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人生存素survivin的克隆与分泌表达

代晓华;姜琳琳;程昕;纪庆;朱惠芳;熊冬生;周圆;   

  1. 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室;天津市口腔医院暨南开大学附属口腔医院实验研究中心;
  • 出版日期:2012-05-26 发布日期:2012-05-26
  • 基金资助:
    高等学校博士学科点专项科研基金项目(20070023093);;

  • Published:2012-05-26 Online:2012-05-26

摘要: 旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达。结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体。融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。

关键词: 生物医学工程, 生存素, 分泌表达, 大肠杆菌, 凋亡