橡胶树转基因植株Southern杂交体系的优化

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (8): 76-81.

橡胶树转基因植株Southern杂交体系的优化

李季¹, 鲁旭^1,2, 黄天带¹, 华玉伟¹, 黄华孙¹

1.中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室, 儋州 571737;
2.海南大学农学院, 海口 570228

修回日期:2014-03-28 出版日期:2014-08-15 发布日期:2014-08-01
作者简介:作者简介: 李季，男，博士，助理研究员，研究方向：橡胶树转基因后代分子检测及橡胶树内源启动子的克隆；E-mail：appleliji@163.com

Optimization of Digoxigenin Based Southern Blot for Transgenic Hevea brasiliensis Analysis

Li Ji¹, Lu Xu^1,2, Huang Tiandai¹, Hua Yuwei¹, Huang Huasun¹

1. Rubber Research Institute of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences & Key Laboratory of Rubber Biology, Ministry of Agriculture, Danzhou 571737;
2. College of Agriculture, Hainan University, Haikou 570228

Revised:2014-03-28 Published:2014-08-15 Online:2014-08-01
Supported by:
国家自然科学基金项目(31200503);现代农业产业技术体系建设专项(NYCYTX-34)

摘要/Abstract

摘要：

以地高辛标记的Southern杂交技术已广泛应用于多个物种中。选择橡胶树为材料，就基因组DNA的提取、探针标记方法的选择以及具体的杂交操作过程等方面对该体系进行了优化。结果表明，至少40 μg高质量的DNA在300 μL的大酶切体系中，酶切12 h可获得良好效果；PCR法标记的探针杂交条带清晰、背景浅，其效率明显强于随机引物法标记的探针。本研究优化的体系信号强、背景浅和灵敏度高，为橡胶树Southern杂交鉴定分析提供参考。

关键词: 橡胶树, 转基因, Southern, blot, 地高辛, PCR法标记

Abstract:

Southern blot technology based on the DIG-chemiluminescent detection has been widely used in numerous species. Using Hevea brasiliensis as materials, the DIG-labeled Southern blot analysis was improved through optimizing several key steps, including extraction of genome DNA, usage of DNA samples amount, digestion system, the comparison between PCR and random-primed labeled method and a serial of procedure in the process of the hybrid. The results showed that desirable digestion result could be achieved when at least 40 μg DNA samples with high quality were enzymed in 300 μL reaction system for 12 hours. The efficiency of probe labeled with the method of PCR was higher than that of probe labeled with random primer obviously, while the Southern blot result of PCR labeled was clear, and the background was lightly, which was conducive to read the copy number accurately. Finally, Southern blot with DIG-labeled was optimized, and good result with high sensitivity and low background was achieved．

Key words: Hevea brasiliensis, Transgene, Southern blot, DIG labeling, PCR labeled method

李季, 鲁旭, 黄天带, 华玉伟, 黄华孙. 橡胶树转基因植株Southern杂交体系的优化[J]. 生物技术通报, 2014, 0(8): 76-81.

Li Ji, Lu Xu, Huang Tiandai, Hua Yuwei, Huang Huasun. Optimization of Digoxigenin Based Southern Blot for Transgenic Hevea brasiliensis Analysis[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(8): 76-81.

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