抗鳞翅目害虫基因cry1C的抗原表位分析及多克隆抗体制备

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0200

生物技术通报 ›› 2018, Vol. 34 ›› Issue (9): 224-229.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0200

抗鳞翅目害虫基因cry1C的抗原表位分析及多克隆抗体制备

金永梅, 陈莫军, 刘笑笑, 林秀峰

吉林省农业科学院,长春 130124

收稿日期:2018-03-12 出版日期:2018-09-26 发布日期:2018-10-10
作者简介:金永梅,女,研究员,研究方向：水稻生物技术育种;E-mail：ymjin0303@163.com
基金资助:
国家转基因重大项目（2016ZX08001001-001-007）,吉林省科技发展计划重点科技攻关项目（20160204033NY）,吉林省农业科技创新工程项目（CXGC2017TD009）

Antigenic Epitope Analysis and Preparation of Polyclonal Antibody of Lepidopteran Pest-resistant Gene cry1C

JIN Yong-mei, CHEN Mo-jun, LIU Xiao-xiao, LIN Xiu-feng

Jilin Academy of Agricultural Sciences,Changchun 130124

Received:2018-03-12 Published:2018-09-26 Online:2018-10-10

摘要/Abstract

摘要： 利用生物信息学方法预测cry1C蛋白的抗原表位区,并命名为Δcry1C。优化Δcry1C的核苷酸序列并进行人工合成,构建重组表达载体pET28b（+）-Δcry1C。在 E.coli中诱导表达His₆-Δcry1C蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,分离、纯化获得cry1C多抗血清。ELISA测定结果表明,抗体效价最高可达1∶512 000。Western Blot分析结果表明,cry1C多克隆抗体能够与cry1C转基因抗虫水稻蛋白特异性结合。利用生物信息学筛选抗原表位区并优化序列、原核表达重组蛋白、免疫制备cry1C多克隆抗体,为深入研究抗鳞翅目害虫植物提供了前提条件。

关键词: 鳞翅目害虫, cry1C, 抗原表位, 序列优化, 多克隆抗体

Abstract: In this study,cry1C antigenic epitope region of cry1C was predicted by bioinformatics analysis and designated as Δcry1C. The nucleotide sequence of the Δcry1C was synthesized after codon optimization,and then recombinant expression vector pET28b（+）-Δcry1C was constructed. To prepare cry1C polyclonal antibody,His₆-Δcry1C recombinant protein was purified after induction in Escherichia coli competent cell BL21（DE3）,and then was used to immunize New Zealand white rabbits as antigen. ELISA assay showed that the titer of cry1C polyclonal antibody reached 1：512 000.Western Blot analysis showed that cry1C polyclonal antibody was able to specifically detect the target protein of cry1C in transgenic pest-resistant rice. In summary,cry1C antigenic epitope region was screened by bioinformatics analysis and its polyclonal antibody was prepared successfully. This study provides a basis for further studying Lepidopteran pest-resistant transgenic plants.

Key words: Lepidopteran pest, cry1C, antigenic epitope, codon optimization, polyclonal antibody

金永梅, 陈莫军, 刘笑笑, 林秀峰. 抗鳞翅目害虫基因cry1C的抗原表位分析及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通报, 2018, 34(9): 224-229.

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抗鳞翅目害虫基因cry1C的抗原表位分析及多克隆抗体制备

Antigenic Epitope Analysis and Preparation of Polyclonal Antibody of Lepidopteran Pest-resistant Gene cry1C

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