实时荧光PCR法同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.012

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (1): 69-73.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.012

实时荧光PCR法同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分

汪永信, 程潇, 安虹, 聂磊, 张波, 刘娟娟

国家农副加工食品质量监督检验中心安徽省食品药品检验研究院, 合肥 230051

收稿日期:2015-03-29 出版日期:2016-01-09 发布日期:2016-01-22
作者简介:汪永信, 男, 硕士, 工程师, 研究方向：分子生物学与食品安全检测;E-mail：yxw118952@163.com
基金资助:
安徽省质监局科研项目(13zj37003)

Synchronously Detecting the Allergenic Ingredients of Soybean and Celery in Food by Real-time Fluorescent PCR

WANG Yong-xin, CHENG Xiao, AN Hong, NIE Lei, ZHANG Bo, LIU Juan-juan

National Center for Quality Supervision and Test of Agricultural-avocation Processed Food, Anhui Institute for Food and Drug Control, Hefei 230051

Received:2015-03-29 Published:2016-01-09 Online:2016-01-22

摘要/Abstract

摘要： 大豆、芹菜等食品原料是一些特殊人群的致敏原。根据大豆atp A基因和芹菜mtd基因设计特异性引物, 利用不同荧光素标记的TaqMan探针, 建立了一种实时荧光PCR检测方法, 可同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分。分别以大豆、芹菜、大米、小麦、大麦、花生、芝麻、玉米、马铃薯、蕃茄、核桃、开心果、腰果、葵花籽、杏仁、苹果、梨、草莓、猪肉、牛肉、羊肉及鱼肉等材料的基因组DNA作为模板, 进行PCR扩增实验, 结果发现该方法仅能特异性扩增大豆和芹菜致敏原成分。灵敏度测试结果表明大豆和芹菜成分的检出限均达0.01%。因此, 本方法可以作为同时检测食品中大豆和芹菜致敏原成分的特异性方法。

关键词: 实时荧光PCR, 大豆, 芹菜, 致敏原检测

Abstract: Soybean and celery as food ingredients are allergen for some special groups of people. Designing the specific primers based on atp A gene of soybean and mtd gene of celery and utilizing TaqMan probes with different fluorescents, we set up a fluorescent real-time PCR method allowing the simultaneous detection of allergenic constituents of soybean and celery in food. The specificity of the method was evaluated using template DNAs from soybean or celery and other 20 species such as rice, wheat, barley, peanut, sesame, maize, murphy, tomato, walnut, pistachio, cashew nut, sunflower seeds, almond, apple, pear, strawberry, pork, beef, mutton and fish, only the specific amplifications of soybean and celery were observed. The limit of quantification was 0. 01% through sensitivity tests. In conclusion, the developed real-time PCR method is a specific, sensitive and efficacious assay for the simultaneous detection of allergenic soybean and celery in food.

Key words: fluorescent real-time PCR, soybean, celery, allergenic detection

汪永信, 程潇, 安虹, 聂磊, 张波, 刘娟娟. 实时荧光PCR法同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分[J]. 生物技术通报, 2016, 32(1): 69-73.

WANG Yong-xin, CHENG Xiao, AN Hong, NIE Lei, ZHANG Bo, LIU Juan-juan. Synchronously Detecting the Allergenic Ingredients of Soybean and Celery in Food by Real-time Fluorescent PCR[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(1): 69-73.

参考文献

［1］ Taylor SL, Hefle SL. Food allergen labeling in the USA and Europe［J］. Curr Op in Allergy Clin Immunol, 2006, 6(3)：186-190.
［2］ Sicherer SH, Sampson HA. Food allergy［J］. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2010, 125(2)：116-125.
［3］ Gendel SM. Comparison of international food allergen labeling regulations［J］. Regul Toxicol Pharmacol, 2012, 63(2)：279-285.
［4］中国国家标准化管理委员会. GB/T 23779-2009 国家标准：预包装食品中的致敏原成分［S］. 北京：中国标准出版社, 2009.
［5］中华人民共和国卫生部. GB 7718-2011 食品安全国家标准：预包装食品标签通则［S］. 北京：中国标准出版社, 2011.
［6］ Franke AA, Halm BM, Ashburn LA. Isoflavones in children and adults consuming soy［J］. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2008, 476(2)：161-170.
［7］ Chiu ML, Lawi W, Snyder ST, et al. Matrix effected a challenge toward automation of molecular analysis［J］. The Association for Laboratory Automation(J ALA), 2010, 36(3)233-242.
［8］ Torp AM, Olesen A, Sten E, et al. Specific, semi-quantitative detec-tion of the soybean allergen Glym Bd 30K DNA by PCR［J］. Food Control, 2006, 17(1)：30-36.
［9］ Franck P, Vautrin MD, Dousset B, et al. The allergenicity of soybean-based products is modified by food technologies［J］. International Archivesof Allergyand Immunology, 2002, 128(3)：212-219.
［10］ Ogawa T, Samoto M, Takahashi K. Soybean allergens and hypoallergenic soybean products［J］. Nutritional Science and Vitaminology, 2000, 46(6)：271-279.
［11］方旭前, 朱友林, 邱丽娟. 大豆过敏原与低过敏原种质创新［J］. 遗传, 2006, 28(8)：1043-1050.
［12］郑义成, 华萍, 杨安树, 等. 食物中过敏原检测技术研究进展［J］. 食品科学, 2010, 31(21)：417-420.
［13］ Poms RE, Klein CL, Anklam E. Methods for allergen analysis in food：a review［J］. Food Addit Contam, 2004, 21(1)：1-31.
［14］ Piknova L, Pangallo D, Kuchta T. A novel real-time polymerase chain reaction(PCR)method for the detection of hazelnuts in food［J］. Eur food Res Technol. 2008, 226(2)：1155-1158.
［15］ Zeltner D, Glomb MA, Maede D. Real-time PCR systems for the detection of the gluten-containing cereals wheat, spelt, kamut, rye, barley and oat［J］. Eur Food Res Technol, 2009(3)：321-330.
［16］曹际娟, 邵娟, 于珂, 等. 实时荧光PCR方法检测含麸质的谷类产品管家基因［J］. 辽宁师范大学学报：自然科学版, 2010, 33(3)：374-379.
［17］ Soares S, Mafra I, Amaral JS, et al. A PCR assay to detect trace amounts of soybean in meat sausages［J］. International Journal of Food Science and Technology, 2010, 45(12)：2581-2588.
［18］ Bauer T, Kirschbaum K, Panter S, et al. Sensitive detection of soy(Glycine max)by real-time polymerase chain reaction targeting the mitochondrial atpA gene［J］. J AOAC Int, 2011, 94(6)：1863-1873.
［19］ Momcilovic D, Rasooly A. Detection and analysis of animal mater-ials in food and feed［J］. J Food Prot, 2000, 63：1602-1609.
［20］ Hupfer C, Waiblinger HU, Busch U. Development and validation of a real- time PCR detection method for celery in food［J］. Eur Food Res Technol, 2007, 225：329-335.
［21］ Mustorp SL, Dr?mtorp SM, Holck AL, et al. Multiplex, quantitative, ligation-dependent probe amplification for determination of allergens in food［J］. Agric Food Chem, 2011, 59：5231-5239.
［22］刘昊, 黄文胜, 邓婷婷, 等. LAMP法检测食品中开心果过敏原成分［J］食品科学, 2013, 34(22)：128-132.
［23］ Cucu T, Demeulenaer B, Devreese B. MALDI based identification of soybean protein markers：possible analytical targets for allergen detection in processed foods［J］. Peptides, 2012, 33(2)：187-196.

[1]	王帅, 冯宇梅, 白苗, 杜维俊, 岳爱琴. 大豆GmHMGR基因响应外源激素及非生物胁迫功能研究[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 131-142.
[2]	李文辰, 刘鑫, 康越, 李伟, 齐泽铮, 于璐, 王芳. TRV病毒诱导大豆基因沉默体系优化及应用[J]. 生物技术通报, 2023, 39(7): 143-150.
[3]	翟莹, 李铭杨, 张军, 赵旭, 于海伟, 李珊珊, 赵艳, 张梅娟, 孙天国. 异源表达大豆转录因子GmNF-YA19提高转基因烟草抗旱性[J]. 生物技术通报, 2023, 39(5): 224-232.
[4]	侯筱媛, 车郑郑, 李姮静, 杜崇玉, 胥倩, 王群青. 大豆膜系统cDNA文库的构建及大豆疫霉效应子PsAvr3a互作蛋白的筛选[J]. 生物技术通报, 2023, 39(4): 268-276.
[5]	杨春洪, 董璐, 陈林, 宋丽. 大豆VAS1基因家族的鉴定及参与侧根发育的研究[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 133-142.
[6]	陈奕博, 杨万明, 岳爱琴, 王利祥, 杜维俊, 王敏. 基于SLAF标记的大豆遗传图谱构建及苗期耐盐性QTL定位[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 70-79.
[7]	苗淑楠, 高宇, 李昕儒, 蔡桂萍, 张飞, 薛金爱, 季春丽, 李润植. 大豆GmPDAT1参与油脂合成和非生物胁迫应答的功能分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(2): 96-106.
[8]	白苗, 田雯青, 武帅, 王敏, 王利祥, 岳爱琴, 牛景萍, 张永坡, 高春艳, 张武霞, 郭数进, 杜维俊, 赵晋忠. 激素和逆境胁迫对大豆维生素E和γ-TMT表达的影响[J]. 生物技术通报, 2023, 39(10): 148-162.
[9]	于惠林, 吴孔明. 中国转基因大豆的产业化策略[J]. 生物技术通报, 2023, 39(1): 1-15.
[10]	郭宾会, 宋丽. 大豆孢囊线虫侵染对乙烯合成及信号传导基因表达调控的研究[J]. 生物技术通报, 2022, 38(8): 150-158.
[11]	石广成, 杨万明, 杜维俊, 王敏. 大豆耐盐种质的筛选及其耐盐生理特性分析[J]. 生物技术通报, 2022, 38(4): 174-183.
[12]	郑向, 段左平, 张杰, 潘素君, 戴良英, 刘世名, 李魏. 大豆疫霉菌效应子研究进展[J]. 生物技术通报, 2022, 38(11): 10-20.
[13]	陈倩, 张露源, 陈伯昌, 吴海燕. 大豆孢囊线虫生防菌株Myrothecium verrucaria ZW-2发酵条件优化及活性物质分析[J]. 生物技术通报, 2021, 37(7): 127-136.
[14]	韩少杰, 郑经武. 寄主对大豆孢囊线虫抗性相关基因功能研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(7): 14-24.
[15]	李春杰, 王从丽. 植物寄生线虫对化感信号的识别及机制[J]. 生物技术通报, 2021, 37(7): 35-44.

实时荧光PCR法同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分

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