油菜（Brassica napus）Bna-miR1140基因启动子miR1140Pro的克隆与表达模式研究

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.07.010

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (7): 66-72.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.07.010

油菜（Brassica napus）Bna-miR1140基因启动子miR1140Pro的克隆与表达模式研究

董云¹, 王毅¹, 靳丰蔚¹, 孙万仓², 刘自刚², 方彦², 徐妙云³, 王磊³

1. 甘肃省农科院院作物研究所,兰州 730070；
2. 甘肃省油菜工程技术研究中心,兰州 730070；
3. 中国农科院生物技术研究所,北京 100081

收稿日期:2016-02-06 出版日期:2016-07-25 发布日期:2016-07-25
作者简介:董云,男,博士,副研究员,研究方向：油菜育种;E-mail：dongyungs@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31260334）,甘肃省自然科学基金资助项目（1308RJZA205）,甘肃省农科院创新专项（2013GAAS16）,甘肃省油菜工程技术研究中心项目（1306NTGA022）

Cloning of Bna-miR1140 Gene Promoter in Rape and Preliminary Identification of Its Expression Pattern

DONG Yun¹, WANG Yi¹, JIN Feng-wei¹, SUN Wan-cang², LIU Zi-gang², FANG Yan², XU Miao-yun³, WANG Lei³

1. Crop Research Institute,Gansu Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730070;
2. Rapeseed Engineering Technology Research Center of Gansu,Lanzhou 730070;
3. Biotechnology Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081

Received:2016-02-06 Published:2016-07-25 Online:2016-07-25

摘要/Abstract

摘要： 旨在研究Bna-miR1140的表达模式及其调控机理,依据本实验室前期的油菜miRNA芯片实验结果,从油菜栽培种Westar中克隆了Bna-miR1140前体序列上游1.5 kb的片段,并进行了顺式作用元件分析,然后构建了GUS报告基因植物表达载体,通过农杆菌介导法将miR1140 pro∷GUS转化到甘蓝型油菜Westar品种中,经PCR法鉴定获得5株阳性株。对阳性株油菜T1代各组织的GUS化学染色分析表明,miR1140前体序列上游1.5 kb区域具有启动子的功能,能够驱动GUS在油菜中表达,并且GUS基因仅在叶柄及叶腋中特异性表达,说明油菜miR1140Pro为特异性启动子。

关键词: 油菜, Bna-miR1140, 启动子, 表达模式

Abstract: In order to explore the expression pattern and regulation mechanism of Bna-miR1140,the upstream 1.5 kb fragment from Bna-miR1140 precursor was cloned in a cultivated variety Westar of rape by PCR approach on the basis of rapeseed miRNAs chip results in our laboratory,and their cis-acting elements were analyzed. Then plant expression vector of GUS reporter genes was constructed,the vector miR1140 pro∷GUS was transformed into variety Westar by Agrobacterium-mediated approach,and 5 positive transgenic lines were obtained. GUS chemically staining the varied tissues of T1 generation groups of positive rape strains,the results showed that the upstream 1.5 kb region of miR1140 precursor sequence presented the function of promoter,driving GUS expression in rapeseed,moreover,only specific expression in the petiole and leaf axil,indicating that miR1140Pro was a specific promoter.

Key words: rapeseed, Bna-miR1140, promoter, expression pattern

董云, 王毅, 靳丰蔚, 孙万仓, 刘自刚, 方彦, 徐妙云, 王磊. 油菜（Brassica napus）Bna-miR1140基因启动子miR1140Pro的克隆与表达模式研究[J]. 生物技术通报, 2016, 32(7): 66-72.

DONG Yun, WANG Yi, JIN Feng-wei, SUN Wan-cang, LIU Zi-gang, FANG Yan, XU Miao-yun, WANG Lei. Cloning of Bna-miR1140 Gene Promoter in Rape and Preliminary Identification of Its Expression Pattern[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(7): 66-72.

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油菜（Brassica napus）Bna-miR1140基因启动子miR1140Pro的克隆与表达模式研究

Cloning of Bna-miR1140 Gene Promoter in Rape and Preliminary Identification of Its Expression Pattern

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