利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.030

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (8): 207-213.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.030

利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白

潘现飞,施泉,林新春,徐英武,曹友志

浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地,临安 311300

修回日期:2016-01-20 出版日期:2016-08-25 发布日期:2016-08-25
作者简介:潘现飞,男,硕士,研究方向：生物大分子结构与功能;E-mail：panxianfei0829@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31270715）,浙江农林大学人才启动基金项目（2012FR079）

Screening for the Interaction Proteins of SOC1 from Phyllostachys violascens Using Yeast Two-Hybrid System

PAN Xian-fei ,SHI Quan, LIN Xin-chun, XU Ying-wu ,CAO You-zhi

The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture,Zhejiang A & F University,Lin’an 311300

Revised:2016-01-20 Published:2016-08-25 Online:2016-08-25

摘要/Abstract

摘要： 在雷竹（Phyllostachys violascens）中找到SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS1（SOC1）在开花途径中的作用靶标,进一步探索SOC1的作用机制。构建pGBKT7-PvSOC1诱饵表达载体,通过SMART技术构建开花时期的雷竹cDNA文库,酵母双杂交筛选与SOC1互作的蛋白,并对其进行分析鉴定。结果显示,成功构建了可用于酵母双杂交的cDNA文库,文库的转化率为每微克pGADT7-Rec 3.0×10⁶转化子,文库滴度为7.5×10⁶ cfu/mL,插入片段主要在250-2 000 bp之间。通过酵母双杂交实验得到与诱饵蛋白PvSOC1相互作用的蛋白,筛选到的靶标蛋白经鉴定是一个富含亮氨酸的蛋白激酶,特征氨基酸序列在不同物种中非常保守,与水稻中的同源蛋白亲缘性最高。

关键词: 雷竹, SOC1, cDNA文库, 酵母双杂交, 蛋白质互作

Abstract: This work aims to study the target proteins of suppressor of overexpression of constans1（SOC1）in flowering way of Phyllostachys violaceus and to explore the action mechanism of SOC1. The pGBKT7-PvSOC1 vector was constructed as the bait protein,then the cDNA library of P. violascens flowering was established using SMART technology,and the interaction proteins with SOC1 were screened by yeast two-hybrid system as well as analyzed and identified. The results showed that the cDNA library for yeast two-hybrid was constructed successfully,the conversion rate of the library was about 3.0×10⁶ converters per μg pGADT7-Rec,and the capacity of the library was up to 7.5×10⁶cfu/mL and the insert fragments were distributed from 0.25 kb to 2 kb. The protein interacted with the bait protein PvSOC1 was screened through the yeast two-hybrid technology. The screened target protein was identified as a protein kinase containing plentiful leucine which amino acid sequence was very conservative in different species,and had the highest affinity with rice.

Key words: Phyllostachys violascens, SOC1, cDNA library, yeast two-hybrid, protein interaction

潘现飞,施泉,林新春,徐英武,曹友志. 利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白[J]. 生物技术通报, 2016, 32(8): 207-213.

PAN Xian-fei ,SHI Quan, LIN Xin-chun, XU Ying-wu ,CAO You-zhi. Screening for the Interaction Proteins of SOC1 from Phyllostachys violascens Using Yeast Two-Hybrid System[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(8): 207-213.

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Screening for the Interaction Proteins of SOC1 from Phyllostachys violascens Using Yeast Two-Hybrid System

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