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抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)产吩恶嗪酮合成酶基因的重组表达

谢迎春;贾红华;谢柏盛;朱清禾;贾丽莎;韦萍;   

  1. 南京工业大学生物与制药工程学院;
  • 出版日期:2011-04-26 发布日期:2011-04-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(20906048)

  • Published:2011-04-26 Online:2011-04-26

摘要: 从抗生链霉菌(Streptomyces antibioticus)中提取出目的基因phs,构建基于质粒pET28a的诱导型表达载体pET28a-phs。以E.coli为表达宿主,将重组质粒转化入宿主菌之后获得能够高效表达吩恶嗪酮合成酶(PHS)的重组菌,经SDS-PAGE验证在72.1 kD处有明显蛋白条带。通过调整可能影响表达的参数获得PHS在大肠杆菌中的最优表达条件。最终优化后的表达条件是最适Cu2+浓度为1.5 mmol/L,最适细菌培养温度为37℃,最适pH值为7.0,在OD600为0.6,时加入终浓度为1.0 mmol/L的IPTG为最佳诱导条件,30℃诱导16 h为最佳诱导时间。

关键词: 漆酶, 吩恶嗪酮合成酶, 表达