一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA

生物技术通报 ›› 2012, Vol. 0 ›› Issue (12): 163-166.

一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA

李维维^{1, 2}, 顿宝庆², 王智², 曲娟娟¹

1 东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030 ；2 中国农业科学院作物科学研究所中国农业科学院生物质能源研究中心，北京 100081

收稿日期:2012-04-09 修回日期:2013-01-25 出版日期:2012-12-26 发布日期:2013-02-06
作者简介:李维维, 女, 硕士研究生, 研究方向微生物学；E-mail:congtouzailai888@126.com
基金资助:
：中国农业科学院作物科学研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目（2060302-13）

Modified Method for the Efficient and Fast Extraction of Total RNAfrom Saccharomyces cerevisiae with Hot-Phenol

Li Weiwei^1,2, Dun Baoqing², Wang Zhi², Qu Juanjuan¹

1 Institute of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030 ；2 Biomass Energy Research Center，Institute of Crop Science，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081

Received:2012-04-09 Revised:2013-01-25 Published:2012-12-26 Online:2013-02-06

摘要/Abstract

摘要： 以酿酒酵母单倍体CEN.PK1 与双倍体CEN.PK2 为研究对象，利用改良热酚法，快速高效地提取酿酒酵母总RNA。结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1 和CEN.PK2 的总RNA 经分光光度计测定浓度为7.63 μg/μL 和3.77 μg/μL，OD260/280分别为2.10 和2.04，OD260/230 分别为2.32 和2.24，浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求。经PCR 与荧光定量PCR 检测，该方法提取的RNA 无DNA 污染，可作为PCR 反应的模板，与Trizol 方法提取RNA 相比，该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h 缩短为1.5 h，具有操作简单、高质、高效等优点，经多次试验证明，此方法同样适用于酿酒酵母总RNA 的大量提取试验，有较高的实用价值。

关键词: RNA, 分离, 酿酒酵母, 热酚法, cDNA, 荧光定量PCR

Abstract: To research an efficient method for total RNA extraction from Saccharomyces cerevisiae, haploid CEN.PK1and diploid CEN.PK2 as the object of study was used to study the new modified hot-acid-phenol method. The total RNA concentration of CEN.PK1 and CEN.PK2was 7.63 mg/mL and 3.77 mg/mL, OD260/280 was 2.10 and 2.04 and OD260/230 was 2.32 and 2.24, using the modified method by spectrophotometerdetermination．It is proved that the RNA was fit for the requirements of follow-up experiments in molecular biology by PCR and fluorescencequantitative PCR detection without DNA contamination compared with the Trizol method. The extraction time 1.5 hours is shorter than that ofconventional method 2.5 hours used and the modified method has the advantages of simple operation, high efficiency and high quality. Repeatedexperiments proved that this method can also be used to extract the total RNA amount of Saccharomyces cerevisiae and can be used for practicalapplications．

李维维, 顿宝庆, 王智, 曲娟娟. 一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA[J]. 生物技术通报, 2012, 0(12): 163-166.

Li Weiwei, Dun Baoqing, Wang Zhi, Qu Juanjuan. Modified Method for the Efficient and Fast Extraction of Total RNAfrom Saccharomyces cerevisiae with Hot-Phenol[J]. Biotechnology Bulletin, 2012, 0(12): 163-166.

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