生物技术通报

黄德宝;唐朝荣;

2010, 0(04): 1-6.

摘要 ( 106 )

PDF (242KB) ( 901 )

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在高等植物中,蔗糖的合成、运输与分配是一个复杂的过程。蔗糖由源到库的运输不仅与植物的生长发育相关,还受到植物体内的激素水平以及外界环境条件变化等因素的影响。蔗糖转运蛋白介导了蔗糖在植物韧皮部的装载、运输和卸载,在某些库中的蔗糖转运和库组织分配的分子调控中起有重要的生理作用。此外,简要介绍了笔者实验室在橡胶树蔗糖转运蛋白基因研究方面的最新进展。

植物泛素结合酶E2功能研究进展

王金利;史胜青;贾利强;江泽平;

2010, 0(04): 7-10.

摘要 ( 240 )

PDF (177KB) ( 950 )

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泛素-26S蛋白酶体途径是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径,广泛参与植物生长发育相关过程。该途径中关键酶主要包括泛素活化酶(E1)、泛素结合酶(E2)和泛素连接酶(E3),对靶蛋白泛素化起重要作用。在简单概述泛素化过程的基础上,主要对近年来植物E2蛋白在DNA修复、光周期和维管分化调控,缺素及抗逆胁迫响应中的功能进行综述,为今后该蛋白功能的深入研究及木本植物中该功能基因的发掘奠定基础。

植物病毒基因沉默抑制子研究进展

田荣欢;刘迪秋;葛锋;王光勇;方松刚;丁元明;

2010, 0(04): 11-15.

摘要 ( 155 )

PDF (256KB) ( 852 )

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RNAi普遍存在于真核生物中,是植物应对外来病毒入侵的一种防御机制。但是植物病毒能通过产生不同的抑制子蛋白来抑制寄主基因沉默的发生。病毒抑制子通过干扰基因沉默的起始、siRNA的积累或干扰系统性基因沉默等方式抑制寄主的基因沉默。有的病毒抑制子蛋白还能促进病毒的积累和胞间移动,加强侵染组织的病毒病症状表现。主要阐述了RNAi的机制、病毒抑制PTGS的作用方式、几种常见的沉默抑制子以及抑制子与病毒侵染的关系。

植物对盐胁迫应答的转录因子及其生物学特性

朱冬梅;贾媛;崔继哲;付畅;

2010, 0(04): 16-21.

摘要 ( 107 )

PDF (225KB) ( 581 )

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逆境胁迫会激活植物的转录因子,转录因子结合到应答基因的顺式作用元件后可以启动应答基因的表达,调控并减轻逆境胁迫对植物的伤害,因而转录调控在植物对逆境胁迫的应答反应中具有重要的作用。本文对盐胁迫下参与植物应答反应的转录因子及其生物学特性进行了综述,并对这些转录因子在植物耐盐基因工程中的应用前景作出了展望。

小麦抗旱机理研究进展

葛培;郭广芳;晏月明;

2010, 0(04): 22-27.

摘要 ( 119 )

PDF (228KB) ( 765 )

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干旱是影响小麦产量和品质的重要环境因素,而小麦在干旱胁迫下的抗旱机理非常复杂,不同程度以及不同发育时期的干旱胁迫对不同品种的影响各异。对近年来有关干旱胁迫下小麦的形态结构与渗透调节物质的变化,特别是基因和蛋白表达量的改变进行了综述,对小麦在干旱胁迫下如何提高品质及产量等问题提出建议。

转基因植物疫苗研究进展

李杨;李志勇;柳纪省;

2010, 0(04): 28-32.

摘要 ( 151 )

PDF (202KB) ( 542 )

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疫苗是当今世界上控制及预防疾病发生的有效方法,利用植物作为生物反应器生产转基因疫苗,成本低廉,方便安全等特点,被认为新型疫苗的研究热点。从4个方面综述了转基因疫苗的研究概况,分析了其优点及不足,并对其未来的发展进行了展望。

乙肝治疗性疫苗的研制与临床应用

李杨;王赛锋;王亚男;孟颂东;

2010, 0(04): 33-37.

摘要 ( 190 )

PDF (209KB) ( 640 )

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尽管乙肝预防性疫苗非常有效,我国仍有约9300万乙肝病毒(HBV)携带者。抗病毒治疗疗效有限,患者长期使用容易产生耐药性。因此,研制乙肝治疗性疫苗可补充甚至替代目前的抗病毒治疗。T细胞免疫对于乙肝病毒的控制和清除至关重要,目前已经设计出蛋白疫苗、表位多肽疫苗以及DNA或病毒载体疫苗通过临床试验检验其疗效。将就研制乙肝治疗性疫苗这一日益活跃的领域加以概述,着重评价疫苗的细胞免疫应答和临床疗效。

减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究进展

陈伟;杨恒;

2010, 0(04): 38-42.

摘要 ( 154 )

PDF (210KB) ( 845 )

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随着沙门氏菌基因组学的深入研究以及DNA重组技术的发展,使得对沙门氏菌进行精确的不可回复性的基因缺失减毒成为可能。减毒沙门氏菌可作为DNA疫苗载体,特异性地将其携带的质粒DNA靶向性的传递给巨噬细胞、树突细胞等抗原递呈细胞,从而有效激发相应的体液与细胞免疫应答。减毒沙门氏菌已作为疫苗载体在针对细菌、病毒、寄生虫等的DNA疫苗研究中得以广泛应用。

GLP-1及其受体激动剂Exendin-4临床适应症的扩展

王晓婧;赵丽艳;孟婧垚;李品颖;邹卫;

2010, 0(04): 43-46.

摘要 ( 127 )

PDF (205KB) ( 673 )

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GLP-1及其受体激动剂Exendin-4是治疗糖尿病的一种理想药物,是近年来新的研究热点之一。近年发现,该类药物可从多个生理角度发挥功能,揭示其临床适应症可能有进一步的扩展空间。对GLP-1及Exendin-4的各种已知和潜在的临床适应症进行了概述,这些适应症除了各型糖尿病外,还包括肥胖症、神经系统和心脏的疾病以及其他各种潜在适应症。

木质素合成关键酶——肉桂醇脱氢酶的研究进展

龚琰;许梦秋;

2010, 0(04): 47-49.

摘要 ( 132 )

PDF (502KB) ( 755 )

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肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素合成途径的关键酶之一,它作用于木质素单体生物合成的最后一步。重点综述了肉桂醇脱氢酶(CAD)的在基因家族方面,基因调控方面以及蛋白结晶方面的研究进展,讨论了存在的问题并提出了相关策略。

生物酶催化聚合的研究进展

马艳芬;吕生华;刘岗;董凌霄;李芳;王飞;郑新建;

2010, 0(04): 50-54.

摘要 ( 118 )

PDF (310KB) ( 830 )

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酶催化聚合反应是近年来的研究热点之一,氧化还原酶是应用广泛的一类催化聚合酶。概括总结了近年来酶促聚合反应的研究进展,重点叙述了辣根过氧化物酶(HRP)、大豆过氧化物酶(SBP)和漆酶(laccase)的结构、催化机理以及它们在酶催化聚合中的应用概况。

微生物转化制备活性维生素D_3的研究进展

冯海婷;陆凌霄;文鹏;陆群;

2010, 0(04): 55-58.

摘要 ( 157 )

PDF (178KB) ( 686 )

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活性维生素D类药物作为一类高效原料药,采用化学合成方法,制备复杂,限制了其广泛应用。采用微生物转化法条件温和,操作简单,对于活性维生素D3的制备具有重要意义。从甾体羟化菌株,生物转化制备不同活性维生素D3、基因工程在生物转化上的应用及转化率的影响因素等方面综述了其研究进展,并对该领域的发展趋势进行了展望。

微生物耐铝机制的研究进展

王阁奇;年洪娟;陈丽梅;

2010, 0(04): 59-62.

摘要 ( 122 )

PDF (179KB) ( 375 )

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铝毒是酸性土壤中限制作物生产最主要的因素。微生物与铝作用逐渐受到关注,一些微生物特别是模式微生物的耐铝机制已被提出。主要综述了酵母,假单胞菌及其它微生物耐铝机制的研究进展,并展望了微生物耐铝机制研究发展的方向。

链球菌合成透明质酸的研究进展

张容鹄;白洋;冯建成;温珍昌;

2010, 0(04): 63-68.

摘要 ( 134 )

PDF (305KB) ( 955 )

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透明质酸是一种具有极大商业价值的线性、高分子粘多糖,微生物的生物合成是透明质酸来源的首选。主要综述链球菌合成透明质酸的研究概况,分析了目前存在的主要问题及解决途径,并对其前景进行了展望。

现代生物化学与分子生物学研究技术在植物微生物生态学中的应用

左山;刘洋;邹媛媛;刘琳;刘家熙;

2010, 0(04): 69-74.

摘要 ( 111 )

PDF (233KB) ( 609 )

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植物微生物生态学是研究植物微生态系统的一门学科,以植物组织细胞内微生物的组成、功能、演替,以及微生物之间和微生物与宿主之间的相互作用关系为研究对象。现代生物化学与分子生物学技术在植物微生物生态学研究领域的作用日益明显。介绍了上述技术及其在植物微生物生态学研究领域的应用进展,并对其在该领域的利用和发展进行了展望。

分子标记技术在石斛属植物种质资源研究中的应用

黄海;李劲松;曹兵;

2010, 0(04): 75-80.

摘要 ( 108 )

PDF (252KB) ( 525 )

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介绍了分子标记的主要类型和特点,综述了分子标记在石斛属植物的品种鉴定、药材的地道性、遗传多样性、亲缘关系与分类、杂种纯度鉴定、遗传图谱构建等研究中的应用概况,同时对其应用前景进行展望。

免疫胶体金技术的应用及展望

朱文钏;孔繁德;林祥梅;徐淑菲;吴德峰;韩雪清;吴绍强;

2010, 0(04): 81-87.

摘要 ( 438 )

PDF (311KB) ( 4091 )

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免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术、应用现状及其优点等方面作一简要综述,并对该技术的发展前景作了展望。

19-去甲类固醇激素检测方法研究进展

姜金庆;张海棠;王自良;王建华;

2010, 0(04): 93-98.

摘要 ( 135 )

PDF (1470KB) ( 878 )

相关文章 | 计量指标

综述了19-去甲类固醇激素检测的筛选法、定量法和确证法,探讨了多残留同时检测试纸条和蛋白质芯片等最新技术。

玉米核糖体失活蛋白基因z108在烟草原生质体中的转化及其表达

周颖;姜国勇;

2010, 0(04): 99-102.

摘要 ( 99 )

PDF (298KB) ( 459 )

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利用与根癌农杆菌共培养的方法将玉米核糖体失活蛋白基因z108及其融合基因GUS导入烟草叶肉原生质体细胞。试验结果表明,烟草叶片在含有1.0%纤维素酶和0.5%离析酶的裂解液中,以0.5M甘露醇、5000.0mg/LCaCl2为渗透压调节剂,25℃保温12-14h,可获得纯化的原生质体细胞;纯化的叶肉原生质体细胞与根癌农杆菌菌株pCam1301/91-108共培养30min,经25mg/L潮霉素筛选,转化率可达17.84%。转化体细胞经X-Gluc染色、PCR和RT-PCR检测证明玉米核糖体失活蛋白基因z108已整合到烟草原生质体细胞的核基因组中并获得表达。

非洲山毛豆叶片蛋白组双向电泳样品制备方法的建立

赖多;徐汉虹;

2010, 0(04): 103-107.

摘要 ( 112 )

PDF (329KB) ( 487 )

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以非洲山毛豆叶片为材料,对非洲山毛豆总蛋白质3种提取方法(TCA/丙酮沉淀法、尿素/硫脲法和酚-甲醇/醋酸铵沉淀法)以及3种蛋白裂解液进行比较分析。结果表明,采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法提取非洲山毛豆叶片总蛋白,用蛋白裂解液(7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS,40mmol/LTris-base,1%Bio-LytepH3.5-10,65mmol/LDTT)裂解蛋白1h,2-DE图谱分离到的蛋白点效果最好。此方法适合于色素、多酚及黄酮类次生代谢物含量较多的非洲山毛豆叶片总蛋白制备方法。

野生黄花苜蓿冷诱导基因克隆及序列分析

刘亚玲;王俊杰;云锦凤;赵彦;石凤敏;

2010, 0(04): 108-111.

摘要 ( 105 )

PDF (2809KB) ( 484 )

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根据紫花苜蓿抗寒基因cas15B(登录号:L12462)的cDNA序列,设计1对特异引物,以经过低温胁迫的黄花苜蓿总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获得了550bp的cDNA片段。测序和序列分析结果表明,扩增片段长度为550bp,编码159个氨基酸。主要由Gly(甘氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Lys(赖氨酸)这4种氨基酸组成,占总量的70%。含1个重复了5次的10肽基序,其序列为Lys-Gly-Glu-Gln-His-Gly-His(Phe)-Val(Leu)-Gly-Gly。经序列比较分析,该片段与紫花苜蓿冷诱导基因CAS15B的核苷酸、氨基酸的同源性均为90%,命名为MfCAS15-1。亚细胞结构定位分析结果显示,MfCAS15-1是一种定向到核的蛋白,在调节或维持核的结构与功能方面起作用。本研究在黄花苜蓿中成功获得了抗寒基因同源序列,为最终克隆黄花苜蓿MfCAS15-1抗寒基因全长奠定了基础。

荔枝DNA提取及RAPD扩增条件优化

尤有利;王江波;施维属;潘东明;

2010, 0(04): 112-115.

摘要 ( 83 )

PDF (246KB) ( 409 )

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为应用RAPD技术开展对荔枝种质资源的分析,以S43(GTCGCCGTCA)为引物,通过试验设计,分别研究了退火温度、模板浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶用量对荔枝RAPD-PCR反应的影响。建立并优化了适宜荔枝RAPD分析的扩增体系:20μL的反应体系,30ng的模板DNA度,0.25μmol/LRAPD引物、1.0UTaqDNA聚合酶,0.2μmol/LdNTP为荔枝适宜的RAPD-PCR扩增条件。

植物β-胡萝卜素羟化酶的生物信息学分析

赵大球;曹春燕;孔芬;周春华;陶俊;

2010, 0(04): 116-121.

摘要 ( 96 )

PDF (512KB) ( 583 )

相关文章 | 计量指标

采用生物信息学方法对GenBank中的拟南芥、玉米、龙胆、福寿草和水仙等植物β-胡萝卜素羟化酶(BCH)的核苷酸和氨基酸序列进行了比对分析,进而对其组成成分、理化性质、信号肽、亚细胞定位、疏水性/亲水性、跨膜结构域、功能结构域、基序及蛋白质二级结构等重要参数进行了预测和分析。结果表明,BCH基因全长约为1256bp,具有完整的开放阅读框,长约为943bp,编码313个氨基酸,分子量为34.82kD,理论等电点为9.18,含量最丰富的氨基酸都包含Ala(10.34%)、Leu(8.7%)和Gly(8.1%);无信号肽,定位于叶绿体中的亲水性不稳定蛋白,含有3-4个跨膜结构域,一个功能结构域,二级结构均以α-螺旋和无规则卷曲为主要构件。

大豆GmPDS基因的克隆及VIGS表达载体构建和鉴定

吕山花;樊颖伦;吕福堂;刘立科;孙亚梅;马姗姗;

2010, 0(04): 122-124.

摘要 ( 154 )

PDF (496KB) ( 963 )

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病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是近年来发展起来的一种反向遗传学快速研究基因功能的方法,对于植物特别是难于转化的大豆而言尤其适用。本研究采用PCR技术从大豆(Glycine max)基因组中克隆了八氢番茄红素去饱和酶(phytoene desaturase,PDS)基因的部分序列,命名为GmPDS(Glycinemax PDS)。该片段长430bp,序列分析表明,该基因与大豆八氢番茄红素去饱和酶(GenBank登录号:M64704)cDNA序列同源性为99%。双酶切GmPDS片段和烟草脆裂病毒载体(pTRV2),构建了重组载体pTRV2-GmPDS,并将该重组载体分别转化农杆菌C58C1/pMP90、GV3101和LBA4404,为分析pTRV载体是否可以浸染大豆奠定了基础。

牦牛TGF-β2基因片段的克隆测序及系统进化分析

唐懿挺;钟金城;

2010, 0(04): 125-127.

摘要 ( 104 )

PDF (211KB) ( 424 )

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克隆测序了牦牛的TGF-β2基因,并进行了Blastn比较分析。结果表明,牦牛TGF-β2基因片段长为559bp,与普通牛、人、黑猩猩、小鼠的相应片段的同源性分别达98%、95%、94%、93%。在5′端调控区域没有类似TATA盒元件,推测TGF-β2基因在脾脏、肾脏组织细胞中表达量不是很高。由于TGF-β对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用,牦牛TGF-β2基因研究对高原畜牧业发展提供了科学资料。

虾夷扇贝β-actin基因的克隆和序列分析

傅立元;高祥刚;李云峰;王健;赫崇波;

2010, 0(04): 128-131.

摘要 ( 110 )

PDF (875KB) ( 504 )

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为进一步研究虾夷扇贝功能基因的表达调控。利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库。对随机选取的4009个克隆进行5′端测序,比对,筛选出1条β肌动蛋白同源序列,对此EST序列两端进行扩增、测序,得到肌动蛋白基因cDNA全长序列。肌动蛋白基因cDNA全长1536bp(不包括polyA),5′端非编码区84bp,3′端非翻译区321bp,阅读框1131bp,编码377个氨基酸。在基因组DNA中,该基因被一个内含子分为两段,内含子位于第41和第42个氨基酸之间,长度为1498bp。系统发育分析显示该肌动蛋白属于β类型。本研究得到的虾夷扇贝β-肌动蛋白基因可以被用于作为定量某种虾夷扇贝mRNA的标准,这为继续研究虾夷扇贝其它功能基因,及其分子生物的进一步研究、促进其他相关分子发育和系统进化研究奠定了基础。

PCR-SSCP的效果分析

赵爽;潘秋丽;姜宫凌侠;

2010, 0(04): 132-134.

摘要 ( 104 )

PDF (274KB) ( 567 )

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PCR-SSCP是一种以PCR为基础的单链构象多态性分析技术,是DNA已知突变的检测或未知变异分析中常用和实用的技术之一。影响SSCP试验效果的因素有很多,本研究主要对凝胶浓度和是否添加甘油两个因素进行分析与探讨。结果表明,凝胶浓度12%和添加甘油终浓度10%的条件下可以得到满意的结果。

海洋生物质的热解特性与动力学研究

赵辉;闫华晓;张萌萌;张睿;田原宇;秦松;

2010, 0(04): 135-140.

摘要 ( 94 )

PDF (6980KB) ( 288 )

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以定生浒苔、漂浮浒苔、石莼、大叶藻、海带、龙须菜和裙带菜7种海洋生物质为研究对象,以1种草类生物质玉米秸秆、1种木质类生物质锯末为对照,用热重分析法对其热解过程及其动力学规律进行了研究。利用TG-DTG-DTA曲线分析了它们的基本热解特性。结果表明,整个热解过程主要为干燥失水、剧烈失重和缓慢失重3个阶段,海洋生物质的Tmax明显低于2类陆生生物质,而且大叶藻的热解稳定性相对较高,而漂浮浒苔的热解稳定性较低,燃烧特性较好。同时,用Coats-Redfern法求得相应的活化能E和频率因子A,发现3类生物质的热解反应机理函数不同。

NtSKP1基因的反义载体构建及转基因烟草的产生

张付云;李伟;张瑛;孙秋颖;李研;杜昱光;

2010, 0(04): 141-145.

摘要 ( 75 )

PDF (438KB) ( 453 )

相关文章 | 计量指标

根据枯斑三生烟SKP1基因(NtSKP1)的序列,设计一对分别含有特定酶切位点的特异引物,以重组质粒pMD18-SKP1为模板,扩增目的基因(约473bp)片段。将反向目的片段插入中间载体pHANNIBAL的内含子右侧,再经NotⅠ酶切回收约3443bp的目的片段,插入到双元载体质粒pART27中,成功构建了含NtSKP1基因片段反向序列的植物表达载体pART27-skp1a,其转录产物能减弱目的基因的表达。将pART27-skp1a质粒导人根癌农杆菌LBA4404中并转化烟草叶片细胞,经选择分化培养,获得转基因烟草。

HIV-1 Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备

柳发勇;韩莉;刘朝奇;覃晓琳;杨凡;余枫华;

2010, 0(04): 146-149.

摘要 ( 97 )

PDF (356KB) ( 368 )

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旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体。结果显示,构建的HIV-1 Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27kD,以包涵体的形式存在。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG。ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应。成功构建和高表达了HIV-1 Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1Gag有特异性结合。为进一步研究HIV-1奠定了试验基础。

融合基因Mdc-hly的构建及原核表达

卢雪梅;金小宝;朱家勇;梅寒芳;马艳;王艳;李小波;褚夫江;

2010, 0(04): 150-155.

摘要 ( 94 )

PDF (462KB) ( 469 )

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构建家蝇天蚕素-人溶菌酶(Mdc-hly)融合基因,实现Mdc-hly基因在大肠杆菌中的表达。通过RT-PCR分别扩增出家蝇天蚕素和人溶菌酶的成熟肽基因序列,再利用Gene-SOEing技术构建融合基因,将融合基因克隆至pET32a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达,融合蛋白分子量约为38kD。Western blotting杂交证实了表达蛋白的抗原活性。成功构建了融合其因并进行了原核表达,为进一步的生物活性研究打下基础。

运用重叠延伸PCR技术构建在甘丙肽全长cDNA嵌入第二内含子的重构分子

雷小春;司苏晋;薛亮亮;刘田福;

2010, 0(04): 156-160.

摘要 ( 82 )

PDF (357KB) ( 330 )

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构建嵌入第二内含子的甘丙肽(Galanin,GAL)全长基因组cDNA的重构分子。通过RT-PCR扩增出cDNA编区的序列,分别从基因组中扩增出cDNA的5′和3′端部分非编码序列;使用重叠延伸PCR(overlap extention PCR,OE-PCR)方法将三个片段重叠获得全长cDNA序列;再将全长cDNA从第三外显子第15个碱基处分成两部分,分开的cDNA前半部分和后半部分以及第二内含子进行重叠延伸获得重构分子,含有第二内含子的甘丙肽(GAL)全长基因组cDNA;将重构分子连入pMDI9-Tsimple载体。电泳分析观察到清晰的重构分子片段;测序显示重构分子由所设计的序列组成,第二内含子插入的位置准确,且无移码。使用重叠延伸PCR能够成功在cDNA中插入内含子获得一段重构基因。

病毒负性调节因子在内皮细胞稳定表达细胞株的建立

杨凡;刘朝奇;覃晓琳;李斌;韩钰;

2010, 0(04): 161-164.

摘要 ( 72 )

PDF (304KB) ( 365 )

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建立HIV-1的调节基因Nef基因在内皮细胞稳定表达的细胞株ECV304-Nef,为研究Nef对血管内皮细胞生物学活性的影响奠定试验基础。构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Nef,将其质粒和pcDNA3.1(+)质粒(阴性对照)分别转染血管内皮细胞ECV304,G418筛选。通过RT-PCR检测NefmRNA在细胞中的表达;细胞免疫荧光法检测Nef蛋白的表达及定位;Western blotting检测Nef蛋白的特异性表达,获得稳定表达的细胞株。构建的重组质粒pcDNA3.1(+)-Nef经BamHI和EcoRI双酶切鉴定,得到的片段大小与理论值相符,分别为载体的5400bp和目的基因的621bp。测序结果显示碱基序列与GenBank(登录号:K03455)序列相同。转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的ECV304细胞株,RT-PCR显示转染pcD-NA3.1(+)-Nef质粒的ECV304细胞出现621bp条带,对照组无目的条带出现;荧光显微镜下观察转染pcDNA3.1(+)-Nef质粒的ECV304细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中。Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1(+)-Nef质粒的ECV304细胞约27kD处检测到目的条带,表明pcDNA3.1(+)-Nef表达正确。

shRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究

汤容;于国新;袁瑞;

2010, 0(04): 165-168.

摘要 ( 95 )

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探讨应用RNA干扰技术沉默趋化因子受体4(CXCR4)基因的表达,研究其对人卵巢癌SW626细胞增殖的抑制作用。设计合成两对特异性针对CXCR4基因的Oligo siRNA,用脂质体转染法转染至SW626细胞中,荧光共聚焦显微镜检测转染效率,采用Western blotting检测CXCR4蛋白表达情况,同时利用M'IT试验检测转染后细胞增殖抑制情况。结果显示,转染Oligo siRNA后,SW626细胞CXCR4蛋白表达水平降低(P<0.05);细胞增殖的抑制率明显增高(P<0.05)。体外合成的特异性针对CXCR4基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SW626中CXCR4基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用。

慢性高眼压下兔视网膜组织蛋白质组变化的初步研究

刘珏;李平华;

2010, 0(04): 169-172.

摘要 ( 91 )

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应用蛋白质组学技术对兔青光眼慢性高眼压视网膜组织的蛋白进行初步分析。左眼前房注入0.2mL复方卡波姆溶液制作成慢性高眼压模型,右眼为对照眼。28d后分离各组视网膜组织,用双向电泳分离试验组和对照组的蛋白,然后分析电泳图谱,对比、分析其表达蛋白质点的差异,寻找兔视网膜中与慢性高眼压相关的蛋白质。结果表明,慢性高眼压诱导视网膜组织3种蛋白质出现明显差异表达。质谱鉴定出3个蛋白质,分别为热休克蛋白70(heat shock 70 kD protein,HSP70),丙酮酸激酶(Pyruvate kinase)和烯醇酶(enolase)。通过双向电泳,发现兔视网膜蛋白质表达与对照眼相比有质和量的变化,这些变化涉及与神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)糖酵解及应激反应有关的几组蛋白质,提示上述蛋白质组改变可能参与了慢性青光眼神经节细胞凋亡的过程。

弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白的高效表达及免疫活性分析

聂福旭;蒋蔚;王权;陈永军;胡永浩;

2010, 0(04): 173-178.

摘要 ( 110 )

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在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白,并对其免疫活性进行分析。应用PCR技术从刚地弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码SAG2的基因片段,亚克隆至原核表达载体pET32a(+),在大肠埃希菌(E.coli)BL21内表达,并对其表达条件进行优化,Western blotting和ELISA分析纯化蛋白的免疫原性;纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗,用间接免疫荧光试验(IFA)分析表达蛋白的免疫反应性。成功构建重组质粒pET32a(+)-tSAG2,所表达的融合蛋白大小约为38kD。在IPTG终浓度为0.1mmol/L、诱导时间4-6h和培养温度32℃条件下,重组SAG2蛋白主要以可溶性形式在大肠杆菌中高效表达,每升培养菌液约获得可溶性重组SAG2蛋白16mg。Western blotting及ELISA结果显示纯化蛋白具有良好的免疫原性。IFA显示重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫表面的SAG2天然蛋白,所表达蛋白具有良好的免疫反应性。截断的SAG2基因在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白保持了天然蛋白的免疫活性,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。

阪崎肠杆菌核酸提取纯化方法分析比较

刘张岚;王晶;石磊;黄晓蓉;张玲;

2010, 0(04): 179-182.

摘要 ( 112 )

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阪崎肠杆菌是一种食源性致病菌,目前越来越多的分子检测技术用于该菌的检测,以取代传统的检测技术。针对分子检测技术相应的核酸标准物质的研制势在必行。核酸的提取和纯化是核酸标准物质的研制过程中的重要环节之一,快速高效高质量,低毒低成本已成为核酸提取的重要目标。就现有方法进行分析比较,重点对常用的三种提取微生物基因组DNA的试剂盒进行了全方位比较,获得了阪崎肠杆菌较优的基因组DNA提取方法,并对提取的DNA进行PCR特异性扩增检测,获得较清晰的谱带。为阪崎肠杆菌核酸标准物质的研制奠定了基础。

土壤中产脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌的分离与鉴定

贾彬;刘文山;杨江科;汪小锋;叶才伟;闫云君;

2010, 0(04): 183-188.

摘要 ( 189 )

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洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)在生物防治、生物降解等农业领域有着广泛的应用,它产生的脂肪酶则在有机合成、精细化工等领域潜力巨大。采用改良的TB-T平板筛选法从土壤中初步筛选出300株洋葱伯克霍尔德菌,然后用脂肪酶活性检测平板对300株菌进行筛选,最终获得6株脂肪酶产量高的菌,通过发酵发现6株菌均有较好的产脂肪酶能力。随后通过16S rDNA比对的方法将6株全部鉴定为B.cepacia。在此基础上,采用HaeⅢ-recA RFLP和基因种特异性PCR对6株菌进行了基因种鉴定,结果表明JWT16、G63YL、WJ158和JWT137属于Burkholderia cenocepacia菌,JWP9属于Burkhold-eria vietnamiensis,JWT267则属于Burkholderia multivorans。

重组蛋氨酸裂解酶的表达、复性及活性研究

孔晨虹;夏立亮;徐顺利;于源华;蒋琴;杨佳新;

2010, 0(04): 189-193.

摘要 ( 91 )

PDF (3184KB) ( 581 )

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探索以包涵体形式表达的重组蛋氨酸裂解酶的纯化、复性方法,并对其活性进行检测。将阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶重组表达载体PET-15b-mgl1转化大肠杆菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并对表达条件进行优化,获得大量表达。通过对包涵体的纯化及复性研究,检测重组蛋氨酸裂解酶的免疫活性及酶活性。Western blotting结果表明,重组蛋氨酸裂解酶免疫小鼠制备的多抗可以和从阴道毛滴虫中提取的天然蛋氨酸裂解酶发生特异性反应。活性检测结果显示复性蛋氨酸裂解酶有活性,复性效率达到25%左右。以包涵体形式表达的蛋氨酸裂解酶经变性、纯化及复性后,获得大量有活性的酶,为深入了解其结构、功能及酶学性质,开展其在临床检测中的应用研究奠定基础。

米曲霉F-81菌株产中性蛋白酶的分离纯化

汤鸣强;曾小芳;

2010, 0(04): 194-197.

摘要 ( 76 )

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对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶进行分离纯化。经过硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl-S200凝胶过滤层析后,得到一种电泳纯的中性蛋白酶,纯化倍数为26.3倍,活性回收率为6.7%。经SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量约为73.4kD。

红酵母NZ-01发酵条件的优化

张琇;林勤;

2010, 0(04): 198-202.

摘要 ( 84 )

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以红酵母菌株NZ-01为试验菌株,研究其发酵工艺与中试生产。采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分与发酵工艺条件对该菌发酵的影响,并进行中试放大生产。结果显示,该菌最适生长培养基组分为葡萄糖10g/L,蔗糖10g/L,酵母膏10g/L,牛肉膏2.5g/L;色素合成最适培养基组分为葡萄糖15g/L,蔗糖10g/L,酵母膏2.5g/L,牛肉膏5g/L。最适生长起始pH值为6.0,最适接种量为8%,生长周期为44h;最适色素合成起始pH值为7.0,最适色素合成接种量为8%,色素合成周期为48h。发酵优化后的色素产量3.88μg/mL较优化前1.71μg/mL提高了127%。中试产量达3.05μg/mL。红酵母菌NZ-01优化后的发酵条件可以应用于中试生产虾青素,有规模化生产应用潜力。

转萝卜过氧化物酶基因毕赤酵母株系培养条件的优化

王一帆;李芳军;杨静;王丽;王林嵩;

2010, 0(04): 203-206.

摘要 ( 77 )

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为了提高转萝卜过氧化物酶基因RsPrx1毕赤酵母株系的表达产量,对培养条件进行优化。试验结果表明,26℃,pH7.4,甲醇浓度0.5%,通气面积1.5cm2,225r/min条件下,萝卜过氧化物酶RsPrx1表达量达50.95U/mL。在优化条件下,对培养基补充方式和菌株的遗传稳定性研究表明,彻底更换培养基较补充培养基提高3倍得率,转基因菌株遗传稳定性较高。

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