产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.027

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (12): 161-167.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.027

产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

李猛 ,陈利飞 ,杨建楼 ,马春玲

齐鲁工业大学食品与生物工程学院山东省微生物工程重点实验室，济南 250000

收稿日期:2014-05-22 出版日期:2014-12-08 发布日期:2014-12-12
作者简介:李猛，男，硕士，研究方向:微生物酶技术;E-mail:limeng3530@163.com
基金资助:
山东省中青年科学家科研奖励基金项目(C010302)

The Isolation of Beta-amylase-producing Bacteria and Cloning， Expression of Beta-amylase Gene in Escherichia coli

Li Meng, Chen Lifei, Yang Jianlou, Ma Chunling

Shandong Provincial Key Laboratory of Microbial Engineering, School of Food & Bioengineering, Qilu University of Technology, Jinan 250000)

Received:2014-05-22 Published:2014-12-08 Online:2014-12-12

摘要/Abstract

摘要： 从淀粉厂附近的土壤中筛选到一株能够利用淀粉的细菌，对该细菌进行生理生化检测和 16S rDNA 同源性比对，分析该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。利用基因克隆技术得到了该菌株的 β-淀粉酶基因，该基因含有一个约 30 个氨基酸的信号肽序列。将该β-淀粉酶基因重组进入质粒 pET-28a 中，转化进入 E.coli BL21(DE3)中进行表达。检测表达结果显示得到了重组后的 β-淀粉酶蛋白质，重组酶的酶活力提高了 53.9%。

关键词: β-淀粉酶, 蜡状革孢杆菌, 克隆, 表达

Abstract: A bacterium which can degrade starch was isolate from the soil near the starch factory, was identified as Bacillus cereus by means of morphology and physiological-chemical characterization as well as 16S rDNA sequencing. Beta-amylase gene was cloned from the strain by PCR, and gene sequence was analyzed, which can encode a signal peptide which contains about 30 amino acids. The beta-amylase gene was cloned and expressed in Escherichia coli BL21(DE3). The results showed that recombinant bacteria can produce beta-amylase, and enzymatic activity increased by 53.9% compared with the parent.

Key words: Beta-amylase, Bacillus cereus, Isolate clone, Expression

李猛 ,陈利飞 ,杨建楼 ,马春玲. 产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达[J]. 生物技术通报, 2014, 0(12): 161-167.

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