PRRS 病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.032

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (12): 190-194.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.032

PRRS 病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建

阮征^1,2, 李杰¹, 刘开武² ,王莲芳¹ ,华娟¹ ,胡小明3 ,刘杰^1,3 ,黄海军^1,4

1. 武汉市畜牧兽医科学研究所，武汉 430208; 2. 武汉市重大动物疫病防控中心，武汉 430023; 3. 华中农业大学猪遗传育种农业部重点实验室 & 农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070; 4. 武汉市畜牧兽医局，武汉 430023

收稿日期:2014-09-22 出版日期:2014-12-08 发布日期:2014-12-12
作者简介:阮征，男，学士，高级兽医师，研究方向:动物疫病防控;E-mail:paper2006@sina.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目(31201938)，武汉市科技局项目(2013020705070350-9，2013020705070350-14)，武汉市农科院创新项目(CX201309)，武汉市农科院青年英才项目(YC201101)

Construction of Eukaryotic Expression Vector for the CD151 and CD163 Receptor Proteins of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

^1,2Ruan Zheng,¹Li Jie,²Liu Kaiwu,¹Wang Lianfang,¹Hua Juan,³Hu Xiaoming,^1,3Liu Jie,^1,4Huang Haijun

(1 .Wuhan Institute of Animal and Veterinary Science, Wuhan 430208; 2. Wuhan Animal Disease Prevention and Control Center, Wuhan 430023; Key Laboratory of Swine Breeding and Genetics, Ministry of Agriculture & Key Laboratory of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction(Huazhong Agricultural University), Ministry of Education, Wuhan 430070; 4. Wuhan Bureau of Animal Husbandry and Veterinary, Wuhan 430023)

Received:2014-09-22 Published:2014-12-08 Online:2014-12-12

摘要/Abstract

摘要： 为了进一步研究 PRRSV 与细胞受体之间的相互作用机理，通过基因工程方法从 PAM 细胞中克隆获得了 CD151 和 CD163 全长编码片段，利用 Sal I 和 Kpn I 内切酶对回收得到的 CD151(762 bp)和 CD163(3 333 bp)DNA 片段进行酶切，构建了 pIRES2-EGFP-CD151 和 pIRES2-EGFP-CD163 真核表达载体。经 PCR 和酶切鉴定后，分别提取重组质粒进行细胞转染。荧光显微镜下可见单独转染 CD151 和 CD163 基因或 CD151/CD163 共转染的 Marc 145 细胞表达强烈的绿色荧光，Western blot 分析结果进一步证实，CD151 和 CD163 蛋白在转染后的细胞中获得超表达。猪 CD151 和 CD163 真核表达载体的成功构建为进一步探索 CD151 和 CD163 在 PRRSV 感染细胞过程中的协同作用提供了物质基础，特别是对深入研究 PRRS 病毒的入侵及宿主识别具有重要意义。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒, CD151, 分子, CD163, 分子, 真核表达载体, 细胞转染

Abstract: In order to study the interaction mechanism between the PRRSV and cell receptors, the CD151 and CD163 code fragments were obtained from PAM cells by PCR. These PCR products were digested with Sal I and Kpn I, then inserted into pIRES2-EGFP vectors separately to construct eukaryotic expression plasmid pIRES2 EGFP - CD151 or pIRES2 EGFP - CD163. These vectors were identified by the methods of restriction enzyme digestion, PCR and sequencing. Marc 145 cells transfected with CD151 or CD163 or CD151/CD163 expressed strong green fluorescence, which was further confirmed by western blot. The successful establishment of eukaryotic expression vectors of CD151 and CD163 provides the material foundation for the further exploring the synergistic effect of CD151 and CD163 in the process of PRRSV infection, especially to the further study of PRRS virus invasion and the host identification.

Key words: Porcine reproductive and respiratory syndrome, CD151, CD163, Eukaryotic expression vector, Cell transfection

阮征, 李杰, 刘开武 ,王莲芳 ,华娟 ,胡小明3 ,刘杰 ,黄海军. PRRS 病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建[J]. 生物技术通报, 2014, 0(12): 190-194.

Ruan Zheng,Li Jie,Liu Kaiwu,Wang Lianfang,Hua Juan,Hu Xiaoming,Liu Jie,Huang Haijun. Construction of Eukaryotic Expression Vector for the CD151 and CD163 Receptor Proteins of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(12): 190-194.

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Construction of Eukaryotic Expression Vector for the CD151 and CD163 Receptor Proteins of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

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