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尿激酶催化结构域S356A突变体在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶

赵更香;江龙光;卞传兵;袁彩;侯晓敏;叶晓明;黄子详;黄明东;   

  1. 结构化学国家重点实验室;中国科学院研究生院;中国科学院福建物质结构所;
  • 出版日期:2009-06-26 发布日期:2009-06-26
  • 基金资助:
    基金委(30625011,30811130467);; 中科院创新基地(KSCX2-YW-R-082);; 科技部863项目(2006AA02A313);; 福建省青年人才项目(2007F3119)

  • Published:2009-06-26 Online:2009-06-26

摘要: 采用定位突变和重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化毕氏酵母X-33。重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化、凝胶层析柱检测,纯度达到99%以上,该重组的尿激酶催化结构域(C279A/N302Q/S356A)不具有丝氨酸蛋白酶活性。用气相扩散法获得蛋白晶体,其衍射分辨率达1.77(?),结构解析发现在其复合物结构中有三个抑制剂分子苯甲醚。

关键词: 尿激酶, 定位突变PCR, 表达, 纯化, 结晶