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不同N端序列长度匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子的表达

陆合;张碧波;   

  1. 重庆医科大学微生物教研室;重庆文理学院生命科学系;
  • 出版日期:2010-01-26 发布日期:2010-01-26
  • 基金资助:
    国家“948项目”(2003Q04)

  • Published:2010-01-26 Online:2010-01-26

摘要: 克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6D是预测的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的ORF序列,N端序列为MKFIIIDKKVY,编码430个氨基酸;两个重组子均具有△6-脂肪酸脱氢酶保守的组氨酸序列和HPGG序列,长序列的N端比短序列长29个氨基酸残基(MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDGDE-EA)。两个重组子在缺陷型酵母中均得到了的表达,产生了γ-亚麻酸。利用酶的相对活力比较两个重组子在同一温度下的稳定性,长序列重组子的酶在15℃下反应4h后相对活力仍有74%,而短序列酶的相对活力只有43%,所以长序列重组子酶在低温下比短序列酶稳定性高,是因为长序列多出的氨基酸序列增加了酶的稳定性。

关键词: 序列长度, △6-脂肪酸脱氢酶, 匍枝根霉, 表达, 稳定性