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桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析

田谷;顿宝庆;王智;李维维;许修宏;李桂英;   

  1. 中国农业科学院作物科学研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程中国农业科学院生物质能源研究中心;东北农业大学生命科学学院;
  • 出版日期:2012-06-26 发布日期:2012-06-26
  • 基金资助:
    中国农业科学院作物科学研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目(2060302-13);;

  • Published:2012-06-26 Online:2012-06-26

摘要: 通过同源序列PCR克隆的方法,获得桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株的木聚糖酶编码基因xyl,该基因全长984 bp,编码327个氨基酸,无内含子序列,具有完整开放阅读框。其编码的氨基酸序列N端具有一段包含19个氨基酸的信号肽序列,并具有糖基水解酶第10家族(GH10)的保守催化域特征,推测该酶属于第10家族成员。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9相连接构建重组载体pPIC9-XYL,电击转化至毕赤酵母GS115菌株中。挑选阳性重组子经测序、酶活性以及SDS电泳分析表明,xyl基因成功在毕赤酵母中分泌表达,重组酶活性可达214.15 IU/mL。该重组酶最适温度与最适pH分别为50℃和4.5,且具有良好的pH和热稳定性。

关键词: 桔青霉, 木聚糖酶, 毕赤酵母, 酶学性质, 表达