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猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10的表达及鉴定

周思旋;徐健;周碧君;文明;王开功;   

  1. 贵州省畜牧兽医研究所;贵州省贵阳市农业委员会;贵州大学动物科学学院;
  • 出版日期:2012-09-26 发布日期:2012-09-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31072158);;

  • Published:2012-09-26 Online:2012-09-26

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摘要： 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株非结构蛋白Nsp10,以克隆质粒pMD18-T-Nsp10/JL为模板,将Nsp10基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对不同温度和IPTG浓度进行优化,以获得Nsp10蛋白表达的最佳条件,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,并通过Western blotting检测其免疫活性。结果表明,Nsp10基因成功克隆至pET-32a,有分子量约为43.4 kD的融合蛋白获得表达,重组蛋白于诱导4 h后达到高峰,IPTG浓度为0.2-1.2 mmol/L时,重组蛋白表达量无明显差异,Western blotting证实该表达蛋白具有反应原性。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒, Nsp10, 表达

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