拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化

拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化

张静;田兆丰;朱文壮;张飞云;

首都师范大学生命科学学院;北京市农林科学院植物保护环境保护研究所;

出版日期:2012-03-26 发布日期:2012-03-26
基金资助:
国家自然科学基金项目(31071075)

Published:2012-03-26 Online:2012-03-26

摘要/Abstract

摘要： 旨在制备柯浩体的标志蛋白——Atcoilin蛋白,利用pET-28a与目的基因构建重组表达质粒,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定。通过分别改变IPTG的浓度、培养时间、培养温度等来优化Atcoilin蛋白的表达条件。表达出的重组蛋白经过镍柱、分子筛进行纯化。结果显示,原核表达载体pET28a-At1g13030成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相应的重组蛋白经Western blotting鉴定正确。在IPTG浓度为0.7 mmol/L,18℃培养20 h的条件下,目的蛋白表达量最高。经过SDS-PAGE分析鉴定,过镍柱、分子筛后得到的重组蛋白纯度较高。

关键词: Atcoilin蛋白, 表达, 纯化, 标志蛋白

张静;田兆丰;朱文壮;张飞云;. 拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化[J]. .

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