生物技术通报

丰锦;陈信波;

2011, 0(07): 1-6.

摘要 ( 164 )

PDF (310KB) ( 803 )

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干旱、低温、土地盐碱化等非生物胁迫是影响植物生长发育以及作物产量的重要因素。近年来大量研究表明,多种转录因子参与调控植物对各种生物及非生物胁迫的应答与防御反应,与此同时人们对其作用机理的探索也日渐深入。AP2/ERF转录因子家族是植物所特有的一类转录因子,在拟南芥中该家族至少有146个成员;而在水稻中该基因家族多达181个,是已知水稻转录因子基因中最大的家族。这些编码含有一个保守APETALA(AP2)结构域的蛋白质可能在植物多个发育过程及应答外界环境信号过程中发挥重要功能。综述了AP2/EREBP类转录因子的结构特征及其功能特性,并重点讨论了它们在植物抗逆中的调控作用及其在植物抗逆性分子遗传改良上的意义。

植物基因表达转录分析中内参基因的选择与应用

牙库甫江·阿西木;关波;张富春;

2011, 0(07): 7-11.

摘要 ( 181 )

PDF (238KB) ( 1119 )

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管家基因能够在生物体细胞中表达和不断地被转录,对于维持细胞功能发挥重要作用,并在细胞中组成型稳定表达。随着基因表达研究的深入,发现许多管家基因的表达也受到不同程度的调控。选择合适的管家基因作为内参对于准确定量分析目标基因的表达水平至关重要。通过对植物基因表达研究中常用的内参对照基因的表达特性,综述了可以筛选作为内参对照基因的标准和条件的验证。

噬藻体和蓝藻间的基因转移及协同进化作用

刘腾腾;刘丽;魏大巧;夏雪山;

2011, 0(07): 12-17.

摘要 ( 187 )

PDF (260KB) ( 713 )

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生物物种之间的水平基因转移广泛存在于细菌、古生菌和真核生物中,并能造成同一生境中种群的快速协同进化。噬藻体是感染蓝藻的专一性病毒,近年研究表明其在蓝藻水华生消中发挥了重要作用,使人们认识到了噬藻体的重要生态地位。综述了物种间的水平基因转移,介绍了噬藻体遗传多样性研究中常用的光合作用基因、结构蛋白基因等靶标基因所介导的基因转移以及基因转移引起的病毒和宿主的协同进化,并介绍了研究基因转移所用到的试验技术以及今后所要面临的问题。

蛋白质翻译后修饰研究进展

郭会灿;

2011, 0(07): 18-21.

摘要 ( 438 )

PDF (205KB) ( 1832 )

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翻译后修饰在蛋白质加工、成熟的过程中发挥着重要的作用,它可以改变蛋白质的物理、化学性质,影响蛋白质的空间构象、立体位阻及其稳定性,进而对蛋白质的生物学活性产生作用,引起蛋白质的功能改变。修饰基团自身的结构特性对蛋白质的性质、功能也会产生深远的影响。在已有的研究基础上,综述蛋白质翻译后修饰的主要类型以及各修饰作用潜在的生物学功能。

乙肝疫苗的研究进展

常晓依;兰喜;白银梅;柳纪省;

2011, 0(07): 22-25.

摘要 ( 177 )

PDF (205KB) ( 1092 )

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乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的传染性疾病,流行范围广泛,危害严重。目前,乙型肝炎的预防和治疗主要通过接种乙肝疫苗。现针对乙肝疫苗的类型及其免疫学作总结,为乙肝疫苗的深入研究提供参考。

植物蛋白质组学技术研究进展

张根连;范术丽;宋美珍;庞朝友;喻树迅;

2011, 0(07): 26-30.

摘要 ( 134 )

PDF (236KB) ( 549 )

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蛋白质组学被认为是后基因组研究中的最主要部分。与基因组学相比较,蛋白质组学的研究内容更为复杂,同时也更为直观地揭示生命过程。近年来新的蛋白质组学研究技术层出不穷,极大地推动了生命科学的研究进展。简要介绍了蛋白质组学的概念、蛋白质组学的研究内容以及一些新的研究技术在植物中的应用等。

植物遗传转化的替代方法及研究进展

李君;李岩;刘德虎;

2011, 0(07): 31-36.

摘要 ( 138 )

PDF (295KB) ( 1046 )

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农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率也随之提高。对这些可替代的遗传转化方法进行概述,并简要介绍各种方法的优缺点及其在农作物转化中的应用情况。

荧光定量PCR技术在植物研究中的应用

马月萍;戴思兰;马艳蓉;

2011, 0(07): 37-45.

摘要 ( 185 )

PDF (386KB) ( 1482 )

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荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的研究。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点和试验中潜在问题和条件的优化,并对其在植物研究中的应用及前景作了探讨。

PCR技术在海洋生物多肽毒素研究中的应用

郑晓冬;李宝珠;彭超;高炳淼;朱晓鹏;陈心;长孙东亭;罗素兰;

2011, 0(07): 46-53.

摘要 ( 171 )

PDF (352KB) ( 1107 )

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随着PCR反应技术的不断改进和完善,它们在现代科学研究、生产和生活检测中的应用也越来越广,并且极大程度上促进了基因工程和蛋白质工程的快速发展。就PCR技术在芋螺毒素、海蛇毒素、海葵毒素及水母毒素等海洋生物多肽毒素基因克隆研究中的应用作简要介绍。

RNAi技术应用的研究进展

张俐;

2011, 0(07): 54-59.

摘要 ( 169 )

PDF (268KB) ( 649 )

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RNAi(RNA interference),即RNA干扰是由与靶基因同源的内源或外源双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)所引发的一种在动植物中普遍存在的基因沉默现象。它最早在植物体中被发现,现在已发展成为一种生物技术,并成为了后基因时代的重要研究手段。对RNAi技术在生物基础、医学、药学和植物学等领域的研究成果进行综述。

发育时期和光诱导对拟南芥AtSUC2基因表达的影响

肖红;张立军;杜国华;崔震海;

2011, 0(07): 60-64.

摘要 ( 113 )

PDF (322KB) ( 526 )

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蔗糖是高等植物中碳水化合物最主要的转运形式,对于植物的生长发育至关重要。植物体内蔗糖的转运主要依赖蔗糖转运蛋白,因此对于蔗糖转运蛋白基因的研究具有重要意义。拟南芥蔗糖转运蛋白AtSUC2在蔗糖装载中起主要作用,通过半定量RT-PCR测定拟南芥叶片不同发育时期和不同光强下AtSUC2基因的表达量,研究拟南芥特定发育阶段和光诱导作用下AtSUC2基因表达的影响。结果表明,在野生型拟南芥叶片中,AtSUC2基因在16 d幼叶、30 d营养期叶片、生殖期叶片中均表达,在16 d幼叶和生殖期叶片中表达强度较弱,在营养生长旺盛时(30 d叶龄)表达较高。同时,植株在暗处理12 h时,AtSUC2基因表达量降低,在强光处理12 h时,AtSUC2基因表达量与对照差异不显着,可能AtSUC2基因的表达受光诱导但与光强无关。

苦荞中查尔酮合成酶全长基因的克隆及其序列分析

胡耀辉;王冠;刘凯;于寒松;

2011, 0(07): 65-68.

摘要 ( 122 )

PDF (345KB) ( 540 )

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选用乌克兰伊琳娜苦荞为试验材料,以从叶片中提取的RNA为模板,应用RACE技术结合CODEHOP引物设计方法成功克隆出苦荞中查尔酮合成酶cDNA序列后,将其序列电子合并其全长后设计基因全长特异性引物。以DNA为模板进行PCR扩增出基因序列。通过生物信息学分析表明,该基因全长为1 906 bp,具有一个463 bp的内含子序列,编码区长度为1 188 bp,编码395个氨基酸。Blastn序列比对发现本试验所获得的CHS基因序列与相近物种Rheum palmatum(登录号:DQ205352.1)的CHS基因同源性达86%。将得到的序列命名为RaCHS并提交GenBank,登录号为HQ434624。应用Clustalxl.81和MEGA4软件构建系统进化树,并进行了同源性分析。

马铃薯块茎组织特异性启动子的克隆及序列分析

陈国梁;陈宗礼;贺晓龙;罗茜;

2011, 0(07): 69-72.

摘要 ( 121 )

PDF (389KB) ( 550 )

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利用PCR技术从马铃薯陇薯3号基因组DNA中扩增出长度约为1.0 kb的DNA片段,经与T载体连接,测序表明,克隆到的DNA片段大小为969 bp,该序列与GenBank中已公布的patatin启动子序列同源性为97.94%;采用植物顺式调控元件数据库PLACE和P lantCare进行序列分析,结果表明,该片段含有启动子的保守序列TATA-box和CAAT-box,且在CAAT-box上游有8 bp的增强子。此外,还具有马铃薯块茎蛋白patatin基因启动子保守调控序列的蔗糖效应元件(SURE)4个及马铃薯储藏物特异结合调控patatin蛋白表达位点(B-box)2个,而这些特异序列可能是基因特异表达所必须的。

烟草微丝结合蛋白Fimbrin-ABD1结构域的表达及纯化

徐宁;陈志玲;

2011, 0(07): 73-76.

摘要 ( 128 )

PDF (249KB) ( 407 )

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微丝骨架在细胞生命活动中发挥着重要作用,微丝结合蛋白通过调控微丝骨架达到调节细胞生理过程的作用,Fimbrin是重要的微丝结合蛋白,目前对其调控机制还不清楚。以烟草Fimbrin基因为模板,首先通过PCR技术获得了其肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD1)基因,随后构建了蛋白表达载体pET28a-Fimbrin-ABD1,经IPTG诱导获得了Fim-brin-ABD1包涵体,通过摸索包涵体复性的条件得到了有活性Fimbrin-ABD1结构域,并对其功能进行了初步研究,为进一步探讨其作用机制奠定了基础。

烤烟SNARE蛋白基因T-NTGP2全长cDNA克隆与生物信息学分析

胡重怡;蔡刘体;

2011, 0(07): 77-81.

摘要 ( 108 )

PDF (705KB) ( 403 )

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从烤烟品种南江3号(Nicotiana tobacumcv.Nanjiang-3)均一化cDNA文库中克隆获得一个SNARE蛋白同源性较高的cDNA全长序列,命名为T-NTGP2,GenBank中的登录号为HO663897。利用ORF finder和ProtParam软件分析显示,它包含一个长度为597 bp的完整开放读码框,编码一个含有199个氨基酸、等电点为6.96、分子量为22.59 kD的蛋白。Blast搜索结果及进化分析结果表明,烤烟T-NTGP2基因编码的蛋白与烤烟、杨树和蓖麻的Ykt6蛋白具有较高的同源性,其一致性分别为99%、91%和91%。该基因编码的蛋白具有一个典型的VAMP基元,同源分析表明该蛋白属于SNAREs中特殊longins中的Ykt6蛋白。

黄花苜蓿LEA3基因片段克隆与生物信息学分析

刘亚玲;王俊杰;云锦凤;赵彦;侯永霞;

2011, 0(07): 82-87.

摘要 ( 130 )

PDF (575KB) ( 349 )

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根据紫花苜蓿LEA3-1 mRNA(EU665182)的cDNA序列,设计1对特异引物,以经过ABA干旱胁迫处理的黄花苜蓿为材料,提取总RNA。采用RT-PCR方法克隆获得了747 bp的cDNA片段,命名为MfLEA3-1(GenBank登录号:HQ327439)。推测该序列编码了248个氨基酸,这些氨基酸主要由10.1%苏氨酸(Thr)、24.6%丙氨酸(Ala)、17.7%赖氨酸(Lys)和12.9%天冬氨酸(Asp)组成,不含有半胱氨酸和色氨酸,这与其他物种LEA蛋白成分非常接近。该氨基酸序列中存在13个11-mer重复序列,根据第3组蛋白分类标准,MfLEA3-1蛋白比较接近于type I,但是11-mer重复中残基分布与type I有所不同,推测MfLEA3-1蛋白属于新的第3组LEA蛋白类型。黄花苜蓿中成功获得了LEA3基因片段,为最终克隆黄花苜蓿LEA3基因序列全长奠定基础。

大白菜乙烯受体基因家族分子特征、微同线性与进化分析

朱红霞;胡利宗;邓小莉;

2011, 0(07): 88-94.

摘要 ( 124 )

PDF (593KB) ( 572 )

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采用HMMER与BLAST相结合的方法,在大白菜基因组中挖掘了10个大白菜ERT基因,被命名为BraERT1-10。基因结构分析显示,乙烯受体基因的外显子数目变异大,其范围为1-15。微同线性结果表明,白菜与拟南芥间以及白菜基因组内共有5对基因区段具有较高同线性,每对基因区段间至少共享了8个保守序列模块。蛋白保守结构域和亚细胞定位分析表明,BraERT1、BraERT2和BraERT8都具有N端疏水区域、GAF区、HisKA区、反应调节区,分别被定位于质膜、叶绿体和线粒体;BraERT3、BraERT4和BraERT7虽然有N端疏水区域、GAF区和HisKA区,但没有完整的反应调节区,分别被定位于质膜、质膜和胞质外;其余4个蛋白不具有典型区域,主要定位于核和叶绿体内。进化树结果显示,大白菜ERT基因具有3种类型,分别归属于不同3个类群。本研究为大白菜ERT基因功能研究提供线索,为进一步解析大白菜乙烯信号途径奠定基础。

兴安落叶松肌动蛋白基因的分离与序列分析

朱雯雯;林晓飞;张文波;许月英;高野博嘉;

2011, 0(07): 95-100.

摘要 ( 118 )

PDF (379KB) ( 347 )

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以兴安落叶松(Larixgmelinii)实生苗为材料,提取总RNA和基因组DNA;利用兼并PCR及RACE技术克隆肌动蛋白基因(Lg-act)。序列分析的结果显示,该基因cDNA全长1 662 bp,编码377个氨基酸;基因组DNA长度约为2 564 bp,包含4个内含子,5个外显子。所克隆的Lg-act cDNA序列与GenBank中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在77%以上,氨基酸序列的相似性高达93%以上。根据高等植物肌动蛋白相似性构建的系统树显示,兴安落叶松肌动蛋白与挪威云杉肌动蛋白之间的亲缘关系较为密切,在进化中分化时间最为接近。

狭叶坡垒基因组总DNA的提取和纯化方法研究

代文娟;唐文秀;邓涛;丁莉;骆文华;黄仕训;

2011, 0(07): 101-105.

摘要 ( 131 )

PDF (328KB) ( 577 )

相关文章 | 计量指标

以狭叶坡垒叶片为材料,对基因组总DNA的提取和纯化方法进行了研究,并对改良CTAB法、高盐低pH法和改良SDS法进行比较。结果表明,改良的CTAB法更适合狭叶坡垒基因组总DNA的提取,且硅胶干燥30 d的叶样和新鲜叶样所得的DNA几乎没有区别。再对改良CTAB法的水浴时间进行探索,发现150 m in是较为合适的水浴时间。对比酚纯化法和试剂盒纯化法,发现试剂盒纯化损失的DNA少,得率高,是一种简便、快速、安全的纯化方法。

杜氏盐藻GAPDH cDNA的克隆鉴定及其启动子功能表达载体的构建

贾岩龙;牛杰;贾俊英;邱乐乐;薛乐勋;

2011, 0(07): 106-110.

摘要 ( 127 )

PDF (827KB) ( 570 )

相关文章 | 计量指标

根据藻类甘油醛3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)氨基酸高度保守序列设计简并引物,采用5′,3′-RACE和巢式PCR的方法,得到了杜氏盐藻(Dunaliella salina)GAPDH cDNA全长序列。序列同源性比较和进化树等生物信息学分析结果表明,根据获得的盐藻GAPDH的核酸序列推导的氨基酸序列与其他已知物种的GAPDH有较高的同源性。定向克隆于原核表达载体的盐藻GAPDHcDNA在大肠杆菌中以融合蛋白的形式得到了高效表达,并成功构建了由盐藻GAPDH基因启动子驱动的cat(氯霉素乙酰转移酶)基因表达载体pUCGCat,为进一步研究杜氏盐藻GAPDH基因和启动子功能奠定了试验基础。

拟穴青蟹线粒体COI基因序列克隆及SNPs位点分析

马群群;马洪雨;马春艳;崔海玉;马凌波;

2011, 0(07): 111-116.

摘要 ( 145 )

PDF (300KB) ( 718 )

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根据拟穴青蟹(Scylla paramamosain)线粒体全序列设计引物,采用PCR产物双向测序法,克隆了线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因部分序列(761 bp),并筛选、分析了拟穴青蟹的SNPs位点。共分析了采自福建省宁德市的16只拟穴青蟹,另外,从GenBank数据库中下载了31条前人提交的拟穴青蟹COI基因序列(长度在425-522 bp之间)。利用MEGA4.0软件对所有序列进行比对分析,结果表明碱基T、C、A和G的平均含量分别为37.6%、17.8%、28.9%和15.7%,G+C的含量平均为33.5%。分析结果表明,在所克隆的761 bp的COI基因序列中共发现29个SNPs位点,其出现频率为3.8%。在这29个SNPs位点中,13个为C/T转换(占44.8%),12个为A/G转换(占41.4%),2个为A/T颠换(占6.90%),1个为G/C颠换(占3.45%),另有一个位点(201 bp处)发生了A/C颠换和C/T转换两种类型的碱基替换。氨基酸分析表明,在29个SNPs位点中,有9个位点属于非同义突变,引起了氨基酸的变化;其他20个位点属于同义突变,未引起氨基酸的变化。这将为拟穴青蟹遗传背景和群体遗传多样性研究提供新的分子标记。

毛蚶、泥蚶和魁蚶ITS1核苷酸序列分析

孙桂金;潘杰;刘可春;王雪;彭维兵;何秋霞;王思锋;

2011, 0(07): 117-120.

摘要 ( 126 )

PDF (233KB) ( 484 )

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对毛蚶、泥蚶和魁蚶3种贝类的ITS1序列进行PCR扩增、测序及分析,并用M ega3.1软件对其进行系统进化分析。毛蚶、泥蚶和魁蚶的ITS1序列长度分别为424、456和431 bp,3种蚶的479个序列位点中,共有330个保守位点,98个变异位点,94个单突变位点。系统进化分析表明,毛蚶和泥蚶先聚为一支,而后与魁蚶聚为一支。ITS1分析结果显示毛蚶和泥蚶种间的遗传关系较近。

小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5′上游调控区域的克隆及序列分析

龚亮;张彦博;耿鹏;胡美英;

2011, 0(07): 121-126.

摘要 ( 138 )

PDF (859KB) ( 401 )

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利用Tail-PCR技术克隆了小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的基因组DNA序列,全长5 013 bp,GenBank登录号为HM210791。研究表明,该基因具有3个内含子,大小分别为96 bp、577 bp和549 bp,且其内含子两端具有典型的GT-AG结构。生物信息学分析表明,该基因5′上游调控区域不仅包括TATA-box等启动子核心序列,而且含有BR-C Z4、Hb、Dfd、CF2-II和HSF等转录因子结合位点。进一步鉴定了该基因的转录起始位点、启动子序列和CPG岛区域。为小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的转录调控机制和具体的生理功能研究提供一定基础。

棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因5′上游序列的克隆及序列分析

张雷;张学涛;马纪;李芬;刘小宁;

2011, 0(07): 127-133.

摘要 ( 127 )

PDF (509KB) ( 580 )

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已证实2-十三烷酮等植物次生物质的胁迫会诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)CYP6B6基因的过量表达[1]。为探明棉铃虫P450 CYP6B6基因的表达调控机制,根据棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因cDNA序列(GenBank登录号:AY950636),运用基因组步移的方法获得其5′上游区的序列,用启动子区的分析软件进行比对分析,结果得到棉铃虫P450 CYP6B6基因5′上游区域1 333 bp的基因片段。分别运用NNPP v.2.2和TRANSFAC v.6.0预测转录起始位点及分析了转录因子结合位点,结果显示,该序列不仅包括TATA盒等这一类核心结构序列,还含有多个转录因子的结合位点,如GATA-1、Dfd、C/EBP、HSF、cytR和AhR(芳香烃受体化合物应答元件)等。该结果为深入研究棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定分子基础。

棉铃虫核型多角体病毒Ha105的序列分析及敲除和回复菌株的构建

曾利平;闫尧;徐旭士;

2011, 0(07): 134-138.

摘要 ( 139 )

PDF (458KB) ( 418 )

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通过生物信息学方法对Ha105的生物功能进行预测,运用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有350 bp同源臂的氯霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因替换了棉铃虫病毒细菌人工染色体HaBacHZ8上的Ha105基因,然后利用Bac-to-Bac系统把Ha105回复到Ha105缺失的重组病毒上,构建了Ha105的缺失和回复重组病毒。生物信息学分析结果表明,Ha105是bro基因家族成员,含有Bro-N结构域,可能对宿主细胞的转录和病毒复制有一定影响。此外,重组病毒的PCR及酶切结果表明,成功构建了vHaHa105-KO-PH-gfp缺失菌株和vHaHa105-REP-PH-gfp、vHaHa105-REP-gfp回复菌株。该Ha105缺失及回复菌株的获得为进一步研究Ha105的功能奠定基础。

大蒜A病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

杨宇;韦传宝;华俊雅;刘春云;吴琪瑶;

2011, 0(07): 139-142.

摘要 ( 118 )

PDF (584KB) ( 440 )

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根据GenBank报道的大蒜A病毒(GarV-A)序列设计引物、扩增其外壳蛋白基因并进行序列分析。结果表明,GarV-A的CP基因与目前已报道的两种GarV-A不同分离物CP基因的核苷酸序列同源性为98%-99%;氨基酸序列同源性均为98%。将GarV-A CP基因插入表达载体pSBET,在大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株中诱导表达。CP经12%SDS-PAGE和5%-20%SDS-PAGE两次纯化,免疫小鼠获得抗CP血清,Western blotting分析表明确定制备的抗体对CP具有高度特异性,ELISA检测表明制备的抗体能够与天然病毒离子结合,因此可以作为该病毒的检测。

一种简易高效的小麦叶片胞间液蛋白提取方法的建立

白婷;张朝晖;严伟;徐世昌;潘映红;

2011, 0(07): 143-147.

摘要 ( 118 )

PDF (270KB) ( 441 )

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植物细胞间液中的蛋白在植物生长发育和抗病抗逆反应及其信号传导过程中发挥着重要作用,是植物学研究的新热点。由于细胞间液含量低,容易因组织细胞损伤性受到胞内成分污染,高纯度的细胞间液蛋白的提取相对困难,参考相关文献报道,建立了一种简易高效的小麦叶片细胞间液蛋白的提取方法。选取小麦品种"铭贤169"幼苗叶片为材料,用50mmol/LNaAc缓冲液充分浸润,负压处理20 min后,30×g离心5 min除去叶片表面缓冲液,随后2 000×g离心15 min,收集小麦叶片胞间液。将获得的小麦叶片胞间液冷冻干燥后,进行SDS-PAGE分离分析。电泳胶图上显示出细胞间液提取物与叶片组织提取物的蛋白质组成有极显着差异,使用MALD-TOF/TOF MS技术分析SDS胶上的细胞间液蛋白条带,共鉴定到9种非高丰度或假定的蛋白,其中有两种是已报道过的植物细胞间液蛋白。试验结果表明,本方法简易高效,适用于小麦蛋白质组学研究中高纯度的细胞间液蛋白的提取。

小麦叶片类囊体膜蛋白复合体的分离和分析技术研究

向小聪;孟庆石;鲍锦库;潘映红;

2011, 0(07): 148-153.

摘要 ( 148 )

PDF (319KB) ( 563 )

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膜蛋白复合体在生命活动中执行着重要的生物化学功能,具有重要的研究意义,但由于其低表达和高度疏水的特点,完整状态和低丰度的膜蛋白复合体的分离分析仍是一大挑战。首先,采用蓝绿温和胶非变性电泳作为第一维分离技术,大量分离制备叶绿体类囊体膜蛋白复合物;其次,采用电洗脱方法差异富集第一维电泳分离到的各种蛋白复合体;最后,采用SDS-PAGE作为第二维分离技术,分析差异富集的不同种蛋白复合体的亚基构成。研究结果表明,利用这种分离分析模式,能有效地富集膜蛋白复合体尤其是低丰度膜蛋白复合体,明显提高第二维分离分析的分辨率和蛋白覆盖率。

谷子弯孢菌海藻糖酶基因(ClTRE)及其启动子的克隆和序列分析

谢夏青;李志勇;马继芳;刘磊;董志平;董金皋;

2011, 0(07): 154-159.

摘要 ( 146 )

PDF (658KB) ( 497 )

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海藻糖代谢调控真菌生长、发育及致病性,为了进一步研究海藻糖代谢在谷子弯孢病菌中的功能,对海藻糖酶基因及其启动子进行了克隆。根据植物病原真菌海藻糖酶基因的保守序列设计简并引物,扩增得到海藻糖酶基因同源序列。通过RACE技术,首次在谷子弯孢病菌中克隆得到了海藻糖酶基因(ClTRE)全长cDNA序列。序列分析表明,该基因最大开放阅读框为2 037 bp,编码679个氨基酸;二级结构预测表明,该蛋白含约40.48%的α螺旋,12.99%的延伸串,6.5%的β转角,40.03%的不规则卷曲;蛋白保守结构域分析发现其含有海藻糖酶特有的保守位点,与其他植物病原真菌中海藻糖酶基因有51%-86%同源性;利用SignalP3.0软件预测谷子弯孢海藻糖酶蛋白具有信号肽。通过染色体步移技术克隆得到其上游启动子序列,利用TFSEARCH软件分析含有多个与逆境胁迫相关的顺式作用元件,初步推测该基因与逆境胁迫相关。谷子弯孢病菌ClTRE基因及其启动子的克隆,为进一步研究该基因在病菌致病中作用以及以该基因为靶位点的化学防控奠定基础。

寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析

连英丽;蓝东明;杨博;王永华;

2011, 0(07): 160-166.

摘要 ( 127 )

PDF (546KB) ( 679 )

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根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank登录号:AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,应用重叠延伸PCR技术,人工合成了寄生曲霉脂肪酶基因lip AP。将基因克隆到pFL-B13cl载体上获得重组质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达。融合蛋白Sumo-LipAP在0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导6 h表达量最高。SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-Sumo-LipAP以包涵体形式表达,大小约为53 kD。复性后透析处理,大部分融合蛋白转化为正确构象且具有催化活性,经一步疏水层析其纯度可达98%。生物信息学工具预测和分析发现,LipAP空间结构保守,具有催化三联体(Ser173-Asp226-His288)、活性部位盖子(S111YSIRNWVTDAT122)及保守五肽(GHSLG)3个功能域。

木糖异构酶基因xylA的克隆及其表达载体的构建

孙磊;张国军;闫爱玲;徐海英;

2011, 0(07): 167-170.

摘要 ( 167 )

PDF (263KB) ( 633 )

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木糖异构酶基因xylA是一种正向选择标记基因,在植物基因工程中使用该标记可以获得安全的转基因植物。构建了以xylA基因为选择标记的植物表达载体。从大肠杆菌Top10中扩增出xylA基因,插入到质粒pCAMBIA2301的XhoI位点,通过酶切和PCR检测插入片段的正确性,得到载体pCAMBIA2301-xylA,将pBI121载体上的‘35S-GUS-Nos’表达框插入到pCAMBIA2301-xylA的EcoR I和Hind III位点。得到中间载体pCAMBIA2301-xylA-GUS,用SacI和SmaI切下克隆载体上的CBF1基因替代pCAMBIA2301-xylA-GUS中的GUS片段,用电转化法将获得的表达载体转化到农杆菌中,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础。

乳糖诱导重组多价人精子表位肽在大肠杆菌中的表达

谢琦;林军;白玲;叶元;杨冰;石青峰;刘永明;

2011, 0(07): 171-175.

摘要 ( 141 )

PDF (320KB) ( 513 )

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旨在研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组多价人精子抗原表位肽的表达及诱导表达的优化条件。在摇瓶发酵条件下,通过改变培养基组成、诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度、诱导时间和诱导方式等条件,利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统,研究以上条件改变对GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较。结果显示,在摇瓶试验中,最优表达条件为选用TB培养基,在菌体对数生长的中期进行诱导,诱导温度37℃、乳糖诱导终浓度3 mmol/L、诱导时间6 h。GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.5%,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同。分批流加乳糖和一次性加入乳糖诱导,效果一样。乳糖可以替代IPTG作为诱导剂诱导GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达,优化条件下可获得与IPTG相同的诱导表达效果。

Scribble在原肠期鸡胚表达的研究

徐涛;林艳青;王晓钰;吴婷;韩哲;张希敏;杨雪松;王丽京;

2011, 0(07): 176-179.

摘要 ( 140 )

PDF (341KB) ( 545 )

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旨在研究极性脚手架蛋白Scibble(Scrib)在原肠期的表达及意义,明确Scrib在早期鸡胚发育中的作用。以含有全长人Scrib的质粒pEGFP-N2-Scrib作为模板克隆出N端一段770 bp左右的片段,从而构建一个新的质粒pSPT18-Scrib;以pSPT18-Scrib为模板进行体外转录制备cRNA探针;并采用原位杂交的方法用此探针检测鸡原肠胚各个时期Scrib的表达情况。结果显示,Scrib在鸡胚四期开始逐渐在原条顶端及两侧的外胚层表达,并随着发育过程向外胚层两侧蔓延扩散,并且在发展到十期时呈现包括神经管和体节在内的广泛的弥散性表达。Scrib的表达规律提示在胚胎发育早期Scrib对外胚层细胞迁移和分化以及而后的器官发生起到重要的作用,为进一步研究Scrib在鸡胚早期发育中的作用提供参考。

大黄鱼性腺线性化cDNA文库的构建及生殖免疫相关基因的筛选

陈芸;周鹏;张子平;王艺磊;

2011, 0(07): 180-185.

摘要 ( 115 )

PDF (312KB) ( 439 )

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以大黄鱼(Larimichthys crocea)性腺为材料,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术和DSN(duplex-specific nuclease)处理构建了大黄鱼性腺线性化cDNA文库,文库的库容为4.3×106PFU/mL,重组率为95.8%,插入片段大小为0.5-3 kb,说明该文库质量良好。从文库中随机挑取了3 961个克隆进行测序,共获得3 535条高质量的表达序列标签(ESTs)。包含与生殖免疫相关的基因33条,其中非特异性免疫相关基因17条,特异性免疫相关基因16条。

重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

张念章;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;逯忠新;

2011, 0(07): 186-190.

摘要 ( 108 )

PDF (303KB) ( 546 )

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利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown。通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多。将此外源打靶基因的两端引入PstI和SacI酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coliSM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础。

含35S启动子的粟酒裂殖酵母表达载体的构建及功能鉴定

王贺;王丕武;洪洋;宋冰;

2011, 0(07): 191-196.

摘要 ( 136 )

PDF (376KB) ( 548 )

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利用PCR技术从植物表达载体pBI121上先后克隆出GUS基因和35S-GUS-NOS基因序列,分别构建粟酒裂殖酵母重组表达载体pESP-2-GUS和pESP-2-35S.GUS.NOS,并将它们转化到粟酒裂殖酵母菌体中。通过对不同液体培养基中两种转化子的不同启动子启动GUS基因表达产物的GUS染色分析与比较,证明连入的35S启动子能够替代pESP-2自身受维生素B1浓度调控的启动子,从而降低了培养基的成本,为今后工业上利用粟酒裂殖酵母发酵生产产品,提高经济效益,奠定了基础。

不同寄主来源白假丝酵母菌多态性与耐药性分析

陆合;黄伟;罗雪莲;

2011, 0(07): 197-200.

摘要 ( 129 )

PDF (264KB) ( 495 )

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为研究白色假丝酵母菌的分子多样性情况,探讨RAPD基因多态性与药物敏感性的关系,在获得病菌分离物的基础上,应用经筛选的10条10 bp随机引物,对18株病菌分离物进行RAPD分析,利用UPGMA对结果进行聚类。RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为白假丝酵母菌分型方法,18株不同来源的菌株可大致分为6种亲缘关系。药敏结果显示导致出现耐药的机制可能并不相同。所以利用RAPD标记技术在基因水平上对白色假丝酵母菌进行分子分型和鉴定是可行的。

新型基因重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性研究

高红伟;李素波;艾雪;李妙;王颖丽;让文亮;季守平;宫锋;

2011, 0(07): 201-204.

摘要 ( 126 )

PDF (332KB) ( 545 )

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观察脆弱类杆菌来源的新型重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株的遗传稳定性。在有选择压力(Kan+)条件下,将重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗性、平板传代及诱导过程中的质粒稳定性、限制酶切图谱、测序、表达量和酶活力检测。结果表明细菌形态、生长速度和抗生素抗性等与原始种子库无明显差异;LB固体培养基上传60代后质粒稳定性接近100%,但诱导过程中质粒易丢失。第20、40和60代提取质粒进行酶切检查,酶切图谱没有改变。DNA测序未见α-半乳糖苷酶基因变异。原代菌株及第20、40和60代菌株经诱导培养,其α-半乳糖苷酶表达水平、酶活力及菌体蛋白的SDS-PAGE图谱均无明显差异。说明α-半乳糖苷酶工程菌株在平板传代中具有良好的遗传稳定性

胡麻专化型尖孢镰刀菌ISSR-PCR最佳反应体系的建立

苑琳;刘姗姗;路福平;李子钦;张辉;

2011, 0(07): 205-209.

摘要 ( 108 )

PDF (360KB) ( 375 )

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采用正交试验设计原理,对尖孢镰刀菌ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素进行优化筛选,确立了适合尖孢镰刀菌ISSR分析的反应体系,即25μL PCR反应体积中含有20 ng模板DNA、1 UTaq酶、0.4μmol/L引物、0.2 mmol/LdNTPs、4.0 mmol/L Mg2+和2.5μL10×buffer。PCR反应最佳退火温度根据引物而定,在此基础上筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。此研究为今后利用ISSR技术分析尖孢镰刀菌遗传多样性和群体结构奠定了基础。

利用慢病毒载体快速建立表达外源基因的哺乳动物细胞系

陈平;胡涛;薛敬礼;杜春燕;章金涛;朱奎成;金树兴;王纯耀;

2011, 0(07): 210-213.

摘要 ( 118 )

PDF (299KB) ( 643 )

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建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系是一项重要的生物技术,介绍了联合使用慢病毒载体和流式细胞仪分选技术来建立稳定表达绿色荧光蛋白的293T细胞系。结果表明,在1个月左右的时间里即可获得表达绿色荧光蛋白的293T细胞系,阳性细胞率高达96.5%,而且建立的细胞系能够稳定传代。因此,联合慢病毒载体和流式细胞仪分选技术的策略对于建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系快捷和可靠。

重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定

赵丽;王凤龙;杨慧;李鹏;李霞;

2011, 0(07): 214-220.

摘要 ( 146 )

PDF (440KB) ( 497 )

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通过双功能螯合剂S-2-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(ρ-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2+)分别与载体蛋白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联。通过二喹啉甲酸(bicin-choninic acid,BCA)法测抗原蛋白浓度,对抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行定性鉴定,利用石墨炉原子吸收分光光度法检测抗原中Zn2+含量等,成功获得了免疫抗原Zn-DTPA-KLH和检测抗原Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA。用Zn-DTPA-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,极限稀释法亚克隆,间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)筛选,获得了1株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5)。Z1A5染色体数目在100以上,所分泌的抗体为IgM亚类,轻链为kappa型,腹水型抗体效价高达1∶51 200。本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。

消费者对转基因食品态度评价与认知:食品政策综述及其影响(续完)

于迎建;

2011, 0(07): 221-224.

摘要 ( 162 )

PDF (233KB) ( 664 )

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<正>5从态度到价值观和接受度:消费者购买行为多数研究使用国家的参数选择方法,已经得出研究结果,美国消费者自愿为非转基因食品支付溢价费。因此,相对于转基因食品,消费者把非转基因食品放在较高的价位。Rousu等(2003年)复制了一个非传统的方法,在一个真正的市场里使用若干种价格拍卖,结果发现在一个没有污染的产品中,消费者都是自愿支付大量的溢价费来避免转基因污染。Bredahl(1999年)发现消费者的购买意向发生

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