生物技术通报

王金辉;李轶女;刘惠芬;张志芳;沈桂芳;

2011, 0(02): 1-6.

摘要 ( 146 )

PDF (1347KB) ( 692 )

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蛋白质组分析是鉴定蛋白质种类和功能的有力工具之一。叶绿体作为光合作用的重要细胞器,叶绿体蛋白质组学成为了研究的热点,涉及的领域包括叶绿体的总蛋白质组学、亚细胞蛋白质组学、差异蛋白质组学和蛋白质的功能等。现主要介绍蛋白质组学的常用技术以及叶绿体蛋白质组学的最新研究进展。

抗菌肽构效关系及其表达策略研究进展

魏照征;田健;伍宁丰;刘国安;

2011, 0(02): 7-11.

摘要 ( 97 )

PDF (759KB) ( 906 )

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抗菌肽(antim icrobial peptides)是一类具有抗菌活性短肽的总称,广泛分布于原核生物与包括人类在内的真核生物体内,是宿主免疫防御系统中的重要组成部分。研究表明,抗菌肽除具有抗病毒、抗细菌、抗真菌作用外,还具有抗肿瘤作用。现从抗菌肽的结构特点与抗菌机制出发,对其构效关系及表达策略进行综述。

外源基因转化棉花育种研究的进展与应用

王志才;张富春;

2011, 0(02): 12-17.

摘要 ( 117 )

PDF (785KB) ( 436 )

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棉花作为重要的经济作物,新品种的选育和应用对于促进棉花生产至关重要。通过转基因技术将外源基因转化棉花,是棉花育种的新手段。尤其是抗逆、抗除草剂、抗虫、抗病和提高棉花品质的转基因技术研究,有助于加速棉花新品种的培育。棉花的转基因技术主要包括农杆菌介导法、基因枪轰击法和花粉管通道法。利用不同的转基因技术在棉花外源基因遗传转化的育种研究中取得了明显成效,探讨外源基因转化棉花育种研究的进展与应用,为新疆陆地棉的转基因育种研究提供重要参考。

泛素化修饰与植物免疫应答

严金平;杨华;

2011, 0(02): 18-22.

摘要 ( 145 )

PDF (846KB) ( 623 )

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植物暴露在细菌、病毒和真菌等病原微生物环境中,病虫害是限制农作物产量和品质的主要因素,而植物病虫害的防治依赖于对植物抗病机制的深入认识。近年来的研究表明,蛋白质泛素化广泛地参与植物防御调节。蛋白质泛素化是真核生物中重要的翻译后修饰方式之一,在植物中,泛素化修饰在多种信号传导途径中发挥作用,如激素、光、糖应答,发育调节和病原菌防御信号途径等。综述了蛋白质泛素化修饰在植物免疫应答中的调控作用。

脯氨酸在植物非生物胁迫耐性形成中的作用

谢虹;杨兰;李忠光;

2011, 0(02): 23-27.

摘要 ( 173 )

PDF (1192KB) ( 1152 )

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植物作为固着生活的有机体,经常暴露在多变且对其生长发育不利的环境条件中,这些生物或非生物的胁迫因子严重影响着植物的生长、发育、生存和分布。脯氨酸在植物抵抗逆境胁迫过程中起着重要的作用。根据国内外的最新研究进展,结合我们的研究成果,对植物体内脯氨酸的代谢途径、渗透调节、抗氧化、分子伴侣、生长发育信号和毒性等方面进行了综述,并对该研究领域作了展望。

猪传染性胃肠炎病毒基因工程疫苗研究进展

杨恒;夏雪山;李盛陶;陈伟;

2011, 0(02): 28-32.

摘要 ( 143 )

PDF (861KB) ( 467 )

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猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起猪的一种高度接触性肠道疾病,可导致仔猪发生严重的呕吐、腹泻与脱水,死亡率可达100%。口服疫苗是TGEV基因工程疫苗研究的主要方向,目前已在腺病毒、细菌、转基因植物及DNA疫苗中对TGEV的S基因进行了表达,并对其口服免疫后的免疫原性进行研究。现针对TGEV基因工程疫苗近年来研究的概况进行综述,分析其优点与不足,并对其未来的发展进行展望。

杆状病毒凋亡抑制基因的研究进展

余倩;

2011, 0(02): 33-36.

摘要 ( 104 )

PDF (445KB) ( 445 )

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杆状病毒(bacu lovirus)感染昆虫细胞能引起细胞凋亡,但在长期进化过程中,杆状病毒可通过自身编码凋亡抑制基因的表达,抑制细胞凋亡以利于自己的增殖。目前在杆状病毒基因组中已发现两种不同类型的细胞凋亡抑制基因p35/p49和iap,这两类凋亡抑制基因分别作用于细胞凋亡途径的不同位点,以抑制细胞的凋亡。近年来人们对这两种基因的蛋白结构及作用机制等方面进行了大量的研究,这些为今后研究昆虫细胞凋亡,扩大杆状病毒宿主范围等方面奠定了基础。

低温纤维素酶的研究进展

董硕;迟乃玉;王鑫;张庆芳;

2011, 0(02): 37-41.

摘要 ( 125 )

PDF (996KB) ( 866 )

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低温纤维素酶在低温下仍具有较高酶活力及较高催化效率,在应用中能够缩短处理工艺时间,节省加热或冷却费用,且易失活,有着中高温纤维素酶无法比拟的优势。现针对微生物低温纤维素酶的研究现状,包括菌种来源、分离鉴定、酶学性质、适冷结构及机理研究和基因工程等方面进行综述。

虾类胰蛋白酶的研究进展

王萍;吴燕燕;李来好;杨贤庆;刁石强;

2011, 0(02): 42-47.

摘要 ( 140 )

PDF (1125KB) ( 414 )

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综述了近年来国内外对甲壳类动物虾类胰蛋白酶的研究概况,详细分析了虾类胰蛋白酶的分离纯化、特性、结构及其在食品工业上的应用,展望对虾加工过程产生的大量虾头废弃物中胰蛋白酶资源的开发利用。

真菌漆酶性质、分子生物学及其应用研究进展

司静;李伟;崔宝凯;戴玉成;

2011, 0(02): 48-55.

摘要 ( 303 )

PDF (1371KB) ( 1456 )

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漆酶是一种含铜的多酚氧化酶。目前发现多种生物能够产生漆酶,包括植物、真菌、昆虫和细菌等,其中,以真菌中的白腐真菌研究最多。由于漆酶在生物漂白、农作物秸秆利用以及环境污染处理等方面具有广阔的应用前景,漆酶研究受到越来越多的关注。同时,随着分子生物学技术的发展,漆酶研究已经深入到基因水平,多种漆酶基因已经成功获得克隆,一些漆酶基因也实现了异源表达。现针对真菌漆酶的生物学性质、分子生物学及其应用的研究进展进行了概括总结,并对其前景进行了展望。

细菌果胶酶的研究进展

张菊;薛永常;

2011, 0(02): 56-60.

摘要 ( 108 )

PDF (811KB) ( 519 )

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近些年来,国内外对细菌果胶酶的研究取得了很大的进展,产果胶酶的新细菌菌种不断地被发现,细菌果胶酶新的应用领域不断地被拓宽。细菌所产的果胶酶多为碱性,具有较好的热稳定性和较宽的酸碱作用范围,被广泛应用于麻类的生物脱胶、茶与咖啡发酵、造纸和果胶废水处理等领域中。细菌果胶酶工业生产具有投资少、成本低、无环境污染等优点。简要概述产生果胶酶的细菌种类、细菌果胶酶的分类、已克隆的酶基因以及应用等内容。

基于特定引物PCR的DNA分子标记技术研究进展

黄龙花;吴清平;杨小兵;胡惠萍;

2011, 0(02): 61-65.

摘要 ( 149 )

PDF (665KB) ( 959 )

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SSR、SCAR、SRAP和TRAP是4种最新发展的基于特定引物PCR的新型DNA分子标记技术,具有简便、高效、重复性好等优点,已在遗传育种和种质资源研究等各个方面得到广泛应用。介绍了这4种分子标记的基本原理和特点,综述了它们在分子生物学研究中的应用。

荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用

李春娟;张一兵;罗喜钢;王毅;王景林;

2011, 0(02): 66-69.

摘要 ( 128 )

PDF (822KB) ( 558 )

相关文章 | 计量指标

荧光定量PCR技术是近些年来发展起来的一种核酸检测技术,它以灵敏度高、特异性强、重复性好、快速准确定量等特点被广泛应用于各个领域。现主要介绍荧光定量PCR技术在病毒、细菌、真菌和寄生虫4个临床微生物检测方面的应用进展。

PCR-SSCP技术在微生物检测中的应用

顾真庆;冯志新;王占伟;刘茂军;王海燕;白昀;邵国青;

2011, 0(02): 70-74.

摘要 ( 103 )

PDF (1141KB) ( 503 )

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聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是一种能够检测DNA突变的分子生物学分析技术,具有快速、简便、灵敏与适于大样本筛选的特点,近年来被广泛应用于生命科学领域的研究。对PCR-SSCP技术在微生物检测研究领域的应用和发展作简要的介绍。

基因工程技术在食品工业中的研究进展

张占军;王富花;

2011, 0(02): 75-79.

摘要 ( 215 )

PDF (1098KB) ( 971 )

相关文章 | 计量指标

综述基因工程技术在改善食品原料品质、改良食品工业用菌种和食品加工性能、生产酶制剂和保健食品方面的应用,同时对转基因食品及其安全性问题进行了总结归纳,最后对基因工程技术在食品中的发展前景进行展望。

大肠杆菌中利用苏云金芽胞杆菌强启动子p1Ac指导Cry1Ac蛋白表达的特性分析

马君兰;束长龙;刘东明;张杰;宋福平;黄大昉;

2011, 0(02): 80-84.

摘要 ( 79 )

PDF (1647KB) ( 355 )

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对利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)强启动子——cry1Ac基因启动子p1Ac指导cry基因在大肠杆菌中的表达进行了研究。结果显示,大肠杆菌中由启动子p1Ac指导表达的Cry1Ac蛋白与苏云金芽胞杆菌来源的Cry1Ac蛋白在碱溶性、胰蛋白酶活化、杀虫活性等方面有较好的一致性,从而解决了目前商业化载体大肠杆菌表达cry基因时形成不易溶解的包涵体问题。同时,还对p1Ac指导的cry1Ac基因在大肠杆菌中表达的发酵条件进行了初步探索。

禾本科psbA-trnH基因的序列分析及其在斑点野生稻鉴定中的应用

许瑾;徐涛;肖正康;朱水芳;张万霞;

2011, 0(02): 85-92.

摘要 ( 121 )

PDF (1423KB) ( 545 )

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通过对稻属(Oryza L.)及其近缘种等禾本科(Gramineae)植物叶绿体psbA-trnH基因进行扩增和测序,分析其系统进化关系及序列差异,并设计鉴定斑点野生稻(O.punctata)的特异分子标记。序列分析的结果表明,栽培稻材料间psbA-trnH基因序列没有或很少存在碱基差异,野生稻相对变异丰富,其中靠近3′端下游序列碱基变异较为丰富,5′端相对保守。根据斑点野生稻psbA-trnH基因序列的特异位点设计的引物,扩增的目的片段ptBD118长118bp,退火温度在62℃时特异性最佳。在条码基因差异位点分析的基础上,开发的特异分子标记用于物种的快速鉴定,为珍贵物种的口岸鉴定提供了检测方法。

红麻不育系和保持系中cob基因的克隆与分析

陈鹏;周瑞阳;赵杨;蒋利和;

2011, 0(02): 93-97.

摘要 ( 114 )

PDF (1465KB) ( 316 )

相关文章 | 计量指标

开展红麻的CMS机理的研究有利于更好地利用其杂种优势。分别提取红麻CMS系和保持系线粒体DNA,Southern blot分析表明,cob基因的组织形式存在差异。根据不同物种cob基因的保守序列设计引物,在红麻CMS系和保持系中克隆到了cob基因,GenBank序列号分别为HM535786和HM535787。基因长度均为1179bp,编码392个氨基酸残基,分子量约为43kD。序列比较发现cob基因在CMS系和保持系同源性达99.8%,和其他物种中cob基因的同源性大于92.3%。研究结果为下一步克隆cob基因的侧翼序列,进而揭示红麻的CMS机理提供了很好的研究基础。

完全重瓣型山茶花品种‘红十八学士’CjHDEF基因cDNA的序列分析

朱高浦;李纪元;范正琪;倪穗;

2011, 0(02): 98-102.

摘要 ( 104 )

PDF (1439KB) ( 403 )

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我国完全重瓣型山茶花品种‘红十八学士’(Camellia japonica‘Hongshibaxueshi’)CjHDEF基因的cDNA序列(GenBank登录号:HM773024)生物信息学分析表明,该基因属于花发育B类功能基因的AP3基因家族成员,其cDNA全长1013bp中有一个完整的681bp开放阅读框,编码226个氨基酸。该基因编码蛋白质分子量26.09kD,理论等电点9.03;不稳定系数达43.20,表明该蛋白为不稳定蛋白;其编码蛋白属于MIKC型蛋白,该蛋白预测的二级结构和三级结构结果相符,主要以α-螺旋和无规卷曲为主,延伸链所占比重最小;含有6个蛋白激酶C磷酸化位点,表明该基因与‘红十八学士’花器官发育的细胞生长和分化密切相关;有多达11个磷酸化特定位点,说明该基因在花器官发育的细胞信号传递过程中占有重要地位。

柿ζ-胡萝卜素脱氢酶基因的克隆与序列分析

赵大球;周春华;薛银芳;陶俊;

2011, 0(02): 103-106.

摘要 ( 107 )

PDF (1194KB) ( 349 )

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通过对柿ζ-胡萝卜素脱氢酶(-ζCarotene desaturase,ZDS)基因的克隆及序列分析,旨在为改良柿果实品质奠定基础。根据GenBank中其他植物ZDS基因的保守序列设计了两条PCR扩增引物,以柿果实中所提取的RNA为模板,采用RACE技术扩增出一条约为500bp的条带。经过序列分析,其长578bp,不含内含子,具有部分开放阅读框(177bp)、终止密码子(TGA)和poly(A)尾巴(11bp),共编码58个氨基酸。该序列及其所编码的氨基酸与其他植物ζ-胡萝卜素脱氢酶基因均具有较高的同源性。该基因已提交GenBank数据库,登录号为GU075728。

口蹄疫病毒VP1基因转化马铃薯及其块茎专一性表达

宋东光;张辉松;聂呈荣;黄林旋;王惠珍;张英慧;何丽烂;邓日烈;

2011, 0(02): 107-109.

摘要 ( 87 )

PDF (1028KB) ( 374 )

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报道了FMDV VP1基因与马铃薯块茎专一性表达class Ipatatin基因5′区融合,经农杆菌介导导入马铃薯植株,PCR、RT-PCR证实了其整合及转录表达。ELISA结果进一步表明,VP1在转基因马铃薯块茎中具有免疫活性。为探讨在马铃薯块茎中高表达VP1蛋白及进一步开发其作为FMDV口服疫苗生物反应器奠定基础。

小梅山猪Ghrelin基因的克隆及其在生殖轴的表达

张舒;潘孝青;丁家桐;

2011, 0(02): 110-114.

摘要 ( 109 )

PDF (1903KB) ( 328 )

相关文章 | 计量指标

以小梅山母猪为试验材料,通过RT-PCR、克隆及荧光定量,研究Ghrelin在其生长发育不同阶段生殖轴表达情况,旨在探究Ghrelin对动物繁殖性能的影响。结果表明,初生、初情期至性成熟卵巢Ghrelin mRNA表达量呈上升趋势,不同阶段间差异显着(P<0.05)。性成熟时生殖轴不同组织Ghrelin mRNA表达量,卵巢明显高于垂体和下丘脑(P<0.05),而垂体与下丘脑间差异则不显着(P>0.05)。

内蒙古白绒山羊VEGF164基因cDNA克隆及组织表达特异性分析

鲍文蕾;杨娇馥;李彬;刘俊娥;王潇;郭旭东;王志钢;侯鑫;刘东军;

2011, 0(02): 115-120.

摘要 ( 118 )

PDF (1299KB) ( 335 )

相关文章 | 计量指标

旨在克隆内蒙古白绒山羊血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF164)基因并分析其基本表达模式。采用RT-PCR技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用半定量RT-PCR方法进行组织表达检测。获得了内蒙古白绒山羊VEGF164基因编码区cDNA全长序列,扩增片段全长573 bp,包含了完整的ORF,编码190个氨基酸残基。核苷酸序列与绵羊的VEGF164(EU857623.1)基因同源性为99%,相应的氨基酸序列同源性为99%。SMART程序分析表明,ORF编码的蛋白质具有信号肽序列及血小板衍生和血管内皮生长因子家族(PDGF,VEGF)结构域。Psite程序分析表明,有1个蛋白激酶C磷酸化位点,4个酪蛋白激酶磷酸化位点。ProtComp Version 9.0程序分析将其定位于细胞外。RT-PCR检测表明,VEGF164基因在绒山羊脑、心脏、睾丸、胰腺、脾、肾和肺组织中均有表达。

小鼠可溶性PD1的克隆、真核表达及生物学活性检测

覃晓琳;刘朝奇;唐国慧;金羽;孙俪;

2011, 0(02): 121-125.

摘要 ( 129 )

PDF (342KB) ( 481 )

相关文章 | 计量指标

旨在克隆小鼠PD1胞外区(简称mPD-1)基因,利用真核表达系统表达有活性的分泌型mPD-1蛋白,初步研究其生物学活性。克隆mPD-1基因,将其连入pcDNA3.1(+)/Fc中获得pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1重组表达质粒,转化至大肠杆菌DH5α,进行PCR和双酶切鉴定,并送测序。将阳性质粒转染L929细胞,利用RT-PCR和Western blotting方法鉴定mPD-1/L929稳定表达株。利用Alamar Blue法检测分泌的mPD-l蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性。结果显示,成功构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1,转染了pcDNA3.1(+)-Fc/mPD-1的L929细胞可将mPD-l蛋白分泌至胞外。A lamar Blue检测结果显示,真核细胞分泌的mPD-1蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖。本试验成功地克隆mPD-1胞外区蛋白,并在L929细胞中得到了分泌型表达。分泌的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件。

埃及伊蚊、冈比亚按蚊和致倦库蚊polyUBQ基因的电子克隆及其序列分析

强承魁;周保亚;凤舞剑;赵虎;苏新林;王胜永;

2011, 0(02): 126-130.

摘要 ( 103 )

PDF (1548KB) ( 384 )

相关文章 | 计量指标

针对具有选择性蛋白质降解功能的泛素在调控昆虫生长发育过程中的重要作用,探讨埃及伊蚊、冈比亚按蚊和致倦库蚊基因组中polyUBQ基因的有关生物信息。采用电子克隆的方法钓取3种蚊虫基因组中polyUBQ基因序列,分析其特征、分子进化关系、遗传多态性和密码子偏爱性。结果显示,成功获取埃及伊蚊、冈比亚按蚊和致倦库蚊polyUBQ基因序列,命名为Aa-polyUBQ(GenBank登录号:AAGE02005963)、Ag-polyUBQ(ABKP02009650)和Cq-polyUBQ(AAWU01023041),分别编码1 065个、218个和533个氨基酸残基,各具14个、3个和7个泛素单体,Aa-polyUBQ、Ag-polyUBQ和Cq-polyUBQ蛋白二级结构主要元件是延伸带和无规则卷曲,Leu、Ile和Lys是构成3种蛋白的主要氨基酸,亚细胞主要定位于细胞质和细胞核,无前导肽、信号肽和跨膜结构域,除Ag-polyUBQ蛋白外均呈碱性;3种基因序列的同源性较高(83.8%-88.2%)且遗传距离较近(0.129-0.187);检出135个多态位点,共生成3个单倍型,单倍型多样性(Hd=1.000)、平均核苷酸差异数(K=96.000)、核苷酸多样性(P i=0.14679)、SS核苷酸多样性均值(P i(s)=0.57731)、NSS核苷酸多样性均值(P i(a)=0.01627)、密码子有效值(ENC=29.432-34.321<61)、偏爱指标(CB I=0.672-0.750>0)和2χ检验计算(2χ=0.977-1.092)显示3种polyUBQ基因间遗传多样性较丰富且呈现较强的密码子偏爱性。Aa-polyUBQ、Ag-polyUBQ和Cq-polyUBQ基因的成功电子克隆及丰富的遗传多态性和较强的密码子偏爱性可为进一步开展其分子进化机制、表达特性和昆虫病毒侵染关系等方面的试验研究提供基础资料。

实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾proPO基因标准曲线构建

孙双双;王亚军;唐杰;刘必谦;

2011, 0(02): 131-135.

摘要 ( 106 )

PDF (1227KB) ( 391 )

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酚氧化酶原(proPO)系统属于一种酶联级系统,在凡纳滨对虾抵抗病原菌侵袭过程中具有重要作用。Real-time PCR检测技术已经成为国际上检测基因表达通用的方法,能对低丰度mRNA水平进行定量,可在体外对细胞活性进行评估,选择该方法进行外界环境因子胁迫下的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织proPO表达分析。在实时荧光定量PCR中,标准曲线法是最为简单、准确的定量方法。为了快速、准确的定量proPO基因在逆境下的表达水平,构建了正确、可靠的proPO基因表达标准品质粒和标准曲线。结果表明,该法所构建的标准曲线能够保证数据的精确性,满足实时荧光定量试验的要求,完全可以作为proPO基因荧光定量检测的参照标准。

刺参甘露糖结合凝集素的生物信息学分析

谢广成;李丹彤;周立敬;

2011, 0(02): 136-140.

摘要 ( 169 )

PDF (1499KB) ( 413 )

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甘露糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)属于C型动物凝集素超家族,特异地结合甘露糖。MBL是宿主起始免疫系统一个重要成分,因此近年来逐渐成为研究的热点。采用生物信息学技术对刺参(Apostichopus japonicus)MBL(AJ-MBL)的两个基因编码的蛋白质结构和功能进行了分析,包括信号肽、分子量、等电点、跨膜结构域、糖基化和磷酸化位点、二级结构和三级结构等,旨在了解其结构特征,为动物免疫反应方面研究提供理论基础。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与原核表达

李国旺;苗志国;陈俊杰;

2011, 0(02): 141-145.

摘要 ( 121 )

PDF (1433KB) ( 308 )

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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害全球养猪业的重要病毒性传染病。通过PCR方法从高致病性PRRSV WUH1株中扩增得到结构蛋白ORF7的基因片段,并将目的基因插入原核表达载体pET-30a中,得到重组表达质粒pET-30a-ORF7。重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,融合蛋白得到了高效表达,表达的融合蛋白分子量约20kD。

番茄脂氧合酶基因的表达和酶活性分析

胡廷章;肖国生;陈再刚;石汝杰;吴应梅;

2011, 0(02): 146-150.

摘要 ( 110 )

PDF (782KB) ( 423 )

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将番茄脂氧合酶基因Tom loxD克隆至酵母表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115菌株,构建组成型表达Tom loxD的酵母工程菌株。SDS-PAGE和W estern blot分析表明,经甲醇诱导,Tom loxD蛋白在酵母中得到表达,表达的融合蛋白分子量约为103.56 kD,与预测的分子量一致。酶活性分析表明,酵母中表达的Tom loxD蛋白具有脂氧合酶活性。半定量RT-PCR分析表明,Tom loxD基因在番茄中表达受机械损伤的诱导,损伤处理的番茄叶片中脂氧合酶的活性明显增高。说明Tom loxD基因在番茄防御信号中发挥作用。

香鱼甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

郝晓娜;陈炯;陆新江;史雨红;

2011, 0(02): 151-156.

摘要 ( 147 )

PDF (1999KB) ( 346 )

相关文章 | 计量指标

GPDH(glycerol-3-phosphate dehydrogenase)是合成脂肪代谢中间产物甘油-3-磷酸的关键酶。通过设计简并引物从香鱼肝cDNA文库中克隆GPDH基因,该基因cDNA序列全长577个核苷酸,单一大的开放阅读框编码一个由351个氨基酸组成的分子量为37.9kD的蛋白。蛋白序列分析表明,香鱼GPDH(aGPDH)与亚洲胡瓜鱼的GPDH序列同源性最高。系统进化树分析表明,GPDH的物种进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致。实时荧光定量PCR结果显示,aGPDH基因在香鱼肝、脾、肾、脑、心和肌肉组织均有表达。香鱼咸淡水适应以后,肝、脾、脑、心和肌肉的aGPDH的mRNA表达水平下调。成功构建重组表达质粒pET-32a-GPDH。SDS-PAGE试验表明,目的蛋白可以在大肠杆菌中大量表达;并制备了抗血清,能与目的蛋白起强的特异性反应,但不与细菌自身蛋白起反应。本研究有助于进一步理解鱼类盐度适应过程中的脂肪代谢调控机制。

稀有海洋放线菌Salinispora arenicola非核糖体肽合成酶和卤代酶生物合成基因簇核心区的克隆及序列分析

马艳玲;邓海;魏菁菁;郭秀红;刘中来;邓灵福;刘艳丽;郭建军;姚汉超;熊国梅;祁超;

2011, 0(02): 157-162.

摘要 ( 103 )

PDF (1259KB) ( 493 )

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克隆稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的非核糖体肽合成酶(NRPS)和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段。根据已发表的放线菌NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区的核苷酸序列保守区设计两对简并性引物,采用PCR的方法扩增NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析。获得两段大小分别为662bp和557bp的基因片段,编码220个和185个氨基酸。这两段序列与海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因核苷酸序列的同源性分别为99%和98%。成功地获得了稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,该基因片段的获取将为分离全长基因簇以及研究该基因簇在生物合成中的功能奠定基础。

原油微生物群落构成多样性及降解菌DYL-1降解原油的研究

王中华;李太武;苏秀榕;秦松;李晔;

2011, 0(02): 163-168.

摘要 ( 100 )

PDF (1505KB) ( 233 )

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为分离得到高效原油降解菌,直接向原油中加入营养物刺激,培养一段时间后原油乳化降解,傅里叶红外光谱显示,2957cm-1、723cm-1处吸收峰消失;2855cm-1、1377cm-1处吸收峰减弱;880cm-1以及800cm-1吸收峰几乎消失,表明原油发生降解,效果明显。同时分离得到一株降解菌,经分子鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),红外光谱法和紫外吸收法分析表明其具有较强的降解原油烃的能力。根据传统分子生物学的方法,构建原油菌16S rDNA克隆文库,限制性酶切片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析了原油中的细菌多样性。结果表明此方法有效地评估了原油中的细菌群落和多样性。

QscR基因的调控对菌株M.sp.SDM11产L-丝氨酸的影响

孔庆胜;张向阳;韩晓琳;林强;董全林;

2011, 0(02): 169-173.

摘要 ( 124 )

PDF (967KB) ( 381 )

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M.sp.SDM11是一株能以甲醇为唯一碳源生长的细菌,初步发酵检测发现能转化甘氨酸为L-丝氨酸。QscR基因产物是甲基营养菌中丝氨酸循环的一个转录调控关键因子,根据在GenBank中已报道的QscR基因序列(登录号:NC_012988.1)设计引物,以M.sp.SDM11的染色体DNA为模板,利用PCR扩增得到一大小为987 bp的QscR基因,将该基因克隆到广泛宿主载体pLAFR3上,在帮助质粒pRK2013的介导下,利用三亲本结合使其导入到菌株SDM11中构建重组菌株SDM12。对SDM12进一步研究发现,重组菌株中与L-丝氨酸合成相关的关键酶丝氨酸羟甲基还原酶(SHMT)的酶活比野生型菌株SDM11要低,约为野生型菌株的70%左右,另一个酶——羟基丙酮酸还原酶(HPR)的酶活力也只有野生型的75%。进一步将菌株进行产L-丝氨酸研究,结果表明,重组菌的产L-丝氨酸能力也明显降低,约为野生型菌株的67%左右。

GAPDH基因克隆及其作为毕赤酵母内标物的可靠性研究

张儒;张变玲;谢涛;李谷才;唐勇军;蒋开军;

2011, 0(02): 174-178.

摘要 ( 222 )

PDF (719KB) ( 662 )

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为了测定GAPDH在巴斯德毕赤酵母中作为内参蛋白的有效性,利用PCR鉴定巴斯德毕赤酵母中GAPDH基因,分别在含葡萄糖、甲醇、甘油培养基及不同温度下培养巴斯德毕赤酵母,采用SDS-PAGE、Western blotting和催化活性检测。测序结果与已报道的巴斯德毕赤酵母GAPDH基因完全一致。SDS-PAGE结果显示,表达蛋白分子量为35.4 kD,与预期分子量相符。Western blotting和催化活性测定显示,在葡萄糖诱导下GAPDH表达最高,甲醇次之,甘油最低。37℃下GAPDH表达略高于28℃。在同一诱导物或温度下,GAPDH表达不会随浓度或培养时间发生明显变化。结果表明,在同一种诱导方式下,GAPDH可以作为异源蛋白表达的内参对照。

环介导恒温扩增法快速检测短小芽孢杆菌

应琪;李太武;苏秀榕;李晔;周君;崔静;王中华;李松伟;

2011, 0(02): 179-183.

摘要 ( 125 )

PDF (800KB) ( 346 )

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短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)是一种能引起食源性疾病的腐败菌,对其进行快速检测具有重要意义。针对短小芽孢杆菌木聚糖(xynA)基因,设计了4条特异性引物(两条内引物和两条外引物),通过条件优化,首次将一种新颖的核酸扩增技术——环介导恒温扩增技术应用于短小芽孢杆菌的快速检测。采用该技术,63℃温育1h的条件下扩增短小芽孢杆菌DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。PCR和LAMP的检测灵敏度分别约为162和16.2拷贝每反应。结果表明,该方法检测短小芽孢杆菌特异性强、灵敏度高、操作简便、检测成本低,1h即可完成,有望发展成为快速检测短小芽孢杆菌的有效手段。

环介导恒温扩增法快速检测海产品中的副溶血弧菌

彭帅;石磊;

2011, 0(02): 184-186.

摘要 ( 110 )

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副溶血弧菌广泛分布于海水或海产品中,人类摄入或接触污染的水源和食物易引起感染。近年来,有关致病性弧菌引起腹泻的报道逐渐增多,但GB标准的细菌学诊断方法检测周期长达1周左右,而且操作较为复杂,难以满足控制疾病暴发和传播的需要,就这一现状,建立了一套不仅快速、准确,而且操作简便、不依赖昂贵仪器的检测方法,应用于海产品中副溶血弧菌快速检测。采用环介导恒温扩增方法(LAMP),针对副溶血弧菌的gyrB基因设计特异引物,进行恒温扩增。使用该方法最低检出限达到101CFU/mL,灵敏度可以达到0.1pg副溶血弧菌基因组DNA,为海产品中副溶血弧菌的检测提供了一个新的辅助方法。

DC-SIGN胞外区基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

吕佰瑞;刘朝奇;

2011, 0(02): 187-191.

摘要 ( 126 )

PDF (800KB) ( 253 )

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旨在构建DC-SIGN胞外区基因原核表达质粒,诱导蛋白表达并制备多克隆抗体。用PCR的方法扩增编码DC-SIGN胞外区的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达DC-SIGN胞外区蛋白,用H is抗体做W estern Blotting鉴定目的蛋白的免疫原性。用纯化的DC-SIGN胞外区蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,免疫荧光法检测其特异性。结果显示,原核表达载体pET-28 a(+)-DC-SIGN胞外区基因成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得相对分子质量约20 kD的DC-SIGN胞外区蛋白,经Westernb lotting鉴定为正确。纯化后的蛋白免疫大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫原性和特异性。本研究得到了纯化的DC-SIGN胞外区蛋白,并制备了具有特异性和高效价的抗体,为研究DC-SIGN生物学功能提供试验基础。

肌球蛋白X干涉载体的构建与鉴定

王俊杰;丁伟;于龙;朱磊;

2011, 0(02): 192-196.

摘要 ( 87 )

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肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是近年来发现的在细胞运动中发挥重要功能的非传统型肌球蛋白,但其发挥功能的分子机制目前尚不明确,RNA干扰技术是目前研究基因功能常用的方法。构建针对鼠的Myo X基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染NLT细胞,观察其对Myo X表达的抑制效应。结果显示,shRNA-2能够有效地降低Myo X的蛋白表达水平,而shRNA-1则不能。进一步分析显示,转染shRNA-2的NLT细胞丝状伪足的形成受到抑制,表明shRNA-2是能够抑制Myo X表达的干涉载体,此干涉载体的构建为进一步研究Myo X的新功能,揭示其作用的分子机制奠定基础。

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