生物技术通报

CCCH型锌指蛋白研究进展

秦智慧;杨青川;晁跃辉;康俊梅;

2010, 0(08): 1-6.

摘要 ( 119 )

PDF (365KB) ( 934 )

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锌指蛋白是一类生物体中广泛存在的具有典型锌指结构特征的超蛋白家族,几乎参与了生物体生长发育的各个阶段。根据锌指蛋白的结构及功能特点,锌指蛋白主要分为9大类,其中CCCH型锌指蛋白相比其它几类来说较少,约占所有锌指蛋白的0.8%,在植物、动物、微生物中都有发现。CCCH型锌指蛋白包含一个或多个由3个半胱氨酸和一个组氨酸组成的能与锌离子结合的基序。综述了CCCH型锌指蛋白的定义、结构、表达、作用方式和功能。

植物细胞壁松弛蛋白——膨胀素

金漫;王轲;晏月明;

2010, 0(08): 7-11.

摘要 ( 202 )

PDF (548KB) ( 1278 )

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膨胀素(expansin,也称作扩张素或扩张蛋白)是一种引起植物细胞壁松弛的蛋白质,在植物细胞伸展以及一系列涉及细胞壁修饰的生命活动中起着关键作用。膨胀素由多基因家族编码,目前的研究表明膨胀素超家族由4个基因亚家族构成。膨胀素存在于不同的种属植物中,并克隆了大量的扩张蛋白基因。综述了近年来国内外有关膨胀素基因和蛋白的结构特征及作用机制等方面的研究进展。

植物MADS-box基因的研究进展

王力娜;范术丽;宋美珍;庞朝友;喻树迅;

2010, 0(08): 12-19.

摘要 ( 193 )

PDF (446KB) ( 1317 )

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MADS-box基因是一类重要的转录调控因子,在动物、植物、真菌中都有分布。在植物中从根、茎、叶到花的发育,果实的成熟MADS-box基因都起作用,尤其是在开花植物中花的发育,开花时间的控制等方面起着重要的作用。综述了MADS-box基因的分类、进化、结构、以及MADS-box基因在植物花器官发育,开花时间的控制,果实的成熟等方面的作用。

植物抗冻基因研究进展

饶磊;田长恩;杨礼香;王正询;

2010, 0(08): 20-23.

摘要 ( 83 )

PDF (176KB) ( 577 )

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低温是作物生长一大限制因素,许多作物不能在低温下生长或者容易受到冻害,所以通过基因工程的方法,转入抗冻基因,是扩大作物生长区域,稳定作物产量的有效办法。目前通过对植物抗冻基因在抗冻机理、研究技术、应用等方面的研究,已经取得了一定的成果。综述抗冻基因的来源、抗冻机理、研究技术,并做适度的展望。

生物传感器在植物激素测定中的研究进展

李巍;莫瑾;萧浪涛;

2010, 0(08): 24-28.

摘要 ( 109 )

PDF (281KB) ( 497 )

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生物传感器由于其反应快速、灵敏度高、易于操作和能耗低等优点在植物激素含量测定中受到了广泛的关注。概述了生物传感器的基本原理、分类以及几种生物传感器在植物激素含量检测中的研究进展,分析了其在应用中存在的问题,并对今后的发展趋势提出展望。

干扰素-γ研究进展

杨生海;殷宏;刘永生;张杰;

2010, 0(08): 29-34.

摘要 ( 665 )

PDF (298KB) ( 1249 )

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干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ对机体免疫系统具有强大的调节作用,是机体发挥免疫功能、清除体内病原体不可缺少的成分。因此,IFN-γ在疾病的诊断、治疗和疫苗免疫效果检测等方面起着重大作用,是现代分子生物学、免疫学和临床医学研究的热点之一。对干扰素-γ产生、分子结构、生物学活性及作用机制等方面做以下简要综述。

禽流感病毒新型疫苗的研究进展

胡建和;王青;杭柏林;

2010, 0(08): 35-39.

摘要 ( 121 )

PDF (202KB) ( 483 )

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疫苗免疫是禽流感防控的主要措施之一,随着生物技术的不断发展,基因工程亚单位疫苗、活载体疫苗、DNA疫苗等新型疫苗得以研究和开发,这为禽流感的防控提供了新的手段。新型疫苗除具有传统疫苗的保护效果外,在生物安全和普遍防控等方面也具有广泛的优势,是禽流感疫苗发展的新方向。

实时荧光定量PCR在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用

祝秀梅;刘学荣;牟克斌;

2010, 0(08): 40-44.

摘要 ( 103 )

PDF (207KB) ( 416 )

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种严重危害种公猪和繁殖母猪及其仔猪的一种接触性传染病,是我国重要猪病病原体之一。建立一种快速、可靠的诊断方法,对于控制和消灭PRRSV至关重要。实时荧光定量PCR技术的发展为PRRSV在快速检测和鉴别诊断方面开辟了新思路。以下回顾了实时荧光定量PCR操作技术在PRRSV研究应用方面的研究进展,同时提出了该领域目前面临的问题,并对其未来发展方向进行了展望。

端粒和端粒酶的发现及应用

杨品红;王志陶;王志勇;

2010, 0(08): 45-51.

摘要 ( 230 )

PDF (607KB) ( 1050 )

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2009年诺贝尔医学或生理学奖被授予Elizabeth HBlackburn,Jack W Szostak和Carol W Greider 3位博士,以表彰他们发现了具保守功能的端粒重复序列末端是如何预防染色体的降解与重组,以及鉴定了负责合成端粒DNA的新的酶复合物——端粒酶。端粒酶和端粒结构维持的研究为我们洞悉诸如癌症、衰老以及遗传疾病综合症等医学高度相关领域提供了新方略,并促进了目前正处于临床检测的基于以端粒酶活性及表达为目标的癌症治疗新策略的发展。综述了端粒和端粒酶发现的背景、过程及其作用。

福建生物经济发展现状与对策研究

陈必链;

2010, 0(08): 52-56.

摘要 ( 97 )

PDF (200KB) ( 559 )

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生物经济被认为是一种新的经济形态,世界各国都在制定各种措施大力发展生物经济。就福建生物经济的优势、潜力和存在问题进行分析,并提出对策建议。

毛细管电泳质谱联用技术及其在代谢组学研究中的应用

阳平;

2010, 0(08): 57-63.

摘要 ( 106 )

PDF (260KB) ( 703 )

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毛细管电泳自20世纪80年代中后期迅速发展以来,是近几年分析化学领域中发展最为迅速的分离手段之一。毛细管电泳与质谱的联用使得分析范围更广,灵敏度更高,因此被广泛应用于生物样品的分析中。介绍了毛细管电泳质谱联用常用的接口技术,质量分析器及其在生物样品中的分离模式,综述了近年来毛细管电泳质谱联用技术在代谢组学中的应用。

DNA测序技术的发展历史与最新进展

解增言;林俊华;谭军;舒坤贤;

2010, 0(08): 64-70.

摘要 ( 1179 )

PDF (259KB) ( 5842 )

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DNA测序技术是现代分子生物学研究中最常用的技术。从1977年第一代测序技术的出现,经过30多年的发展,DNA测序技术取得重大进展,以高通量为特点的第二代测序技术逐步成熟并商业化,以单分子测序为特点的第三代测序技术也已经出现。介绍每一代测序技术的特点,并重点介绍了第二代测序技术及其应用。展望新的测序技术对于未来生物学研究及人们自身健康与人类疾病等方面研究的影响。

链替换技术提高噬菌体抗体亲和力的研究进展

王乃东;袁安文;薛立群;

2010, 0(08): 71-75.

摘要 ( 135 )

PDF (875KB) ( 844 )

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高亲和力抗体基因的克隆是噬菌体抗体在基础研究、临床诊断治疗研究等重要领域中应用的基础。链替换技术已逐步广泛用于噬菌体抗体的性能改造。该技术不仅可以促进噬菌体的体外亲和力成熟,提高抗体亲和力,有助于低剂量抗体达到实际应用所需要的抗原结合效应,拓宽抗体的应用开发前景,而且可应用于减少抗体人抗鼠抗体反应,分析重链或轻链基因对抗原抗体结合的影响,有助于较好的理解免疫化学。就链替换的原理、策略及其应用进行综述。

生物技术在黄瓜研究中的应用

韩建明;王颖;

2010, 0(08): 76-81.

摘要 ( 130 )

PDF (224KB) ( 416 )

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从组织培养、相关基因分子标记、遗传图谱构建、种质资源亲缘关系、品种纯度鉴定和基因工程等方面,综述了黄瓜生物技术应用研究进展,并对存在的问题和应用前景进行了讨论。

现代动物生物技术的发展及应用前景

李瑞国;苗朝华;

2010, 0(08): 82-88.

摘要 ( 135 )

PDF (253KB) ( 534 )

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主要综述了以转基因动物技术、动物克隆技术和基因打靶技术为代表的现代农业动物生物技术的发展历程和重要进展,阐述了其在家畜和家禽的遗传性状和品种改良,扩大优良畜种数量、保护动物遗传资源,开展功能基因研究,实现基因表达调控,生产药用蛋白和再造人类器官等方面的诱人前景。为促进这一技术的尽快产业化和直接服务人类的生产生活提出了建议。

我国水产生物技术的研究进展

熊良伟;王帅兵;王权;

2010, 0(08): 89-92.

摘要 ( 113 )

PDF (210KB) ( 470 )

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水产生物技术是生物技术的重要组成部分,应用于水产养殖的各个学科中。从水产动物功能基因的筛选与克隆、分子标记的筛选与应用、基因工程和细胞工程育种、性别决定机制和性别控制研究、鱼类低温生物工程研究等五个方面阐述我国水产生物技术的研究进展。

藻类原生质体融合和细胞杂交技术

张伟伟;任丽丽;张韩杰;

2010, 0(08): 93-97.

摘要 ( 121 )

PDF (201KB) ( 747 )

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细胞融合技术是一项迅速发展的细胞工程技术,是细胞工程研究的重要内容之一。自20世纪80年代开始,细胞融合技术开始应用于藻类原生质体融合,至今已在多种藻类中开展了细胞融合及杂种培育试验。综述了在藻类细胞融合技术中常用的方法:化学融合法、电融合法、激光融合法,以及在藻类细胞融合中的最新研究进展,并对目前在藻类细胞融合研究中的困难进行简要的评述。

通用型转铁蛋白融合表达载体的构建及应用价值

王峰;孙晗笑;莫雪梅;李秀英;张光;

2010, 0(08): 98-101.

摘要 ( 141 )

PDF (3533KB) ( 424 )

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构建通用型转铁蛋白融合表达载体,利用PCR方法扩增编码人转铁蛋白N端半分子的基因片段,通过酶切、连接、转化等分子克隆方法构建通用型转铁蛋白融合表达载体。PCR扩增了一个长约1.1 kb的包含ScaI酶切位点的基因片段,插入pPICZα的PmlI和XbaI酶切位点,转化后进行菌液PCR鉴定,成功获得重组子pPICZα-TfN,测序结果表明载体构建成功,重组质粒pPICZα-TfN能被ScaI酶切。本研究成功构建通用型转铁蛋白融合表达载体,构建的载体可以用于转铁蛋白融合表达载体的构建。

拟南芥ERECTA基因的克隆及其对番茄转化

朱锦程;沈海涛;祝建波;

2010, 0(08): 102-105.

摘要 ( 101 )

PDF (3344KB) ( 451 )

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全球每年因干旱而造成的作物减产和农业产量损失不可计量,因此从分子生物学上探索植物潜在的耐旱机理对于提高作物抗旱能力具有非凡意义。拟南芥(Ler型)ERECTA基因编码的蛋白存在两个不同的跨膜受体蛋白激酶。通过RT-PCR的方法从拟南芥基因中克隆出ERECTA基因,构建真核表达载体pBin438-ERECTA,转化到番茄中,为后续研究其对植物水分的利用效率奠定基础。

甜瓜HMGR基因全长cDNA的克隆及序列分析

郝金凤;李彤彤;郭艳琼;高峰;哈斯阿古拉;

2010, 0(08): 106-109.

摘要 ( 105 )

PDF (750KB) ( 351 )

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根据已报道的reticulatus甜瓜的HMGR cDNA序列设计合成引物,应用RT-PCR技术从甜瓜品种河套蜜瓜幼果总RNA中克隆得到HMGR的全长cDNA序列,共1 939 bp,编码588个氨基酸。序列比对及系统发育分析表明,该HMGR cD-NA序列与已报道的reticulatus甜瓜HMGR基因cDNA序列完全一致,和拟南芥HMG1亲缘关系最近。该基因的克隆为研究该基因在甜瓜中的表达特性及其功能奠定基础。

侵染辣椒的黄瓜花叶病毒CP基因的序列分析、原核表达及抗血清制备

刘金亮;王凤婷;侯春喜;魏毅;张世宏;潘洪玉;

2010, 0(08): 110-115.

摘要 ( 115 )

PDF (532KB) ( 490 )

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从吉林长春感病辣椒上获得一黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物(CMV-CC),根据GenBank中已登录的CMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列设计简并引物,通过RT-PCR的方法克隆到了长度为657 bp的目的片段。序列分析表明,CMV-CC与CMVI组各分离物核苷酸同源性为93.2%-97.9%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:38个CMV分离物可分为3个组,CMV-CC属于CMV的IB亚组。将CMV-CC CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达出分子量约27 kD的融合蛋白。表达的融合蛋白经树脂纯化后免疫家兔制备了抗血清。用间接ELISA测定抗血清效价为1/4 096。Western blotting分析表明制备的抗血清对CP有高度特异性,为准确、快速地检测CMV奠定了基础。

GFP基因转化藿香的研究

程志号;惠荣奎;蔡明历;郝大翠;刘焰;

2010, 0(08): 116-119.

摘要 ( 140 )

PDF (688KB) ( 369 )

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以藿香无菌苗幼嫩茎段为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(GFP)的遗传转化研究。经农杆菌侵染,通过共培养、选择培养后获得其抗性愈伤组织,对抗性愈伤组织的诱导过程进行了GFP荧光检测。结果表明,GFP基因能在抗性愈伤组织中强烈表达,证明GFP基因能够在藿香遗传转化中得到应用。对抗性愈伤组织的PCR检测初步证实外源GFP基因已整合到藿香愈伤组织的基因组中。

低温胁迫下甘蔗抗寒相关基因的cDNA-SCOT差异显示

陈香玲;李杨瑞;杨丽涛;吴建明;罗聪;熊发前;杨柳;

2010, 0(08): 120-124.

摘要 ( 88 )

PDF (312KB) ( 554 )

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为探寻甘蔗在低温协迫下相关基因表达差异的分子基础,探索cDNA-SCOT差异显示的可行性,选用了桂糖28号(抗寒性强)和新台糖22号(抗寒性弱)两个甘蔗品种,分别构建了低温处理与对照的RNA混合池,利用cDNA-SCOT法进行了差异显示研究。102条SCOT引物扩增出600多条带,长度在100-1 800 bp之间。选择其中7条差异片段(TDF),进行回收、克隆和测序。结果表明,利用SCOT方法可以对甘蔗cDNA混合池进行差异显示研究,两个甘蔗品种在低温下有部分相同的基因表达,5个TDF分别与脱水素、半胱氨酸型肽酶、多胺氧化酶、C4磷酸羧化酶和过氧化氢酶基因具有很高的同源性,只在抗寒品种中稳定出现的2个TDF功能未知,可能与甘蔗的抗寒基因表达相关。

蒙古冰草MwLEA3基因植物表达载体的构建

石凤敏;云锦凤;赵彦;逯晓萍;

2010, 0(08): 125-128.

摘要 ( 85 )

PDF (242KB) ( 350 )

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以植物双元表达载体pCAMBIA2300为基础,设计分别带有酶切位点XbaI和PstI的一对引物,从克隆载体pGM-T-MwLEA3中扩增到目的基因MwLEA3。用XbaI和PstI双酶切该目的基因及表达载体pCAMBIA2300,回收后利用T4DNA连接酶连接,获得植物表达载体pCAM-MwLEA3。通过冻融法将所获得的植物表达载体重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中,为该基因的功能鉴定及通过农杆菌介导法将MwLEA3基因导入植物提高相关抗性奠定了基础。

大苞萱草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

沈鹏;董丽;

2010, 0(08): 129-133.

摘要 ( 86 )

PDF (313KB) ( 397 )

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分别采用正交设计和单因子试验两种方法对影响大苞萱草ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。两种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了大苞萱草ISSR-PCR的最佳反应体系。在20μL的反应体系中:Taq酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP0.20 mmol/L,引物0.4μmol/L,1×PCR buffer,30 ng模板DNA。在此基础上筛选出10个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。

三种提取冬虫夏草菌丝体基因组DNA方法的比较

谢放;陈京津;朱子雄;

2010, 0(08): 134-136.

摘要 ( 108 )

PDF (204KB) ( 568 )

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采用改良氯化苄法、CTAB法、蛋白酶K裂解法这三种方法,对冬虫夏草菌丝体基因组DNA进行提取,将提取的基因组DNA经过紫外分光光度计检测纯度和计算浓度、琼脂糖凝胶电泳分析及PCR扩增,结果表明,3种方法均能提取到符合分子生物学的DNA,其中蛋白酶K裂解法纯度最高,含蛋白质少,改良氯化苄法、CTAB法次之。而浓度则是改良氯化苄法最高,CTAB法、蛋白酶K裂解法次之。3种方法所提取的DNA均能扩增出理想条带。

转P_(rd29A)-ipt基因对烟草根及侧芽生长的影响

董绍旺;王爱英;孙建富;沈海涛;祝建波;

2010, 0(08): 137-140.

摘要 ( 90 )

PDF (392KB) ( 373 )

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利用异戊烯基转移酶(isopentenyl-transferases,ipt)基因转化植物,可明显提高抗逆性和抗病性,延缓叶片衰老。逆境胁迫常会对植物造成很大的伤害,拟南芥的Prd29A启动子受干旱、盐及冷胁迫诱导。构建了Prd29A-ipt植物表达载体,通过农杆菌介导转化普通烟草,获得了能够正常生长的转基因植株。通过表型观察发现,转Prd29A-ipt烟草具有一定的组成型表达,降低了烟草的顶端优势,促进了烟草侧芽的生长,同时,对根的伸长有一定的抑制作用。

棉蚜Catb5基因RNAi载体的构建及其对烟草的转化

李晓明;高朝宝;彭明;崔百明;

2010, 0(08): 141-144.

摘要 ( 82 )

PDF (298KB) ( 369 )

相关文章 | 计量指标

依据细胞色素氧化酶亚基Ⅰ序列的多态性设计特异性引物,通过PCR技术扩增出的特异性条带鉴定为棉蚜。提取棉蚜总RNA,利用RT-PCR技术从棉蚜中扩增出大小为515 bp的Catb5目的基因,进一步将两段Catb5基因分别正向和反向连接到植物表达载体pBi35SG12上,构建了pBi35SC5 RNAi表达载体,并通过农杆菌介导法导入烟草中,PCR检测表明已得到转基因烟草再生苗。

棉花高频体细胞胚胎发生及再生体系建立

顾冉冉;薛金教;袁英歌;彭明;崔百明;

2010, 0(08): 145-149.

摘要 ( 101 )

PDF (422KB) ( 356 )

相关文章 | 计量指标

棉花的体细胞胚胎发生率低,限制了转基因棉花的发展。为了扩大可再生棉花的基因型,发展新疆优质棉花的特点,以新疆的主要栽培品种新陆早33为材料,以下胚轴为外植体,使用葡萄糖,麦芽糖作为主要碳源,用Phytagel固化,对不同激素的浓度组合和培养条件进行探索,对棉花胚性愈伤的诱导到体细胞胚胎的发生阶段进行优化,体细胞胚胎成熟以后进行萌发培养可以获得正常的植株。通过试验证明,有利于棉花的愈伤组织生长的激素浓度为KT 0.1 mg/L,2,4-D 0.1 mg/L,下胚轴的中部诱导愈伤形态最好。体细胞胚胎发生阶段以KT,IBA组合,以低盐培养基进行子叶胚的成苗,建立了再生体系。

番茄果实总RNA提取方法的优化

何健行;陈乐;郭新伦;余有见;杨玲;

2010, 0(08): 150-152.

摘要 ( 150 )

PDF (227KB) ( 537 )

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针对番茄等果实的特殊性,对商品化Trizol试剂盒提取总RNA的方法进行适当的改良:液氮研磨后加入预处理液除去果实中大部分糖类等次级代谢物质,裂解时加入β-巯基乙醇抑制酚类等物质的氧化,从富含多糖、多酚的番茄、枣果肉中成功提取总RNA。与其它方法相比,该改良方法具有操作步骤简单、快速等优点。利用RT-PCR技术,从所提取RNA中成功克隆出ζ-胡萝卜素脱氢酶基因片段,进一步表明其质量可以完全满足分子生物学研究的要求。

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

周亚奎;杨云;隋春;甘炳春;魏建和;

2010, 0(08): 153-156.

摘要 ( 104 )

PDF (224KB) ( 488 )

相关文章 | 计量指标

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。

柴胡及体细胞杂种愈伤组织酯酶同工酶技术的优化

刘法磊;车婧;支大英;王敏琴;夏光敏;

2010, 0(08): 157-159.

摘要 ( 89 )

PDF (178KB) ( 341 )

相关文章 | 计量指标

为解决柴胡及其体细胞杂种愈伤组织中次生代谢物多,同工酶粗提液粘稠、杂质多且呈混浊态,同工酶电泳谱带不清晰及易拖尾的问题,通过增加离心次数、调整酶粗提液上样体积等方法,得到了理想的酯酶同工酶电泳谱带。该法广泛适用于其它植物的同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。

甜菜叶柄高效直接再生体系的建立

殷东林;祝建波;张彦伟;向本春;

2010, 0(08): 160-162.

摘要 ( 109 )

PDF (283KB) ( 330 )

相关文章 | 计量指标

通过预试验,从4中不同基因型甜菜中选取KWS-9103作为试验材料,建立其叶柄高效直接再生体系。通过种植无菌苗、预培养、诱导分化培养,获得了再生植株,建立了甜菜快速繁殖体系。结果表明,甜菜种子经过消毒处理后培养,取幼苗在MS附加6-BA 0.5 mg/L和NAA 0.05 mg/L的培养基中预培养,再取叶柄作为外植体转入诱导培养基MS附加6-BA0.5 mg/L和NAA0.05 mg/L中诱导不定芽,不定芽诱导率为50%以上。在MS附加IBA2.0 mg/L生根培养基中生根,诱导生根率在90?以上,移栽成活率高达95%。

三株芸豆叶际拮抗细菌的筛选与鉴定

路晓萌;姚良同;宋洪宁;丁延芹;侯启会;杜秉海;

2010, 0(08): 163-167.

摘要 ( 114 )

PDF (3717KB) ( 381 )

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以芸豆锈病病原菌[Uromyces appendiculatus(Pers.)Ung.]为指示菌,从芸豆叶际中筛选到3株具有明显拮抗效果的细菌,编号为SS2,L14b,NEW2。经过形态学观察,生理生化测定,16S rDNA序列及系统发育分析,初步鉴定SS2为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),L14b与NEW2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。SS2,L14b,NEW2的16S rDNA序列的Gen-Bank登录号分别为EU771078、EU771076和EU771079。

精子介导法生产转基因牦牛杂种胚胎的研究

字向东;梁冠男;陈绍威;

2010, 0(08): 168-173.

摘要 ( 77 )

PDF (294KB) ( 377 )

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研究外源DNA转染对牦牛精子体外受精(IVF)、早期胚胎发育以及绿色荧光蛋白(GFP)基因在早期胚胎表达的影响。用构建融合人乳铁蛋白基因绿色荧光蛋白表达载体(pAcGFP1-hLF)转染的牦牛精子IVF黄牛卵母细胞,生产的胚胎在荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果显示,用环形质粒、线性质粒pAcGFP1-hLF转染的精子及未转染精子IVF后的卵裂率分别为56.4%、54.8%和61.0%,线性转染的囊胚率显着低于环形转染(17.7%与35.7%)。环形质粒转染的精子用DNaseⅠ消化、不消化及未转染的精子IVF后卵裂率分别为44.8%、55.2%和56.3%,囊胚率分别为33.3%、33.3%和30.2%。未经DNaseⅠ消化洗涤的环形质粒组GFP胚胎阳性率显着高于线性质粒组(99.3%与76.6%);DNaseⅠ消化组GFP胚胎阳性率极显着低于不消化组(25.4%与99.3%)。结果表明,用环形质粒DNA转染牦牛精子不会影响其受精及早期胚胎发育能力,但DNaseⅠ消化洗涤显着降低GFP胚胎阳性率。

牛流行热病毒LUX~(TM)荧光RT-PCR检测方法的建立

刘志玲;陈茹;邱索平;马静云;曾碧健;周科;

2010, 0(08): 174-179.

摘要 ( 124 )

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采用LUXTM荧光PCR技术原理,以牛流行热病毒(BEFV)糖蛋白抗原G基因保守序列为模板设计特异荧光PCR扩增引物,建立BEFV LUXTM实时荧光RT-PCR快速检测方法。试验结果显示,所建立的荧光RT-PCR可特异检测牛流行热病毒RNA,而对蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻-粘膜病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛白血病病毒以及与BEFV同种属的狂犬病病毒核酸检测呈阴性反应。敏感性试验表明LUXTM荧光RT-PCR对BEFV RNA的检测敏感性比常规RT-PCR方法提高达100倍以上。该LUXTM荧光RT-PCR的批内检测变异系数0.64%-1.17%,批间检测变异系数均小于2%,表明检测体系稳定、重复性好。通过人工添加灭活病毒液的方法制备30份模拟感染牛血清样品,采用上述所建立的BEFV LUXTM荧光RT-PCR方法检测均呈阳性。

科学出版社新书

2010, 0(08): 179-179.

摘要 ( 66 )

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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR的建立及应用

赵朴;郑玉姝;贾贝贝;刘俊伟;陈金山;姚四新;赵坤;李任峰;王三虎;刘兴友;赵恒章;

2010, 0(08): 180-182.

摘要 ( 93 )

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根据GenBank上PRRSV的保守序列,设计1对引物,建立了PRRSV的RT-PCR方法。试验结果表明,该RT-PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为PRRSV的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。

卵巢运输温度及卵母细胞促成熟因子对山羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

孙新明;戴彩华;罗婷;

2010, 0(08): 183-187.

摘要 ( 97 )

PDF (203KB) ( 472 )

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探讨山羊卵母细胞体外成熟培养的影响因素,为优化山羊体外受精程序奠定基础。比较从屠宰场采摘的山羊卵巢运输温度和体外培养促成熟因子对卵母细胞体外成熟培养和体外受精效果的影响。结果表明,在运输温度接近室温(25±2)℃时的卵母细胞成熟率显着高于接近体温(36±2)℃时的运输温度(成熟率分别为53.8%,35.0%,P<0.01),两种运输温度的卵巢卵母细胞成熟培养后体外受精率无显着差异(分别为37.9%,36.6%,P>0.05)。与在体外成熟基础培养液(M1:M199 media+1μg/mL E2+10μg/mL FSH+10μg/mL LH+20%EGS)中进行成熟培养相比,在基础培养液中仅添加20 ng/mL EGF(M2)和另外添加10%GFF(M3)进行体外成熟培养的卵母细胞成熟率均有明显提高,其中成熟率在M1为53.8%,极显着低于M2的69.5%和M3的72.6%,P<0.01;M2和M3间差异不显着;卵母细胞成熟培养后体外受精率在三者间无明显差异分别为37.9%,39.5%和40.6%,P>0.05。山羊体外受精时从屠宰场采摘的卵巢宜在室温条件下进行运输,在体外成熟培养体系中加入EGF和GFF均可有效促进山羊卵母细胞的体外成熟,但EGF起关键作用。

一种石磺科贝类线粒体基因组全序列分析

魏峦峦;沈斌;沈和定;陈诚;方磊;吴文健;

2010, 0(08): 188-194.

摘要 ( 87 )

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石磺线粒体基因组全序列对研究石磺科分子系统进化具有重要意义。利用LA-PCR技术对一种石磺Platevin-dexmortoni线粒体基因组全序列进行了测定和分析。结果表明,线粒体基因组序列全长13 991 bp,碱基组成分别为27.27%A、16.78%C、20.23%G、35.72%T;由22个tRNA、2个rRNA、13个蛋白编码基因和25个长度为2-118 bp的非编码区组成。4个蛋白质编码基因和5个tRNA基因从L链编码,其余基因均从H链编码。蛋白质基因的起始密码子,除ND2为GTG以外,均为典型的起始密码子ATN。ND2和Cytb基因使用了不完全终止密码子T,其余基因均使用典型的TAA或TAG。预测了22个tRNA基因的二级结构,发现tRNASer和TrnaAsn缺少DHU臂,tRNASer和tRNAThr的反密码子环上有9个碱基,而不是通常的7个碱基。最长的非编码区含有两个类似于的tRNAGln和tRNAPhy的二级结构。

带组氨酸标签的斑马鱼p53真核表达载体的构建及表达鉴定

赵向忠;刘明;丁丽丽;吴宁;林秀坤;

2010, 0(08): 195-198.

摘要 ( 126 )

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构建斑马鱼p53基因的真核表达系统,为下一步p53体内、外功能研究,以及为斑马鱼作为抗肿瘤药物筛选模型的构建和应用奠定基础。采用RT-PCR法从斑马鱼胚胎中扩增获得p53基因编码区,定向克隆到真核表达载pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1/his-p53,在起始密码前加入增强翻译的Kozak序列,并在终止密码前引入组氨酸标签便于检测和纯化,脂质体介导质粒转染HeLa细胞,RT-PCR和Western blotting检测基因表达情况。结果表明,成功构建了斑马鱼p53真核表达载体,RT-PCR扩增出1 100 bp的转录产物,表达产物能被抗his单克隆抗体特异性识别,Western blotting呈现53 kD左右单一条带。斑马鱼p53蛋白在HeLa细胞中成功表达。

草鱼CYP1A和ACT基因cDNA片段的克隆与鉴定

林茂;杨先乐;纪荣兴;

2010, 0(08): 199-203.

摘要 ( 88 )

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以Trizol法分别提取BNF诱导和对照处理草鱼的肝组织总RNA并合成cDNA第一链,以此为模板利用1对ACT特异性引物和(8条)6对CYP1A简并引物进行扩增。结果显示,引物对F0-R0在对照和诱导草鱼中均扩增得到预期ACTcDNA片段,而引物对F4-R4在诱导草鱼中获得预期CYP1A cDNA产物。这两个cDNA片段分别进行克隆、测序和比对,BLAST结果表明草鱼ACTcDNA片段(800 bp)与GenBank中ACT基因(登录号M25013)同源性为99.1%,推导氨基酸序列同源性为99.2%;草鱼CYP1A cDNA片段(439 bp)与鲤鱼同源性最高,为92.5%,推导氨基酸同源性为96.6%。上述序列提交GenBank,获得登录号分别为DQ211096和DQ211095。通过Mega 3.1软件的Neighbor-joining程序对CYP基因的部分cDNA序列和氨基酸序列进行比对分析并绘制进化树,根据CYP1A部分蛋白的系统发育关系,在进化上可以将参与比对的真骨鱼划分为4个主要的分支。

牛蛙抗菌肽的生物信息学分析

邬晓勇;孙雁霞;何钢;颜军;苟小军;

2010, 0(08): 204-208.

摘要 ( 112 )

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对NCBI公布的牛蛙抗菌肽序列进行了生物信息学方面的分析。结果表明,牛蛙抗菌肽基因可能属于诱导性表达,存在多个可能的功能域,在进化上高度不保守。二级及空间结构分析结果表明,牛蛙抗菌肽属于典型的α-螺旋型抗菌肽,并且均属于信号肽。通过对牛蛙抗菌肽的分析,可为抗菌肽类药物的分子设计和构造提供重要的理论依据和快捷的途径。

PCR构建融合基因方法的建立

陈国梁;白兴俊;赵蓉;雷鸿亮;陈宗礼;

2010, 0(08): 209-213.

摘要 ( 241 )

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以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法,并对融合基因构建时PCR产物(不回收)的使用量及一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度等条件进行优化。结果表明,以不回收的PCR产物为模板构建融合基因时PCR产物(不回收)的使用量在10-20 ng范围内为佳;一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度在25-1 000 nmol/L为宜。

BenA3基因双元载体的初步构建及转化绿僵菌189的初步研究

姚洪平;王广君;张泽华;农向群;魏松红;

2010, 0(08): 214-217.

摘要 ( 92 )

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用XholⅠ和SalⅠ分别双酶切植物表达载体pCAMB IA1300和含有目的基因的pMD19-T-BenA3,定向连接得到重组质粒pCAMB IA1300-BenA3,将其导入农杆菌AGL-1。经PCR鉴定后,得到可用于绿僵菌转化的农杆菌双元载体。采用的预培养时间、菌液浓度、共培养时间、乙酰丁香酮浓度的条件下,进行农杆菌介导绿僵菌的遗传转化,得到可以稳定性遗传的绿僵菌转化子,随机挑选转化子进行苯菌灵抗性基因的PCR扩增表明,绿僵菌转化子含有了苯菌灵抗性基因。该转化体系的建立,将有利于绿僵菌生防功能基因的克隆和作用机制的研究。

α-互补与蓝白斑筛选机制的探究

周玉亭;曹建斌;

2010, 0(08): 218-221.

摘要 ( 210 )

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针对高校生物科学实验教学中存在的问题,着重探究了基因重组试验中的α-互补与蓝白斑筛选机制,精心设计了5组试验,结果指出,经双酶切的质粒载体自身不能环化,也不能成功转化;蓝白斑筛选中的蓝斑通常来源于商品载体中的环状质粒或者线性载体自连后的转化产物;重组子一般为白斑,但在一定条件下,白斑也会变成蓝斑。在此基础上作了进一步的讨论,为今后的教学实践和科学研究提供借鉴和指导。

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