生物技术通报

闻可心;刘雪梅;

2010, 0(02): 1-7.

摘要 ( 259 )

PDF (399KB) ( 1366 )

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AP2基因作为调控植物花发育的功能基因,参与花分生特性建立、花器官的特性特化以及形成调控。所编码的AP2/EREBP转录因子的主要特征是都至少含有一个由60到70个左右的氨基酸组成高度保守的DNA结合区,称作AP2结合域。按其所含的AP2结构域的数目分为3个亚族,即AP2亚家族、EREBP亚家族和RAV亚家族,每个亚家族都有各自的作用。AP2基因不但自身调控着花、胚珠的发育,而且与其他因子相互协作,参与到复杂的花发育调控网络。将对AP2基因的特征和分类及其在花发育中的作用进行概述。

科学出版社新书

2010, 0(02): 7-18.

摘要 ( 71 )

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植物脯氨酸合成酶基因工程研究进展

陈吉宝;赵丽英;景蕊莲;王述民;卢玉琼;

2010, 0(02): 8-10.

摘要 ( 126 )

PDF (180KB) ( 646 )

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逆境条件下植物细胞积累脯氨酸是植物适应逆境的一种反应,有利于减轻逆境对植物的伤害。简要回顾了生物体脯氨酸代谢过程和逆境下植物积累脯氨酸的作用,重点总结了植物体内脯氨酸合成酶基因吡咯啉-5羧-酸合成酶(P5CS)的克隆、表达和转基因研究进展。研究认为,P5CS是一个逆境胁迫应答基因,通过基因工程方法调节P5CS基因的表达有利于提高植物体脯氨酸的积累量,改善植物的抗逆性。因此,目前可以在大田植物中开展利用提高脯氨酸来改善植物抗逆性的研究。

水稻硅转运蛋白研究进展

李莉;徐慧妮;李昆志;

2010, 0(02): 11-13.

摘要 ( 109 )

PDF (145KB) ( 581 )

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硅是促进水稻生长和维持持续生产的重要营养元素,它有助于提高植物抗病虫害、抗倒伏以及抗生物和非生物胁迫的能力。硅能改善水稻的形态结构,提高产量和品质,还可以提高氮、磷利用率,减轻一些重金属的毒害作用。综述了水稻硅吸收运输有关的输入转运蛋白Lsi1、输出转运蛋白Lsi2和运输蛋白Lsi6表达和功能。同时,对这些转运蛋白的应用前景进行了展望。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

张梅;刘光瑞;

2010, 0(02): 14-18.

摘要 ( 144 )

PDF (291KB) ( 723 )

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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱发的一种接触性传染病,其症状主要表现为怀孕母猪流产、早产、产死胎、木乃伊胎及成年猪的呼吸道症状。本病自1987年在美国爆发后,给世界养猪业造成巨大损失。近年来,由于其危害性大而引起专家学者的关注,PRRS在分子生物学方面研究者较多。就其病原特性,基因结构,病毒蛋白,分子生物学诊断以及PRRS基因工程疫苗的研究等方面进行论述。

重构胚中线粒体命运的研究进展

鞠光伟;杜卫华;郝海生;赵学明;王栋;朱化彬;

2010, 0(02): 19-23.

摘要 ( 92 )

PDF (205KB) ( 388 )

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线粒体是哺乳动物细胞中最为重要的细胞器之一,是除细胞核外惟一含有功能性基因组的细胞器,通过氧化磷酸化产生维持细胞正常生理功能的ATP。重构胚中线粒体的命运及线粒体与供体核间的互作关系已越来越成为研究的焦点,综述了同种、异种核移植,ICSI,卵胞质移植及异源线粒体注射后,重构胚中线粒体的命运。

内皮祖细胞的分离培养与鉴定

白春雨;侯玲玲;庞全海;关伟军;马月辉;

2010, 0(02): 24-27.

摘要 ( 95 )

PDF (201KB) ( 1472 )

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内皮祖细胞的分离方法有免疫磁珠分离法、淋巴细胞分离液分离法(1.077)和差速贴壁法,这3种方法已被人们广泛使用,均可分离到一定的目的细胞。分离到的目的细胞在培养过程中逐渐分化、成熟、发育为内皮细胞。在内皮细胞和内皮祖细胞的鉴别区分,使用CD34+/CD133+/KDR+鉴定为内皮祖细胞,同时使用内皮祖细胞吞噬D il-ac-LDLFITC-UEA双阳性的方法也可鉴定为内皮祖细胞。

MicroRNA与细胞信号转导通路研究进展

魏运荣;卢清显;卢清君;

2010, 0(02): 28-32.

摘要 ( 121 )

PDF (209KB) ( 565 )

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成熟的microRNA(miRNA)是一种长约22 nt的非编码RNA,通过与靶基因的3′非翻译区(3′UTR)结合来调控靶基因的表达。直至目前,在不同物种中发现的miRNA达6 397个。miRNA的发现为基因表达调控研究打开了新的窗口。目前研究者不仅证实miRNA在生物体生长、发育和疾病发生等过程中发挥着重要的作用,而且开始进一步探寻其发挥作用的分子机理。综述了miRNA与细胞信号转导途径之间的关系,从而有助于从基因水平上理解疾病的发生机制,为疾病的诊断、治疗提供依据。

Glypican-3与肿瘤关系的研究进展

程华;闫静辉;

2010, 0(02): 33-37.

摘要 ( 127 )

PDF (195KB) ( 708 )

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磷脂酰肌醇蛋白聚糖是硫酸乙酰肝素糖蛋白中的一个家族,参与调控个体发育、细胞增殖和分化等过程。其中,磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3)与肿瘤的发生发展关系密切,特别是在肝细胞癌中特异性高表达,有望成为一个新的肿瘤标志物。

基因治疗导入载体的研究进展

王巍杰;杨永强;徐长波;

2010, 0(02): 38-41.

摘要 ( 88 )

PDF (196KB) ( 633 )

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基因治疗在恶性肿瘤、癌症、遗传性疾病和心脑血管等疾病的治疗中开始应用,临床治疗效果明显。基因治疗中的关键技术是选用合适的载体将外源基因高效导入受体靶细胞,综述了基因治疗中病毒和非病毒载体的研究进展。

中心体异常扩增和染色体不稳定性

李智涛;吴逸明;

2010, 0(02): 42-50.

摘要 ( 148 )

PDF (725KB) ( 778 )

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中心体作为主要微管组织中心在细胞周期事件中起着重要的作用。异常中心体可产生纺锤体异常,使染色体错误分离,引起染色体不稳定性和非整倍体的形成。中心体异常同染色体不稳定性一样是肿瘤细胞的一个普遍特征,并且可出现在肿瘤发生的早期阶段。中心体异常在肿瘤的发生发展演化过程中可能具有重要作用。现综述中心体的结构、功能、复制和调控,阐述肿瘤中中心体异常的表现和导致中心体扩增的可能机制及中心体扩增与染色体不稳定之间的相关性。

木质纤维生产燃料乙醇工艺的研究进展

王璀璨;王义强;陈介南;李辉;张振华;

2010, 0(02): 51-57.

摘要 ( 119 )

PDF (286KB) ( 667 )

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利用丰富而廉价的木质纤维原料代替粮食生产燃料乙醇,对经济和社会的可持续发展有着重要的意义。以木质纤维为原料发酵生产燃料乙醇可分为4种工艺:分步糖水解化发酵法、同步糖化发酵法、同步糖化共发酵法和直接微生物转化法。介绍了以上4种工艺的研究进展,并对今后进一步研究提出了建议。

生物技术在忍冬属植物研究中的应用

韩琳娜;张永清;

2010, 0(02): 58-62.

摘要 ( 99 )

PDF (197KB) ( 534 )

相关文章 | 计量指标

对近年来生物技术在忍冬属植物快速繁殖、种质资源鉴定和药用活性有效成分生产方面的研究进展进行了综述,包括忍冬属植物的组织培养、染色体核型分析、生物化学和分子生物学的研究。

PCR技术在食品微生物检测中的应用

王华;刘斌;

2010, 0(02): 63-67.

摘要 ( 140 )

PDF (195KB) ( 1422 )

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PCR技术以其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,广泛地应用在食品微生物检测的各个领域,尤其对培养困难的细菌检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面。介绍了几种PCR方法的原理,以及其在食品微生物检测中的应用情况。

构建微生物突变体的方法综述

张念章;逯忠新;

2010, 0(02): 68-71.

摘要 ( 160 )

PDF (180KB) ( 921 )

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生物学范畴内的突变是指细胞中的遗传物质发生可遗传的改变,包括DNA碱基对的置换、增添或缺失等结构的变化。人们利用突变生物体进行科学研究和培育新产品。综述了人工构建突变体的几种常用方法及原理,着重介绍了应用基因工程技术进行微生物改造的方法,为科研工作和生产实践拓展思路。

牛卵核移植技术的应用

征月良;

2010, 0(02): 72-75.

摘要 ( 88 )

PDF (606KB) ( 347 )

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用去核的牛卵母细胞进行核移植,形成重构胚,胚胎移植后,可产生克隆牛。将克隆牛的肉和奶制成肉粉和奶粉饲喂大鼠,大鼠的生理功能不受影响。牛卵核移植技术为珍稀动物的保护提供了一条重要途径,对于细胞治疗的研究也具有重要意义。通过牛卵核移植技术,可构建异种克隆胚胎,用以研究核质相互作用。将牛卵核移植技术和体细胞基因修饰技术相结合,可生产转基因克隆牛。

拟南芥和水稻CPP转录因子家族的生物信息学分析

王凯;

2010, 0(02): 76-84.

摘要 ( 133 )

PDF (2133KB) ( 1062 )

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CPP(cystein-rich polycomb-like protein or Tesmin/TOS1-like)家族是含有保守的富含Cystein的CRC结构域的蛋白质的统称,参与花器官的发育,在控制生殖组织发育和细胞分裂过程中起着极其重要的作用。本研究系统鉴定了8个拟南芥(Arabidopsis thaliana)和11个水稻(Orysa sativa japonicacv.Nipponbare)的CPP基因,并对这些基因编码的蛋白质序列进行了序列保守性和系统进化分析,最后对相关基因的表达进行了分析。结果表明,所有的CPP转录因子都具有高度保守的CRC结构域;单子叶和双子叶植物分化之前,植物CPP基因发生过大幅度的扩张;尽管C1域和C2域氨基酸序列一致性较高,但在该蛋白质的生物学功能中可能起着不同的作用;CPP基因主要在花组织中表达,在拟南芥中,AtCPP5、AtCPP6和AtCPP7极有可能存在功能互补作用。

拟南芥转录因子CBF1和CBF4基因的克隆与序列分析

徐春波;王勇;杨志如;赵海霞;李兴酉;

2010, 0(02): 85-89.

摘要 ( 81 )

PDF (779KB) ( 290 )

相关文章 | 计量指标

利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株中扩增出CBF1和CBF4基因,并将其连接到pGEM-Tvector载体上。PCR和酶切鉴定后进行基因测序,结果表明所克隆的CBF1和CBF4基因序列与GenBank中基因序列同源性分别可达99.84%和99.41%,说明这两个片段确为拟南芥CBF1和CBF4基因。

转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究

黄新;张琰;侯立华;张祺;陈洪俊;朱水芳;

2010, 0(02): 90-93.

摘要 ( 91 )

PDF (493KB) ( 526 )

相关文章 | 计量指标

旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持。根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测。结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%。建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持。

番茄LeNHX1基因植物过量表达载体的构建及表达分析

范晶;雷常安;黄明远;刘超;梁梓;陈丽萍;王永建;

2010, 0(02): 94-97.

摘要 ( 94 )

PDF (1155KB) ( 327 )

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从番茄幼苗中提取RNA,根据NCBI中番茄LeNHX1基因序列设计引物,通过RT-PCR获得了番茄LeNHX1基因的cDNA序列,包含一个1 605 bp的开放阅读框,编码534个氨基酸。将cDNA序列连接到植物过量表达载体PBI121上,对所获得的重组质粒进行双酶切鉴定,结果表明,植物过量表达载体PBI121-LeNHX1已构建成功。半定量RT-PCR结果表明LeNHX1基因在根、茎和叶中均表达,盐、低温和脱落酸的诱导能提高LeNHX1基因的表达量,推测番茄LeNHX1基因在逆境应答中可能起着重要作用。

毛竹笋全长cDNA文库构建

刘志伟;张智俊;韩国民;何沙娥;杨丽;

2010, 0(02): 98-101.

摘要 ( 69 )

PDF (258KB) ( 476 )

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Gateway技术构建cDNA文库,利用了λ噬菌体的位点特异性重组,避免使用限制性内酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。应用Gateway技术构建毛竹笋cDNA文库,经检测cDNA入门文库的滴度达到1.7×106cfu/mL,文库总容量为8.5×106cfu,平均插入片段在1.0 kb以上。毛竹笋文库的构建为进一步克隆毛竹纤维化分子机理打下了基础。

甘菊DFL::EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

王翊;付建新;戴思兰;

2010, 0(02): 102-108.

摘要 ( 98 )

PDF (669KB) ( 391 )

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增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3′端后面插入一段多克隆位点,成功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体。通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体。用含有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光。这一结果表明,融合蛋白DFL∷EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能。

琯溪蜜柚汁胞RNA提取方法的比较

钟凤林;郭志雄;马传营;潘东明;

2010, 0(02): 109-112.

摘要 ( 72 )

PDF (257KB) ( 381 )

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比较了3种从琯溪蜜柚汁胞中提取RNA的方法,通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测,对提取所得RNA的完整性、纯度及浓度进行分析。试验结果表明,Trizol法适合琯溪蜜柚汁胞RNA的提取,能有效获得纯度高、完整性好的RNA样品,而且Trizol法步骤简单,RNA得率与质量均较高。通过RT-PCR检验表明该RNA适于后续分子生物学操作。

两个枣树扩展蛋白基因cDNA全序列的克隆及分析

孟玉平;曹秋芬;魏玮;孙海峰;

2010, 0(02): 113-118.

摘要 ( 68 )

PDF (1114KB) ( 349 )

相关文章 | 计量指标

用定向克隆法构建了枣树(Ziziphus jujubaMill.)快速生长初期结果枝的cDNA文库,经过重组质粒的筛选,克隆获得两个扩展蛋白基因cDNA全序列,分别命名为ZjEXP1(GenBank登录号:FJ449891)和ZjEXP2(GenBank登录号:FJ449892)。ZjEXP1全长1 037 bp,包含编码254个氨基酸的完整开放阅读框;ZjEXP2全长905 bp,包含编码251个氨基酸的完整开放阅读框。两个序列有共同的结构特征,即在N-末端有8个保守的半胱氨酸残基的丰富域,C-末端有4个保守的色氨酸残基的丰富域,中间有一个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)功能域。两者之间的氨基酸同源性为74.0%。从已知的扩展蛋白基因家族的进化分析表明,ZjEXP1和ZjEXP2由一个祖先进化而来,又分别属于两个不同的分支。

三种快速制备含重复序列质粒PCR模板的方法

赵宏宇;蔡禄;赵秀娟;王晶妍;李晶;

2010, 0(02): 119-122.

摘要 ( 113 )

PDF (264KB) ( 857 )

相关文章 | 计量指标

为了探索含重复序列质粒PCR模板的快速简易制备方法,分别利用高速离心法、TE煮沸法和TE/SDS煮沸法处理过夜培养的含重组质粒大肠杆菌菌体,制备模板后进行PCR扩增发现,均能得到比较清晰的目的条带,可以用于含重复序列质粒的初步鉴定。相比较而言,高速离心5 min、TE煮沸3 min、TE/SDS煮沸2.5 min制备的样品PCR扩增后效果较好。这3种方法快速、简便、费用低、无污染,简化了PCR模板制备的过程,为重组质粒大量筛选鉴定的研究奠定了基础。

Chelex-100快速提取放线菌DNA作为PCR扩增模板

周双清;黄小龙;黄东益;胡新文;陈吉良;

2010, 0(02): 123-125.

摘要 ( 191 )

PDF (188KB) ( 731 )

相关文章 | 计量指标

旨在建立有效扩增16S rRNA基因序列的放线菌DNA快速提取的方法。采用Chelex-100法提取放线菌DNA,使用PCR扩增16S rRNA基因序列评价提取核酸的质量。结果显示,Chelex-100法能够在10 min之内从放线菌中快速提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,符合理论预期结果。因此,Chelex-100法提取放线菌DNA可以作为16S rRNA基因序列PCR扩增的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于放线菌菌株大规模地筛选和分类鉴定。

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

李红梅;陈佳;徐斐;曹慧;Maria Eugenia;

2010, 0(02): 126-130.

摘要 ( 205 )

PDF (450KB) ( 2355 )

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通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。

pcDNA3.1(+)-VEGF165载体的构建及表达蛋白特性分析

邱明;肖明朝;苟欣;杨钰兴;

2010, 0(02): 131-134.

摘要 ( 94 )

PDF (521KB) ( 614 )

相关文章 | 计量指标

构建含人VEGF165基因的重组真核表达质粒,并对其表达蛋白特性进行初步分析。将合成的VEGF165基因序列克隆至pCR2.1-TOPO载体,测序鉴定证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建成pcD-NA3.1(+)-VEGF165重组质粒。利用DNAstar软件分析基因序列并翻译成氨基酸序列,再用ExPASy protscale和Protean软件分析其疏水特性、蛋白二级结构。经基因测序、酶切鉴定和PCR鉴定证实pcDNA3.1(+)-VEGF165重组质粒构建成功。Ex-PASy protscale和Protean软件分析表明VEGF165蛋白具有较好的水溶性。本研究为VEGF165的基因治疗应用和VEGF165蛋白直接治疗勃起功能障碍奠定了基础。

乙型肝炎病毒HBx蛋白抑制TTRAP启动子活性的体外研究

张小花;张磊;田园园;王丽英;黄爱龙;汤华;

2010, 0(02): 135-139.

摘要 ( 100 )

PDF (346KB) ( 308 )

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旨在探讨体外培养条件下HBx蛋白对TTRAP(TRAF and TNF receptor-associated protein)基因转录水平表达的影响。用RT-PCR及Real-time PCR检测TTRAP在HepG2细胞和HepG2.2.15细胞中的表达;构建TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒;分别与HBV、HBs、HBp、HBc、HBx表达质粒共转染HepG2细胞,比较虫荧光素酶活性。RT-PCR和Real-time PCR结果显示,TTRAP在HepG2.2.15细胞中的表达量分别是其在HepG2细胞中表达量的44.9%和27.8%(P<0.05)。TTRAP启动子虫荧光素酶报告质粒与HBV表达质粒共转染组的相对荧光素酶活性,与对照组相比下降了43.8%。转染HBx表达质粒组的相对荧光素酶活性与其对照组相比下降了35%,而转染HBc、HBs及HBp表达质粒组对相对荧光素酶活性没有影响。因此证实HBx蛋白能抑制TTRAP启动子活性。

肾癌中hepaCAM外显子2异常甲基化与hepCAM表达的关系

潘翠翠;罗春丽;吴小候;杨淑哲;荀春华;蒲军;

2010, 0(02): 140-144.

摘要 ( 85 )

PDF (402KB) ( 283 )

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探讨肾癌中抑癌基因肝细胞粘附分子hepaCAM表达与hepaCAM外显子2 CpG岛甲基化状态的关系。采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR、RT-PCR法检测肾癌细胞株(786-0,RC-2)和43例肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAM外显子2的甲基化状态及hepaCAM mRNA的表达。786-0细胞hepaCAM表达水平低于RC-2细胞(P<0.05);786-0和RC-2细胞,前者存在hepaCAM外显子2甲基化,后者未检测到。肾癌组织中hepaCAM mRNA表达水平显着低于癌旁组织(P<0.001);肾癌组织hepaCAM外显子2的甲基化率为34.9%,癌旁组织2.33%,两者差异有显着意义(P<0.001),但在临床病理参数中的差异无统计学意义(P>0.05)。hepaCAM外显子2甲基化的肾癌组织其mRNA的表达水平显着低于未甲基化的肾癌组织(P<0.05)。因此,肾癌hepaCAM外显子2的甲基化可能是导致hepaCAM表达下降或缺失的原因之一,hepaCAM甲基化的研究为探讨肾癌发生发展的机制提供了新的理论依据。

RVVC患者阴道分泌物中SP-A的表达及意义

明燕虹;袁瑞;

2010, 0(02): 145-148.

摘要 ( 83 )

PDF (1207KB) ( 543 )

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旨在探讨肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)在复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)患者阴道分泌物中的表达及意义。收集RVVC患者、外阴阴道假丝酵母菌患者(VVC)及健康体检者(对照组)阴道分泌物各20例,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组中SP-A蛋白的含量,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测各组中SP-A的基因表达情况。用ELISA方法检测各组中SP-A蛋白的含量发现,VVC组的SP-A明显高于对照组(P<0.05),RVVC组的SP-A高于对照组及VVC组(P<0.05)。RT-PCR检测结果发现,VVC组的SP-A mRNA的表达水平高于对照组(P<0.05),RVVC组的SP-AmR-NA的表达水平明显高于对照组及VVC组(P<0.05)。SP-A可能是RVVC患者抗假丝酵母菌的重要物质,其性质或数量的改变可能在RVVC的发病机制中发挥重要作用。

人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

蔡富强;韩钰;王艳林;

2010, 0(02): 149-153.

摘要 ( 96 )

PDF (1349KB) ( 328 )

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克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiensornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白。采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1)。将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞。阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1。原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定。结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化。建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础。

番茄叶片GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因表达载体的构建与转化

吴海琴;赵瑛;符庆功;王华森;

2010, 0(02): 154-156.

摘要 ( 90 )

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GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMPase,EC 2.7.7.22)是维生素C合成途径的第一步关键酶。通过RT-PCR扩增到1498 bp的GMPase全长序列,GenBank登录号为DQ449030。利用克隆到的基因分别构建得到正义及反义植物表达载体。并将其克隆至PBI121真核表达载体,转化农杆菌LBA4404,利用农杆菌介导法转化烟草植株,经基因组PCR及琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明GMPase真核表达载体构建成功,并成功获得转基因植株。

莱茵衣藻血红素加氧酶1过表达载体的构建和遗传转化

王五姐;魏渊源;刘兆普;杨志敏;

2010, 0(02): 157-161.

摘要 ( 110 )

PDF (677KB) ( 596 )

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莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti)是一种3套基因组都能进行遗传转化的真核生物,作为一种模式生物,它被用于生物学研究的各个领域。目前,发现血红素加氧酶具有多种功能活性,但关于它的作用机理还不是很清楚。本研究利用分子生物学技术,构建了莱茵衣藻HO-1过表达载体,用SpeI和BglII双酶切,DNA测序,GUS染色,PCR检测证明表达载体构建成功。将此构建通过农杆菌介导法导入莱茵衣藻细胞中,获得了能够稳定遗传的转化子。上述结果为后续进一步的功能研究奠定基础。

猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达

张烨;于在江;唐启慧;陈禹保;辛丽;陈永坤;陈清轩;舒跃龙;

2010, 0(02): 162-167.

摘要 ( 118 )

PDF (443KB) ( 345 )

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克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。

猪血超氧化物歧化酶分离纯化工艺改进及其抗氧化活性研究

王保全;庞晓斌;李昭华;平娟;王玲玲;董先智;

2010, 0(02): 168-172.

摘要 ( 104 )

PDF (371KB) ( 704 )

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以新鲜猪血为原料,首次利用改进的新工艺提取分离超氧化物歧化酶,经过溶血,热变,丙酮沉淀,超滤浓缩,SephadexG-75凝胶过滤层析和DEAE-sepharose-fast flow离子交换层析纯化,冷冻干燥等步骤,得到高纯度酶,并对酶的相关性能进行研究。试验结果显示产品粗酶活性在3 000 U/mg左右,分别经SephadexG-75和DEAE-sepharose-fast flow层析纯化后,酶活分别达到5 585 U/mg和6 148 U/mg产品得率分别为13.4%和10.32%,SDS-PAGE凝胶电泳显示为单一条带达到电泳纯,其分子量在31 kD附近,其临苯三酚抗氧化活性明显。

黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性的影响

薛龙吟;林瑞凤;舒正玉;黄建忠;

2010, 0(02): 173-177.

摘要 ( 108 )

PDF (346KB) ( 440 )

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比较黑曲霉脂肪酶与黑曲霉酯酶的3-D结构发现二者在盖子结构域存在显着差异。根据已解析的酯酶的3-D结构信息,运用重叠延伸PCR技术,对黑曲霉脂肪酶的4个位点进行突变,以期获得开盖型黑曲霉脂肪酶。4个突变位点分别为形成黑曲霉脂肪酶盖子结构的α-螺旋与酯酶对应区域的α-螺旋相互置换;Ser84突变为Gly;Asp99突变为Pro;Lys108突变为Glu。4个重组质粒导入毕赤酵母GS115菌株进行异源表达后,仅pPCI9K-anl-D99P和pPCI9K-anl-K108E实现了活性表达。

一株高产碱性内切聚半乳糖醛酸酶生产菌的筛选与鉴定

李祖明;张洪勋;薛文通;张保国;李鸿玉;张晓岚;

2010, 0(02): 178-183.

摘要 ( 106 )

PDF (2110KB) ( 353 )

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从碱性土样中经分离筛选得到1株固态发酵产碱性内切聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株。经提酶条件优化得到较优的酶液提取提条件为30倍Na2CO3/NaHCO3缓冲液提取1 h。从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学鉴定结果来看,该菌株属B.gibsonii。

一株耐热脂肪酶产生菌的筛选及酶学性质研究

赵春雷;闫丽娟;谢振荣;高润池;李俊;唐湘华;黄遵锡;

2010, 0(02): 184-188.

摘要 ( 79 )

PDF (556KB) ( 421 )

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从云南省富油地采取了60份土样中,利用透明圈法筛选出一株耐热脂肪酶产生菌。对其酶学性质和发酵条件进行了研究,酶学性质表明,该酶最适作用温度为50℃,最适pH6.0,在pH3.0-8.0范围内稳定,在60℃保温60 min酶活还保留70%;70℃保温60 min残余50%;具有良好的热稳定性;不同金属离子有不同的作用,Ca+,K+对酶有激活作用,Fe3+、Pb2+、Mn2、Cu2+、Al3+、Zn2+对酶活有抑制作用。EDTA对酶影响不大。产酶最佳条件为:MgSO4.7H2O 0.05 g,K2HPO40.1 g,CaCO30.25 g,可溶性淀粉2.5 g,大豆粉2.5 g,装液量50 mL。这株细菌通过培养基优化酶活达到20.3 U/mL。

异源表达脂肪酶的重组酵母筛选培养基的改良

赖红星;万霞;张银波;黄凤洪;陈洪;江木兰;

2010, 0(02): 189-193.

摘要 ( 111 )

PDF (385KB) ( 626 )

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在脂肪酶产生菌的筛选中,最常用的方法是三丁酸甘油酯琼脂平板透明圈法和橄榄油琼脂平板变色圈法。而传统的三丁酸甘油酯平板缺乏有效营养成分,重组酵母无法生长;橄榄油平板灵敏度较低,低脂肪酶活力的重组酵母不能产生变色圈,这给产脂肪酶基因工程菌的鉴定带来了困难。本研究在三丁酸甘油酯平板的基础上,添加适合酵母生长的营养成分,获得了新的改良培养基;重组酵母在该培养基上生长良好、水解圈清晰,检测脂肪酶灵敏度高。

猪圆环病毒2型福建株的全基因组克隆与序列分析

陈琼;

2010, 0(02): 194-198.

摘要 ( 105 )

PDF (366KB) ( 386 )

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根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型全基因序列设计一对扩增PCV-2全基因的引物,建立扩增PCV-2全序列的PCR方法,并应用此方法从福建省不同地区采集的疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的仔猪肺组织病料中扩增出PCV-2全基因组(1 767 bp),将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-PCV-2,并对其进行序列测定,然后对全基因组进行同源性和遗传进化分析。结果表明,福建省不同地区采集的猪肺组织扩增出的PCV-2全序列与GenBank上公布的的全基因组同源性介于94.9%-99.8%之间,ORF1的同源性介于97.2%-99.9%,ORF2的同源性也很高,介于97.7%-99.8%之间。其中福州株、福清株和漳州株与中国农大报道的12株、郑州株5株、杭州4株、武汉株3株、上海株2株、扬州2株、南京1株和兰州1株共30株在一个进化分支上,同源性也高达99.3%。本研究有助于监测PCV-2的疫源和进化关系,为进一步深入研究福建省生猪猪圆环病毒来源奠定一定基础。

牛乳碱性蛋白二维凝胶电泳条件的优化

李珊珊;王加启;杨永新;魏宏阳;卜登攀;张乐颖;

2010, 0(02): 199-201.

摘要 ( 85 )

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为了在二维凝胶电泳(2-DE)中有效分离牛乳中的碱性蛋白,本试验在等电聚焦上样缓冲液中加入异丙醇和甘油,采用杯上样方式,比较了三丁基磷(TBP)和二硫苏糖醇(DTT)两种还原剂对碱性区域蛋白的分离效果。结果发现,等电聚焦上样缓冲液以TBP为还原剂的碱性蛋白分离图谱水平条纹少,优于以DTT为还原剂图谱。表明等电聚焦上样缓冲液以TBP为还原剂,采用杯上样的方法可以改善牛乳中碱性蛋白的分离效果。

一种高效快速的鱼类标本基因组DNA提取方法

乐小亮;章群;赵爽;范凤娟;

2010, 0(02): 202-204.

摘要 ( 152 )

PDF (212KB) ( 562 )

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以95%酒精保存的黄鳝(M onopterus albus)和斑鳢(Channa maculates)标本为材料,采用先沉降DNA再去除杂质的方法从鱼类标本中提取基因组DNA。基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测以及PCR扩增结果显示,本方法提取的鱼类基因组DNA的电泳主带清晰明亮;A260/A280值在1.7830-2.0144之间;PCR扩增产物条带清晰明亮,且单一整齐没有拖带,表明本方法可从酒精保存的鱼类标本中提取比较纯净的DNA,能够满足一般分子生物学试验需要。与传统苯酚/氯仿法相比,本方法操作简单快速,避免了苯酚等物质对后续实验的影响,可作为一种常规动物组织DNA提取方法。

去垢剂在膜蛋白研究中的应用

谢浩;陈艳可;孙恩杰;王宏炜;

2010, 0(02): 205-212.

摘要 ( 342 )

PDF (401KB) ( 2583 )

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去垢剂是同时具有亲水极性基团和疏水非极性基团的双极性分子,能够使脂膜解体释放膜蛋白,并在溶液中为去膜状态下的膜蛋白提供疏水环境,维持和保护膜蛋白的疏水跨膜结构,在膜蛋白的结构和功能研究中有重要的意义。去垢剂的双极性和理化特性,如临界胶束浓度能够极大影响去垢剂和膜蛋白间的相互作用。在膜蛋白研究中,需要充分利用去垢剂的结构和特性:一方面,需要利用去垢剂代替脂质分子支持和稳定去膜状态下膜蛋白的结构和功能;另一方面,需要控制去垢剂和膜蛋白的相互作用,以满足膜蛋白结构研究如蛋白质结晶试验的要求。简要介绍了去垢剂在膜蛋白研究中的最新应用进展,涉及去垢剂在膜蛋白离体表达、分离和纯化、以及结构研究中的应用。

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