生物技术通报

宋敏;林祥明;刘丽军;

2010, 0(01): 1-8.

摘要 ( 126 )

PDF (466KB) ( 336 )

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从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)提取的Cry基因,是目前国内外开发应用最为广泛的抗虫基因,具有巨大的潜在经济价值。自上世纪80年代以来,美欧日等发达国家加速利用知识产权在Cry基因技术领域布阵设防,建立了严密的知识产权攻防体系,掌控着相关产业发展的主动权。通过检索搜集全球范围内的Cry基因专利信息,分析研究了Cry基因家族的专利分布状况,借此对我国在制定技术研发和产业化策略时,有效规避知识产权陷阱提供决策依据。

藻胆蛋白质的提取纯化与生物活性研究进展

张唐伟;李天才;

2010, 0(01): 9-13.

摘要 ( 154 )

PDF (201KB) ( 478 )

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藻胆蛋白的提取原料主要来自于红藻和蓝藻;细胞破碎的方法主要有反复冻融法、化学试剂处理法等5种方法;提取的方法主要有盐析法等3种;分离纯化的方法主要有层析法等3种;藻胆蛋白其生物活性主要表现在:抗肿瘤活性、抗病毒活性、抗氧化和消炎活性,提高免疫活性。

噬藻体光合作用基因研究

王淼星;向安;魏大巧;夏雪山;刘丽;

2010, 0(01): 14-18.

摘要 ( 107 )

PDF (283KB) ( 499 )

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感染原绿球藻和聚球藻的噬藻体基因组中普遍存在与psbA、psbD和hli等同源的基因,这些基因编码的蛋白参与光合作用,是光合成反应中心II(photosystem II,PSII)的重要组成成分,在噬藻体感染蓝藻过程中可能发挥着重要的作用。一些假说认为这些基因可能来自于宿主并发生共进化。因此,光合作用基因的功能、起源与演变及基因多样性分布引起了人们的关注。

植物Dof转录因子及其生物学功能

徐慧妮;王康;李昆志;

2010, 0(01): 19-23.

摘要 ( 222 )

PDF (236KB) ( 394 )

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Dof(DNA binding with one finger)蛋白是植物特有的一类转录因子,包含一个C2-C2锌指,其N-末端保守的Dof结构域是既与DNA又和蛋白相互作用的双重功能域。在过去10多年的研究中,Dof蛋白在多种单子叶和双子叶植物中被分离。Dof蛋白作为转录的激活子或抑制子在植物的生长和发育中发挥重要作用。就Dof转录因子及其生物学功能的进展进行了综述。

枯草芽孢杆菌在抑制植物病原菌中的研究进展

黄曦;许兰兰;黄荣韶;黄庶识;

2010, 0(01): 24-29.

摘要 ( 561 )

PDF (241KB) ( 2386 )

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枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌中比较具应用潜力的菌种之一。近年来国内外对于芽孢杆菌各方面应用的研究日益增多,枯草芽孢杆菌作为一种生防细菌越来越引起人们的关注。主要综述了枯草芽孢杆菌在抑制植物病原菌生物防治领域的研究进展,阐述了枯草芽孢杆菌的控病作用机制,包括竞争作用、拮抗作用、溶茵作用、诱导植物产生抗性及促进植物生长5个方面。简要介绍了枯草芽孢杆菌及其制剂在国内外的应用情况及在植物病害防治应用中存在的问题、解决措施及发展前景。

MicroRNA与动物发育

付元帅;施志仪;

2010, 0(01): 30-36.

摘要 ( 104 )

PDF (340KB) ( 320 )

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MicroRNA(miRNA)是一类约22nt大小的内源性非编码RNA,它们通过剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译从而起到转录后调控靶基因表达的作用。在动物体内,通过基因敲除等方法所进行的大量研究表明了miRNA参与了胚胎早期发育、脑及神经发育、心脏发育、肌肉及骨骼发育等动物发育的各个方面。miRNA是动物发生发育过程中重要的调控因子。主要介绍了近年来miRNA在动物生长发育过程中的研究进展。

基于Cytb基因的动物检材种属鉴定在非传统领域的部分运用

王健胜;高雅琴;

2010, 0(01): 37-43.

摘要 ( 106 )

PDF (328KB) ( 530 )

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传统意义上的种属鉴定主要用于法医学研究方面,然而随着科技的进步及社会发展的需要,种属鉴定在其他领域也有广泛的应用。主要以线粒体Cytb基因为切入点,简要介绍了线粒体DNA及Cytb基因的结构和特点,总结和归纳了基于Cytb基因进行种属鉴定的相关技术方法在打击动物走私、濒危物种保护、食品及动物产品或制品等的检验检疫方面的运用情况,并对存在的问题及发展趋势做一阐述。

非编码保守DNA序列形成与演化机制

朱红霞;胡利宗;黄建新;

2010, 0(01): 44-48.

摘要 ( 187 )

PDF (201KB) ( 928 )

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作为一种系统进化足迹,基因组非编码保守DNA序列受到极大关注。由于非编码保守DNA序列很可能与转录因子或特异蛋白质相互作用,直接参与调控基因表达或稳定染色体结构等重要的生命活动。因此,它极有可能成为基因组研究的下一个新浪潮。在总结对生物非编码保守DNA序列的认识过程的基础上,详细阐述了非编码保守DNA序列形成与演化的模型及其分子生物学机制,进一步展望了非编码保守DNA序列在生物学研究中的应用前景。

利用表达序列标签电子克隆cDNA全序列的策略

孙淼;赵茂林;

2010, 0(01): 49-52.

摘要 ( 159 )

PDF (169KB) ( 514 )

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基因组计划的进展及表达序列标签数据的迅速扩增使得电子克隆方法孕育而生,为进行基因克隆开辟了一条新的路径。介绍了表达序列标签和电子克隆的原理及过程,重点分析电子克隆过程中遇到的问题及解决方法,展望其在新基因功能研究中的作用。

茉莉酸和茉莉酸甲酯生物合成及其调控机制

李清清;李大鹏;李德全;

2010, 0(01): 53-57.

摘要 ( 337 )

PDF (245KB) ( 1836 )

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近年来茉莉酸类物质作为重要的信号分子引起了广泛的关注。从茉莉酸的生物合成入手,概述了茉莉酸类物质作为信号分子在植物胁迫响应及生长发育中作用的研究进展。

Cdk5在可卡因诱导的药物成瘾中的作用

李彦辉;马莎;白洁;

2010, 0(01): 58-62.

摘要 ( 103 )

PDF (985KB) ( 524 )

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细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase-5,Cdk5)是细胞周期素蛋白激酶之一,具有很多磷酸化底物,其激动剂p35和p39特异存在于神经系统(CNS)。因此,Cdk5在神经系统中的功能尤为突出,成为神经科学研究热点。目前研究较多的是Cdk5在可卡因诱导的药物成瘾中的作用。在可卡因所致药物成瘾过程中,多巴胺系统,ΔFosB,神经元突触可塑性等发挥重要作用。Cdk5与这些分子相互作用,所以,Cdk5与可卡因诱导所致药物成瘾密切相关。阐明其与药物成瘾的联系,探索新的以Cdk5为靶向的药物,将可能成为成瘾治疗的有效手段。综述了在可卡因诱导的药物成瘾中Cdk5作用,以及Cdk5与相关的信号转导分子之间的相互调节。

应用系统遗传学与细胞发生的基因调控网络序列标记显示分析

曾(杰)邦哲;

2010, 0(01): 63-67.

摘要 ( 75 )

PDF (602KB) ( 200 )

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基因型-表现型复杂系统自组织化是基因系统到蛋白质系统、代谢酶系统的遗传信息转换过程。一个协同表达的基因群调控一个相对独立性状的功能模块,基因网络的自组织化建构基因组稳态与遗传适应过程。腺垂体干细胞分化成5种不同的内分泌细胞系,受上丘脑和性腺、胰岛细胞等激素的调控,涉及系列转录因子的诱导表达,成为细胞系发生研究的模型。GH基因的表达受上丘脑激素GRF、GHRP-6刺激以及SMS抑制,经不同受体、G蛋白亚单元和PKA、PKC信号传导路径,转录因子调控细胞再生或GH基因表达、激素分泌。基因表达调控决定于基因序列,如启动子、非翻译RNA区、蛋白质的结构域等,系统生物学包括组学、计算与合成生物技术,序列标志片段显示(STFD),可用于细胞系分化、病理变化等基因表达谱、信号传导网络的系统分析与功能基因克隆。

生物技术在食品检测方面的应用

谢修志;

2010, 0(01): 68-72.

摘要 ( 156 )

PDF (227KB) ( 787 )

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综述了DNA探针、PCR、生物芯片、胶体金免疫层析及ELLSA等生物技术的基本原理及其在食品检测方面的应用。

454测序法在环境微生物生态研究中的应用

徐晓宇;刘和;

2010, 0(01): 73-77.

摘要 ( 137 )

PDF (236KB) ( 1787 )

相关文章 | 计量指标

传统的Sanger测序技术虽已成熟,但其速度和成本的限制满足不了大规模测序的要求。第二代高通量测序技术结合了乳胶微粒和皮升级反应的454焦磷酸测序法,作为一种高通量测序技术,具有分析结果准确、高速、高灵敏度和高自动化的特点。对454测序法的技术原理和操作步骤进行了介绍,对近年来运用该方法在环境微生物生态研究领域的进展进行了综述。

水稻叶绿素a氧化酶基因突变体的鉴定及其对氮营养的响应

李宝珍;徐国华;

2010, 0(01): 78-82.

摘要 ( 109 )

PDF (533KB) ( 365 )

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对从日本获得的水稻Tos17插入突变基因进行了鉴定,并通过PCR技术对其插入位点和纯合体进行了分析和筛选。结果表明,Tos17插入在序列号为DP000086的基因,在此基因反向互补序列的1579bp处,在mRNA序列的第5个外显子区域,是水稻的一个叶绿素a氧化酶基因,而且此基因在单一的铵营养下表达减弱,氮饥饿条件下表达增强。利用Tos17未端和插入位点上下游设计引物进行PCR反应,鉴定到3株纯合突变体株,为进一步研究其功能奠定了基础。

适用于微卫星标记的湿地松、加勒比松DNA快速提取法

李义良;赵奋成;张应中;吴惠姗;

2010, 0(01): 83-86.

摘要 ( 164 )

PDF (284KB) ( 318 )

相关文章 | 计量指标

以湿地松(Pinuselliottii,PEE),包括古巴加勒比松(P.caribaea var.caribaea,PCC)、洪都拉斯加勒比松(P.caribaea var.hondurensis,PCH)、巴哈马加勒比松(P.caribaeavar.bahmaensis,PCB)3个变种在内的加勒比松,侧枝顶芽为试验材料,使用RETSCHMM400混合球磨仪破碎植物组织,然后利用改良CTAB法提取基因组DNA,完成48个样品仅用1h,1个工作日可提取300个样品以上,DNA分子量大于20kb,0.3g样品可提取DNA20-60μg,能够满足几百次PCR反应;利用所提DNA进行SSR分析,条带清晰,多态性好,说明该方法提取的DNA完全可以满足SSR反应的需要。本研究为SSR标记用于湿地松、加勒比松分子标记辅助选择育种提供了经济、高效、可靠的DNA提取方法。

毛竹抗逆锌指蛋白基因cDNA克隆与序列分析

刘志伟;张智俊;杨丽;

2010, 0(01): 87-92.

摘要 ( 85 )

PDF (709KB) ( 303 )

相关文章 | 计量指标

根据水稻抗逆相关锌指蛋白基因的保守区序列设计引物,以毛竹基因组DNA和cDNA为模板,采用PCR方法,成功扩增出1个含有完整阅读框架的cDNA序列,长度为495bp,序列无内含子,共编码164个氨基酸,将其命名为PeZFP基因(GenBank登录号:FJ472953)。氨基酸序列(GenBank登录号:ACL01101)的分析结果表明,PeZFP与其他锌指结构蛋白有较高的同源性,同水稻锌指结构抗逆蛋白OSIAP1序列相似性高达87.7%,且其序列C端具有典型的AN1类型的锌指结构Cx2-4Cx9-12Cx2Cx4Cx2Hx5HxC,在N端具有典型的A20类型锌指蛋白结构,推测此PeZFP为植物抗逆OsIAP1类似基因,在功能上与毛竹抗逆性相关。

转查尔酮合酶基因对烟草花色及花器官的影响

夏玉凤;耿晓娜;王万双;赵宝华;

2010, 0(01): 93-98.

摘要 ( 82 )

PDF (775KB) ( 393 )

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花色是重要的园艺性状,一直是育种工作者苦苦追求的目标。利用植物基因工程技术可定向改良花色。根据已知的CHS序列(序列号M20308.),用PCR方法从拟南芥中克隆CHS基因,并分别将其以正向、反向插入到真核表达载体pBI121,在农杆菌介导下用叶盘转化法转化烟草。对转基因烟草进行检测,结果表明,转基因烟草的花色变淡、花青素含量降低;叶片颜色变浅、叶绿素含量降低。转基因烟草花的形态也发生了明显变异。

高效氯氰菊酯降解菌CH7的分离鉴定及降解条件的优化

张琛;王圣惠;闫艳春;

2010, 0(01): 99-102.

摘要 ( 76 )

PDF (385KB) ( 303 )

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从农药厂活性污泥中,分离到一株能以高效氯氰菊酯为唯一碳源生长的细菌CH7。经生理生化试验和16S rD-NA分析,将菌株CH7鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。采用Box-behnken设计试验、响应面法(response surfacemethodology)优化菌株CH7的降解条件。在最优条件下(29.4°C,pH7.0,接种量0.15g/L),菌株CH7在12d内对100mg/L高效氯氰菊酯的降解率为90%。

产聚β-羟基丁酸酯菌株的筛选及发酵条件的优化

崔志芳;季爱云;李春露;

2010, 0(01): 103-106.

摘要 ( 127 )

PDF (348KB) ( 471 )

相关文章 | 计量指标

作为一类可望替代传统塑料的新型可降解生物高分子材料,聚β-羟基丁酸酯(PHB)日益引起人们的重视。采用尼罗蓝荧光法从污水中初筛得到产PHB的细菌,摇瓶发酵复筛得到一株PHB产量较高的菌株AE13,同时对该菌株的发酵条件进行了正交优化,PHB的产量达到0.85g/L。

不同N端序列长度匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子的表达

陆合;张碧波;

2010, 0(01): 107-110.

摘要 ( 96 )

PDF (1268KB) ( 356 )

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克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6D是预测的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的ORF序列,N端序列为MKFIIIDKKVY,编码430个氨基酸;两个重组子均具有△6-脂肪酸脱氢酶保守的组氨酸序列和HPGG序列,长序列的N端比短序列长29个氨基酸残基(MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDGDE-EA)。两个重组子在缺陷型酵母中均得到了的表达,产生了γ-亚麻酸。利用酶的相对活力比较两个重组子在同一温度下的稳定性,长序列重组子的酶在15℃下反应4h后相对活力仍有74%,而短序列酶的相对活力只有43%,所以长序列重组子酶在低温下比短序列酶稳定性高,是因为长序列多出的氨基酸序列增加了酶的稳定性。

甘蓝型油菜β碳酸酐酶的结构预测

邓秋红;栗茂腾;向福;余龙江;

2010, 0(01): 111-117.

摘要 ( 95 )

PDF (1231KB) ( 283 )

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根据已经克隆到的甘蓝型油菜β碳酸酐酶基因序列,概念地翻译成蛋白质的氨基酸序列。利用Vector NTISuite、SOPMA、Swiss-Model和NCBI-VAST等软件和服务器对甘蓝型油菜β碳酸酐酶的一级结构、二级结构、三维结构进行分子结构模型预测,并进行三维结构的比对。预测结果显示,甘蓝型油菜β碳酸酐酶是定位于叶绿体基质的蛋白质,具有β类碳酸酐酶所特有的保守性基序Cys-Xn-His-X2-Cys;SOPMA预测二级结构显示α螺旋(39.88%)、随机卷曲(39.27%)、β折叠(16.31%)和β转角(4.53%);用同源建模法构建了三维结构图;通过VAST矢量比对工具将甘蓝型油菜β碳酸酐酶与模板(1ekjG)进行三维结构比对,显示甘蓝型油菜β碳酸酐酶与豌豆β碳酸酐酶同型八聚体中的一个单体(1ekjG)很好的匹配,推测甘蓝型油菜β碳酸酐酶全酶也是同型八聚体。

魔芋葡甘露低聚糖的酶法制备工艺的初步研究

吴长菲;董岩岩;李俊俊;唐湘华;黄遵锡;

2010, 0(01): 118-122.

摘要 ( 79 )

PDF (377KB) ( 445 )

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利用β-甘露聚糖酶产品水解魔芋胶制备魔芋葡甘露低聚糖的工艺条件。在加样顺序、pH、酶添加量、时间、温度等单因素试验的基础上,进一步通过正交试验确定的最佳工艺条件为:魔芋胶浓度10g/L,酶添加量为100U/g,pH5.5,45℃条件下,酶解时间1.5h。再利用酵母发酵去除可发酵性糖的方法,以获得最终产物为100%的魔芋葡甘露低聚糖。

少根根霉脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达

张欢;王凤寰;田平芳;谭天伟;李文进;

2010, 0(01): 123-127.

摘要 ( 91 )

PDF (542KB) ( 425 )

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利用PCR技术从少根根霉基因组中扩增出脂肪酶成熟肽基因ral,并从枯草芽孢杆菌基因组中扩增出sacB基因的启动子-信号序列(SacB);通过搭桥PCR将SacB序列与ral基因融合,并将该基因表达盒连接到枯草杆菌分泌表达载体pGJ103中构建了脂肪酶基因的诱导表达载体pGJ103-SacB-ral。将重组载体转化至枯草芽孢杆菌后,少根根霉脂肪酶成熟肽基因在SacB启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,产物分泌至胞外。

禾谷镰刀菌降解毒素基因Tri101的克隆和序列分析

闫海霞;杨丽荣;薛保国;段立清;孙虎;全鑫;

2010, 0(01): 128-135.

摘要 ( 112 )

PDF (1491KB) ( 322 )

相关文章 | 计量指标

禾谷镰刀菌Tri101基因编码的单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶可通过加乙酰基的形式使禾谷镰刀菌产生的单族毒素(如DON)转变为较低的毒性。本研究利用RT-PCR技术从禾谷镰刀菌0623中扩增并克隆了Tri101基因的cDNA片段,测序结果表明,Tri101基因核苷酸序列阅读框架全长1356bp(GenBank序列号:GQ907236),编码451个氨基酸的多肽,推测分子量为49.45kD,等电点为5.14。氨基酸序列同源性比对结果表明,它与Kimura报道的禾谷镰刀菌Tri101氨基酸序列同源性最高,为99.56%,与其它13种镰刀菌的Tri101氨基酸序列的同源性分别为97.91%-75.68%。系统进化树分析结果表明,Fusarium graminearium0623与Fusarium sporotrichioides属于同一进化枝且与Fusarium asiaticum有较近的亲缘关系,而与F.oxysporum、F.moniliforme、F.nygamai、F.nisikadoi和F.decemcellulare的亲缘关系较远。

北极海泥菌群的分离鉴定及生物学特性的初步研究

刘军;张帅帅;杨娜;杜宗军;

2010, 0(01): 136-141.

摘要 ( 100 )

PDF (830KB) ( 363 )

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对从北极冰川海面下1500-4000m处的海泥样品中分离的8株冷适应细菌进行了生理特征和分子生物学研究。其中5株嗜冷菌、3株耐冷菌,利用16SrDNA通用引物对5株嗜冷菌基因组DNA进行扩增,测序得到其部分16SrDNA序列。经Blast调出与菌株16SrDNA同源的序列,按照Neighbor-Joining方法构建16SrDNA系统发育树。对8株细菌进行酶检测试验,结果表明其中有部分细菌产低温酶:N014产淀粉酶,R151产明胶酶,P371产纤维素酶。研究结果为进一步开发利用冷适应微生物产物提供参考依据。

金玉兰酶制剂(β-内酰胺酶)抗体制备及初步应用

张小兵;吴萌;齐颖颖;邸禄芹;李君华;李春生;成凯琳;闫静辉;

2010, 0(01): 142-146.

摘要 ( 105 )

PDF (516KB) ( 323 )

相关文章 | 计量指标

以金玉兰酶制剂(β-内酰胺酶)为抗原,制备出对β-内酰胺酶特异的多克隆抗体和单克隆抗体,并进行了抗体纯化和特性分析。采用Tas-ELISA,初步对牛奶中的β-内酰胺酶进行了检测。结果表明利用该检测体系可实现对牛奶中β-内酰胺酶的检测,并且该体系灵敏度高,特异性强,重复性好。

化学药物导致的与Friedreich共济失调相关的GAA重复序列不稳定性的研究

赵宏宇;蔡禄;赵秀娟;王晶妍;陈元秀;刘水峰;

2010, 0(01): 147-152.

摘要 ( 97 )

PDF (1443KB) ( 226 )

相关文章 | 计量指标

Friedreich共济失调是由位于FRDA基因上的GAA重复序列动态突变扩增所引起的,目前其不稳定性机制还不清楚。为了探索化学药物对GAA重复序列的作用,本实验构建了含有(GAA)42的重组质粒,转入大肠杆菌中,分别经过丝裂霉素C和甲基磺酸乙酯连续多次处理后,检测其长度变化发现,两种化学药物在不同程度上都可以促使(GAA)42发生删除,且删除后长度多数处于体内的正常范围。试验结果表明,化学药物可以促进与Friedreich共济失调相关的GAA重复序列发生删除。本工作为研究Friedreich共济失调的致病机理及治疗方案奠定了一定的基础。

白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中表达纯化及性质研究

赵雪娜;董相陈;侯登勇;孙丽霞;王晶翼;王庆民;

2010, 0(01): 153-156.

摘要 ( 215 )

PDF (3390KB) ( 483 )

相关文章 | 计量指标

CRM197是一种白喉毒素突变体,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pET25b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,CRM197获得高效表达,达到菌体总蛋白的20%。目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换、S-100分子筛纯化获得纯度高于95%的CRM197样品,用该蛋白样品免疫新西兰大白兔,免疫兔血清中检测到特异性抗体应答。急性毒性试验中,每只豚鼠皮下注射200μgCRM197纯化样品,未出现明显毒性反应症状,与之相比较,注射后48h内,20ng白喉毒素阳性对照组动物全部死亡。结果表明,利用本试验的表达策略,CRM197得到高效表达,并且具有良好的免疫原性和安全性,为其进一步生产及应用奠定基础。

hepaCAM和VEGF基因表达与肾透明细胞癌侵袭转移关系的探讨

杨淑哲;罗春丽;吴小候;潘翠翠;荀春华;蒲军;

2010, 0(01): 157-161.

摘要 ( 105 )

PDF (1784KB) ( 286 )

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研究肾癌细胞株786-0,RC-2及肾透明细胞癌组织中肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaC-AM)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及其与肾透明细胞癌侵袭转移的关系。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测786-0、RC-2、正常肾组织hepaCAM和VEGFmRNA表达,73例肾透明细胞癌组织及相应癌旁组织中hepaCAMmRNA表达,43例肾透明细胞癌组织及相应癌旁组织VEGFmRNA表达,并比较它们之间的差异性和相关性。与正常肾组织比较786-0,RC-2的hepaCAMmRNA显着降低(P<0.05);VEGFmRNA显着升高(P<0.05)。肾透明细胞癌组织hepaCAMmRNA显着低于癌旁组织(P<0.05);VEGFmRNA显着高于癌旁组织(P<0.05)。在肾透明细胞癌组织中临床Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期两组VEGFmRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05),hepaCAM与VEGFmRNA呈负相关(r=-0.329,P<0.05)。提示hepaC-AM基因缺失可能参与肾透明细胞癌侵袭转移,其机制可能与调节VFGF表达改变有关,hepaCAM有望成为一种新的肾癌基因治疗的靶分子。

抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

杨正梅;卜友泉;刘革力;易发平;宋方洲;

2010, 0(01): 162-167.

摘要 ( 94 )

PDF (1336KB) ( 279 )

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研究食管癌细胞中Plk1表达被抑制后对化疗药物敏感性的影响,为进一步研究开发基于Plk1食管癌分子靶向治疗奠定基础。化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入3代表性的食管癌细胞系;采用RT-PCR和蛋白质印迹法确认siRNA对Plk1表达的抑制效果;MTT分析观察抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗药物敏感性的影响。半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制所使用的3代表性食管癌细胞系中Plk1的表达,抑制程度约90%。MTT分析结果表明,siRNA抑制Plk1表达后,能显着提高3食管癌细胞系对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。由此证实,siRNA介导的Plk1表达抑制能显着提高食管癌细胞对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。

双色荧光多重PCR技术及在禽流感病毒检测中的应用

侯立华;黄新;朱水芳;王慧煜;韩雪清;

2010, 0(01): 168-172.

摘要 ( 101 )

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为快速检测7种亚型禽流感病毒,对引物进行双色荧光标记,建立双色荧光多重PCR(DFM-PCR)方法,通过运用DFM-PCR可一次检测出7种禽流感病毒亚型。此方法为应用于病毒或病原等一些要求快速、高通量的检测领域打下基础,而且为禽流感病毒检测以及其他种类病毒等病原检测提供了一种新型方法。

猪γ-干扰素的克隆表达及单抗的潜在应用

娄忠子;兰喜;李建强;李学瑞;李志勇;殷相平;柳纪省;

2010, 0(01): 173-179.

摘要 ( 106 )

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以刀豆素A(ConA)刺激长白猪外周血单个核细胞(PBMC),提取的总RNA为模板,采用一步法RT-PCR扩增出包含猪γ-干扰素(PoIFN-γ)完整基因的片段。将完整的PoIFN-γ基因亚克隆到pET-32a(+)上,构建pET-IFN-γ融合表达载体,转化入Rosetta(DE3)后IPTG诱导表达,得到大小约为36.8kD的目的蛋白。将目的蛋白检测及纯化后免疫后BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,最终筛选出3株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞。ELISA叠加试验显示,3株单抗针对相同或邻近的PoIFN-γ抗原表位,制备的腹水中单抗间接ELISA效价为1×104。选取单抗IF-2株进行单抗的潜在应用研究,Westernblotting分析结果显示单抗IF-2株能与融合表达蛋白产生特异性反应,与pET-32a(+)标签蛋白无反应;间接免疫荧光检测(IFA)发现,在采用腺病毒表达系统表达PoIFN-γ的HEK-293细胞中散在大量特异性荧光。

弓形虫上海株的棒状体蛋白ROP2的克隆表达及纯化

蒋蔚;王权;陈永军;聂福旭;

2010, 0(01): 180-183.

摘要 ( 74 )

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根据已发表基因序列(GenBank登录号为Z36906)设计引物,以弓形虫(Toxoplasma gondii)上海本地株的基因组DNA为模板,扩增编码ROP2(rhpotry protein2)蛋白的基因片段,定向克隆至表达质粒pET32a(+),重组质粒经限制性酶切鉴定后测序,结果表明插入片段长度为1044bp,与GenBank上登录的序列相比,同源性为96%-100%,其中与弓形虫RH株的rop2基因同源性为100%。重组原核表达质粒pET32a-rop2转化至大肠杆菌BL21(DE3),经诱导可表达分子量约60.9kD的融合蛋白,能被感染弓形虫RH株的绵羊阳性血清识别。

鸭胚胎干细胞分离与鉴定

高健潜;张春红;王丙云;陈金顶;

2010, 0(01): 184-187.

摘要 ( 184 )

PDF (394KB) ( 291 )

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采用药勺法分离仙湖3号肉鸭鸭胚的胚盘细胞,并以鸭胚成纤维细胞作为饲养层,培养鸭胚胎干细胞。在此基础上,通过对体外培养的鸭胚胎干细胞形态观察,碱性磷酸酶染色(AKP)以及胚胎阶段表面特异性抗原(SSEA-1)免疫组化等方法,分离与鉴定鸭胚胎干细胞。结果表明传至第3代的鸭胚胎干细胞经AKP和SSEA-1鉴定均为阳性,AKP染色为深蓝色,SSEA-1染色呈绿色荧光,表明培养至第3代的鸭胚胎干细胞仍保持干细胞未分化特性,具有胚胎干细胞的特征。结果提示本试验分离、培养的鸭胚盘细胞为鸭胚胎干细胞。

真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG的构建及在HeLa细胞中的表达

王洪振;王晓光;翟雷;

2010, 0(01): 188-192.

摘要 ( 333 )

PDF (447KB) ( 619 )

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为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目的片段重组至pcDNA3.1(-)中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定后,构建了带有Kozak序列和核定位信号的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG。真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG被转染试剂Su-perfect转染至HeLa细胞中,绿色荧光蛋白基因在HeLa细胞中得到表达而且在细胞核中观察到绿色荧光。该研究以绿色荧光蛋白为标记初步建立了活体观察真核细胞核动态变化的研究体系。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

朱玉君;樊叶杨;庄杰云;

2010, 0(01): 193-195.

摘要 ( 128 )

PDF (161KB) ( 1127 )

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介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。

高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较

唐天乐;高炳淼;长孙东亭;罗素兰;

2010, 0(01): 196-199.

摘要 ( 279 )

PDF (236KB) ( 1324 )

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旨在比较5种毕赤酵母基因组DNA的提取法,以便获得简便高效的提取高质量酵母基因组DNA的优化方法。分别使用蜗牛酶破壁法,超声波破碎法,液氮研磨法,Lyticase破壁法,试剂盒法提取毕赤酵母基因组DNA,然后进行DNA电泳检测以及紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。结果显示,5种方法均能提取出酵母基因组DNA,而酶法所提取的酵母基因组DNA质量最好。由此证实,蜗牛酶法成本低、效果好,是理想的提取高质量酵母基因组DNA的方法,完全满足后续试验要求。

载ZnO/活性碳复合材料抗菌性能及安全性研究

韩绪军;张立波;冯悦;唐颖蕾;魏大巧;彭金辉;夏雪山;

2010, 0(01): 200-204.

摘要 ( 176 )

PDF (2114KB) ( 480 )

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废催化剂微波烧结法制备的ZnO/活性碳复合材料,在多孔活性炭表面附载有ZnO,是一种新型的环保材料。为评价其抗菌活性和使用安全性,本研究进行了材料对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及酵母菌的抑菌试验,结果表明ZnO/活性碳复合材料有很好的抑制细菌增殖效果,低浓度下(0.1μg/mL)作用2h的抑菌率能达到90%以上,对真菌-酵母菌的抑制活性相对较低;经细胞毒性试验、动物口服急性毒性试验,皮肤过敏性试验发现,材料对小鼠经口灌喂半致死剂量(LD50)>2000mg/kg,对兔皮肤刺激性积分为0,对细胞生长无影响,属于实际生物无毒级。试验结果表明ZnO/活性碳复合材料具有很好的抗菌效果及使用安全性。

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