生物技术通报

根癌农杆菌介导的木霉遗传转化及应用进展

范亮波;李梅;冀颖;刘卫德;蒋细良;

2010, 0(03): 1-5.

摘要 ( 100 )

PDF (317KB) ( 782 )

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木霉作为土传植物病原菌的生防真菌,研究其功能基因具有重要的意义。根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)为木霉功能基因的研究提供了一个强有力的工具。对根癌农杆菌介导木霉遗传转化的机理、特点、方法及其在木霉中的应用进行了综述。

影响工程菌株目的基因表达的因素

沈宝明;谭新球;谭周进;刘勇;

2010, 0(03): 6-12.

摘要 ( 140 )

PDF (256KB) ( 1045 )

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目的基因在细胞中的表达研究,在理论和应用上都具有重要的意义。只有弄清影响目的基因表达的因素,才能使目的基因高效表达。主要讨论目的基因本身、表达载体、宿主细胞、培养条件、诱导剂等因素对目的基因更加高效的表达的影响。

植物肌动蛋白功能的研究进展

刘曦;张少斌;汪澈;

2010, 0(03): 13-16.

摘要 ( 128 )

PDF (252KB) ( 981 )

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肌动蛋白结构与功能方面的研究属于生物学的基础性研究,随着科技的不断发展,近年来研究重点已经转移到了在其结合蛋白调控下的功能作用的研究。主要回顾近年来植物肌动蛋白功能方面的研究进展。

科学出版社新书

2010, 0(03): 16-30.

摘要 ( 90 )

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转基因植物在环境污染监测中的应用

于典司;郭长虹;

2010, 0(03): 17-20.

摘要 ( 95 )

PDF (235KB) ( 325 )

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在通常情况下,污染物的存在很难被发现。它们对环境和人类的潜在危害就更加难以估计。在众多生物监测体系中,转基因植物监测系统脱颖而出。综述了几种成功应用于污染物质遗传毒性监测的转基因植物系统,并对今后生产高效率转基因植物监测体系的关键问题进行了探讨。

硫堇蛋白及细胞防御素在植物抗病性育种中的研究

宗晓娟;王甲威;刘庆忠;

2010, 0(03): 21-24.

摘要 ( 120 )

PDF (207KB) ( 422 )

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硫堇蛋白及细胞防御素是一类广泛存在于植物细胞中并对细菌、真菌等病原微生物具有抑制或杀灭作用的小分子量多肽抗生素。二者在分子量、空间结构及某些化学性质具有相似性,近年来在植物抗病性育种中得以应用。对植物硫堇蛋白及细胞防御素的分类、结构、作用机制以及在植物抗性育种的应用实例进行综述。

动物线粒体遗传系统理论与应用研究进展

陈念;赖小平;

2010, 0(03): 25-30.

摘要 ( 105 )

PDF (652KB) ( 623 )

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随着线粒体与人类疾病之间关系研究的不断深入,线粒体DNA及其编码的13个多肽的功能和进化引起了众多研究者的关注。作为有氧呼吸的后生动物主要的产能系统——线粒体电子传递系统(ETS)由线粒体和核基因组共同编码,自然选择被认为偏爱那些增强ETS功能的突变,此类突变可发生在线粒体或核编码的ETS蛋白中并引起积极的基因组间的相互作用,即"共适应"。线粒体DNA进化通常被认为遵循一种稳定的突变速率平衡中性模型,但有证据表明该假设可能并不可靠。对线粒体遗传系统研究的最新进展进行了综述,这对科学和合理地使用线粒体DNA分析技术具重要意义。

PDIA3的结构与功能及其在精卵融合过程中的作用

吕利霞;汤睿智;邢万金;

2010, 0(03): 31-34.

摘要 ( 154 )

PDF (292KB) ( 625 )

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二硫键异构酶家族的一员PDIA3(protein disulfide-isomerase A3)最初确定其位于内质网腔内,作为钙联接蛋白和钙网质蛋白的分子伴侣复合物的组成成分之一,促进新合成的糖蛋白在内质网中的正确折叠。PDIA3在内质网中的功能依赖其蛋白二硫键氧化还原异构酶活性。目前研究发现位于精子表面的PDIA3的蛋白二硫键氧化还原酶活性在精卵融合中也发挥着重要的作用。就目前关于PDIA3的结构和功能及在精卵质膜融合中的作用研究进展做一概述。

与HBV感染可能有关的microR-122的筛选及其作用的靶点预测

郝美君;黄爱龙;

2010, 0(03): 35-37.

摘要 ( 115 )

PDF (1136KB) ( 366 )

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应用基因芯片技术筛选到与HBV感染可能有关的microRNA——miR-122,利用计算机软件分析预测microR-122作用HBV的可能靶点。分析结果认为miR-122与HBV的感染可能有关,并且作用靶点可能为HBV1689-1711nt。

热休克转录因子1与机体耐热性的相关研究

王延久;王长法;鞠志花;何剑斌;黄金明;李建斌;仲跻峰;李秋玲;

2010, 0(03): 38-41.

摘要 ( 142 )

PDF (710KB) ( 577 )

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热休克转录因子1(HSF1)能够启动各种热休克蛋白基因的诱导表达,这对防止机体免受热应激损伤具有重要的意义。从HSF1的结构、功能及活化过程等几个方面阐述了HSF1的生理特征及其与机体耐热性能之间的关系。

微生物果胶酶研究进展

李祖明;张洪勋;白志辉;李鸿玉;

2010, 0(03): 42-49.

摘要 ( 318 )

PDF (366KB) ( 1813 )

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果胶酶是一类分解果胶质的酶的总称,它能将复杂的果胶分解为半乳糖醛酸等小分子。目前果胶酶在食品、纺织、医药、造纸、环境、生物技术、饲料等领域得到广泛应用。果胶酶主要来自微生物。综述了微生物果胶酶生产菌的菌种、选育、鉴定、发酵方法和发酵条件优化,酶的分离纯化、酶学性质和分子生物学方面的研究进展,并介绍了果胶酶的应用进展,最后展望了微生物果胶酶研究的广阔前景。

微生物甲醛脱氢酶的研究进展

张婧;年洪娟;陈丽梅;

2010, 0(03): 50-53.

摘要 ( 275 )

PDF (213KB) ( 826 )

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甲醛脱氢酶(FADH)属于中等锌链醇脱氢酶家族中的一员,存在于绝大多数原核生物以及所有的真核生物中,是微生物中主要用于甲醛解毒的酶。近年来一些研究确定甲醛脱氢酶还具有S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)的活性,用于调节内源性NO的动态平衡。对微生物甲醛脱氢酶的结构,生理生化特性,基因克隆以及在环保上的应用方面进行综述。

脂肪酶催化合成生物柴油的研究进展

王巍杰;杨永强;吴尚卓;

2010, 0(03): 54-57.

摘要 ( 146 )

PDF (178KB) ( 468 )

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环保型燃料生物柴油有望解决能源短缺的问题,脂肪酶催化动植物油脂合成生物柴油的方法具有反应条件温和、产物易分离和不污染环境等优点。综述了酶催化法在提高脂肪酸酯产率和减少生产成本等方面的研究进展。

分子标记技术在烟草种质资源研究中的应用进展

尚志强;

2010, 0(03): 58-61.

摘要 ( 85 )

PDF (168KB) ( 410 )

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DNA分子标记作为新发展起来的一种遗传标记形式,凭借其可靠有效等优点,在农业科学研究中的应用越来越广泛。综述了几种分子标记技术(RAPD、AFLP、ISSR)在烟草种资源中的应用进展,分析了分子标记技术在烟草种资源及遗传多样性研究中存在的问题及今后发展方向。

微生物分子生态学技术在湖泊微生物多样性研究中的应用

武婷婷;生吉萍;申琳;

2010, 0(03): 62-66.

摘要 ( 145 )

PDF (255KB) ( 574 )

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微生物是湖泊生物圈物质循环和能量流动的主要参与者,在湖泊的生态系统中起着重要的作用。但是,湖泊中存在着大量不可培养的细菌,利用传统的培养技术,无法对湖泊微生物的多样性进行深入而全面的研究,而不依赖培养的分子生物学技术的发展为此方面研究开辟了新的路径。微生物分子生态学作为分子生物学与微生物生态学交叉产生的学科,在研究湖泊微生物多样性方面已经得到了广泛的应用。主要综述了变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,末端限制性酶切片段长度多态性技术(T-RFLP),16SrDNA克隆文库技术等微生物分子生态学技术在研究湖泊微生物多样性方面的应用情况。

酶联免疫斑点法的研究进展

庞盼姣;张付贤;李长安;

2010, 0(03): 67-71.

摘要 ( 122 )

PDF (302KB) ( 573 )

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酶联免疫斑点技术(ELISOP)在目前已经被广泛应用在生物学领域。较为详细地从原理、发展简史、操作步骤、优缺点及应用、展望阐述了酶联免疫斑点技术。

微流控与细胞迁移技术的研究进展

蔡绍皙;黎昌莉;

2010, 0(03): 72-75.

摘要 ( 130 )

PDF (222KB) ( 761 )

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细胞迁移在多种生理、病理过程中扮演着重要角色。在细胞迁移研究中,琼脂糖平板法、transwell小室法等因操作简单、重现性好被广泛运用于细胞迁移的体外建模。但传统方法大多是检测单因素条件下的细胞迁移情况,却忽略了血流这一重要因素对细胞迁移的影响。微流控芯片的出现不仅解决了上述难题,并能保证迁移试验在多参数条件下一步到位的完成并及进行实时观测。因此,微流控芯片将带来一场细胞迁移技术及相关领域的革命。对近10年微流控技术在细胞迁移研究中运用进行了总结。

新技术在农药微生物降解中的应用

杨柳;陈少华;赵川;钟国华;

2010, 0(03): 76-80.

摘要 ( 142 )

PDF (277KB) ( 637 )

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近年来,分子生物学及基因工程的迅猛发展,克服了农药微生物降解传统研究中存在的障碍,为农药微生物降解的研究开辟了新的途径。综述了固定化技术、基因工程、多菌复合体的构建以及细胞表面展示技术在农药微生物降解中的应用,并对新技术在农药微生物降解中的应用前景作出了展望。

丙酮丁醇梭菌ldhL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

于振海;杨登峰;郭媛;马潘蕾;韦宇托;黄日波;

2010, 0(03): 81-84.

摘要 ( 146 )

PDF (359KB) ( 502 )

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首次从丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum ATCC824)中克隆得到L-乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,ldhL)基因,并将其连接到pSE380表达载体上,得到重组质粒pSE380ldhL,将重组质粒转化到乳酸脱氢酶和丙酮酸裂解酶缺陷的Escherichia coli FMJl44大肠杆菌中进行表达。SDS-PAGE分析表达产物的分子量约为34kD,摇瓶发酵后用HPLC检测分析L-乳酸产量为2.4g/L,纯度达到99.9%,不需要再进行手性分离,为以后在工业上生物法生产高纯度的L-乳酸打下基础。

LfcinB突变基因在大肠杆菌中的融合表达及其活性测定

吴建军;韩跃武;刘凯;张延英;刘永琦;

2010, 0(03): 85-89.

摘要 ( 104 )

PDF (1570KB) ( 342 )

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测定LfcinB突变基因(mLfcinB)在大肠杆菌中的融合表达及其表达产物的抗菌活性。对LfcinB基因突变后进行克隆并测定序列,mLfcinB基因融合表达载体构建后并在大肠杆菌中的表达,分离提纯表达物并测定其活性。结果显示,Lf-cinB突变基因克隆后表达产物在经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝G250染色可在29kD处看到预期的融合蛋白条带;对照组空质粒pGEX-4T-1经相同条件诱导后表达的蛋白为26kD。通过抑菌试验发现其对金黄色葡萄球菌ATCC25938具有较强抗菌活性。表明mLfcinB基因表达物具有较强的抗菌作用。

枯草杆菌脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导分泌表达

李海军;王林刚;王治泽;陈芳;高剑峰;

2010, 0(03): 90-94.

摘要 ( 112 )

PDF (526KB) ( 477 )

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借助生物信息学对已克隆的枯草杆菌脂肪酶LipB2全长基因序列进行比对分析。结果显示该脂肪酶基因全长635bp,编码包括31个氨基酸分泌型信号肽在内的211个氨基酸,与NCBIGenBank中已报道的枯草杆菌属脂肪酶核苷酸序列有94.0%的一致性。将该基因克隆到pET-28a(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用枯草杆菌脂肪酶的信号肽序列进行了分泌表达。SDS-PAGE电泳显示分泌表达的脂肪酶分子质量约为21kD。对表达条件优化后,在30℃、大肠杆菌菌液OD600值为1.8、乳糖诱导浓度为1.5mM、摇瓶发酵10h后大肠杆菌分泌表达26.0U/mL重组脂肪酶,相比较IPTG的诱导,既实现了脂肪酶的高效表达,又节省了成本。

大肠杆菌腺苷脱氨酶基因的克隆表达

栾海涛;丁庆豹;欧伶;魏晓琨;许彦梅;

2010, 0(03): 95-98.

摘要 ( 136 )

PDF (373KB) ( 747 )

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将大肠杆菌K12菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。通过IPTG诱导,SDS-PAGE检测和酶活性的测定发现,重组菌表达产生大量腺苷脱氨酶,活性达到51.07U/mg蛋白。通过酶性质的研究,腺苷脱氨酶对腺苷最适pH和温度分别为7.5和40℃,且在40℃下维持稳定。

拟南芥FT基因原核表达载体的构建、表达和蛋白纯化

任霞;吴忠义;黄丛林;张秀海;

2010, 0(03): 99-103.

摘要 ( 148 )

PDF (375KB) ( 779 )

相关文章 | 计量指标

FT基因是植物成花素,在植物的开花调控中起着重要作用。构建了用于原核表达的FT-eGFP表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达。从IPTG诱导浓度、诱导时间和诱导温度等方面进行了细致的分析,最终建立了FT-eGFP融合蛋白诱导表达的优化体系:当菌液OD600=0.6-1.0时,采用IPTG1.0mol/L,在28℃诱导表达6h。摸索和建立了利用HisTrapKit标签,经过镍柱纯化,纯化目的蛋白的技术体系,为进一步研究FT基因在植物开花调控中的应用奠定了基础。

毛竹β-1,4-糖苷酶基因cDNA克隆与表达分析

吴林森;金晓春;杨勇春;黄海松;陈世通;姚伟峰;姚丰平;

2010, 0(03): 104-108.

摘要 ( 102 )

PDF (709KB) ( 374 )

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根据水稻β-1,4-糖苷酶(korrigan)基因的保守区序列设计引物,以毛竹cDNA为模板,采用PCR方法,成功扩增出1个含有完整阅读框架的cDNA序列,长度为2191bp,共编码617个氨基酸,将其命名为PeKOR基因。其氨基酸序列分析的结果表明,PeKOR与其他β-1,4-糖苷酶有较高的同源性,同水稻序列相似性高达91%,且其序列具有典型的Glycosyl hydrolase9super family结构域,推测此PeKOR为毛竹β-1,4-糖苷酶基因。在竹笋中采用半定量方法研究该基因的表达情况,结果表明该基因在高温条件下表达量较低温条件下明显升高。

洋桔梗的转基因研究

陈奇;王阁奇;马莉;陈丽梅;

2010, 0(03): 109-113.

摘要 ( 170 )

PDF (496KB) ( 489 )

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以叶盘为外植体,通过农杆菌菌株C58Cl(pPMP90)介导,开展了用植物表达载体pK2-35S-GFP(含GFP基因)转化洋桔梗(Eustoma russellianum)的研究。洋桔梗叶盘用农杆菌浸染15-20min,在共培养基上与农杆菌共培养2d后,转移到分化培养基上诱导愈伤组织。10d后选取部分叶盘在紫外灯下观察GFP的荧光亮点,结果80%以上的叶盘都有GFP的荧光亮点,说明农杆菌对叶盘的感染效率很高。在分化培养基上红花洋桔梗叶盘不定芽分化频率约为30%,把分化培养基上形成的小苗转移到含有Km(20mg/L)的生根培养基上,进行生根诱导筛选具有Km抗性的转基因植株,统计结果说明红花洋桔梗的转化效率为2.4%。随机选取4株具有Km抗性的洋桔梗植株进行PCR检测,结果均为阳性,证明GFP基因已整合到洋桔梗基因组中,选取经PCR检测为阳性的植株叶片,用激光共聚焦显微镜观察,结果发现有GFP的绿色荧光出现在叶片细胞质中,说明叶片中有GFP蛋白的表达,转化试验成功。

甘蓝型油菜花粉超低温保存及其花粉活力的研究

刘婷婷;代其林;奉斌;田霞;龚元亚;孙英坤;王劲;

2010, 0(03): 114-118.

摘要 ( 120 )

PDF (414KB) ( 507 )

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研究超低温方法保存油菜花粉过程中的预冻和解冻处理方式对油菜花粉的形态、大小及其活力的影响。结果表明:采用0℃(12h)→-4℃(12h)→-20℃(12h)→-80℃(12h)变温预冻处理和用-80℃(1h)→-20℃(1h)→4℃(1h)逐步解冻后对油菜花粉形态大小和活力影响最小。而经过25℃室温解冻法和42℃快速解冻法处理后油菜花粉出现破裂,破裂率分别达到7.6%和9.1%。同时液氮保存油菜花粉的时间长短对花粉的大小及活力影响不大。

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化番茄的研究

朱莹;周琦;崔继哲;

2010, 0(03): 119-123.

摘要 ( 100 )

PDF (377KB) ( 478 )

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构建AtNHX1基因植物表达载体,通过农杆菌介导法将其转入番茄。探讨了外植体类型、农杆菌菌株和不同筛选标记对芽诱导分化的影响。对抗性植株进行PCR检测,获得15株转基因植株。对转基因番茄T1代进行80mmol/LNaHCO胁迫处理,转基因植株的相对生长量高于对照植株,显示AtNHX1基因的导入提高了番茄对碱性盐的耐受性。

根癌农杆菌介导天花粉蛋白基因TCS转化茎瘤芥的研究

赵爽;郝雪峰;

2010, 0(03): 124-127.

摘要 ( 103 )

PDF (1204KB) ( 449 )

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以茎瘤芥(Brassica junceavar.tumidaTsen et Lee)的子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的介导,将天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)基因导入到茎瘤芥中。对所获得的31株抗性植株进行PCR扩增,其中阳性植株为23株;Northern blot分析结果表明基因TCS在转基因植株中能够正常表达。转基因植株接种病毒试验结果表明,转基因TCS的植株对芜菁花叶病毒TuMV的侵染有一定的抑制作用。

一种适于转基因水稻PCR检测的微量DNA快速提取法

许明;程祖锌;黄志伟;杨志坚;郑金贵;

2010, 0(03): 128-130.

摘要 ( 132 )

PDF (223KB) ( 629 )

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对已报道的小麦基因组DNA快速提取方法的部分步骤进行了简化,在水稻上进行了尝试。结果表明,简化法提取的水稻基因组DNA完整性好,PCR扩增效果与试剂盒提取法无明显的差异,结果稳定可靠;而且整个提取过程操作简单、花费时间少,样品用量少,仅需5-10mg,适用于大规模转基因水稻的PCR检测。

截短的猪繁殖与呼吸综合征ORF5基因及重组蛋白的原核表达

李国娟;柳纪省;李宝玉;娄忠子;田永强;

2010, 0(03): 131-134.

摘要 ( 97 )

PDF (1142KB) ( 421 )

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通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deleting ORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-1,在E.coliRosetta细胞中成功表达了重组蛋白GST-dORF5。用Western blotting鉴定表达蛋白,证明dORF5基因得到表达。本试验得到的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点分子特征分析

于天飞;朱红标;孙天国;张健;蔡雅璐;庞后琴;史小飞;

2010, 0(03): 135-138.

摘要 ( 119 )

PDF (330KB) ( 456 )

相关文章 | 计量指标

为了进一步研究猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原位点的分子特征,选取GenBank中22株TGEV分离株,采用生物信息学方法对抗原位点氨基酸序列进行同源性比对分析。结果表明,不同分离株的A和C位点高度保守,B和D位点则有一些变化。

莱芜猪心脏cDNA文库的构建与鉴定

李付美;闫顺;曲志才;徐来祥;

2010, 0(03): 139-142.

摘要 ( 99 )

PDF (291KB) ( 368 )

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以莱芜猪心脏为供试材料,采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA。通过SMART技术反转录合成全长cD-NA,经LD-PCR扩增后与pMD18-T载体连接并转化细菌DH5α,测定滴度和重组率,构建成莱芜猪心脏全长cDNA文库。经初步检测,原始文库的滴度为1.8×105CFU/mL,重组率约为94.4%。从原始文库随机挑取13个单菌落过夜培养,提取质粒,经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,凝胶电泳显示插入片段大小在0.3-2.0kb之间。

MTT比色法检测赖氨酸、蛋氨酸对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响

李喜艳;王加启;魏宏阳;卜登攀;胡菡;周凌云;

2010, 0(03): 143-148.

摘要 ( 108 )

PDF (262KB) ( 417 )

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采用噻唑蓝比色法检测赖氨酸、蛋氨酸对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响。赖氨酸和蛋氨酸在培养基中的添加浓度分别为0、0.05、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6mmol/L和0、0.025、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8mmol/L;培养期为24、48和72h。结果表明,赖氨酸在0.8-1.6mmol/L、蛋氨酸在0.4-0.8mmol/L浓度范围内对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞增殖的促进作用最明显且在48h时增殖作用最强(P<0.0001)。

刺参基因组DNA提取的探讨

孙孝德;孙国华;杨建敏;吉成龙;王卫军;宋志乐;

2010, 0(03): 149-153.

摘要 ( 108 )

PDF (1720KB) ( 341 )

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以刺参为试验材料,分别以CTAB法、SDS法、Segama试剂盒法对刺参的触手、管足、体壁、纵肌、肠和呼吸树组织进行基因组DNA的提取,均得到了高质量的基因组DNA。Segama试剂盒提取DNA条带较其他两种方法清晰,杂质少且无降解,效果最佳。对比6种不同的刺参组织,其中纵肌组织3种方法均获得高质量基因组DNA,为提取基因组DNA的首选组织。开发了利用刺参触手和管足活体取样提取基因组DNA的方法,得到了高质量的基因组DNA,这为刺参无损伤取样提供了数据支持,使得将来刺参家系建立过程中保证亲体的健康存活及减少试验样品取样所带来的损伤成为可能。

黄颡鱼微卫星标记的筛选及三个野生群体的遗传结构分析

吴勤超;梁宏伟;李忠;呼光富;罗相忠;沈子伟;邹桂伟;

2010, 0(03): 154-159.

摘要 ( 116 )

PDF (370KB) ( 535 )

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为了探明长江中上游流域黄颡鱼野生群体的遗传多样性状况和遗传结构,本研究采用磁珠富集法筛选出10个黄颡鱼微卫星标记,并利用其对长江中上游流域3个黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidrac)野生群体(赤水群体、乐山群体、洞庭群体)的遗传结构进行分析。获得65个阳性克隆并测序,得到36个含有微卫星的序列,设计并合成了22对微卫星引物,经筛选得到10对多态性稳定的引物,其中高多态性位点6个,中多态位点3个。每对引物等位基因数2-9个,平均4.8。3个群体(赤水、乐山和洞庭)的平均多态信息含量(PIC)分别为0.5438、0.4568和0.3965,平均有效等位基因(Ne)分别为2.9928、2.5401和2.1713,平均期望杂合度(He)分别为0.6280、0.5277和0.4757,表明这3个群体遗传多样性水平较高,其中赤水群体遗传多样性最高,洞庭群体最低。种群分化指数(Fst)和遗传距离(Ds)分析表明,洞庭群体和乐山群体之间的亲缘关系最近,而与赤水群体的亲缘关系最远。聚类分析显示,乐山群体和洞庭群体聚为一支,赤水群体单独聚为一支。

HSV-2 LAT ORF2在Vero细胞中的表达及对细胞的作用

白利利;杨慧兰;

2010, 0(03): 160-163.

摘要 ( 156 )

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旨在研究人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)对体外培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)形态和活性的作用。将构建好的带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HSV-2LAT ORF2真核表达载体pEGFP-ORF2,转染vero细胞,荧光显微镜观测细胞形态的改变和MTT法进行活性分析。结果:显示,HSV-2LATORF2诱导细胞形态发生明显变化,绿色荧光蛋白在细胞的定位也发生了改变,细胞活性降低。由此证实,HSV-2LAT ORF2对细胞有损伤作用,为阐明HSV-2LATORF2的功能提供了资料。

人锰超氧化物歧化酶基因剪接异构体的表达分析

王峰;黄璐圆;

2010, 0(03): 164-167.

摘要 ( 156 )

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对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列比对;利用RT-PCR方法分析锰超氧化物歧化酶基因异构体的表达。结果显示,在GenBank库检索发现有3种人锰超氧化物歧化酶基因异构体,剪接异构的类型为可变的5′剪接位点和外显子盒,各异构体基因内含子均符合"GT-AG"规则。3种基因异构体编码两种异构体蛋白,即222个氨基酸的人锰超氧化物歧化酶蛋白以及中部缺少39个氨基酸的截短型异构蛋白。RT-PCR检测结果表明,剪接异构体hMn-SODb在HEK293T和HSC细胞中的表达比在HepG2细胞中高,未见异构体hMn-SODc的表达。

重组hIL-10质粒构建及其在毕赤酵母SMD1168中的表达和纯化

封建凯;孙万邦;陈富超;黄俊琼;罗军敏;杜联峰;姚新生;王胜香;

2010, 0(03): 168-172.

摘要 ( 118 )

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构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础。PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoRI/XbaI双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化法,将其转入毕赤酵母SMD1168,甲醇诱导Mut+型转化子基因表达;对目的蛋白进行检测及纯化。扩增出了目的基因hIL-10cDNA,重组质粒pPICZaA-hIL-10经酶切鉴定和序列测定正确;表达产物经SDS-PAGE分析在42.0kD处可见较浓染条带,Westernblotting分析可见特异条带;ELISA检测72h上清液中目的蛋白浓度可达1.973mg/L;纯化后目的蛋白纯度达67.0%。实现了重组hIL-10在毕赤酵母SMD1168中的成功表达和初步纯化。

诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法的建立

田甜;董英;薛强;邹明强;王伟;

2010, 0(03): 173-177.

摘要 ( 126 )

PDF (439KB) ( 450 )

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旨在建立诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法。选取诺如病毒较为保守的RdRp基因作为扩增对象,经RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针及生物素标记引物。生物素标记引物的扩增产物经热变性后与固定在硝酸纤维素膜上的探针进行杂交反应,经显色后判定结果。出现明显的蓝紫色斑点为诺如病毒阳性,如无斑点则为阴性。对5份临床样品进行检测,并以RT-PCR对比验证。结果显示,利用反向斑点杂交法对重组质粒的检测限为100拷贝/μL,在5例实际样品检测中有1例为阳性,与RT-PCR判定结果一致。建立了诺如病毒的RT-PCR-反向斑点杂交检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,具有重要的应用价值。

鼠肝中金属硫蛋白的纯化

王雪;赵海峰;吕明;李鸿雁;吴文杰;刘娅;李正强;

2010, 0(03): 178-180.

摘要 ( 110 )

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旨在探索鼠肝中金属硫蛋白(MT)提取工艺并加以改进。按照经典方法工艺提取MT,用中空纤维柱超滤方法加以改进,依据MT自身特点进行分离和鉴定。结果显示,粗品符合MT特点:分子量在6.5kD左右;无280nm特征吸收峰,加酸后紫外吸收(200-300nm)肩峰消失;通过离子交换可以实现MT1、MT2的分离;通过原子吸收测定,含有锌、铜、镉3种金属,锌含量最高,具有重要的病理生理意义。因此,与其它方法比较,改进后方法更适宜实验室制备。

尼罗蓝在筛选PHB高产菌株中的应用研究

薛林贵;赵旭;景春娥;常思静;

2010, 0(03): 181-184.

摘要 ( 121 )

PDF (1167KB) ( 853 )

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建立一种简便、高效、可靠的初筛方法是PHB高产菌株筛选的关键。以芽孢杆菌(BacillusP-9)为试验材料,对各种PHB产生菌筛选方法进行了比较,最终确定尼罗蓝染色法为一种最佳方法。并且对试验程序进行了优化,确定尼罗蓝染液的最佳浓度为0.225mg/L,菌株的最佳染色时间为培养后96h。进一步证实了尼罗蓝染色法为一种值得推广的PHB产生菌初筛方法。

两株植物内生巨大芽孢杆菌的生物学特性比较

杨胜远;韦锦;李云;

2010, 0(03): 185-190.

摘要 ( 164 )

PDF (367KB) ( 609 )

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分别从爬山虎和金银花的茎中分离和鉴定获得了两株植物内生巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),并对其形态特征、生理生化特征、培养及生理特征进行研究和比较。结果显示,在菌体的大小、耐盐能力、利用柠檬酸盐和在10°C下生长情况、D-木糖的代谢和产卵黄磷脂酶情况等方面,不同植物的内生巨大芽孢杆菌间以及植物内生菌与外源菌间都存在较大差异。结果表明,表型分类法在植物内生菌的鉴定中存在一定局限。

圆弧青霉PG37脂肪酶的生物信息学分析

李剑芳;张慧敏;邬敏辰;

2010, 0(03): 191-195.

摘要 ( 101 )

PDF (535KB) ( 398 )

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利用生物信息学软件对GenBank上登录的圆弧青霉PG37碱性脂肪酶(LipⅠ)进行预测和分析。结果表明,PG37LipⅠ全肽含多个疏水区域,无明显跨膜结构域,定位于胞外,N-末端20个氨基酸为信号肽;PG37LipⅠ成熟肽是等电点为6.16的疏水性稳定蛋白质,包含一个Lipase_3的结构域,属于α/β水解酶超家族,含磷酸化位点等多种功能性位点,具有脂肪酸代谢的功能;α-螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,在三级结构中,Ser132-Asp188-His2413个氨基酸残基组成酶活性中心。

氨基化硅胶载体固定化纤维素酶的研究

刘志良;杨敏丽;

2010, 0(03): 196-198.

摘要 ( 136 )

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用硅胶作载体,戊二醛作交联剂,制备了固定化的纤维素酶。对制备固定化纤维素酶的偶联剂浓度、pH、给酶量3个影响因素进行了研究,通过正交试验优化得出最佳的固定化条件:交联剂戊二醛浓度为1%,固定化pH值为5,固载量为每克载体100mg纤维素酶。

酸性α-淀粉酶的分离纯化与酶学性质研究

胡元森;潘涛;李翠香;

2010, 0(03): 199-202.

摘要 ( 135 )

PDF (290KB) ( 619 )

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纯化了枯草芽胞杆菌xm-1菌株酸性α-淀粉酶,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵沉淀和Sephadex G-75凝胶层析将酸性α-淀粉酶粗酶液纯化了32.5倍,活力回收率为10.0%。酶性质测定结果表明,该酸性α-淀粉酶分子量约为60kD,最适反应温度为45℃、最适作用pH5.0,该酶在pH3.4-6.0下稳定,高温耐受性差。Cu2+、Zn2+、EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Ca2+和Mn2+对酶具有较强的激活作用。

捷安肽素高产突变株96孔板筛选方法的建立

陈芬;张晓勇;钟娟;周金燕;李志东;杨杰;谭红;

2010, 0(03): 203-206.

摘要 ( 103 )

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建立了一种快速灵敏地筛选出捷安肽素(JAA)高产突变株的方法。主要利用96多孔板固体培养菌体,用50%乙醇为最佳浸提液浸提4h,滤纸片法检测JAA生物活性的点样量为100μL,筛选出5株高产突变株,经摇瓶复筛选出2株高产突变株,经一剂量法检测,其抑菌圈直径较出发菌株提高了14%左右。

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