生物技术通报

李燕;燕永亮;林敏;平淑珍;

2009, 0(12): 1-5.

摘要 ( 149 )

PDF (264KB) ( 963 )

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σS(RpoS)是大肠杆菌RNA聚合酶的一个亚基。在压力情况下,如高温、酸、渗透冲击、营养缺陷和生长进入稳定期等能够被诱导,并在一定程度上能够取代σ70与核心酶结合形成全酶,从而激活多数σS-依赖的基因的转录。对RpoS调控的基因和它们的启动子序列、调控方式以及它自身的调控进行了简单的综述。

粘附斑激酶(FAK)及其信号通路研究进展

李树裕;王志钢;

2009, 0(12): 6-10.

摘要 ( 461 )

PDF (523KB) ( 4500 )

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粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一类胞质非受体蛋白酪氨酸激酶,属于蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase)超家族,因而也称为PTKⅡ。FAK在细胞信号转导中处于十分重要的位置,它是胞内外信号出入的中枢,介导多条信号通路。FAK可以整合来自整合素、生长因子以及机械刺激等的信号,激活胞内PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路,调节细胞生长。FAK还与胚胎发育、肿瘤发生与迁移有关。

阿魏酸酯酶基因克隆表达调控及其应用进展

胡雪松;李夏兰;

2009, 0(12): 11-16.

摘要 ( 155 )

PDF (771KB) ( 747 )

相关文章 | 计量指标

阿魏酸酯酶作为微生物降解植物多糖的酶系的一部分,其从细胞壁中降解多糖获得芳香酸和单多糖的能力越来越受到重视。主要介绍了阿魏酸酯酶研究进展,包括阿魏酸酯酶的研究现状,酶-底物分子对接模型、阿魏酸酯酶基因克隆表达、重组与调控以及应用。

酿酒酵母丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶的功能与调控

蒋伶活;于立权;

2009, 0(12): 17-21.

摘要 ( 121 )

PDF (279KB) ( 583 )

相关文章 | 计量指标

从酿酒酵母蛋白磷酸酯酶的分类和结构特征入手,阐述了该蛋白家族中的亚家族成员丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶的功能和表达调控。深入研究酿酒酵母丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酯酶,特别是PP2C蛋白磷酸酯酶的细胞功能及其调控,将对新药研发和疾病干预治疗提供重要基础。

多不饱和脂肪酸对细胞膜功能影响的研究进展

李喜艳;王加启;卜登攀;魏宏阳;胡菡;周凌云;

2009, 0(12): 22-26.

摘要 ( 518 )

PDF (233KB) ( 2744 )

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多不饱和脂肪酸是细胞膜磷脂的重要组成成份,影响细胞膜的稳定性。它具有广泛的生物学功能,包括细胞内信号传导通路、基因表达和细胞凋亡的调控等。主要从细胞膜脂质的组成,细胞膜的流动性及膜脂质过氧化等方面对多不饱和脂肪酸对细胞膜功能的影响进行了综述。

科学出版社新书

2009, 0(12): 26-107.

摘要 ( 90 )

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假基因的发现与研究

徐娜;李宝玉;柳纪省;

2009, 0(12): 27-29.

摘要 ( 235 )

PDF (249KB) ( 894 )

相关文章 | 计量指标

随着人类基因组计划的顺利实施,人们分离、鉴定新基因的速度越来越快,对于占人类基因组97%的非表达序列的研究,即对所谓"垃圾"DNA的研究已成为全球范围内关注的热点。现就假基因的发现、命名和分类、特性和分布、产生、作用机理、功能、进化及展望等方面进行论述。

人防御素分子生物学研究进展及其应用

高金湖;唐存多;邬敏辰;

2009, 0(12): 30-36.

摘要 ( 167 )

PDF (437KB) ( 667 )

相关文章 | 计量指标

人防御素(human defensins)是一类内源性阳离子抗微生物肽,在天然免疫防御中起重要作用,也能增强继承性免疫应答。它具有强烈的广谱抗微生物活性,并且不易对微生物产生耐药性。对人防御素的分子生物学特性方面的研究进展作一综述,重点在于比较和探讨其结构的异同,并对其应用和发展的前景进行展望。

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

李国娟;田永强;李建强;李宝玉;柳纪省;

2009, 0(12): 37-41.

摘要 ( 157 )

PDF (243KB) ( 961 )

相关文章 | 计量指标

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重危害养猪业的病原,对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白及其功能、致病机理及复制与转录等。

鸟类线粒体DNA结构特点及在鸟类研究中的应用

刘铸;杨春文;金建丽;金志民;戴鹏;

2009, 0(12): 42-47.

摘要 ( 153 )

PDF (159KB) ( 904 )

相关文章 | 计量指标

介绍了鸟类mtDNA的结构和鸟类mtDNA作为分子标记的特点,并综述了mtDNA作为分子标记在鸟类的种间系统发生关系及分类、鸟类分子钟、地理分布区的推断和种群遗传多样性的研究中应用现状。

DGGE技术在环境微生物多样性研究中的应用

张珍妮;吴晓芙;陈永华;石卉;

2009, 0(12): 48-52.

摘要 ( 175 )

PDF (266KB) ( 768 )

相关文章 | 计量指标

微生物是污水净化的主要作用者之一。采用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophresis,DGGE)方法培育和鉴定土壤微生物具有可靠性强、重复性好、方便快捷等优点,已被广泛应用于环境科学和污染防治研究领域。综述了基于PCR-DGGE技术的基本原理、关键环节及其在微生物多样性研究中的应用,同时就其自身存在的不足进行了评价并提出了解决方案。

现代分子生物学技术在冰川微生物生态研究中的应用

赵龙;季秀玲;魏云林;

2009, 0(12): 53-56.

摘要 ( 142 )

PDF (196KB) ( 399 )

相关文章 | 计量指标

研究冰川中微生物的多样性对于揭示环境气候变迁,研究生物进化,开发微生物资源具有重要意义,现代分子生物学的发展为研究冰川微生物的多样性提供了行之有效的方法。简要综述了16SrDNA文库构建、变性梯度凝胶电泳、限制性片段长度多态性和荧光原位杂交等技术的原理及在冰川微生物生态研究中的应用现状。

生物法处理木质素的研究进展

程玲玲;何钢;陈介南;詹鹏;张伟涛;

2009, 0(12): 57-61.

摘要 ( 150 )

PDF (245KB) ( 1505 )

相关文章 | 计量指标

对生物法处理木质素进行了简要概述,包括微生物降解、生物法酸析提取木质素以及生物法纯化木质素的效果及其研究进展。生物法处理木质素对资源的合理利用、经济的发展以及环境保护具有重要的意义。

拉曼光谱在生物学领域的应用

李睿;周金池;卢存福;

2009, 0(12): 62-64.

摘要 ( 180 )

PDF (165KB) ( 1420 )

相关文章 | 计量指标

随着人们对拉曼光谱技术研究的深入,拉曼光谱在生物学领域中得到越来越多的应用。综述了国内外拉曼光谱在生物学领域的应用进展,同时对其应用前景做出了展望。

棉铃虫多核型多角体病毒38k基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构的预测

唐平;李轶女;秦启联;王春艳;沈桂芳;

2009, 0(12): 65-67.

摘要 ( 121 )

PDF (382KB) ( 352 )

相关文章 | 计量指标

采用半补齐方法建立棉铃虫多核衣壳型多角体病毒基因组文库,通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得了38k基因。该基因上游具有晚期调控保守序列TTAAG,是一个晚期表达基因,基因阅读框为903bp,共编码300个氨基酸,氨基酸序列同源性分析结果表明其与α类杆状病毒的同源性较高,有较近的亲缘关系。氨基酸高级结构的分析表明其与与磷酸酶结构相似性达到95%,与病毒核衣壳的组装有关。

萼脊兰ACC氧化酶基因片段的克隆及其反义基因表达载体的构建

崔波;李长看;马杰;张仙云;袁秀云;叶永忠;

2009, 0(12): 68-71.

摘要 ( 111 )

PDF (542KB) ( 542 )

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根据已报道的几种不同属的兰科植物ACO基因序列,设计并合成了一对特异引物,以萼脊兰的基因组DNA为模板,用PCR扩增方法克隆出萼脊兰ACO基因的部分片段,将其连接到pMD19-T质粒载体上进行测序。结果显示,该片段的长度为333bp,序列和蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrid)、卡特兰(Cattleya intermedia)、两棱蕾丽兰(Laelia anceps)的相应ACO片段的同源性分别达到达到99.7%、92.49%和92.19%;和大花蕙兰(Cymbidium hybrid)、石斛兰(Dendrobium crumenatum)的同源性分别是89.49%和89.19%。将此片段反向插入植物表达载体pBI221的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,成功构建了萼脊兰ACO的反义基因植物表达载体pBI-antiACO。

观赏桃ISSR-PCR反应体系的优化

林玲;汤浩茹;刘燕;候艳霞;

2009, 0(12): 72-75.

摘要 ( 138 )

PDF (360KB) ( 402 )

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采用改良CTAB法从观赏桃满天红叶片中提取基因组DNA,通过单因素实验探讨了模板DNA、Mg2+、dNTPs和TaqDNA酶等条件对观赏桃ISSR-PCR扩增结果的影响,建立了ISSR-PCR扩增的最佳体系:25μl反应体系中包含10×Buffer2.5μl,模板DNA40ng,Mg2+浓度2.5mmol/L,引物浓度0.4μmol/L,dNTPs浓度0.4mmol/L,TaqDNA酶0.5U。利用所建立的体系对红叶桃、菊花桃和春艳等13份材料进行检验,其结果表明优化后的体系适合观赏桃的ISSR-PCR反应。

应用SRAP标记分析黄瓜的遗传差异

王惠哲;李淑菊;管炜;

2009, 0(12): 76-79.

摘要 ( 114 )

PDF (216KB) ( 302 )

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利用49对SRAP引物对4种不同类型28份黄瓜种质资源进行了遗传差异分析。结果表明,有35对引物扩增出多态性,在28份资源间共产生724条扩增带,平均每对引物组合产生20.69条;共检测出337个多态性位点,多态性比率为46.5%,每对引物平均为9.63个。利用NTSYS软件分析遗传相似系数,UPGMA方法聚类分析表明,28份资源可聚为两大类。试验结果表明SRAP标记位点多,重复性好,可以揭示不同类型黄瓜种质之间的遗传基础。

洋葱黄矮病毒检测试剂盒的研制

贾玉成;韦传宝;

2009, 0(12): 80-83.

摘要 ( 144 )

PDF (284KB) ( 362 )

相关文章 | 计量指标

根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)序列设计引物,扩增洋葱黄矮病毒(OYDV)六安分离物外壳蛋白(CP)基因。序列同源性分析结果表明,与目前已报道的OYDV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为84.0%~95.8%,相应推测的氨基酸序列同源性为86.8%~97.6%。将CP基因插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)Plys S中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化诱导产物,免疫家兔获得抗CP血清,Western blot分析对CP具有高度特异性。硫酸铵沉淀初步IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶4800的一抗。将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成OYDV检测试剂盒,可用于田间OYDV病样检测。

番茄加工产品DNA提取方法研究

吴明生;贾希海;律宝春;云晓敏;郭慧杰;

2009, 0(12): 84-86.

摘要 ( 111 )

PDF (211KB) ( 489 )

相关文章 | 计量指标

采用SDS法、CTAB法、热碱法和试剂盒法提取番茄加工产品的DNA,并通过PCR方法是否检测出番茄内源基因来评价DNA提取效果。结果显示,番茄加工产品经弱碱稀释处理后,CTAB法和热碱法提取的DNA利用嵌套PCR检测出内源基因,可以满足基因检测需求。同时对加工产品DNA提取及基因检测需注意的问题进行了探讨。

生物信息学对番茄LeNHX1基因的研究

范晶;代娟;胡建平;梁梓;黄明远;

2009, 0(12): 87-91.

摘要 ( 102 )

PDF (977KB) ( 425 )

相关文章 | 计量指标

应用生物信息学的方法和工具对番茄LeNHX1蛋白质的理化性质、跨膜区域、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类和同源性进行分析。结果表明此蛋白为疏水性稳定蛋白,包含一个保守的氨氯吡嗪咪结合位点LFFIYVLPPI区域,相对分子量为59.0kD,等电点为6.60,存在10个跨膜区域,蛋白质二级结构中的主要构成元件是α-螺旋和不规则卷曲,功能分类和蛋白质同源性分析表明番茄LeNHX1属于液泡膜Na+/H+反向转运蛋白。

水稻RAPD反应体系的正交优化

张安世;邢智峰;徐九文;张利民;韦慧彦;

2009, 0(12): 92-95.

摘要 ( 111 )

PDF (375KB) ( 530 )

相关文章 | 计量指标

以焦旱1号总DNA为材料,首先对影响RAPD-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了初步优化,分析了各因素对RAPD-PCR扩增结果的影响。在此基础上对影响RAPD-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等4个主要因素进行正交优化,研究结果表明:在25μlRAPD-PCR反应体系中,模板DNA20ng;Mg2+浓度1.5mmol/L;dNTP的浓度0.2mmol/L;引物量15pmol;TaqDNA聚合酶1.0U。在此最佳条件下,利用引物B8对18个北方粳稻品种进行了成功的扩增。

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

胡兵;黄超;李文静;邓柳红;肖苏生;张春发;

2009, 0(12): 96-101.

摘要 ( 157 )

PDF (613KB) ( 621 )

相关文章 | 计量指标

旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。

原因不明子宫内膜薄雌激素受体β基因RsaⅠ、AluⅠ多态性

乐爱文;单莉莉;袁瑞;董洁;肖天慧;卓蓉;王中海;

2009, 0(12): 102-107.

摘要 ( 107 )

PDF (338KB) ( 439 )

相关文章 | 计量指标

旨在探讨重庆地区雌激素受体β基因RsaⅠ、AluⅠ多态性与原因不明子宫内膜薄的关系。选择重庆地区120名原因不明子宫内膜薄患者为试验组,120名正常子宫内膜作为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法分析ERβ基因RsaⅠ、AluⅠ多态性。观察ERβ基因多态性在试验组与对照组中的分布,分析各基因型、等位基因型及单倍体型特征。结果显示,两组ERβ基因RsaⅠ基因型比较差异有显着性,R等位基因型频率试验组为37.1%,对照组为48.3%,OR值为0.630(95%CI=0.438～0.907),P=0.013;两组ERβ基因AluⅠ基因型比较差异没有显着性。试验组和对照组ERβ基因RsaI和AluI单倍体型D′分别=0.1138、0.0680,其连锁不平衡性不强。ERβ基因多态性与原因不明子宫内膜薄有关,R等位基因可能是其保护因素。

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子复性和纯化方法的比较

刘建波;于占江;邓玲娟;张尼;白泉;

2009, 0(12): 108-111.

摘要 ( 127 )

PDF (296KB) ( 608 )

相关文章 | 计量指标

比较重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)在用疏水色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC)3种液相色谱进行复性和纯化,选择较好的复性和纯化方法。通过对比rhGM-CSF在液相色谱上复性和纯化的主要指标,包括比活、纯度和质量回收率,结果发现采用HIC和IEC对rhGM-CSF进行复性和纯化时,其比活可以达到国家标准,纯度和质量回收率也比较高,而采用SEC,其比活、纯度和质量回收率远低于HIC和IEC。

广东地区汉族群体线粒体DNA 9bp序列缺失频率研究

李彬彬;龙燕;罗世英;王槐高;钟志国;

2009, 0(12): 112-114.

摘要 ( 118 )

PDF (300KB) ( 604 )

相关文章 | 计量指标

旨在研究中国广东省部分地区汉族人群线粒体DNA Region Ⅴ 9bp序列缺失情况。采用PCR-PAGE和直接测序法对3个群体144份样本mtDNA Region Ⅴ进行序列分析。结果只检测到标准型和短型(即9bp缺失)两种多态。广东汉族人群的平均缺失频率为21.5%,广州、东莞和湛江汉族人群的缺失频率依次为20.8%、19.2%和25.0%。由此得出,广东汉族人群mtDNA9bp缺失频率较高,与其它地区汉族群体存在一定的差异。

金黄色葡萄球菌肠毒素A对H22小鼠移植瘤的抑制作用

王雪;孙嘉琳;张云;冯艳敏;陈自辉;李政楠;

2009, 0(12): 115-118.

摘要 ( 128 )

PDF (376KB) ( 465 )

相关文章 | 计量指标

旨在探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)在KM鼠体内的抑瘤效果。建立H22荷瘤小鼠模型,将20只小鼠随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(15μg/ml)、中剂量组(25μg/ml)和高剂量组(50μg/ml),观察肿瘤生长趋势,计算抑瘤率,通过ELISA检测IL-2的含量。结果显示,给药组肿瘤生长趋势均较对照组缓慢;对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的抑瘤率分别为0,28.9%,34.0%,51.0%(P<0.05);血清中IL-2含量分别为58.9pg/ml、83.6pg/ml、91.8pg/ml、118.1pg/ml。金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)可抑制H22肿瘤的生长,并上调IL-2的分泌。

甲状腺素T4对体外高温培养奶牛乳腺上皮细胞生长和凋亡的影响

崔瑞莲;王加启;卜登攀;魏宏阳;胡菡;周凌云;

2009, 0(12): 119-123.

摘要 ( 112 )

PDF (530KB) ( 456 )

相关文章 | 计量指标

以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用台盼蓝染色绘制生长曲线,细胞流式检测细胞凋亡,以正常培养温度(38℃)为对照,研究体外高温培养条件下(42℃),添加不同浓度(0.01、0.1和1μmol/L)甲状腺素(thyroxine,T4)对细胞生长和凋亡的影响。结果表明,不同浓度的T4在38℃有促进奶牛乳腺上皮细胞生长的趋势,但是变化不显着(P>0.05),而T4对缓解高温所造成的乳腺上皮细胞的生长抑制作用也不显着(P>0.05);不同的T4都能够极显着缓解42℃培养1h和3h的奶牛乳腺上皮细胞的凋亡(P<0.01),并且对缓解42℃培养3h的细胞凋亡效果更加明显,但是对42℃培养5h和8h的细胞,仅1μmol/L的T4能够极显着缓解其凋亡(P<0.01)。结果提示,T4对高温造成的奶牛乳腺上皮细胞的生长抑制没有明显的缓解作用,但能缓解高温诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。

猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析

陈降华;刘忠华;李文平;

2009, 0(12): 124-128.

摘要 ( 124 )

PDF (325KB) ( 328 )

相关文章 | 计量指标

旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA。将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Westernblot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定。以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测。结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。

大口黑鲈肌肉生长抑制素多克隆抗体的制备及其对仔鱼生长影响

张宁宁;白俊杰;李胜杰;叶星;何小平;夏仕玲;杜晓东;

2009, 0(12): 129-133.

摘要 ( 130 )

PDF (455KB) ( 503 )

相关文章 | 计量指标

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是抑制肌肉生长和发育的生长调控因子。将大口黑鲈(Micropterus salmoides)MSTN成熟肽cDNA改造后克隆到pET32a(+)载体上,构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE检测表明重组表达的融合蛋白分子大小约28kD,含量为菌体总蛋白的34%。用纯化后的表达蛋白免疫新西兰兔制备抗大口黑鲈MSTN多克隆抗体,Western blot和ELISA检测证实所获得的抗体可与抗原蛋白特异性结合,抗体的效价为1∶62500。将获得的抗体显微注射到大口黑鲈的受精卵卵黄区,结果显示具有促进仔鱼生长的作用。

文蛤微卫星DNA的筛选及其特性分析

陈淑吟;吉红九;许广平;张志伟;杨海平;

2009, 0(12): 134-138.

摘要 ( 136 )

PDF (360KB) ( 589 )

相关文章 | 计量指标

采用磁珠富集分离法从文蛤(Meretrixmeretrix)的基因组中筛选得到49条微卫星DNA序列,其中两碱基重复有3种类型36个序列,四碱基重复有14种类型26个序列。重复次数在5~30之间的序列占75.6%,30次以上重复的序列占24.4%,最高重复次数为100。根据重复单元的排列特点,完美型、非完美型及混合型序列所占比例分别为61.2%、14.5%和24.5%。本研究中构建的文蛤微卫星文库将在文蛤种质资源评价及分子遗传学研究中发挥作用。

GFP用于单核细胞增生李斯特菌PrfA调控毒力基因actA转录表达的研究

冯莹颖;张晓莉;张强;罗勤;蒋苹;钱悦;冯爱平;

2009, 0(12): 139-143.

摘要 ( 173 )

PDF (454KB) ( 544 )

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PrfA是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究PrfA转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16质粒上,构建成表达融合载体pLSV16-PactA-gfp,然后将其电转化入LM野生株P14、PrfA高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中表达。利用荧光显微镜和荧光酶标仪检测上述3株细菌中绿色荧光蛋白的不同表达强度,从而评价actA基因依赖于PrfA的转录活性强弱。结果显示,绿色荧光蛋白在P14a中发出的荧光强度最高,P14次之,A42最弱,两两比较均有显着差异(P<0.01),表明毒力基因actA的转录水平高低与PrfA的活性成正相关,其转录表达依赖于PrfA的调控;该试验同时也显示GFP能方便、有效地用于研究PrfA调控LM不同毒力基因的转录表达水平。

小单孢菌属特异寡核苷酸探针的设计及杂交条件优化

李玉梅;李莉;彭双;闫淑珍;

2009, 0(12): 144-149.

摘要 ( 174 )

PDF (662KB) ( 279 )

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小单孢菌在生态环境中占有重要地位,也是寻找新的抗生素的重要来源。为了探索小单孢菌的生态分布和在未培养情况下的生态位,在分离和鉴定一定数量的小单孢菌的情况下利用小单孢菌属的16S rDNA基因同源性,采用ClustalX软件进行序列分析,设计了小单孢菌属的16S rRNA特异寡核苷酸探针Mn1和Mn3两个序列,将这两个序列与GenBank中小单孢和非小单孢菌属的16S rRNA序列进行Blastn比对分析,先在理论上确认Mn1和Mn3对小单孢菌属是特异的。收集小单孢和非小单孢菌株19株,通过原位杂交试验的方法对设计的探针进行特异性验证,结果证明,Mn1能和试验用到的所有小单孢菌属的标准菌株杂交和非小单孢菌均不能杂交;Mn3能和所有小单孢菌属的标准菌株杂交,但也能与链霉菌CGMCC4.891(Streptomyces microflavus)杂交。初步证明Mn1可作为小单孢菌属的特异性探针。并通过杂交条件试验优化了Mn1荧光原位杂交的条件:甲酰胺浓度为30%,溶菌酶处理时间为37℃40min,HCl处理时间为60min,杂交时间为3h。

酿酒酵母菌核糖体RNA沉降系数的初步研究

牟岱英;刘红;蔡生力;钟立强;

2009, 0(12): 150-154.

摘要 ( 240 )

PDF (575KB) ( 969 )

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为研究酿酒酵母菌核糖体RNA(rRNA)的沉降系数,用酶解法和液氮研磨法裂解酿酒酵母菌的细胞壁,Trizol Reagent提取其总RNA,同时提取小白鼠和斑马鱼的总RNA进行比较。经紫外分光光度计检测和甲醛琼脂糖变性胶电泳后,RNA纯度好,条带清晰,无弥散或降解现象。试验发现,与酶解法相比,用液氮研磨法破碎酿酒酵母菌细胞壁提取总RNA所用的成本低,时间少,产率和纯度高,适用于少量样品RNA的提取。同时,酿酒酵母菌与斑马鱼和小白鼠总RNA电泳图谱表明,三者的"18SrRNA"在条带大小方面差异较小,而"28SrRNA"差异较大。利用分析型离心机测得的酿酒酵母菌两个较大rRNA的沉降系数分别为24.7S和18.1S。研究结果表明了真核生物rRNA种类的多样性。

两株高丁醇耐受细菌的分离鉴定及其丁醇耐受特性的研究

左文朴;裴建新;庞浩;黄日波;

2009, 0(12): 155-159.

摘要 ( 132 )

PDF (564KB) ( 512 )

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高浓度丁醇耐受菌株是丁醇异源重组生产的关键因素。本研究对不同环境中耐受丁醇的微生物进行筛选,从自然环境中分离得到两株能够耐受高浓度丁醇的菌株,分别命名为btpz-4-1和btpz-6-3,它们耐受丁醇的浓度达到了25g/L。通过分子标记物16S rDNA的鉴定以及分子系统进化树的分析,btpz-4-1被鉴定为Lactobacillus mucosae,btpz-6-3被鉴定为Pedi-ococcus pentosaceus。同时,对它们的生理特性进行研究,结果显示btpz-4-1和btpz-6-3的最适生长温度分别为45℃和42℃,最适生长pH分别为6.0和6.5。

柴油降解菌的筛选及降解能力研究

陈苗苗;陈书洁;方旭波;陈小娥;

2009, 0(12): 160-163.

摘要 ( 109 )

PDF (326KB) ( 540 )

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从修造船业周围油污污染土样中分离纯化出9株以柴油为唯一碳源的高效降解菌,其中2#菌为微球菌属,确定为优势菌株,其降解率高达到65.7%;分析了接种量、柴油浓度、pH、温度、转速对2#微球菌降解柴油的影响。结果表明,该菌株最适宜生长条件接种量为1.0ml/L、柴油浓度为1.4g/L、pH7.0、温度为35℃、转速为160r/min。

微量法鼠疫菌质粒DNA抽提的优化

韦蝶心;郭英;苏鹏;钟佑宏;宋志忠;

2009, 0(12): 164-166.

摘要 ( 105 )

PDF (206KB) ( 432 )

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旨在分析微量法抽提鼠疫菌质粒DNA的效果,探讨其在鼠疫菌分子生物学实验研究中的应用价值。采用微量法分别提取鼠疫菌EV76株,假结核耶尔森菌PstII株及大肠杆菌V517株质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA抽提结果进行分析。结果显示,微量法能在较短时间内获取开环较少的闭合环状鼠疫菌质粒DNA,经琼脂糖凝胶电泳图示其电泳条带清晰、亮度均一。微量法鼠疫菌质粒DNA抽提效率和纯度较好,抽提结果稳定,重复性良好。经微量法抽提的质粒DNA符合多数鼠疫菌分子生物学试验的要求,可广泛应用于鼠疫菌分子生物学试验研究中。

白腐菌混合菌降解木质素最佳条件的优化

段传人;贾秋云;

2009, 0(12): 167-171.

摘要 ( 119 )

PDF (309KB) ( 598 )

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通过正交试验对3种白腐菌混合菌降解竹材木质素的条件进行优化,结果表明,在温度为32℃、pH3.0、固体发酵时间20d、培养液与竹材基质质量百分比110%时降解木质素的效率最高。在此基础上,研究了两种诱导剂对白腐菌混合菌降解木质素的影响。结果表明,两种诱导剂均能促进木质素的降解,其中H2O2在浓度1%时,木质素降解率高达62.9%,苯甲酸在浓度0.1%时,木质素降解率最高,为67.8%。

一株产木质素降解酶真菌的分离与鉴定

武善军;荚荣;甘露;

2009, 0(12): 172-176.

摘要 ( 124 )

PDF (414KB) ( 577 )

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从自然界中分离到一株产木质素降解酶真菌。平板显色反应显示,该菌株具有产多种木质素降解酶的能力,并通过酶活力测定得到证实。为确定该菌株的分类地位,对其ITS序列进行了扩增并测序,并利用MEGA4.0生物学软件计算其与同属其它菌株的遗传距离并构建系统发育树,在分子水平上确定它们之间的亲缘关系。试验结果表明,该菌株的ITS序列与Irpex lacteus乳白耙菌序列相似度达99%,且与Irpex lacteus XSD-2亲缘关系最近。

制霉菌素抗性筛选高活性苎麻脱胶菌诱变菌株

曾莹;向新柱;

2009, 0(12): 177-179.

摘要 ( 118 )

PDF (117KB) ( 423 )

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利用制霉菌素抗性筛选高渗透性突变株,提高黑曲霉菌对苎麻纤维的脱胶能力,使微生物脱胶能用于工业生产实践之中。分别用紫外线、硫酸二乙酯、亚硝酸作为诱变剂对黑曲霉3.0.2菌株进行诱变处理。以制霉菌素抗性为遗传标记,从突变菌株中定向筛选得到一株高活性苎麻脱胶菌黑曲霉3.0.2-26。在以未经刮制的苎麻韧皮为主要碳源,0.7%(NH4)2SO4为氮源,添加0.05%KCl;0.05%MgSO4;0.1%K2HPO4;0.1%酵母膏;Tween800.1%的培养液中,接入黑曲霉3.0.2-26,置30℃下,150r/min处理30h左右,脱胶苎麻纤维的残胶率平均为14.43%。

SPE-HPLC法快速检测发酵液中紫杉醇的含量

李勇超;许桂芳;杨靖;孟丽;

2009, 0(12): 180-183.

摘要 ( 125 )

PDF (395KB) ( 418 )

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针对红豆杉内生真菌发酵液中紫杉醇的含量测定进行探讨,以建立快速高效低耗的检测方法。采用C18固相萃取柱对紫杉醇进行吸附,用不同浓度的甲醇-乙酸铵和甲醇分别作为洗脱剂对其进行洗脱,比较两者的洗脱效果,洗脱液用HPLC进行检测;色谱条件为:流动相甲醇(v)∶水(v)∶乙腈(v)=20∶45∶35,流速:0.70ml/min,检测波长:227nm。结果表明,浓度为80%的甲醇溶液洗脱效果较好,紫杉醇的回收率为87.6%。

凝胶层析在发酵液中分离提纯透明质酸中的应用

吴华昌;马钦元;邓静;徐静;陈哲;

2009, 0(12): 184-187.

摘要 ( 118 )

PDF (499KB) ( 742 )

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采用葡聚糖凝胶G-100,以0.1mol/L氯化钠溶液为洗脱剂,在优化的凝胶层析条件(层析柱高度30cm、进样量2ml、洗脱流速1ml/4min)下,对透明质酸发酵液进行分离纯化,得到了高纯度的透明质酸。HA提取率达到79.85%,蛋白质去除率为84.93%。

有机复合物H对纤维素酶促反应动力学特性的影响

李鸿玉;厉重先;

2009, 0(12): 188-192.

摘要 ( 96 )

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采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)为显色剂,滤纸和CMC为底物,测定纤维素酶的酶活。考察了在不同温度、pH值、反应时间、底物浓度等反应条件下,有机复合物H对纤维素酶滤纸酶活(FPA)和CMC酶活(CMCA)的影响。结果表明,有机复合物H对纤维素酶的FPA活性和CMCA活性均有一定的促进作用,且在不同条件下的促进效果有较大差异。

《生物技术通报》2009年总目次

2009, 0(12): 193-203.

摘要 ( 77 )

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《生物技术通报》稿约及文章格式要求

2009, 0(12): 204-205.

摘要 ( 401 )

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