生物技术通报

凌永胜;杜娟;肖宇;胡晓倩;林忠平;

2009, 0(11): 1-7.

摘要 ( 98 )

PDF (414KB) ( 452 )

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在缺氧条件下,透明颤菌血红蛋白(VHb)通过促进氧输送增强呼吸和能量代谢,并在各种宿主中表达,显示出改善增长,蛋白质分泌,代谢产物的生产力和提高宿主抗逆性等的生理效应,从而使蛋白质在代谢工程尤其在优化植物代谢中应用前景广阔。概括了VHb在生物技术工业的诸多研究领域中的应用潜力,探讨VHb功能的细胞机制,并显示出各领域所采取的各种方法。

蛋白改造提高苏云金杆菌杀虫活力的研究进展

王发祥;刘永乐;丁学知;夏立秋;

2009, 0(11): 8-12.

摘要 ( 89 )

PDF (232KB) ( 356 )

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苏云金杆菌(Bt)已被广泛应用于农林害虫防治,但传统制剂仍然存在很大局限性,利用蛋白质工程对其改造能有效的克服这些缺点。主要概述了近年来利用结构域转换和定点突变技术改造BtCry蛋白并增强其杀虫活性的研究进展。

Wnt信号通路及其与疾病的关系

韩萍萍;郑若男;

2009, 0(11): 13-15.

摘要 ( 70 )

PDF (285KB) ( 1235 )

相关文章 | 计量指标

Wnt信号通路是参与胚胎及器官发育的主要4大类信号传导途径之一,对胚胎及器官发育起着不可替代的作用。对其在疾病产生中的作用做了简要的概述,以期在发育生物学、生物医学及交叉学科的研究上带来全新的革命。

肝纤维化中肌成纤维细胞的作用及TGF-β/Smads通路的研究进展

黄岂平;陈国宝;

2009, 0(11): 16-19.

摘要 ( 81 )

PDF (373KB) ( 441 )

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肌成纤维细胞(myofibrobasts)是一种多起源的异质性细胞,在肝纤维化过程和愈伤反应(wound-healing response)中扮演重要角色。TGF-β/Smads通路作为体内重要的信号调节通路,对肝纤维化过程具有关键的调节作用,现已成为国内外近年来的研究热点。对肌成纤维细胞的来源以及影响其分化的因素,TGF-β/Smads通路与调控的研究进展,以及肝纤维化的治疗进行了较为全面的综述,并就肝纤维化今后研究的主要发展方向进行了展望。

细胞程序性死亡通路的研究进展

敏云馨;马忠仁;

2009, 0(11): 20-23.

摘要 ( 202 )

PDF (269KB) ( 1596 )

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细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)一直被看做是细胞凋亡(apoptosis)。随着细胞生物学研究的深入,新的细胞死亡途径逐渐被揭示出来,如胀亡、自噬、副凋亡等。这些通路有些是caspase依赖的,有些不依赖于caspase途径。在细胞程序性死亡过程中,各种通路不是单独起作用的,而是相互交联的,有彼此重叠的机制出现。目前,Clarke形态学分类法是得到大多数学者认可的细胞程序性死亡的分类方式。按照该分类法,可将PCD分为3大类,即:Ⅰ型细胞程序性死亡、Ⅱ型细胞程序性死亡和Ⅲ型细胞程序性死亡。

芪合酶基因的分子生物学研究

生书晶;赵树进;

2009, 0(11): 24-29.

摘要 ( 96 )

PDF (380KB) ( 436 )

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植物中存在芪类次生代谢产物(stilbenes)作为一种重要的植保素,不仅能够使植物体本身的抗逆性提高,在人类健康医疗领域也有很好的应用前景。由于其合成途径具有专一性,需要芪合酶(Stilbene synthase,STS)的存在,近年来芪合酶基因工程日益引起人们的研究和重视。介绍了芪合酶基因的结构功能及其诱导表达的调控机理,并对其转基因工程的研究进展进行了综述,以期为进一步开展芪类次生代谢物在作物品质改良及人类健康营养中的应用提供参考。

木素过氧化物酶的研究进展

姜杰;杨暖;丁梦旋;汪文静;王子元;谢响明;

2009, 0(11): 30-33.

摘要 ( 64 )

PDF (204KB) ( 1080 )

相关文章 | 计量指标

木素过氧化物酶是一种能降解木素,由微生物分泌的胞外酶,广泛应用于生物制浆、纸浆的酶法漂白、有机污染物的降解和环境的生物修复等方面。介绍了木素过氧化物酶的来源、结构与性质、催化机理以及基因工程方面的研究成果,并对其可能带来的工业应用前景以及今后的研究方向进行了展望。

豆豉纤溶酶的研究现状

龚福明;柳陈坚;李海燕;

2009, 0(11): 34-38.

摘要 ( 118 )

PDF (160KB) ( 465 )

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豆豉纤溶酶是从中国传统风味食品豆豉中分离得到的一种由杆菌产生的丝氨酸蛋白酶,具有极强的纤溶活性。综述了豆豉纤溶酶的产生菌种、发酵工艺、酶学性质、分离纯化、作用机理以及分子生物学特性等研究现状。豆豉纤溶酶在溶栓的过程中有着溶栓能力强,无毒副作用,原材料丰富,在体内半衰期长等优点,因此该酶有着广阔的应用发展前景。

烟叶主要生物酶活性变化规律及其在烟叶发酵中的应用

刘敏;王毅;马永凯;季秀玲;魏云林;

2009, 0(11): 39-42.

摘要 ( 73 )

PDF (196KB) ( 507 )

相关文章 | 计量指标

烟叶中的生物酶在烟叶的生长及发酵过程中起着重要作用。他们能够促进烟叶内部有机物质的分解与转化,调整烟叶中各种化学成分的比例,提高烟叶中香气成分的形成和积累,从而提高烟叶的综合品质。综述了烟叶生长、加工过程中淀粉酶、蛋白酶、多酚氧化酶的活性变化规律,以及外加生物酶在烟叶发酵中的应用现状。

蛋白质定向进化技术的研究进展

苏怡丹;伍宁丰;刘国安;

2009, 0(11): 43-47.

摘要 ( 219 )

PDF (140KB) ( 1696 )

相关文章 | 计量指标

蛋白质定向进化技术是蛋白质分子改造的一个重要策略。重点介绍了易错PCR、DNA改组等对编码蛋白质的基因进行随机突变和重组的技术,以及构建突变体库和高通量筛选的方法,并探讨了定向进化技术在蛋白质工程中的应用及前景。

生物工程技术在食品工业领域中的应用

孙远;

2009, 0(11): 48-51.

摘要 ( 83 )

PDF (229KB) ( 681 )

相关文章 | 计量指标

据当今生物工程技术发展情况,综述了它在食品工业领域中的食用资源开发、食品加工及食品安全检测中的应用。

cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术在植物基因差异表达上的应用及其分析比较

吴建明;李杨瑞;杨柳;王爱勤;杨丽涛;熊发前广西作物遗传改良生物技术重点开发实验室;甘崇昆;

2009, 0(11): 52-55.

摘要 ( 110 )

PDF (278KB) ( 395 )

相关文章 | 计量指标

对cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术在植物上的应用研究进行了介绍,指出cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术已逐渐成为基因表达研究的重要工具,是构建转录图谱、定位目标性状位点、研究差异基因表达等研究的主要手段,具有广泛广阔的应用前景。但是cDNA-AFLP和cDNA-SRAP技术均具有一定的缺限,主要表现在获得的差异片段还不够全面丰富。cD-NA-AFLP可以扩增到扩增较多的带,但试验程序比较繁琐、昂贵而且耗时较长、操作较困难;而cDNA-SRAP相对比较简便、便宜而耗时较短,较易操作。因而将cDNA-AFLP与cDNA-SRAP技术结合起来,可望得到更全面丰富的差异片段,从而在植物基因差异表达、新基因发现、抗逆性分子机理研究等方面发挥更大的作用。

转基因技术在水产动物营养中的应用

范艳君;朱伟;

2009, 0(11): 56-59.

摘要 ( 71 )

PDF (124KB) ( 341 )

相关文章 | 计量指标

近年来,随着分子生物学研究的进展,转基因技术得到了迅猛的发展,在水产动物营养中也有广泛的应用。动物转基因技术是指将外源基因或体外重组的基因结构导入动物的基因组内,使其在动物体内整合和表达,产生具有新的遗传性状,并能将这种性状稳定地传递给后代的一种技术。对转基因技术的一般方法,如显微注射、精子载体、电穿孔,逆转录病毒载体感染和基因枪等方法,以及转基因技术在水产动物营养中的应用进行了综述。

刺参病害现状及其生物技术检测的研究进展

王颖;仇雪梅;王娟;王秀利;

2009, 0(11): 60-64.

摘要 ( 70 )

PDF (289KB) ( 633 )

相关文章 | 计量指标

随着人工养殖规模的扩大,刺参养殖的病害问题已严重阻碍刺参养殖业的发展,如刺参腐皮综合症、化板病、病毒性疾病等。综述了近年来刺参的养殖工艺和模式,以及常见疾病的症状和防治手段。并针对刺参防御系统的特点,从免疫学和分子生物学方面做了相应的探讨和展望。

解淀粉芽孢杆菌BamHI甲基转移酶基因克隆、功能鉴定与序列分析

刘洋;沈微;石贵阳;王正祥;

2009, 0(11): 65-68.

摘要 ( 71 )

PDF (394KB) ( 510 )

相关文章 | 计量指标

从解淀粉芽孢杆菌Baillus amyloliquefaciens CICIM B2125中克隆了BamHI甲基转移酶基因(bamHIM),并在大肠杆菌JM109中得到了成功表达。该基因含有1271bp的开放阅读框(ORF),编码423个氨基酸,成熟蛋白分子量为49kD。该基因在自身启动子引导下,表达了具有活性的BamHI甲基转移酶(M.BamHI)。该酶可以将BamHI位点的碱基甲基化。氨基酸序列分析表明该酶存在有NADB_Rossmann结构域。

短小芽孢杆菌肉碱转运系统opuC基因的克隆与序列分析

王岩;沈锡权;吴祖芳;

2009, 0(11): 69-74.

摘要 ( 105 )

PDF (1128KB) ( 390 )

相关文章 | 计量指标

以前期获得的ω-1-羟基脂肪酸高产突变菌株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)M-F641的总DNA为模板,利用Primer Premier5.0软件设计4对引物,对决定长链脂肪酸无效降解途径中肉碱转运的OpuC转运系统的基因进行克隆,成功获得了opuCA、opuCB、opuCC和opuCD的基因序列,并利用MEGA3.1、DNAStar等软件进行序列分析。研究内容将为进一步利用短小芽孢杆菌长链脂肪酸高效转化生产ω-1-羟基脂肪酸菌株奠定基础。

书讯

2009, 0(11): 74-124.

摘要 ( 65 )

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靶向HBs基因的shRNA表达载体的构建及其抑制HepG2.2.15表达HBVsAg的作用

杨尚君;王亚平;唐恩洁;张国元;

2009, 0(11): 75-78.

摘要 ( 60 )

相关文章 | 计量指标

探索用PGenesil-1(Pg)构建的靶向乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(简称Pgs),对体外培养HepG2.2.15细胞中的HBV基因及其抗原表达的抑制作用。设计、合成靶向HBVS区的3对DNA序列,分别插入PGenesil-1中构建3个siRNA表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,经限制性内切酶,DNA序列测定等技术鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量后,分别或按不同组合转染HepG-2.2.15细胞,48h后采用半定量RT-PCR检测HBVsmRNA转录水平,免疫细胞化学技术检测HBsAg表达水平,MEIA分别检测细胞裂解液和培养上清中HBsAg和HBeAg的表达水平。结果表明,HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3均能不同程度地抑制HepG2.2.15细胞中的HBsAg、HBeAg合成和HBs-mRNA转录。成功构建的HBV真核表达载体Pgs1、Pgs2、Pgs3,其中PgS3能显着抑制HBsAg表达(P<0.01)。多种表达载体联合对抗原表达的抑制作用效率不同。

侧孢短芽孢杆菌X10启动子活性片段的克隆和序列分析

李伟杰;姜瑞波;陈敏;

2009, 0(11): 79-82.

摘要 ( 76 )

PDF (342KB) ( 370 )

相关文章 | 计量指标

提取了侧孢短芽孢杆菌X10的基因组DNA,以绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,gfp)为报告基因,以启动子探针pUC19-GFP为载体,通过鸟枪法在大肠杆菌DH5α中构建了X10的启动子文库,通过筛选获得了14个阳性克隆,编号为P1~P14。测定了阳性克隆子的荧光强度,结果表明P6中gfp基因的启动子活性最强,它的荧光强度达到了355.67,而P14中gfp基因的启动子活性最弱,它的荧光强度只有211.67。对P6克隆中的重组质粒的插入片段进行了测序和序列分析。

IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

黄思超;杜军;邱胜红;徐俊;傅刘鹏;马锦珊;蔡绍晖;

2009, 0(11): 83-88.

摘要 ( 124 )

PDF (679KB) ( 321 )

相关文章 | 计量指标

旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显着的抑制活性(P<0.01)。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具。

糖基化磷脂酰肌醇锚定型EGFP真核表达质粒的构建及表达

郭荫广;陈全;朱大冕;

2009, 0(11): 89-91.

摘要 ( 80 )

PDF (372KB) ( 399 )

相关文章 | 计量指标

构建与增强型绿色荧光蛋白基因相连的糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)序列的真核表达质粒,并检测其在A549细胞中的表达。分离人外周血淋巴细胞,提取总RNA,以RT-PCR法扩增CD24基因的243bpGPI锚定序列,双酶切后定向克隆入pEGFP-C1质粒中,构建并鉴定pEGFP-C1-GPI质粒。经脂质体介导转染A549细胞后,在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况。经酶切和测序鉴定证实,所克隆的CD24GPI序列正确,荧光显微镜观察pEGFP-C1-GPI质粒转染A549细胞可见围绕细胞膜的强绿色荧光,而对照pEGFP-C1质粒转染A549细胞仅见胞内均匀荧光。成功构建与EGFP相连的GPI真核表达质粒,且能在A549细胞膜上锚定表达EGFP-GPI融合蛋白,为构建锚定表达型肿瘤疫苗奠定基础。

番茄LeABI3基因的生物信息学分析

范晶;黄明远;李仲芳;梁梓;伏秦超;雷常安;

2009, 0(11): 92-97.

摘要 ( 75 )

PDF (1212KB) ( 426 )

相关文章 | 计量指标

对所克隆到的番茄LeABI3基因测序结果进行序列分析,发现得到LeABI3基因的2种转录本。应用生物信息学的方法和工具对LeABI3蛋白质的理化性质、跨膜区域、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域和同源树进行分析,结果表明此蛋白是包含一个保守B3结构功能域的亲水性不稳定蛋白,相对分子量为65.4kD,等电点为6.54,可能存在2个跨膜区域。蛋白质二级结构中的主要构成元件是α-螺旋和不规则卷曲,蛋白质同源分析发现番茄LeABI3和马铃薯vp1-ABI3类蛋白相似度最高,同源性为89%。

枣树肌动蛋白基因cDNA片段的克隆及其表达分析

孟玉平;张洁;张春芬;孙海峰;曹秋芬;

2009, 0(11): 98-102.

摘要 ( 64 )

PDF (613KB) ( 417 )

相关文章 | 计量指标

根据GenBank中登录的植物肌动蛋白基因同源核苷酸保守序列设计引物,以壶瓶枣(Ziziphus jujubaMill.Hup-ingzao)刚萌发结果枝构建的cDNA文库为模板,利用PCR技术得到了一个478bp的cDNA片段。与其它植物同源序列进行分析表明,其核苷酸序列的同源性在70%以上,氨基酸序列的同源性在85%以上,证明它是肌动蛋白基因在枣树中的同源cDNA片段,命名为ZjAT1(Ziziphus jujubaactin1),GenBank登录号为EU251882。DNA印迹分析结果表明,ZjAT1在枣树基因组中以单拷贝的形式存在。对不同发育阶段的不同器官组织进行了RT-PCR分析,结果显示ZjAT1基因只在花和幼果中有明显表达,在毛根、幼茎、叶片、成熟茎尖、成熟茎段以及成熟果实的果肉和种仁中都没有检测到表达。

甜樱桃品种SSR-PCR反应体系的优化

张文娜;王忆;孔瑾;李天忠;张新忠;韩振海;许雪峰;

2009, 0(11): 103-107.

摘要 ( 73 )

PDF (250KB) ( 376 )

相关文章 | 计量指标

以甜樱桃品种那翁为试材,研究了樱桃SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了采用聚丙稀酰胺凝胶及琼脂糖电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明:在PCR反应体系中,DNA最适浓度30～45ng;Mg2+的最适浓度范围为1.5～3.0mmol/L;dNTP最适浓度为0.2～0.3mmol/L;引物的最适浓度为0.3～0.4μmol/L;Taq聚合酶在20μl反应体系中宜加入0.5U。利用此反应体系,对24份樱桃代表资源进行了SSR反应,用6%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测,扩增产物在100～250bp之间,不同品种间DNA谱带多态性丰富。琼脂糖电泳检测的DNA多态性不如聚丙稀酰胺凝胶丰富。

甘菊cDNA-AFLP反应体系的优化

黄河;王顺利;曹华雯;戴思兰;

2009, 0(11): 108-113.

摘要 ( 68 )

PDF (432KB) ( 370 )

相关文章 | 计量指标

以甘菊为试验材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜甘菊的cDNA-AFLP分析体系,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明:适用于甘菊叶片总RNA提取的方法为改进的Trizol法;酶切连接采用一步法,dscDNA酶切用量为300ng,酶切连接时间为8h;PCR选择性扩增反应时,反应体系中最佳组合为:引物浓度0.4mM、Mg2+浓度1.25mM、Taq酶浓度0.9U、dNTP浓度0.3mM。

野生山梨基因组DNA提取方法和部位比较

田路明;高源;曹玉芬;

2009, 0(11): 114-116.

摘要 ( 80 )

PDF (297KB) ( 352 )

相关文章 | 计量指标

以野生山梨(Pyrus ussuriensis Maxim)嫩叶、一年生枝韧皮部和成熟叶片为材料,分别用CTAB,改良CTAB+高盐+5%PVP和试剂盒3种方法提取基因组DNA,通过测OD值、DNA琼脂糖凝胶电泳和SSR引物扩增检验。结果表明:韧皮部和嫩叶是最理想的提取DNA材料,改良CTAB法是比较理想的方法,试剂盒是提取DNA最简便快捷的有效方法。

PCR方法筛选淡紫灰链霉菌海南变种基因组粘粒文库

田云龙;朱昌雄;蒋细良;郭萍;刘雪;

2009, 0(11): 117-120.

摘要 ( 89 )

PDF (267KB) ( 596 )

相关文章 | 计量指标

以中生菌素产生菌淡紫灰链霉菌海南变种(Streptomyces lavendulae var.hainanensis)B-7菌株为材料,利用pOJ446作为载体构建了B-7菌株的基因组粘粒文库,文库效价达到4.21×106CFU/ml。随机挑取12个克隆提取质粒,经BamHI酶切电泳分析,插入片段大小约为30~40kb,符合建库要求的理论值。利用建立的基于96深孔板PCR技术的文库筛选改良方法,成功快速地筛选到含有目标基因片段的阳性菌株。

PCR方法扩增神经生长因子β亚基基因的条件优化

闻崇炜;李倩;庄强;夏娟;文毅;

2009, 0(11): 121-124.

摘要 ( 79 )

PDF (266KB) ( 378 )

相关文章 | 计量指标

研究了不同退火温度、dNTP浓度、Mg2+浓度下用PCR方法扩增小鼠神经生长因子β亚基(β-NGF)基因的效率。并将扩增所得β-NGF基因克隆到pUCAT4载体中,对得到的阳性克隆进行了测序证实,为下一步利用该基因表达重组β-NGF创造了前提条件。

单克隆抗体与多克隆抗体配对ELISA方法比较

张小兵;邸禄芹;吴萌;闫静辉;

2009, 0(11): 125-129.

摘要 ( 178 )

PDF (394KB) ( 849 )

相关文章 | 计量指标

以人绒毛膜促性腺激素(HCG)为抗原,制备出对HCG的多克隆抗体和特异性单克隆抗体,并进行抗体纯化和特性分析,利用辣根过氧化物酶(HRP)分别对其进行了标记。采用双抗夹心ELISA试验,探讨了多克隆抗体与单克隆抗体配对的若干事项。结果表明,利用单克隆抗体和酶标多克隆抗体配对,并用含动物血清的稀释液稀释酶标抗体,可实现对检测原的高特异性和高灵敏度检测。

细粒棘球蚴AgB8/2基因的原核表达及免疫学鉴定

陈献威;王志钢;王红霞;毕玉新;李树裕;李洁;王媛媛;

2009, 0(11): 130-135.

摘要 ( 70 )

PDF (485KB) ( 408 )

相关文章 | 计量指标

旨在克隆细粒棘球蚴AgB8/2基因,优化原核表达体系,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值。采用RT-PCR扩增AgB8/2基因cDNA,构建原核表达载体pET-AgB8/2并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件。纯化的AgB8/2融合蛋白经Western blot鉴定正确后,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值。结果显示,克隆的AgB8/2基因包含了273bp的完整ORF,序列分析表明与其它已报道的AgB8/2cDNA序列的同源性在99%~100%之间。优化的表达条件为,当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.05mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化的蛋白经Western blot鉴定为目的蛋白。克隆的AgB8/2基因高度保守,原核表达载体pET-AgB8/2构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体。

三丁基锡暴露条件下杂色鲍肝胰腺均一化cDNA文库的构建

贾锡伟;张子平;邹志华;王艺磊;

2009, 0(11): 136-139.

摘要 ( 67 )

PDF (242KB) ( 318 )

相关文章 | 计量指标

用RDP试剂提取三丁基锡暴露诱导的杂色鲍肝胰腺总RNA,经Oligotex纯化得到mRNA;应用SMART技术合成双链cDNA,双链特异核酸酶(DSN)进行双链cDNA的均一化,构建了杂色鲍三丁基锡暴露诱导下的均一化cDNA文库。原始文库的库容为4.3×106CFU/ml,重组率为97.9%。从文库中随机挑选了3288个克隆进行测序,得到3048个高质量EST序列,其中有370条Contigs,2103条Singlets,Unigenes共2473条,冗余率为18.86%。以上结果说明该文库质量较好,为进一步筛选相关功能基因打下基础;较低的冗余率说明该文库值得继续使用大规模ESTs测序的方法寻找相关功能基因,并为进一步使用基因芯片技术研究相关功能基因的表达谱提供便利。

地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达

李兴暖;韩雅莉;

2009, 0(11): 140-144.

摘要 ( 68 )

PDF (499KB) ( 319 )

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依据已报道的地鳖虫成熟肽cDNA序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675bp地鳖虫纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列。将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符。重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性。

人源H5N1禽流感病毒血凝素分子遗传变异特征分析

张继荣;

2009, 0(11): 145-149.

摘要 ( 69 )

PDF (388KB) ( 372 )

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从GenBank获取已公布的人及相应国家禽感染的H5N1禽流感病毒HA核酸和蛋白序列,用生物软件Clust-alX1.83和MEGA4.0对HA基因序列和蛋白分析,构建HA核苷酸遗传进化树。结果表明,HA蛋白上再次出现既能与人又能与禽受体特异性结合的QNG;东南亚和东亚人感染毒株亲缘关系密切,西亚、南亚和非洲人感染毒株遗传距离近;进化树组成和HA蛋白关键位点氨基酸的变异,揭示多数国家的人感染的毒株与当地禽感染毒株高度同源,具有地域性特征,部分国家之间存在着病毒扩散现象。

一种棉铃虫多角体病毒的纯化与鉴定

唐平;李轶女;张寰;张志芳;

2009, 0(11): 150-153.

摘要 ( 81 )

PDF (292KB) ( 291 )

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对一株纯化的棉铃虫多角体病毒进行电镜观察,形态呈不规则型,直径约2μm,命名为棉铃虫多角体-B(Heli-coverpa armigeranucleocapsid nucleopolyhedrovirus-B,HaNPV-B),它对东方粘虫有较好的感染性,与棉铃虫单核型多角体病毒(Helicoverpa armigerasingle nucleocapsid NPV,HaSNPV)有不同的宿主域。通过半补齐法建立HaNPV-B基因组文库,拼接了一个6035bp的核苷酸片段,推测包含6个ORF,其包含基因内容及基因结构与HaSNPV不同,分析表明两者是不同种病毒,这为杆状病毒与宿主的相互作用及共同进化提供了信息。

CHO工程细胞株低血清培养的初探

马爱瑛;周栋;李敏;

2009, 0(11): 154-157.

摘要 ( 96 )

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以DMEM∶F12(1∶1)为基础培养基,对CHO细胞的低血清培养进行了初步探索,降低培养基中血清含量,观察了细胞在10%、5%和1%等不同浓度低血清培养条件下生长状态和外源蛋白表达活性的变化。试验结果表明:在含1%血清的F12∶DMEM(1∶1)培养基中,细胞仍能保持良好的生长状态,且培养上清中的目的蛋白活性与常规血清浓度10%DMEM培养条件下的活性接近。从而达到了既可以降低生产成本,又可以降低纯化难度的目的。

铅螯合物人工抗原的制备与鉴定

刘功良;王菊芳;李志勇;梁世中;

2009, 0(11): 158-162.

摘要 ( 112 )

PDF (286KB) ( 431 )

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以双功能螯合剂异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合铅离子,制备得半抗原Pb-ITCBE,然后再分别与载体蛋白KLH或BSA偶联制备得免疫原Pb-ITCBE-KLH与包被抗原Pb-ITCBE-BSA,ITCBE-BSA。用二喹啉甲酸法测3种抗原的浓度,分析半抗原、抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱,利用SDS-PAGE对3种抗原的分子量进行鉴定,用三硝基苯磺酸法检测3种抗原中的赖氨酸残基的ε-NH2被半抗原替换的程度,用石墨炉原子分光吸收法检测抗原中铅的含量。研究结果表明,免疫原与包被抗原制备成功,Pb-ITCBE-KLH、Pb-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA的浓度依次为6.47±0.08mg/ml,6.68±0.06mg/ml,5.57±0.05mg/ml;抗原与载体蛋白的紫外吸收光谱的特征各不相同;SDS-PAGE的结果显示3种抗原的分子量均不同于各自的载体蛋白;抗原中载体蛋白ε-氨基的替换程度依次为1.86±0.74%、55.53±1.13%、54.19±1.34%;铅的含量依次为15.64±0.11μg/ml,17.33±0.15μg/ml,0μg/ml。

表达重组咖啡豆α-半乳糖苷酶的酵母工程菌的高密度发酵

高红伟;贾延军;鲍国强;季守平;檀英霞;李素波;章扬培;宫锋;

2009, 0(11): 163-167.

摘要 ( 76 )

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用5L发酵罐优化了重组咖啡豆α-半乳糖苷酶酵母工程菌pPIC9K-Gal/GS115(本室构建)的高密度发酵工艺。通过对发酵条件的优化,包括甘油补充量及补充时机、甲醇诱导量及诱导时机、溶氧控制、诱导时间等,重组咖啡豆α-半乳糖苷酶在毕赤酵母中得到了高效表达。利用所确定的最适条件进行发酵,菌体密度最终达到368g/L以上,每批发酵液离心后可获得3.5L的发酵上清,上清中的蛋白含量达到3g/L以上,目的蛋白占上清总蛋白的50%以上,含量约为1.5g/L,上清中α-半乳糖苷酶的活性维持在80U/ml左右。确立工艺后又进行了3次发酵试验,证明了工艺的可行性和稳定性。为重组咖啡豆α-半乳糖苷酶在B→O血型改造和酶解大豆低聚糖方面的应用奠定了基础。

蔗渣发酵菌剂培养基的筛选及发酵条件的优化

叶婧;刘雪;张丽;于江;朱昌雄;

2009, 0(11): 168-173.

摘要 ( 63 )

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采用单因素和正交试验研究了蔗渣高效发酵菌剂(芽孢杆菌B-A、曲霉菌F-A、链霉菌A-B)的摇瓶发酵最佳工艺条件。结果表明:芽孢杆菌B-A的最佳培养基配方:牛肉膏0.3%、蛋白胨1%、葡萄糖1%、NaCl0.5%、可溶性淀粉0.5%、3.08%浓度的MnSO4溶液0.1;最适发酵条件为pH7、装液量100ml(250ml三角瓶)、36℃培养27h。曲霉F-A的最佳培养基配方:葡萄糖3%、豆饼粉3%、蛋白胨1.2%、酵母膏0.3%、K2HPO40.05%、KH2PO40.05%、CaCl20.08%、MgSO40.04%、MnSO40.04%、ZnSO40.02%;最适发酵条件为pH6、装液量50ml、30℃培养3d。链霉菌A-B的最佳培养基配方:可溶性淀粉4.5%、蔗糖1%、豆饼粉3%、NaNO30.2%、ZnSO40.01%、KH2PO40.001%;最适发酵条件为pH7、装液量50ml、30℃培养3d。

高效氯氰菊酯降解菌JCN13的分离鉴定及降解特性研究

张琛;王圣惠;闫艳春;

2009, 0(11): 174-177.

摘要 ( 64 )

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从生产高效氯氰菊酯的农药厂污水曝气池中,分离到一株能降解高效氯氰菊酯并以之为唯一碳源进行生长的细菌JCN13。经生理生化试验和16S rDNA分析,鉴定菌株JCN13为沙雷菌属(Serratia sp.)。气相色谱检测,菌株JCN13在4d内对100mg/L高效氯氰菊酯的降解率为89%,8d内基本降解完全。经气质联用检测,发现高效氯氰菊酯在被菌株JCN13降解的过程中存在异构体的转化。

内蒙古碱湖中紫色非硫光合细菌的分离和鉴定

杨慧;刘芳;王敏;孙军德;孙建光;高俊莲;

2009, 0(11): 178-181.

摘要 ( 65 )

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从内蒙古碱湖水样中分离得到一株紫色非硫光合细菌,命名为JH1-6。对该菌株进行了形态学观察、生理生化鉴定、活细胞吸收光谱以及16S rDNA序列分析。16S rDNA序列分析结果表明该菌株与沼泽红假单胞菌的16S rDNA序列同源性高达99%,结合形态特征和生理生化特性以及活细胞吸收光谱特征等,确定菌株JH1-6在分类地位上属于沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。

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