生物技术通报

岳同卿;郎志宏;黄大昉;

2009, 0(10): 1-7.

摘要 ( 164 )

PDF (310KB) ( 955 )

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外源基因表达的不稳定性和多样性是制约转基因作物育种研发进度的关键因素,外源基因的整合情况与外源基因的表达直接相关,充分了解外源基因的整合情况可为构建高效表达载体、获得外源基因稳定一致表达转基因材料提供参考,同时为转基因作物的安全利用提供保障。就外源基因整合情况的分析方法、不同转化方法外源基因的整合特点及利用定点整合技术提高外源基因表达稳定一致性的研究进展作一概述。

欢迎订阅2010年《中国畜禽种业》

2009, 0(10): 7-7.

摘要 ( 72 )

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耐盐基因及转基因烟草研究进展

王悦琳;李德全;

2009, 0(10): 8-14.

摘要 ( 103 )

PDF (315KB) ( 518 )

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盐胁迫是影响植物生存的非生物胁迫之一,且日趋严重。通过改变基因性状可以有效地提高植物耐盐性。烟草作为模式植物之一,本身还具有重要的经济价值。对基因工程在烟草抗盐研究方面的应用进行了综述,并对以后的发展趋势进行了展望,旨在为烟草抗盐性研究及盐渍化土地资源的开发利用提供参考。

农业类综合性优秀学术期刊《现代农业研究》杂志征稿启事

2009, 0(10): 14-14.

摘要 ( 84 )

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植物应答逆境胁迫的蛋白质组学研究进展

范海延;崔娜;邵美妮;许玉凤;

2009, 0(10): 15-19.

摘要 ( 201 )

PDF (273KB) ( 913 )

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逆境胁迫是制约植物生长发育、影响作物产量和质量的关键因子,揭示植物应答胁迫的分子机理一直是人们长期探索的重大课题。随着拟南芥、水稻等模式植物基因组测序的完成,植物基因组学的研究重点已经转变为功能基因组学研究,蛋白质组学是后基因组时代的新兴研究领域,它有助于人们从分子水平上了解植物耐受胁迫的机制。介绍了植物应答非生物胁迫,如盐胁迫、温度胁迫、干旱胁迫、营养胁迫和机械伤害等,以及生物胁迫,如病菌侵害的蛋白质组学最新研究进展,并探讨了利用蛋白质组学技术研究植物抗逆性方面的优势和前景。

植物NAC转录因子的研究进展

冶晓芳;唐益苗;高世庆;杨颖;刘美英;王永波;赵昌平;

2009, 0(10): 20-25.

摘要 ( 250 )

PDF (159KB) ( 1140 )

相关文章 | 计量指标

NAC转录因子是近些年来新发现的植物特有的转录调控因子,其N端含有高度保守的NAC结构域,在植物的生长发育、器官建成、逆境胁迫以及作物的品质改良中具有重要作用。主要介绍了植物NAC转录因子结构特点、生物学功能、作用机制等方面的最新研究进展进行综述。

植物花色素代谢途径改变机理及应用

夏玉凤;耿晓娜;王万双;赵宝华;

2009, 0(10): 26-29.

摘要 ( 112 )

PDF (353KB) ( 1078 )

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花色作为重要的观赏性状是育种工作者追求的目标。然而花色在生化和遗传上都极为复杂。很多植物呈现有限的花色范围,是因为缺乏必要的基因或者是由于酶对底物的特异性引起的。采用多种基因工程技术,例如,反义抑制、共抑制、RNAi、突变体的应用以及多基因共同导入等可以为人们提供崭新的思路和途径,改变植物花色素代谢方向,创造出自然界不存在的新花色。

小麦雄性不育研究进展

江红梅;师光开;

2009, 0(10): 30-33.

摘要 ( 172 )

PDF (201KB) ( 706 )

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雄性不育是植物中的一种普遍现象,而雄性不育是利用杂种优势提高作物产量和品质的基础,因此小麦雄性不育的理论机制研究对农业生产具有重要的指导意义。对小麦雄性不育类型及遗传、生理生化不育机制、定位及分子生物学研究进行了综述,并探讨了今后该领域的研究前景。

奶牛乳腺脂肪酸合成相关基因研究进展

胡菡;王加启;李发弟;卜登攀;

2009, 0(10): 34-39.

摘要 ( 160 )

PDF (211KB) ( 1096 )

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数量和种类繁多的脂肪酸构成了牛奶中不同分子量和饱和度的甘油三酯,也是乳脂的主要成分。链长不同的脂肪酸来源也不尽相同,几乎所有的短链和中链脂肪酸都由乳腺内源合成,长链脂肪酸主要是由血液中转运而来,奶牛乳腺在转运和合成脂肪酸过程中起着重要作用。近年来,研究人员将传统营养与分子生物学研究相结合,发现了大量与乳脂合成相关基因,并揭示了其功能和相互之间的作用。就奶牛乳腺的脂肪酸摄取和转运,脂肪酸的内源合成,乳腺重要酶类,脂肪酸酯化和相关基因网络调控几方面对脂肪酸合成相关基因进行归类,对其研究进展进行介绍。

《光明中医》杂志2010年征稿征订启事

2009, 0(10): 39-39.

摘要 ( 83 )

相关文章 | 计量指标

基因工程抗体研究进展

李菁;林彤;宋帅;高闪电;邵军军;丛国政;独军政;常惠芸;

2009, 0(10): 40-44.

摘要 ( 266 )

PDF (239KB) ( 1685 )

相关文章 | 计量指标

随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。

2010年部分生物、农林类学术期刊联合征订表

2009, 0(10): 44-44.

摘要 ( 65 )

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<正>~~

骨骼肌卫星细胞生物学特性及临床应用前景

李方华;庞全海;侯玲玲;郑扬;关伟军;马月辉;

2009, 0(10): 45-48.

摘要 ( 193 )

PDF (142KB) ( 979 )

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骨骼肌卫星细胞是位于肌细胞膜和基膜之间的具有增殖和分化潜力的生肌干细胞,对于出生后骨骼肌的生长、再生修复和维持具有重要的意义。主要对卫星细胞的含量与分布、细胞标志、可塑性和不均一性等生物学特性做了综述,最后展望了卫星细胞移植在临床上的应用前景。

基于四环素调控系统的病毒载体在基因治疗中的应用

张小男;李玉霞;凌焱;梁龙;陈珊;陈惠鹏;

2009, 0(10): 49-54.

摘要 ( 194 )

PDF (208KB) ( 773 )

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基因治疗已经发展成为处理各种疾病的理想治疗模式。病毒载体是将基因递送到体内或体外的分裂和非分裂细胞的有效工具。病毒载体基因治疗在临床环境成功应用的一个重要问题是严谨和持续地调控基因表达。目前,已经报道的无毒且严谨的调控转基因表达系统中,四环素转录调控系统是在体内和体外研究最好而且高效的调控系统。Tet调控系统已经被编码在慢病毒属、腺病毒属、腺相关病毒属和逆转录病毒属,而且可以有效地对基因进行调控。将主要讨论已经在Tet调控系统调控下递送基因的主要载体系统及其在基因治疗上的应用。

与真核生物DSBs修复有关的NHEJ途径研究进展

虞海燕;梁锋;杨志伟;

2009, 0(10): 55-59.

摘要 ( 137 )

PDF (230KB) ( 708 )

相关文章 | 计量指标

DNA双链断裂是真核生物最严重的DNA损伤形式。如果断裂的DNA双链无法及时修复,将可能导致细胞死亡。非同源末端连接途径在真核生物DSBs修复中起重要作用。综述了真核生物NHEJ途径中核心蛋白质Ku、DNA-PKcs、DNA连接酶IV、XRCC4、ARTEMIS和XIF等因子的结构和功能,并简要介绍了NHEJ修复途径的分子机制,其中涉及到DSBs位点蛋白复合体组装的两种模型。

农产品加工

2009, 0(10): 59-59.

摘要 ( 94 )

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微生物抗重金属的生理机制

陈亚刚;陈雪梅;张玉刚;龙新宪;

2009, 0(10): 60-65.

摘要 ( 273 )

PDF (370KB) ( 1470 )

相关文章 | 计量指标

虽然环境中高浓度的重金属对微生物有毒害作用,但一些微生物表现出抗重金属的特性,在细胞结构、生理代谢和遗传水平方面形成了不同的抗性机制。主要从生物吸附、胞外沉淀、生物转化、生物累积和外排作用等5个方面阐述了微生物对重金属抗性的生理和分子机制,为重金属污染环境的生物修复提供理论依据。

大肠杆菌乙酸产生及其控制研究

张晓云;叶勤;

2009, 0(10): 66-69.

摘要 ( 276 )

PDF (174KB) ( 1372 )

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大肠杆菌表达系统具有许多优点,是表达外源基因常用的宿主菌,然而在培养过程中易发生副产物乙酸的生成和积累,造成碳源浪费,且会抑制菌体生长及外源基因的表达,影响了大肠杆菌的生产能力。介绍了大肠杆菌乙酸产生的原因,分析了乙酸的抑制作用及其机理,并探讨控制乙酸生成和减少乙酸抑制的方法,为利用大肠杆菌生产重组蛋白提供过程控制的参考依据。

《生物医学工程与临床》征订启事

2009, 0(10): 69-69.

摘要 ( 89 )

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L-蛋氨酸γ-裂解酶的研究进展

夏立亮;于源华;薛冉;王保学;

2009, 0(10): 70-74.

摘要 ( 224 )

PDF (383KB) ( 480 )

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L-蛋氨酸γ-裂解酶是一种磷酸吡哆醛依赖型多功能酶,属于γ-蛋白家族。它能催化L-蛋氨酸及同型半胱氨酸的α,γ-裂解反应,被应用于肿瘤治疗及同型半胱氨酸血症的诊断。综述了蛋氨酸γ-裂解酶的来源,酶学性质,基因克隆与表达,酶的空间结构、活性位点及其应用,并对其在制备及应用中存在的问题和前景作了分析与展望。

染色体步移技术研究进展

梁成真;张锐;郭三堆;

2009, 0(10): 75-82.

摘要 ( 233 )

PDF (804KB) ( 1238 )

相关文章 | 计量指标

染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,以及连接成环PCR法、外源接头介导PCR法和半随机引物PCR法的原理,并且比较分析了他们之间的优缺点,以期对实际操作起到借鉴作用。

生物传感器在转基因产品检测中的研究进展

黄新;郭欣硕;李明福;陈洪俊;朱水芳;

2009, 0(10): 83-87.

摘要 ( 113 )

PDF (166KB) ( 567 )

相关文章 | 计量指标

生物传感器因快速、低耗和易于操作等优点在基因序列测定中受到了广泛的关注。概述了生物传感器的基本原理、分类以及几种主要生物传感器在转基因产品检测中的研究进展,分析了其在应用中存在的问题,并对今后的发展趋势提出一些看法。

利用RNAi技术改良淀粉品质的研究进展

陈国梁;张向前;穆三浪;陈宗礼;

2009, 0(10): 88-91.

摘要 ( 90 )

PDF (239KB) ( 347 )

相关文章 | 计量指标

RNA干涉(RNAi)是由dsRNA引起的序列特异性基因沉默现象,在动、植物和真菌中广泛存在并被证实。具有的特异性、稳定性、高效、快速以及不改变基因组的遗传组成等特性,为RNAi这一新技术在植物的遗传改良等方面提供了一个强有力的手段。重点从RNAi的发现与淀粉品质相关的淀粉合成酶及其利用RNAi在提高直链淀粉含量、降低直链淀粉含量等品质改良研究方面进行了回顾并对其存在的问题作了初步探讨。

应用基因表达芯片分析水稻高温胁迫相关基因

王曼玲;Rocha Pedro;李落叶;徐孟亮;Din Chen;夏新界;

2009, 0(10): 92-97.

摘要 ( 115 )

PDF (607KB) ( 588 )

相关文章 | 计量指标

非生物逆境,如低温、高温、干旱通常会严重影响到农作物的生长及产量,其中高温胁迫则是造成植物伤害的主要原因之一。为深入了解水稻高温胁迫反应的分子机理,发现新的耐高温相关功能基因,为水稻生物工程育种提供候选材料,采用Affymetrix水稻表达芯片分析了超级稻两优培九母本培矮64S(Oryzasativa L.)在高温逆境胁迫下,孕穗期、抽穗开花期的叶片全基因组表达谱,得到大量高温诱导表达基因。应用实时定量PCR方法对其中一部分基因的表达水平进一步分析,所得结果与基因芯片结果基本吻合,证明芯片分析数据是可靠的,为下一步耐高温相关基因的克隆、功能分析等研究提供了基础。

大豆花叶病毒CP基因原核表达与抗血清制备

陈文华;韦传宝;贾玉成;祁伟;

2009, 0(10): 98-101.

摘要 ( 165 )

PDF (334KB) ( 406 )

相关文章 | 计量指标

根据已报道的大豆花叶病毒(SMV)序列设计引物,扩增SMV的外壳蛋白(CP)基因,序列同源性分析结果表明,与目前已报道的SMV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为85.0%～96.8%,相应推测的氨基酸序列同源性为87.9%～98.9%。将CP基因插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化诱导产物,免疫家兔获得抗CP血清,Western blot分析对CP具有高度特异性。硫酸铵沉淀法与Protein A-Red Sepharose亲和层析相结合提取IgG,获得效价达1∶3800的一抗,可用于田间SMV病样检测。

甘蓝型油菜γ-TMT基因的克隆及其植物表达载体的构建

陈明训;王中;蒋立希;

2009, 0(10): 102-104.

摘要 ( 121 )

PDF (424KB) ( 422 )

相关文章 | 计量指标

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了甘蓝型油菜γ-TMT基因,并将其克隆到pMD18-T vector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了DNA全序列。结果表明,克隆片段全长为1044bp。将甘蓝型油菜γ-TMT基因定向克隆到植物表达载体pCambia1300的35S启动子下游,构建了该基因的植物超表达载体。

鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析

张建朋;陈新;吕慧贞;张元湖;

2009, 0(10): 105-108.

摘要 ( 119 )

PDF (310KB) ( 501 )

相关文章 | 计量指标

研究α-法尼烯合成酶基因的表达特性,了解鸭梨虎皮病发生的分子基础。应用高效液相色谱(HPLC)法检测鸭梨果皮中α-法尼烯含量;经过RT-PCR扩增首次得到了1824bp鸭梨α-法尼烯合成酶基因(GenBank注册号DQ364626),使用Northern杂交法检测了该基因的表达特性。PFS基因在鸭梨果皮中的表达量最高,叶中的次之,茎、花、根中的表达量相对较低;二苯胺(DPA)推迟而1-甲基环丙烯(1-MCP)抑制了低温冷藏的鸭梨果皮中PFS基因的表达和α-法尼烯的释放。α-法尼烯的积累量与PFS基因的表达量之间存在很高的协同性。

柑橘基因组DNA快速提取及ISSR-PCR扩增体系优化

施维属;潘腾飞;钟凤林;潘东明;李开拓;王江波;郭志雄;刘天亮;

2009, 0(10): 109-113.

摘要 ( 112 )

PDF (423KB) ( 456 )

相关文章 | 计量指标

对CTAB-mini法进行改良,得到一种效率较高的柑橘DNA提取方法。试验结果表明,得到的高质量DNA适合柑橘ISSR分析。同时,采用正交设计对影响柑橘ISSR-PCR因子进行优化。试验结果表明:20μl反应体系中采用5ng模板DNA、0.35mmol/LdNTPs、0.15μmol/LPrimer、1UTaq酶和3μl10×Buffer(含Mg2+)为柑橘ISSR-PCR最优反应体系。

欢迎订阅2010年《农业网络信息》(月刊)

2009, 0(10): 113-113.

摘要 ( 72 )

相关文章 | 计量指标

缘管浒苔Rubisco酶大亚基基因编码序列rbcL克隆及分析

尹顺吉;应成琦;汤文仲;张婷;何建华;何培民;

2009, 0(10): 114-119.

摘要 ( 108 )

PDF (300KB) ( 385 )

相关文章 | 计量指标

主要对缘管浒苔光合作用第一关键酶Rubisco大亚基基因(rbcL)进行了克隆分离。首先通过PCR特异性扩增叶绿体基因编码的缘管浒苔大亚基编码序列rbcL部分基因序列(1035bp)。依据基因步移原理,首次克隆得到缘管浒苔rbcL5′上游非翻译区序列(224bp)。据推测,rbcL5′上游非翻译区序列存在类似原核生物的启动子元件-10区(TAAAAT)和-35区(TTGAAA)。此外,依据3′-RACE(cDNA末端快速扩增技术)原理,克隆得到缘管浒苔rbcL3′末端cDNA序列(579bp)。

三角褐指藻Δ6脂肪酸延长酶基因的克隆与序列分析

李运涛;付春华;栗茂腾;余龙江;

2009, 0(10): 120-123.

摘要 ( 109 )

PDF (382KB) ( 507 )

相关文章 | 计量指标

多不饱和脂肪酸具有重要的生理和保健功能。利用基因工程手段在植物和微生物中生产多不饱和脂肪酸是研究的热点。Δ6脂肪酸延长酶是多不饱和脂肪酸合成中的关键酶,克隆了三角褐指藻的Δ6脂肪酸延长酶基因的cDNA和DNA序列,并对该基因的基因结构、翻译后修饰及起源进化进行了分析。结果显示,三角褐指藻的Δ6脂肪酸延长酶基因有两个内含子,该酶属于ELO系列延长酶,具有磷酸化及N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰等翻译后修饰。BLAST结果表明,在三角褐指藻中很有可能存在两个Δ6脂肪酸延长酶基因。

幼体中国对虾荧光标记虾的制作

刘海映;王秀利;李旭威;田燚;王桂娥;

2009, 0(10): 124-126.

摘要 ( 116 )

PDF (348KB) ( 332 )

相关文章 | 计量指标

采用经过暂养,平均体长为2cm以上的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)进行试验,用黄色、红色和绿色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾。结果表明,对照组中国对虾与用VIE标记后7个试验组中国对虾在生长发育等方面没有差异,并且各组对虾蜕皮正常。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为95%。3种颜色的荧光染料中,红色荧光标记的效果最好。

trp14基因在文昌鱼早期发育阶段的时空表达及免疫活性初步研究

蒋圣娟;

2009, 0(10): 127-131.

摘要 ( 116 )

PDF (624KB) ( 450 )

相关文章 | 计量指标

探讨文昌鱼trp14(thioredoxin-related protein of 14kD)基因在文昌鱼早期发育阶段的时空表达模式及其免疫活性。利用整体原位杂交技术研究trp14基因在文昌鱼早期发育阶段的时空表达模式;通过半定量RT-PCR方法分析trp14基因在低温胁迫和免疫药物刺激下的mRNA表达变化。trp14基因在文昌鱼2d幼虫的原始消化道表达,呈现时空特异的表达模式;低温可以增强trp14基因的表达,而免疫刺激药物LPS和LTA则降低trp14基因的表达量。文昌鱼trp14基因在胁迫条件下表达量发生变化,暗示其可能参与氧化压力变化引起的免疫反应。

蒙古绵羊tnp1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析

白音巴图;胡甜园;罗奋华;侯越;吴应积;

2009, 0(10): 132-135.

摘要 ( 136 )

PDF (383KB) ( 323 )

相关文章 | 计量指标

过渡蛋白1基因(tnp1)是圆形精子细胞特异表达的基因。绵羊tnp1基因的DNA序列至今尚未报道。为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据其他物种tnp1基因cDNA的保守序列设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp1基因cDNA全编码区。该基因cDNA长246bp,包含一个168bp的ORF,编码含有54个氨基酸的多肽链。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为94.0%。绵羊tnp1基因的cDNA克隆和序列测定为进一步研究绵羊精子发生过程奠定了基础。

弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

安立刚;蒋蔚;王权;陈永军;龚国华;周锦萍;邢小勇;孙泉云;丁铲;

2009, 0(10): 136-141.

摘要 ( 131 )

PDF (536KB) ( 525 )

相关文章 | 计量指标

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白。SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His.Bind Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性。在IPTG为1mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在。在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达。Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别。tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂。

紫外线胁迫麦长管蚜DNA变异的AFLP分析

赵永田;赵惠燕;

2009, 0(10): 142-145.

摘要 ( 89 )

PDF (278KB) ( 283 )

相关文章 | 计量指标

在6个不同时间段对不同体色、世代和寄主条件下的麦长管蚜进行紫外胁迫,应用AFLP技术对麦长管蚜基因组变异进行分析。研究结果表明:处理时间与变异频率之间存在正相关(r=0.9466);不同体色型的蚜虫和不同抗性寄主饲养条件下的蚜虫对紫外胁迫表现出不同的抗性,红色型蚜虫的变异较强,高抗寄主上的蚜虫变异较弱;F1代可累代遗传。

苏云金芽胞杆菌cry2Ad基因的克隆及其表达产物的活性分析

张静涛;束长龙;宋福平;刘楠;张杰;黄大昉;

2009, 0(10): 146-150.

摘要 ( 99 )

PDF (458KB) ( 512 )

相关文章 | 计量指标

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)SBT2是我国新分离出的一株野生菌株。扫描电镜显示该菌株产生双锥体形晶体。琼脂糖凝胶电泳发现其质粒图谱含有5个条带。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此菌株产生130kD晶体蛋白。利用PCR-RFLP法进行杀虫基因类型鉴定,发现其含有cry1Aa、cry1Da、cry1Hb、cry1Jb、cry1Ka、cry1Ib、基因。Cry2Ad蛋白的活性至今未见研究报道,本研究克隆和测序了该基因。并对其进行了表达。生物活性测定结果表明其表达产物对舞毒蛾(Lymant-ria dispar)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)、小菜蛾(Plutella xylostella)有低活性;对大猿叶甲(Colaphellus bowringi)无活性。

抗菌肽hepcidin融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化

王继雯;谢宝恩;周伏忠;陈国参;

2009, 0(10): 151-155.

摘要 ( 100 )

PDF (465KB) ( 496 )

相关文章 | 计量指标

构建了his-hepcidin融合蛋白表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,得到携带有pET-hec的E.coli BL2l(pET-Hec)菌株,为了确定融合蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,分别对诱导温度、诱导时机、诱导时间、诱导剂用量等进行了优化,通过Tricine-SDS-PAGE电泳分析,确定了最佳表达条件:37℃培养工程菌至OD600为0.6时,加入0.2mmol/LIPTG,25℃诱导表达8h。

凹甲陆龟沙门氏菌的分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测

黄道超;姜波;杨光友;牛李丽;王强;余星明;邓家波;赵波;陈维刚;

2009, 0(10): 156-160.

摘要 ( 136 )

PDF (298KB) ( 648 )

相关文章 | 计量指标

从成都动物园因腹泻死亡的凹甲陆龟体内分离到一株病源菌,经选择性分离培养、生化试验、血清型鉴定等,确定该病源菌为D群肠炎沙门氏菌,其抗原结构式为1,9,12∶g,m∶-。该菌株对小鼠有较强的致病性,能引起人工感染小鼠大量死亡,且从其体内分离到相同特性的菌株;药物敏感性试验证实该分离菌对头孢曲松、氧氟沙星、卡拉霉素、多粘菌素、复方新诺明、呋喃唑酮等敏感,对链霉素、四环素、氯霉素等耐药;同时根据GenBank中已报道的沙门氏菌毒力因子ivnA和ivnE的基因序列,设计两对特异性引物对该菌进行PCR检测,结果在该菌中成功扩增并检测出ivnA和ivnE基因。本试验尝试了沙门氏菌的PCR检测方法,为该分子诊断技术的全面推广奠定了良好基础,也为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了科学的实验数据。

全耐药鲍曼不动杆菌分子分型和分子流行病学调查

欧阳萍;黄晶;雷连成;尹立子;林花;吕爽;韩文瑜;

2009, 0(10): 161-164.

摘要 ( 125 )

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重复片段引物PCR和随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对临床分离全耐药不动杆菌分子分型,并进行流行病学调查。从ICU病房感染多重耐药不动杆菌患者的标本分离不动杆菌,碱裂解法提取全基因组,重复片段引物PCR(Rep-PCR)和随机引物扩增(RAPD),对8株临床分离的全耐药菌基因分型,并与生物学分型和质粒分型比较,调查医院流行全耐药菌的基因型。结果显示,8株分离菌经两对重复片段引物分型可分为6种和4种基因型,经随机引物分型为4种和3种基因型,经质粒分型可分为2种基因型,生物学分型归属为1种表型。PCR方法用于全耐药不动杆菌分子分型简便易行,重复性好,适合医院感染流行病学调查,本医院同一部门出现多种基因型,各科室间不存在交叉传染。

抑制Rent1表达对HeLa细胞黏附能力的影响

宋关斌;唐开福;

2009, 0(10): 165-168.

摘要 ( 104 )

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Rent1是无义介导的mRNA降解(NMD)通路中的关键因子之一,通过引导含有提前出现的终止密码子(PTC)的mRNA至P-body,从而引发mRNA降解。为了进一步研究Rent1的生理功能,应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Rent1的表达。试验发现,抑制Rent1的表达能够增强HeLa细胞对纤维粘连蛋白的黏附能力,另外,抑制Rent1的表达能够增加整合素基因ITGA2、ITGA3、ITGA6、ITGB5的表达。

效应分子Map、EspF在致病性大肠杆菌致细胞线粒体功能障碍中的作用

杨健;朱红;任碧轩;

2009, 0(10): 169-172.

摘要 ( 134 )

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用自杀质粒、基因等位交换方法构建致病性大肠杆菌(EPEC)效应分子Map或EspF缺失删除株Δmap、ΔespF和ΔmapespF,并用PCR和蛋白印迹技术(Western blot)对删除株进行鉴定;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测删除株感染HeLa细胞后细胞MMP改变。试验结果表明,Δmap、ΔespF和ΔmapespF等删除株成功构建,效应分子Map和EspF可以单独或协同引起细胞线粒体功能障碍。

玫瑰微球菌中treZ基因在毕赤酵母中的表达研究

杨蕾蕾;袁其朋;李文进;孙新晓;

2009, 0(10): 173-177.

摘要 ( 95 )

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首次将玫瑰微球菌中麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)treZ基因序列连接到表达载体pPICZαA中,通过电转化法将构建好的表达载体分别转入巴斯德毕赤酵母GS115和KM71菌株中。利用含有Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,并经PCR、SDS-PAGE电泳以及Western blot最终验证海藻糖水解酶基因treZ已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,并且得到了预期的表达。

荧光定量PCR法检测重组汉逊酵母中HBsAg基因的拷贝数

邵强;冯真真;张勇朝;潘若文;徐玉国;

2009, 0(10): 178-180.

摘要 ( 171 )

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重组汉逊酵母基因中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和检测传代稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为研究和分析重组基因的重要内容。利用快速、灵敏的荧光定量PCR法检测外源基因HBsAg拷贝数,以Mox基因为内源参照基因,通过梯度稀释法,建立了Mox基因和HBsAg基因的循环数(Ct值)与起始模板数的相关标准曲线,其相关系数分别达到0.9996和0.9982。通过比较目的基因HBsAg和内源参照基因Mox在同一荧光强度下出峰的循环数,获得了目的基因HBsAg在重组汉逊酵母中的拷贝数为39。发酵前后HBsAg基因在重组汉逊酵母中稳定存在,发酵前后拷贝数相差均小于6.2%。本方法快速、简便、准确,可以满足基因拷贝数检测的需要。

铜绿假单胞菌荧光实时定量PCR标准品的构建

孙飞龙;邱志刚;金敏;郭向飞;王新为;吴道澄;李君文;

2009, 0(10): 181-184.

摘要 ( 109 )

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构建了荧光实时定量PCR标准品以检测水中的铜绿假单胞菌。利用所报道的铜绿假单胞菌gyrA基因为目的基因设计引物,通过培养细胞,煮沸法裂解细胞后做PCR,电泳,胶回收,然后与pMD19-TVector连接并转化到感受态大肠杆菌中;氨苄青霉素筛选出白色菌落,菌落PCR及测序鉴定其特异性,根据OD值确定浓度,制备梯度浓度参考标准品,制作标准曲线,检测水样品中铜绿假单胞菌的菌量。

基于氨单加氧酶基因的自养脱氮菌群结构分析

郑雪松;龚钢明;

2009, 0(10): 185-188.

摘要 ( 176 )

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全程自养脱氮是一种在高氨氮低溶氧条件下完全由自养菌群作用脱除氮素的现象。以全程自养脱氮污泥为研究对象,特异性扩增氨单加氧酶活性基因amoA片段,建立克隆文库并对克隆序列进行系统发育学分析,考察全程自养脱氮系统从建立到退化过程中氨氧化菌的结构变迁。结果表明:Nitrosomonas oligotropha和Nitrosomonas europaea细菌是系统中的主要氨氧化菌,而随着系统的退化前者逐渐被后者完全取代,而氨氧化菌的种群变迁可能并不是全混流系统全程自养脱氮效率下降的原因。

耐热DNA聚合酶基因双元载体的初步构建

梁雪莲;关彩蝶;柳勇;廖伯强;

2009, 0(10): 189-193.

摘要 ( 96 )

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TaqDNA聚合酶是PCR反应中的重要试剂,它具有结构性稳定和耐高温的特性,有能在90℃以上合成DNA的能力,因此被广泛使用于DNA扩增技术当中,但是国内尚未报道有关TaqDNA聚合酶基因用于转基因的研究。若将此耐热基因转入某些经济作物中培育耐热新品种,将会有很好的前景和实用价值。本试验将初步构建TaqDNA聚合酶的基因表达双元载体。通过引物设计,用PCR法从含有Thermus aquaticus DNA polymerase克隆基因的散装TaqDNA聚合酶中扩增耐热DNA聚合酶基因,得到约2.5kb的DNA片段。扩增片段连接到质粒pUC19中测序证实是TaqDNA聚合酶基因,再将该片段重组到双元载体pBin19中,通过蓝白筛选选择重组子,构建耐热DNA聚合酶的基因双元载体pBin19-Taq。对其作进一步的加工,即插入植物启动子和增强子等后,可通过土壤农癌杆菌的介导作用,用作植物转基因之用。

产氢菌的分离鉴定及其产氢特性研究

刘合钦;徐莉;周翔南;付强;闫云君;

2009, 0(10): 194-197.

摘要 ( 85 )

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从河底污泥中分离到一株产氢菌,通过16SrDNA序列和系统发育分析,鉴定为克雷伯氏菌属,命名为Klebsiella sp.HQ-3。运用单因子试验考察了摇瓶发酵培养基中碳源、氮源、无机盐等因素对克雷伯氏菌HQ-3发酵产氢的影响,并对其产氢特性做了初步研究。结果表明,克雷伯氏HQ-3在葡萄糖浓度为24g/L,蛋白胨为18g/L,KH2PO4为8g/L时具有较高产氢量,其最佳产氢初始pH为8.0左右。

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