生物技术通报

张文银;安永平;王彩芬;马静;

2008, 0(05): 1-4.

摘要 ( 107 )

PDF (142KB) ( 591 )

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经过12年的产业化发展,转基因作物研究取得了较大进展。相关外源基因的转入使抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆、品质改良和功能性等作物相继问世。转基因大豆、玉米、棉花和油菜已经大面积种植,产生了极大的经济效益。2007年全球转基因作物的种植面积达到1.143亿hm2。综述了主要转基因作物研究现状及其产业化进展,并对我国转基因作物产业化应解决的问题进行了论述。

植物miRNA抗胁迫机理研究进展

徐涛;张富春;

2008, 0(05): 5-9.

摘要 ( 151 )

PDF (144KB) ( 866 )

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植物microRNA(miRNA)是一类约有21个核苷酸组成的小RNA分子,属于非编码单链RNA家族。miRNA与靶mRNA互补配对结合,以抑制基因表达或切割mRNA的方式,实现基因的负调控。miRNA对植物基因表达、生长发育和抵抗胁迫等有十分重要的影响。综述了植物miRNA特点以及miRNA抗胁迫机理的最新研究进展。

植物叶绿素突变体及其分子机理的研究进展

邢才;王贵学;黄俊丽;吴金钟;

2008, 0(05): 10-12.

摘要 ( 155 )

PDF (116KB) ( 1166 )

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叶绿素是植物叶绿体内参与光合作用的重要色素,叶绿素突变是一种明显的性状突变,其在理论研究和实际应用方面具有重要的意义。综述了植物叶绿素突变体的种类、遗传及突变的分子机理研究进展,着重介绍了突变的分子机理研究进展。

马铃薯晚疫病抗病基因研究进展

周军会;宋扬;张永强;

2008, 0(05): 13-17.

摘要 ( 147 )

PDF (143KB) ( 354 )

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马铃薯晚疫病是马铃薯和番茄等茄科植物中最主要的病害之一,每年都引起巨大的经济损失。基因工程技术的发展为马铃薯晚疫病的防治工作提出了新的契机,从晚疫病抗性品种中筛选出具有高持久抗性的抗病基因,并将其转化到栽培品种中去,无疑是我们开发持久性晚疫病抗性的最快捷的手段。到目前为至,已经有十几个晚疫病抗性基因从S.demissum,S.bulbocastanum,S.berthaultii,S.mochiquense和S.pinnatisectum等抗性马铃薯品种中鉴定出来并已定位在马铃薯染色体基因组上,并有4个被克隆出来(R1,R3a,Rpi-blb1/RB和Rpi-blb2)。主要概述了马铃薯晚疫病抗病基因的研究现状和发展前景。

盐地碱蓬耐盐相关基因克隆研究进展

陈国强;王萍;

2008, 0(05): 18-21.

摘要 ( 105 )

PDF (219KB) ( 623 )

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盐地碱蓬是一种生长于盐碱地和海滨沙滩的盐生植物,富含氨基酸、维生素、矿物质等,极具开发价值。由于其具有很强的耐盐性,人们日益重视其耐盐机理的研究。目前对其耐盐机理的研究已经进入到耐盐基因的克隆、结构分析、功能研究等方面。综述了近年来盐地碱蓬与耐盐相关的基因克隆、结构及功能分析等方面的研究进展。

试管苗长期继代培养中的形态发生能力与遗传稳定性

刘玲梅;汤浩茹;刘娟;

2008, 0(05): 22-27.

摘要 ( 122 )

PDF (175KB) ( 581 )

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在植物组织培养过程中,继代培养是其中的重要环节,而长期继代则是种质资源离体保存的必要手段。综述了长期继代培养对植物试管苗形态发生能力和遗传稳定性的影响,探讨了继代培养过程中影响培养物形态发生能力和遗传稳定性的主要因素。

克隆动物食品的安全性评估——国外综述

钟舒乐;

2008, 0(05): 28-30.

摘要 ( 107 )

PDF (113KB) ( 428 )

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综述了美国、欧盟和其他各国对克隆动物肉和奶等食品食用安全性的评估。

鱼用基因工程疫苗载体的研究进展

袁野;王秀利;郭设平;

2008, 0(05): 31-34.

摘要 ( 105 )

PDF (114KB) ( 358 )

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疫苗载体是基因工程疫苗研制过程中的一种应用极为广泛的工具。它在病原基因的表达方面显示了独特的优越性及广阔的开发和应用前景。应用疫苗载体已成功构建了多种鱼用基因工程疫苗。现就鱼用基因工程疫苗载体的研究进展进行综述,以期为新型疫苗的研制提供参考。

ABC转运蛋白研究的新进展

马云芳;梁国鲁;裴得胜;崔宗斌;

2008, 0(05): 35-41.

摘要 ( 318 )

PDF (357KB) ( 1343 )

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ABC转运蛋白主要包括P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和乳腺癌耐药蛋白,它们属于同一家族,具有保守的功能结构域和多样化的生物学功能。ABC转运蛋白部分成员的过表达与肿瘤细胞的多药耐药性(MDR)密切相关,是导致化疗失败的主要原因。随着对MDR机制认识的深入,针对多药耐药蛋白的特异结构域已设计出多种形式的MDR逆转药物。近年来发现,ABC转运蛋白广泛存在于多种正常的组织和器官,参与药物和内、外源毒素的吸收、分布和排泄,行使解毒和防御保护的作用。因此,通过转植ABC转运蛋白基因有可能降低经济鱼类、虾等水产品中有毒污染物的积累。

纳米材料在蛋白多肽富集研究中的应用进展

叶能胜;谷学新;

2008, 0(05): 42-44.

摘要 ( 151 )

PDF (87KB) ( 374 )

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复杂样本中低丰度蛋白的检测是蛋白质组学发展的难点和瓶颈。发展快速富集方法是检测低丰度蛋白有效途径之一,近年来研究表明纳米材料对蛋白/多肽存在不同程度的富集作用。结合国内外文献报道,对纳米材料在蛋白/多肽富集中的应用概况加以评述。

丙型肝炎病毒基因突变与免疫逃逸

房恩贞;夏雪山;

2008, 0(05): 45-47.

摘要 ( 236 )

PDF (118KB) ( 380 )

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免疫逃逸(Immune evasion)是指病原体逃避机体免疫监控的现象。在宿主和病毒的长期共同进化过程中,病毒形成了各种逃逸机制以逃避宿主的免疫监控,其中病毒基因变异是最主要机制。丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)在感染个体中表现出极高的基因异质性,能有效地逃逸机体免疫识别和破坏宿主免疫应答的能力,HCV还可侵袭免疫细胞来抑制机体的免疫功能,而建立HCV持续性感染。了解HCV病毒突变与免疫逃逸机制将会为预防和控制丙型肝炎提供依据。

乳酸菌作为口服疫苗载体的研究进展

余丽芸;王桂华;唐彦君;

2008, 0(05): 48-50.

摘要 ( 140 )

PDF (84KB) ( 509 )

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乳酸菌是一类重要的工业菌株,是食品级安全菌。利用乳酸菌作为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。近年来对于乳酸菌口服疫苗的研究成为热点,并在此方面取得了突破性成果。

霍乱毒素B亚单位在疫苗研究中的应用

魏刚才;赵朴;郑玉姝;

2008, 0(05): 51-53.

摘要 ( 152 )

PDF (87KB) ( 281 )

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CTB不同于CT,没有毒性,在体内和体外CTB具有强的免疫调节活性。越来越多的证据表明CTB在疫苗研究中发挥重要作用。深入理解CTB的免疫调节机制及其在疫苗研究中的应用,有助于设计新疫苗和改良疫苗。因此,将对CTB在疫苗研究中的应用进展进行综述。

富集微量元素钼的研究及在微生物中的应用

马福荣;贾乐;杨凤苓;任轩;李明才;

2008, 0(05): 54-56.

摘要 ( 109 )

PDF (83KB) ( 367 )

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钼是动物和人体所必需的微量营养元素,是固氮酶、硝酸还原酶、黄嘌呤氧化酶和亚硫酸氧化酶等多种酶的重要组成成分,参与和影响机体内多种代谢过程,如细胞内的电子传递、机体内铁代谢、醛氧化等。钼对癌症、肝脏疾病、心脑血管疾病以及克山病、龋齿、小细胞低色素性贫血和区域性脱发等地方病有很好的防治作用。

多聚磷和聚磷酶研究进展

王智;许雷;

2008, 0(05): 57-59.

摘要 ( 93 )

PDF (88KB) ( 389 )

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多聚磷在生物体内广泛存在,并且发挥重要作用。生物体内的多聚磷是由聚磷酶催化合成的。概述了多聚磷的生物学功能,聚磷酶的功能及多聚磷和聚磷酶的应用。

异养硝化作用酶学研究进展

宋琴;许雷;

2008, 0(05): 60-62.

摘要 ( 169 )

PDF (248KB) ( 1314 )

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对异养硝化作用作了简单的概述,着重从异养硝化作用和好氧反硝化作用的偶联机理、其中涉及的关键酶和相关基因几方面综述了异养硝化作用的研究进展,最后还提出了研究展望。

有机溶剂耐受菌的研究进展

王洪涛;王孝平;玄光善;

2008, 0(05): 63-66.

摘要 ( 113 )

PDF (115KB) ( 635 )

相关文章 | 计量指标

有机溶剂耐受菌是一类新的能与有害影响因素竞争并能在有机溶剂中茁壮生长的微生物。介绍了有机溶剂对细菌的毒性机理,有机溶剂耐受菌的获得方法,讨论了有机溶剂耐受菌的两种反应形式,并对有机溶剂耐受菌的应用进行了展望。

系统遗传学与合成生物学——21世纪的生物工程产业化

曾(杰)邦哲;吴超;

2008, 0(05): 67-71.

摘要 ( 113 )

PDF (140KB) ( 352 )

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基因型-表现型复杂生物系统由多基因群调控,细胞发生的信号传导路径、多基因相互作用与细胞系谱定位形成生物系统的结构-图式发生遗传学,但分子、细胞和器官的结构、图式形成机理还不很清楚。复杂生物系统的图式演化是细胞的物种进化、细胞形态发育的细胞发生非线性动力学过程,包括:1)物种基因组结构内等位基因替代构成物种内基因多样性调控;2)物种间进化的基因组结构层次级别的自组织化。系统理论应用于系统生态学(Van Dyne GM.1966)、系统生理学(Sagawa K.1973)、系统心理学(Titchener EB.1992)、系统生物医学(Kamada T.1992)、系统生物学(Zieglgansberger W,TolleTR.1993)、系统生物工程与系统遗传学(ZengBJ.1994)的建立,以及遗传学机理的生物系统分析。细胞的基因组结构自组织化形成生物的系统发生,基因组的结构变化形成物种的适应变异,生物体结构的基因组复制与表达的细胞自组织化构成生物个体发生。基于系统遗传学的工程应用,合成生物学探索生物系统泛进化,包括人工生物体的遗传工程、基因调控和仿生智能的纳米生物机器,构成生物系统的人工引导进化。

毛细管电泳技术在蛋白质翻译后修饰中的应用

张东阳;晏月明;

2008, 0(05): 72-74.

摘要 ( 97 )

PDF (114KB) ( 426 )

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蛋白质中翻译后修饰蛋白的鉴定是蛋白质组学研究的主要内容之一。毛细管电泳技术由于其高分辨能力、低样品上样量、易操作性和较少的分析时间等特点,迅速发展成为一种重要的分离技术。通过毛细管电泳与质谱连用,可以得到许多关于蛋白质鉴定、纯化和结构改变方面的十分有价值的信息。对毛细管电泳技术进行了简单介绍,并且就其在蛋白质磷酸化和蛋白质糖基化研究中的应用进行了综述。

RNA干扰技术在植物线虫基因功能研究及虫害防治方面的应用

王高峰;冯欣;彭德良;孙建华;

2008, 0(05): 75-80.

摘要 ( 103 )

PDF (171KB) ( 368 )

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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA特异降解的过程,具有高效性、非绝对特异性和表型可遗传性。其在遗传育种、基因功能研究、药物研发等各方面具有广泛的运用前景。近年已应用到植物线虫基因功能的研究中。随着对植物线虫基因组及基因功能研究的不断深入,RNAi技术在植物线虫防治方面的研究也取得了很大进展。

RNA沉默技术及其在烟草抗病毒研究中的应用

尚志强;

2008, 0(05): 81-83.

摘要 ( 101 )

PDF (116KB) ( 483 )

相关文章 | 计量指标

RNA沉默技术是一项基因沉默新技术。在抗病毒研究中,人为地将与病毒或宿主基因(宿主基因编码的蛋白质对病毒很重要而对宿主本身作用很小或不起作用)同源的双链RNA(double strand RNA,dsRNA)导入生物体内,引起与其同源的基因发生沉默,从而抑制病毒复制,达到抗病毒的目的。因此,RNA沉默技术技术在抗病毒研究中倍受关注,并取得了显着成绩。主要对RNA沉默技术的相关知识及其在烟草抗病毒中的应用进展作一综述。

酵母的分子生物学鉴定

唐玲;刘平;黄瑛;杨江科;闫云君;

2008, 0(05): 84-87.

摘要 ( 175 )

PDF (134KB) ( 539 )

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酵母种类繁多,与人类的关系极其密切,但目前由于研究方法的不同,对于酵母的分类还存在着不同的分类体系。而准确快速的对酵母进行鉴定,既可以有效防止食品腐化变质,又可以增加经济效益,同时也为酵母的分类鉴定奠定一定的理论基础。对常用的核糖体DNA鉴定法、DNA指纹图谱鉴定、脉冲场电泳鉴定、实时PCR和基因芯片等分子生物学鉴定方法在酵母鉴定工作中的研究情况进行了比较。

离子液体双水相体系及其在生物分离中的应用

徐晓冬;丹媛媛;李欣欣;张密林;

2008, 0(05): 88-91.

摘要 ( 123 )

PDF (114KB) ( 590 )

相关文章 | 计量指标

作为一种高效而温和的新型绿色分离体系,离子液体双水相体系结合了离子液体和双水相体系的优点,因此倍受国内外研究者的青睐。介绍了双水相萃取技术的原理和离子液体双水相体系;综述了离子液体双水相体系在生物分离中的研究进展,主要包括抗生素、蛋白质、和食用色素等的萃取分离;并展望了离子液体双水相体系在生物分离中的应用前景。

以耐草甘膦2mG2-epsps基因为选择标记的玉米转化体系的建立

赫福霞;郎志宏;陆伟;林敏;张杰;黄大昉;

2008, 0(05): 92-97.

摘要 ( 142 )

PDF (1136KB) ( 625 )

相关文章 | 计量指标

转化细胞的筛选和再生是植物遗传转化体系中重要的组成部分,筛选剂的选择和筛选压力的高低直接影响着外源基因的转化率。以草甘膦异丙胺盐为筛选剂,通过比较在不同的草甘膦浓度及筛选时间的条件下,玉米愈伤组织生长和分化情况,发现经1mM的草甘膦异丙胺盐筛选15d后玉米愈伤组织分化受到明显抑制,故以此作为玉米遗传转化实验中的筛选压力。通过基因枪轰击,将构建好的pMAGUHM载体(其上携带有抗草甘膦基因2mG2-epsps基因)转化到玉米愈伤组织,利用草甘膦筛选得到耐草甘膦植株80株,其中PCR检测阳性植株为36株,转化率为45%。

没顶淹涝早期水稻基因差异表达分析

陈昊;赵森;肖国樱;

2008, 0(05): 98-102.

摘要 ( 123 )

PDF (354KB) ( 397 )

相关文章 | 计量指标

水稻(Oryza sativa L)耐淹品种FR13A在分蘖期进行没顶淹涝处理。分别取淹涝0h,2h,4h,8h,16h,32h的叶片进行mRNA差异显示分析,获得8个差异表达的cDNA片段。利用反式Northern斑点杂交法去除4个假阳性片段,对4个阳性片段(DF8、DF9、DF10、DF11)测序后进行同源性分析,其中一个片段(DF8)的蛋白产物与WD-40重复蛋白高度同源,另一个片段(DF11)的蛋白产物与植物生长素应答蛋白有较高同源性,其余2个没有找到同源蛋白质序列。

Floral-dip法大豆GmDREB转录因子转拟南芥研究

王晓飞;程宪国;王迎波;吴庆钰;白由路;梁永超;

2008, 0(05): 103-107.

摘要 ( 90 )

PDF (573KB) ( 310 )

相关文章 | 计量指标

DREB(dehydration responsive element binding)转录因子通过调控下游多个抗逆相关基因的表达,能有效提高植物的抗逆性。将构建的植物高效表达载体GmDREB::pCAMBIA1304,借助优化的floral-dip法,转入模式植物拟南芥,并经潮霉素Hygromycine(40～50mg.L-1)抗性筛选得到22棵抗性植株。对抗性植株再进行PCR和GUS检测获得19颗阳性苗,阳性率为86.3%。对T1代种子进行抗性分离比例统计,有4个株系的分离比例接近3:1,符合孟德尔遗传定律,说明外源基因GmDREB在这些株系的染色体中可能是单拷贝插入。继续对上述4个株系的后代进行抗性筛选,现已得到2个纯合的转基因株系。导入的报告基因GUS组织染色检测表明,转入大豆DREB基因在拟南芥的根系和子叶中均有大量表达,并在叶脉中表达。

Vip3A基因植物表达载体的构建及其对烟草的遗传转化

马作江;邓伟;杨迎伍;李正国;

2008, 0(05): 108-111.

摘要 ( 92 )

PDF (371KB) ( 352 )

相关文章 | 计量指标

为了研究Vip3A基因在转基因抗虫植物中的应用,利用PCR技术克隆了苏云金芽孢杆菌的Vip3A基因和烟草的EF1α启动子,以pBI121质粒为基本载体,构建了分别由组成型CaMV35S启动子和花特异表达的EF1α启动子驱动Vip3A基因的植物表达载体pBIVip3A和pBIEFVip3A,并通过农杆菌介导的方法对烟草进行了遗传转化。经PCR检测,外源基因已整合到烟草基因组中。

甘蔗叶片总蛋白提取及双向电泳条件的改进

郭晋隆;叶冰莹;黄庆煌;陈由强;陈如凯;

2008, 0(05): 112-114.

摘要 ( 86 )

PDF (303KB) ( 374 )

相关文章 | 计量指标

针对甘蔗叶片中含有大量酚类和色素等干扰物质的现象,通过对甘蔗叶片蛋白样品制备、上样量和电泳条件等方面做了必要改进,建立了一套适用于甘蔗叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法。

香蕉转化中的抗褐化及再生研究

李敬阳;张建斌;徐碧玉;金志强;

2008, 0(05): 115-117.

摘要 ( 102 )

PDF (391KB) ( 574 )

相关文章 | 计量指标

香蕉在进行遗传转化过程中,外植体容易褐化,从而降低了再生频率,影响到遗传转化的效率。为降低香蕉转化过程中外植体的褐化率,采用香蕉(Musa AAA group cv.Brazilian)未成熟雄花作为外植体,以农杆菌介导法进行遗传转化。结果表明,当改良的MS培养基中铵态氮与硝态氮(NH4+/NO3-)的摩尔比为20.6:67.6时,具有较强的抗褐化能力。当6-BA浓度为1.0mg/L时,外植体易于诱导出胚状体。

可可粉中几种外源植物源性成分的PCR检测

金永生;朱卫娟;廖祥儒;

2008, 0(05): 118-121.

摘要 ( 95 )

PDF (561KB) ( 443 )

相关文章 | 计量指标

大豆粕、芝麻粕、花生壳和板栗壳是常见的几种可可粉外源掺假成分,根据它们所特有的基因片段设计引物,以高等植物18SrDNA基因为内参照基因,应用改良CTAB法抽提材料DNA,对分离的DNA进行PCR扩增并分析,建立了可可粉中这几种外源植物成分的快速检测方法。用建立的PCR方法对可可基因组进行扩增,均无特异条带;扩增出的PCR产物测序结果表明与目标片段一致;将各材料DNA倍比稀释,分别对各个稀释度的DNA进行PCR扩增。结果表明,该方法对大豆粕、芝麻粕、花生壳和板栗壳DNA检测的敏感度分别可达82.5pg/μl、32.5pg/μl、124pg/μl和157pg/μl。模拟样品试验发现,该方法的最低检测限(w/w)分别达0.5%、0.5%、5%和5%,可作为可可粉及其制品中这几种外源成分鉴别检测的有效方法。

拟斯卑尔脱山羊草基因的克隆与表达研究

陈鹏;汪长东;黄阜峰;汪越胜;杨广笑;何光源;

2008, 0(05): 122-125.

摘要 ( 133 )

PDF (456KB) ( 526 )

相关文章 | 计量指标

Avenin-like基因是近年来发现的一类新基因。根据小麦avenin-like基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对拟斯卑尔脱山羊草(Aegilops speltoides,SS)的基因组DNA进行avenin-like基因扩增、克隆、序列测定和表达分析,发现了一个新型avenin-like基因。基因长855bp,编码284个氨基酸残基,分子量约为33kD。Southernblot结果表明其属于多基因家族。RT-PCR证实了avenin-like基因在籽粒胚乳中特异性表达。其对应的氨基酸序列含有18个半胱氨酸残基,可以形成7对分子内二硫键。研究表明Avenin-like蛋白是一类新型的储藏蛋白。这为小麦加工品质的改良提供了理论依据和遗传资源。

亚麻遗传多样性的RAPD分析

何东锋;陈信波;邓欣;龙松华;高原;王进;王玉富;

2008, 0(05): 126-129.

摘要 ( 82 )

PDF (902KB) ( 381 )

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从600个随机引物筛选出28个扩增稳定性较好的引物,对18份来自不同国家和地区的亚麻资源遗传多态性进行RAPD分析。结果表明:共扩增出条带529,其中多态性条带201,总的多态性百分率(PPB)为38.0%。用NTSYSpc(2.10)软件进行UPGMA聚类分析,18个亚麻品种遗传距离为0.0469～0.1332之间,可分3大类,其中红木5号与匈牙利5号亲缘关系最近,ABYSSINIA(BROWN)和匈牙利5号遗传距离相差最显着,达到0.1332。

基于rhaSR嵌合操纵子的穿梭表达载体及其在鱼腥藻细胞中表达的初步研究

贺根和;肖宜安;许东风;喻富根;

2008, 0(05): 130-135.

摘要 ( 90 )

PDF (892KB) ( 463 )

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通过PCR等基因重组技术,以pKT-215(起源于RSF1010)为载体,构建了带有PR序列(含rhaSR操纵子表达调控元件、rhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子)和PT序列(含rhaSR操纵子表达调控元件及rhaT基因)的二种穿梭表达载体pKT-PTR、pKT-PR。其中,在RhaR基因上游设计和插入了增强的SD序列。首先将pKT-PTR、pKT-PR分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同培养基条件下,即含鼠李糖与不含鼠李糖的培养基中进行表达,紫外分光光度计测定GST蛋白(谷胱甘肽-S-转移酶)的活性。结果表明,含嵌合操纵子的穿梭表达载体能在L-鼠李糖的诱导下表达,gst基因的表达量诱导条件下比非诱导条件下高3倍左右,且表达载体上的rhaT基因并不能提高gst的表达;其次,利用三亲结合的方法将2种表达质粒转入鱼腥藻Anabaena sp.PCC7120中,抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻,并以转基因藻的质粒DNA为模板进行PCR检测。最后,转基因藻GST酶活力分析结果表明,嵌合操纵子PR在蓝藻细胞中的诱导表达效率极低,表达条件还需进一步优化。尝试将诱导型的操纵子转入蓝藻,具有潜在的应用价值。

体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用

郭进军;李青岭;周倩云;曾爱忠;黄爱龙;

2008, 0(05): 136-139.

摘要 ( 100 )

PDF (362KB) ( 353 )

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根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GSTPull-down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。

TAT-MafA融合蛋白诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素

罗海兰;毋慧玲;路君;卢大儒;沈坤堂;金坚;

2008, 0(05): 140-144.

摘要 ( 135 )

PDF (426KB) ( 608 )

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借助蛋白质转导技术,利用胰岛β细胞转录因子MafA诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素,为糖尿病的治疗提供新的方法。将TAT基因与MafA基因一起插入p32a(+)载体中,构建TAT-MafA融合蛋白原核表达载体,转化BL21获得表达菌株,经IPTG诱导和Ni柱亲和层析纯化TAT-MafA融合蛋白,用1μM浓度的该融合蛋白孵育IEC-6细胞12h和24h后,分别进行进胞检测和胰岛素表达检测。实验结果表明,细胞免疫荧光和Western-blot方法检测到经TAT-MafA融合蛋白作用12h后的IEC-6细胞中有该蛋白,并经细胞免疫荧光和RT-PCR的方法检测出TAT-MafA作用24h后的IEC-6细胞中有胰岛素的表达。因此,TAT-MafA融合蛋白可以高效进入小肠细胞系IEC-6细胞,并且进胞后仍保持MafA原有的生物学活性,能启动胰岛素基因的表达,诱导IEC-6成为胰岛素表达细胞。

抗登革病毒2型E蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

陶萍;帅光泽;赖梅梅;王雪梅;郑健;黄爱龙;

2008, 0(05): 145-148.

摘要 ( 96 )

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为了制备可用于胶体金快速检测试纸条的抗登革病毒2型(DEN2)E蛋白单克隆抗体(mAb),通过基因克隆获得E基因与质粒pET32a(+)的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPGT诱导表达重组蛋白。以DEN2重组E蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DEN2E蛋白的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类。结果表明获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(7C7),其抗体亚类为IgG1。Western blot显示该株mAb能特异识别重组pET32a-DEN2E蛋白。因此,成功制备出抗DEN2E的1株mAb,为建立快速特异检测登革病毒感染的实验方法提供了有力的工具。

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

张海棠;王自良;刘玺;钟华;范国英;

2008, 0(05): 149-153.

摘要 ( 95 )

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重氮化法将克伦特罗(CL)偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法(GA)合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫Balb/C小鼠。细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体(CLmAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CLmAb,并测定其亲和性。依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,应用CLmAb研制CL残留快速检测免疫试纸(CL-Strip),并测定其性能。结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12-6H6,亲和常数(Ka)为1.76×1010L/mol。CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒和GC/MS相当,符合率为100%。CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测。

DEC-205单抗耦联长循环免疫脂质体的制备及其体外靶向

胡雪;曾照芳;陈里里;

2008, 0(05): 154-157.

摘要 ( 126 )

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为使脂质体将所包封的药物或抗原高效地递呈给树突状细胞(dendritic cells,DCs),诱导产生强烈的T细胞免疫应答或特异性免疫耐受,采用薄膜分散法制备了包裹FITC-dextran的纳米脂质体;用DSPE-PEG(2000)对脂质体膜进行修饰使之具有长循环功能;用异型双功能交联剂SPDP将抗小鼠DEC-205单克隆抗体耦联于脂质体表面使之具有主动靶向DCs的能力。稳定性实验表明脂质体在4℃贮存7d后粒径分布变化较小,FITC-dextran累积泄漏率小于7%;体外结合实验证明耦联抗DEC-205的免疫脂质体(anti-DEC-205 iLPSM)可特异性地识别DCs,并作为良好载体将FITC-dextran带入DCs浆内。成熟树突状细胞(mDC)与未成熟树突状细胞(iDC)均可高效摄取anti-DEC-205 iLPSM,iDC摄取能力更强。anti-DEC-205 iLPSM有望成为一种新型DC疫苗应用于临床。

禽流感病毒核蛋白在噬菌体表面的展示

王新卫;何宏轩;毕英佐;马静云;王宪文;詹爱军;

2008, 0(05): 158-162.

摘要 ( 108 )

PDF (532KB) ( 515 )

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利用PCR技术,扩增禽流感病毒(AIV)核蛋白基因片段,将其克隆至pR质粒的T4噬菌体SOC基因C末端获得重组质粒pR-np,以此重组载体转化大肠杆菌Escherichia coli2(E2),用溶菌酶缺陷噬菌体T4-z1感染重组E2菌,重组载体与缺陷噬菌体T4-z1基因发生同源重组,将np基因整合到噬菌体基因组中,用PCR方法筛选重组噬菌体并命名为T4-z1-np。经Western blot免疫电镜与ELISA检测证实,T4-z1-np表达的NP融合蛋白具有免疫学活性。结果表明,AIV核蛋白成功地在T4噬菌体表面展示,为禽流感防治奠定了基础。

奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC基因的克隆及序列分析

王林锋;杨宏军;杨少华;王长法;高运东;仲跻峰;葛利江;

2008, 0(05): 163-165.

摘要 ( 102 )

PDF (411KB) ( 427 )

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根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列,设计了一对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序。结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。Curli菌毛csgC基因的克隆,为获得重组csgC蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。

中华鲟YY肽基因电子克隆表达与生物信息学分析

陈晓武;施志仪;

2008, 0(05): 166-170.

摘要 ( 102 )

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以日本鳗鲡的PYY基因cDNA序列为信息探针,搜索中华鲟EST文库,得到中华鲟PYY的EST序列,经过生物信息学分析。结果表明,此cDNA序列包含完整的开放读码框,所编码的蛋白质包含97个氨基酸,前28个氨基酸为信号肽,分子量为11.03kD,理论等电点为5.54。该蛋白序列和牙鲆、河豚以及斑马鱼的PYY肽同源性较高。其中36个氨基酸构成PAH结构域,由一个α螺旋结构和一个无规则卷曲区组成。包含中华鲟PYY在内的139条真核生物神经肽Y蛋白质序列比对结果显示,有6个氨基酸位点高度保守,其中有5个氨基酸位于α螺旋上,另外1个脯氨酸位于无规则卷曲区,提示α螺旋也可能起到重要作用。

细粒棘球蚴eg95基因的克隆以及原核融合表达

贾如;邹媛媛;李轶女;魏兆军;沈桂芳;

2008, 0(05): 171-175.

摘要 ( 97 )

PDF (451KB) ( 427 )

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从青海省羊源细粒棘球蚴提取基因组DNA,PCR扩增eg95基因并且克隆。测序结果表明该基因序列全长1262bp,由2个内含子和3个外显子组成,3个外显子分别为70bp、306bp和95bp。因此,推测其ORF为471bp,编码156个氨基酸。用RT-PCR方法扩增该基因的ORF,经克隆、DNAstar比对分析序列,它与预测的ORF序列100%相同。将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1,构建重组表达质粒pGEX-5x-1-eg95,将其转入表达菌株BL21中进行原核表达。表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,得到一条特异的蛋白条带;质谱鉴定证明表达的蛋白确实是eg95抗原蛋白;酶联接免疫吸附剂测定表明抗原抗体发生了特异性反应,进一步证明融合蛋白进行了正确表达,从而为囊型包虫病的研究奠定基础。

直接利用糖质原料产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌glyA基因序列分析

林琳;窦文芳;张晓梅;许泓瑜;许正宏;王正祥;

2008, 0(05): 176-180.

摘要 ( 119 )

PDF (573KB) ( 422 )

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以能够利用糖质原料产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)SYPS-062glyA基因为研究对象,比较C.glutamicum SYPS-062与C.glutamicum模式菌株ATCC13032的glyA基因的异同。分别以SYPS-062及ATCC13032基因组为模板,利用PCR技术获得丝氨酸羟甲基转移酶编码基因glyA。核苷酸序列分析结果表明,来源于SYPS-062和ATCC13032的glyA基因片段全长均为1305bp,编码434个氨基酸,分子量为46.5kD,基因的同源性为99.54%,存在6个核苷酸的差异,引起一个氨基酸残基的突变。将获得的基因分别在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。酶活测定结果显示,2种不同菌株来源的重组SHMT的比活力稍有差异,说明SYPS-062glyA基因的差异对其表达产物SHMT蛋白构型及功能影响不大。提示对于C.glutamicum SYPS-062能够利用糖质原料产L-丝氨酸的机制解析应进一步从glyA基因的转录水平、翻译水平及胞内SHMT辅酶的供给情况等方面进行深入研究探讨。

微小亚历山大藻麻痹性贝类毒素小鼠生物检测

柳俊秀;陈桃英;梁灵之;田晓玲;沈和定;胡乐琴;何培民;

2008, 0(05): 181-184.

摘要 ( 132 )

PDF (450KB) ( 415 )

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应用小鼠生物检测法对培养的微小亚历山大藻(LJX02株系)麻痹性贝类毒素进行了检测。首先建立微小亚历山大藻培养技术,利用对数期藻细胞接种,可使藻细胞处于快速生长,并在7d内藻细胞密度最高达到30000ml-1。从培养株系中提取的藻毒素,经液相质谱分析主要为GTX1/4和GTX2/3,其含量分别为12.23μg/ml和9.742μg/ml,12L藻体培养液中可获得18.35μgGTX1/4和14.61μgGTX2/3毒素量。采用小鼠生物检测法建立了藻毒素剂量-小鼠死亡时间曲线,其曲线方程为Y=74.017X-1.5896,将死亡时间t变为时间倒数1/t,GTX毒性MU取对数为logMU,得直线回归方程为Y=3.7009X-0.0858(R2=0.9824),求得了昆明小鼠一个鼠单位所代表的GTX1/4和GTX2/3毒素剂量分别为0.026μg和0.021μg。

PCR扩增血浆凝固酶基因检测致病性金黄色葡萄球菌

王英杰;王长法;陈营;安利国;杨桂文;仲跻峰;杨少华;杨宏军;

2008, 0(05): 185-188.

摘要 ( 114 )

PDF (247KB) ( 808 )

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金黄色葡萄球菌致病株能同时产生两种蛋白质,一种分泌于菌体外,另一种结合在菌体表面,它们能使含有抗凝剂的家兔或人的血浆凝固,称为凝固酶(Coagulase)。凝固酶是检验致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。试验根据GenBank公布的血浆凝固酶序列,设计特异PCR引物,利用聚合酶链式反应扩增出金黄色葡萄球菌凝固酶基因,克隆测序,与Genbank中已公布的序列同源性达到100%,并且检测结果与用兔血浆进行血浆凝固酶实验结果完全吻合,建立了金黄色葡萄球菌性乳腺炎的快速诊断方法。

产脂肪酶木霉菌株的筛选鉴定及酶学性质研究

隋聪颖;顾金刚;徐凤花;姜瑞波;

2008, 0(05): 189-192.

摘要 ( 97 )

PDF (643KB) ( 514 )

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筛选到4株可产生脂肪酶的真菌菌株,分别是153-1、13-2、30425和西1-1,经形态观察、ITS序列测方法鉴定,30425、153-1鉴定为Trichoderma harzianum,西1-1、13-2鉴定T.longibrachiatum。研究了脂肪酶的基本酶学性质,153-1、13-2、30425和西1-1酶的最适作用温度为45℃、40℃、20℃、20℃,最适pH为9.5、10.0、7.5、9.5,金属离子对153-1、13-2、30425和西1-1酶活的影响存在差异,其中Mn2+、Cu2+、Pb2+对4株菌株的酶活均为抑制作用,而Ba2+对4株菌株的酶活均为不同程度的激活作用。

基于微电极阵列的微生物电融合

霍丹群;姜志忠;曹毅;康红燕;侯长军;杨军;

2008, 0(05): 193-197.

摘要 ( 79 )

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利用自主研制的梳状交叉微电极阵列细胞电融合芯片系统,研究微生物电融合。在酶解浓度1.5%、酶解温度33℃、酶解时间3h、酶解pH值6.0、0.8mol/L山梨醇的渗透压条件下,获得生成率和再生率分别为95.2%和8.9%的微生物细胞原生质体。在脉冲峰值电压50V、持续时间80μs、8个脉冲、间隔1s的电融合条件下,该原生质体通过电融合获得一株菌株其乳化性能从62%提高到85%。

转基因作物对蜜蜂健康、蜜蜂产品食用安全和生态环境的潜在影响(下)

汪开治;

2008, 0(05): 198-200.

摘要 ( 120 )

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<正>1.3GM植物的基因可在蜜蜂的消化道中进行水平的转移吗?德国的蜜蜂专家Kaatz教授在2000年的一次电视谈话中,曾提到他的一些未发表的研究结果。他发现用耐除草剂的GM油菜的花粉喂饲蜜蜂,可

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