生物技术通报

杜洪伟;陈芬;肖国樱;

2008, 0(06): 1-6.

摘要 ( 73 )

PDF (401KB) ( 614 )

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当植物受到干旱胁迫时就会感受到水分的变化,表达产生各种耐旱蛋白包括耐旱功能蛋白、转录因子和激酶,从而抵御干旱胁迫。目前已经明确的耐旱信号途径主要有4条:其中2条是ABA依赖的信号途径,另外2条是不依赖于ABA的信号途径。DREB转录因子是不依赖于ABA的信号途径中的一个重要的转录因子。由于DREB转录因子以及这一信号途径在各种植物中具有很高的保守性,研究这一信号途径对于改良作物的耐旱性以及了解植物抵御干旱的信号交叉联系具有重要意义。综述了近几年来在DREB基因的克隆、表达调控以及遗传转化方面的研究进展,并对未来的发展进行了展望。

脱落酸对植物抗逆性影响的研究进展

刘红娟;刘洋;刘琳;

2008, 0(06): 7-9.

摘要 ( 183 )

PDF (183KB) ( 1556 )

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脱落酸(ABA)是一种重要的植物激素,受到生物胁迫和非生物胁迫的调控,在植物对胁迫环境抗逆性中发挥重要作用。综述了近些年来国内外有关ABA生理功能抗逆性研究的一些最新进展,重点介绍ABA在植物干旱、高盐、低温、病虫害等逆境胁迫反应中起重要作用,在植物保护和农林业生产中的应用有重要意义。

植物次生代谢途径的遗传修饰研究进展

刘蓉蓉;

2008, 0(06): 10-13.

摘要 ( 95 )

PDF (245KB) ( 892 )

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通过过量表达或反义抑制等遗传修饰手段,人们尝试对研究较为清楚的植物次生代谢途径进行了基因工程改造。对萜类、生物碱、苯丙烷类3类植物次生代谢工程的研究进展进行了综述。

植物表观遗传学相关研究进展

王霞;亓宝;胡兰娟;

2008, 0(06): 14-16.

摘要 ( 117 )

PDF (172KB) ( 1205 )

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表观遗传学是研究没有DNA序列变化,并且可以遗传的基因功能变化的学科。表观遗传在植物生长发育过程中起着极其重要的作用,现对其主要研究内容及相关进展进行综述。

高等植物类胡萝卜素代谢工程研究进展

周雨隆;陈丽梅;

2008, 0(06): 17-19.

摘要 ( 84 )

PDF (291KB) ( 556 )

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类胡萝卜素是自然界中种类繁多的天然化合物。植物类胡萝卜素由类异戊二烯碳骨架组成,并含有或没有环氧的、羟基或酮基基团。类胡萝卜素是人类饮食结构中不可缺少的重要成分,具有多种重要的保健功能,并且是安全的食品、饲料和化妆品着色剂。类胡萝卜素植物代谢基因工程的应用旨在增加特殊植物的营养价值、利用植物来生产特殊的类胡萝卜素、提高植物对光氧化的抵抗力及对植物的花色进行修饰等。

羊茅属植物内生真菌研究进展

杜永吉;曾会明;韩烈保;

2008, 0(06): 20-23.

摘要 ( 73 )

PDF (236KB) ( 567 )

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感染内生真菌的羊茅属植株在畜牧业和草坪业上具有重要的生态和经济意义。关于内生真菌与羊茅属植株互利共生的关系已有大量研究,就已报道的有关羊茅属内生真菌种类、内生真菌促进羊茅属植株生长发育以及内生真菌提高羊茅属植株抵抗生物胁迫和非生物胁迫的研究做一综述,指出羊茅属内生真菌研究中存在的问题并做出展望,以期更好地利用我国羊茅属内生真菌资源。

安全标记基因在转基因植物中的应用

符勇耀;杨迎伍;邓伟;李正国;

2008, 0(06): 24-29.

摘要 ( 119 )

PDF (387KB) ( 533 )

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转基因植物的抗性标记一直是转基因生物安全性争论的焦点,是限制转基因植物应用的瓶颈之一。筛选安全标记基因替代抗生素标记基因已成为解决转基因植物安全性和促进转基因植物应用的重要策略。综述了生物安全标记基因的产生背景、系统分类、筛选原理及不同起源的标记基因在植物基因工程中的应用和存在问题。选用植物内源标记基因已成为转基因植物安全标记基因研究的重要方向。

根癌农杆菌介导转化马铃薯与抗病毒基因工程

张陈明;胡宗利;陈国平;

2008, 0(06): 30-35.

摘要 ( 78 )

PDF (427KB) ( 463 )

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病毒侵染一直是导致马铃薯品种退化的主要因素,严重影响马铃薯的产量和品质。近年来,随着基因工程的迅速发展和转基因技术体系的日益完善,基因工程技术在提高马铃薯抗病性(尤其是抗病毒)方面显示了极大的潜力,必将成为马铃薯抗病毒育种的主要手段。对其进展进行了综述,并讨论了根癌农杆菌介导马铃薯遗传转化及其体系优化因素。最后提出存在问题及发展趋势,以供广大马铃薯抗病毒育种工作者参考。

猪干扰素-γ的研究进展

潘晓梅;窦永喜;才学鹏;

2008, 0(06): 36-39.

摘要 ( 90 )

PDF (279KB) ( 484 )

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干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是在特定的诱生剂作用下,由机体自身产生的一种维持机体自我稳定的防御性物质,是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。由于其免疫调节、抗病毒和抗肿瘤的独特作用,在动物传染性疾病的预防和治疗中具有广阔的应用前景。对猪干扰素-γ产生、分子结构、检测、生物学活性及作用机制以及应用等方面做以下简要综述。

禽类胚胎生殖细胞的研究

张艳艳;王颖;陈莉娜;李林凤;靳亚平;关伟军;马月辉;

2008, 0(06): 40-43.

摘要 ( 80 )

PDF (295KB) ( 403 )

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胚胎干细胞有2种来源:一种来自于早期胚胎囊胚期内细胞团(inner cell mass,ICM)的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞),另一种是来自胚胎生殖腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG细胞)。PGCs是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞。自Matsui等证实了PGCs同样可以作为胚胎干细胞的原材料之后,现已在人、小鼠、猪和鸡等多种动物的PGCs进行了分离培养并获得了EG细胞。现从形态特征和迁移、分离培养及鉴定方面对禽类EG细胞的研究进展作一综述。

Sox基因家族功能的研究进展

江玲霞;李纪委;贺彧;李美丽;方威;李贵强;徐银学;

2008, 0(06): 44-48.

摘要 ( 243 )

PDF (386KB) ( 1380 )

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Sox(Sry-related high mobility group box)基因是由众多具有HMG-box保守基序构成的超基因家族,是与位于雄性动物Y染色体上的Sry基因同源的家族基因,在很多动物中都有表达。由于其编码的蛋白质具有结合DNA的能力,因而认为Sox基因家族是一类重要的转录调控因子。在个体发育过程中,Sox基因广泛参与了动物的早期胚胎发育、性别决定和分化、神经系统发育、软骨及多种组织器官的形成,具有重要的生物学功能。主要对Sox家族基因的功能及其研究进展进行简要的综述。

杆状病毒进化研究进展

唐平;单晓红;张雨;徐攀;张志芳;沈桂芳;

2008, 0(06): 49-51.

摘要 ( 69 )

PDF (197KB) ( 643 )

相关文章 | 计量指标

杆状病毒的进化研究对于理解病毒的多样性十分重要,因此就杆状病毒基于单基因和基因组的进化研究方法、进化与变异、转座子与进化、与宿主共进化的相互关系进行了简要的总结和概括。

与肿瘤相关的MicroRNA研究进展

姚绛;罗玉萍;李思光;

2008, 0(06): 52-55.

摘要 ( 61 )

PDF (220KB) ( 463 )

相关文章 | 计量指标

MicroRNA(smiRNAs)是一类进化上保守的单链非编码小分子RNA,它作为基因表达调控因子在转录后水平调节基因表达。最近研究发现,miRNA能够控制细胞生长、凋亡及分化;miRNA的表达与癌症相关,并在肿瘤的形成过程中发挥着重要的作用。因此,miRNA的研究对于揭示基因表达的调控机理、人类疾病防治及生物进化探索具有重要意义。

乙型肝炎病毒转录后调节元件的研究进展

程丽英;黄爱龙;汤华;

2008, 0(06): 56-59.

摘要 ( 101 )

PDF (280KB) ( 553 )

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乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE)是位于HBV基因组内的一段调控序列。因其在转录后水平调节HBV的基因表达而命名。它对HBV基因的高表达是非常重要的。自从1993年被发现后,它的功能机制及与其相互作用的蛋白因子一直是人们的研究热点,为深入研究HBV基因表达的调控机制创造了条件。同时,这些研究可能促进下调病毒基因表达的新的机制的形成,为防治HBV感染的相关疾病奠定了基础。

蛋白质组学分析技术在微生物研究中的应用

耿伟平;吴晨紫;杨志伟;

2008, 0(06): 60-64.

摘要 ( 87 )

PDF (287KB) ( 841 )

相关文章 | 计量指标

随着后基因组时代的到来,蛋白质组学分析为研究微生物的生命活动和细胞功能提供了一个广阔的视角。综述了大规模分析微生物蛋白质组的策略和方法,包括自上而下的蛋白质组学分析、自下而上的蛋白质组学分析、蛋白质组定量分析技术、蛋白质修饰研究方法和蛋白质芯片技术。最后,对沙门氏菌蛋白质组学的研究进展进行了简要介绍。

ISSR分子标记在牧草研究中的应用

王康;董宽虎;杨青川;康俊梅;董洁;

2008, 0(06): 65-68.

摘要 ( 59 )

PDF (306KB) ( 504 )

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ISSR(inter-simple sequence repeat)是在SSR标记基础上发展起来的一类新型的分子标记技术。在比较ISSR和其它分子标记的原理和特点的基础上,主要对ISSR标记的原理、特点以及ISSR分子标记在牧草DNA指纹库的构建、遗传多样性、种质资源鉴定、遗传作图和基因定位、分子标记辅助育种等领域的研究进展进行综述,并对其应用前景进行简要概述。

铁皮石斛的鉴定研究

张奇;段承俐;

2008, 0(06): 69-72.

摘要 ( 72 )

PDF (234KB) ( 898 )

相关文章 | 计量指标

综述了组织、显微、光谱、色谱及分子生物学技术等鉴定方法在铁皮石斛鉴定中的研究与应用,以期为铁皮石斛的有效鉴定提供科学依据。

ELISA技术在禽流感诊断研究中的应用

韩庆功;崔艳红;张智勇;

2008, 0(06): 73-77.

摘要 ( 62 )

PDF (266KB) ( 443 )

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禽流感(AI)是目前禽类流行的主要疫病之一,给养禽业和人类健康带来了巨大危害。由于禽流感病毒血清型众多,致病疫情多样,因此,适时的检测和早期快速诊断是预防和控制禽流感的前提条件。ELISA方法以其特异、灵敏、快速、简便,可迅速检测大量样品,使用仪器设备少,利于基层操作等优点成为AI流行病学普查及早期快速诊断的最实用和有效的方法。

植物源内含子对GUS基因表达模式的影响

邹智;吴刚;肖玲;武玉花;聂淑晶;肖娜;卢长明;

2008, 0(06): 78-82.

摘要 ( 115 )

PDF (691KB) ( 965 )

相关文章 | 计量指标

采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆菌中高效表达。为避免GUS基因在农杆菌中的表达对瞬间表达体系的影响,一拟南芥蛋白基因的内含子被插入到GUS基因的编码区,进而构建了含内含子的GUS植物表达载体pBI121-GUSint。组织化学染色结果表明,GUSint在农杆菌中没有表达,而在接种3d的油菜中可高效瞬间表达,其中在子叶柄(带子叶)中瞬间表达率高达100%,这一方面证实载体构建成功,另一方面也为进一步优化油菜及其它芸薹属植物转化体系及在油菜中快速研究目的基因的功能和表达调控模式奠定了基础。

拟南芥非特异性磷脂酶C4基因表达模式的研究

孙建;裴慧娟;路小铎;王晓云;张春义;

2008, 0(06): 83-86.

摘要 ( 66 )

PDF (511KB) ( 365 )

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拟南芥非特异性磷脂酶C4(AtNPC4)具有降解磷脂酰胆碱(PC),产生二酰甘油(DAG)和磷酸胆碱的活性。本研究从拟南芥基因组中分离了NPC4基因起始密码子上游1 379bp的启动子序列,与GUS报告基因融合后转化拟南芥,获得转基因植株。GUS组织化学染色表明,AtNPC4基因主要在处于衰老过程中的叶片中高水平表达,在根、茎、种荚和花中也有一定程度的表达,这种表达模式与RT-PCR结果相一致。另外,通过RT-PCR发现,AtNPC4基因在转录水平上受脱落酸的诱导,但不受水杨酸和茉莉素诱导。

拟南芥ICE1基因转化水稻的进一步研究

向殿军;满丽莉;殷奎德;

2008, 0(06): 87-90.

摘要 ( 57 )

PDF (1294KB) ( 439 )

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利用农杆菌介导的转基因技术,成功地将由启动子(35S和rd29A)调控的拟南芥ICE1基因导入垦鉴稻10号中,经PCR和Southern检测确认目的基因已整合到水稻基因组中。潮霉素抗性测定结果表明,与未转基因水稻相比,T1代表现出对潮霉素较高的抗性和孟德尔式的单位点遗传;抗寒能力检测结果表明,在同等低温胁迫条件下T1代转基因株系的死亡率明显低于未转基因对照;脯氨酸含量测定结果表明,低温处理后T1代植株脯氨酸含量增幅明显高于未转基因对照;上述结果表明,转ICE1水稻提高了抗寒能力。

优化玉米CMS-S双向电泳体系与差异蛋白比较

孙翠霞;扬会;李萌;祝静静;郭晓红;李新征;王泽立;

2008, 0(06): 91-96.

摘要 ( 53 )

PDF (519KB) ( 445 )

相关文章 | 计量指标

利用自主创建的Rf3近等基因系不育群体(P)s和可育恢复系群体(Pf)为试材,采用改进的双向(二维)聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术,对苗期、成株期叶片细胞总蛋白进行分析,分离到在Pf遗传背景下一特异蛋白质RRPⅥ,分子量为30.8kD,等电点为5.0,该特异蛋白质点的出现与消失可能与玉米CMS-S的育性恢复有一定关系,对其纯化分离将为Rf3基因的克隆奠定基础和进一步了解玉米质核互作不育表达模式的分子机制。讨论了采用2D-PAGE技术在玉米分子生物学研究中的优化以及基因组学与蛋白组学研究的衔接。

脯氨酸和硝酸银对农杆菌转化香蕉的影响研究

赵巧阳;赖钟雄;

2008, 0(06): 97-100.

摘要 ( 67 )

PDF (1039KB) ( 491 )

相关文章 | 计量指标

如何提高转化效率是植物遗传转化中的一个关键问题。已经发现有许多物质如乙酰丁香酮(AS)等许多酚类化合物、葡萄糖等能够促进农杆菌介导的遗传转化。试验在农杆菌转化香蕉茎尖薄片的过程中附加化合物脯氨酸、硝酸银,通过对GUS基因表达的分析发现,这2种化合物均能明显地提高香蕉茎尖薄片的转化率,其中浓度为2mg.L-1的脯氨酸及2mg.L-1的硝酸银效果最佳。

分离自杭子梢等宿主根瘤的30株菌的结瘤特性的研究

刘思敏;韩素贞;

2008, 0(06): 101-105.

摘要 ( 68 )

PDF (545KB) ( 327 )

相关文章 | 计量指标

对分离自杭子梢、菜豆和决明等宿主根瘤、处于Agrobacterium系统发育分支、DNA-DNA杂交与A.rubi的相似性达到100%的30株土壤杆菌,分属于Agrobacterium、Bradyrhizobium、Mesorhizobium、Rhizobium和Sinorhizobium5个属的12个参比菌株。nodA PCR的结果表明,30株供试菌中扩增不出nodA,即没有结瘤性。以Sinorhizobium meliloti USDA1002T的nodA做探针对所提取的细菌总DNA进行斑点杂交,在65℃~68℃严谨洗膜条件下,该探针只能与同种的根瘤菌进行杂交,不能与其它属的根瘤菌或土壤杆菌杂交,初步推测共同结瘤基因nodA探针只能对种内根瘤菌的结瘤性进行鉴定。

培养基组分、激素及pH值对转基因白桦花粉萌发的影响

钱晶晶;曾凡锁;王晓凤;詹亚光;

2008, 0(06): 106-109.

摘要 ( 63 )

PDF (259KB) ( 511 )

相关文章 | 计量指标

采用花粉离体培养法研究了培养基不同组分、激素及pH值对转基因白桦(BetulaplatyphyllaSuk.)花粉萌发的影响。结果表明,培养基组分在一定范围内促进花粉萌发,转基因白桦花粉萌发对硼酸和Ca2+的反应敏感,培养基中缺乏该物质时花粉不萌发。激素类物质低浓度时促进萌发,高浓度时抑制萌发。最适合培养基组分为蔗糖18%,硼酸0.015%,Ca2+0.020%,pH6.0,NAA10mg/ml,6-BA1mg/ml。并对不同保存条件(4℃,-20℃)下转基因白桦花粉的萌发率进行了比较,4℃下干燥保存更有利于保持转基因白桦花粉的活力。

羊草种质资源筛选及RAPD遗传多样性分析

孔祥军;梁正伟;刘淼;马红媛;

2008, 0(06): 110-114.

摘要 ( 59 )

PDF (464KB) ( 317 )

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利用大安碱地生态试验站采集的天然羊草种子进行单株培养筛选具有典型表型特征的羊草(Leymuschinensis)个体,通过无性繁殖建立了30个无性株系。RAPD分析结果表明,13个随机引物在30个羊草无性系中共扩增出98条带,其中多态位点为88个,多态位点百分率为89.79%,平均每个引物可扩增出7条带。运用Nei和Shannon多样性指数计算30个羊草无性系的遗传相似性系数,其平均遗传距离为0.3355。应用软件NTSYS对其做聚类分析,以0.65为阈值可将其分为2个类群。

DGGE和RFLP方法分析桑粒肩天牛幼虫肠道微生物多样性

陈金华;王中康;贺闽;殷幼平;

2008, 0(06): 115-119.

摘要 ( 63 )

PDF (754KB) ( 666 )

相关文章 | 计量指标

昆虫是一个复杂的微生态系统,这些微生物对宿主发育,营养物质的消化吸收和防御方面起着重要的作用。利用DGGE和RFLP指纹图谱的方法初步研究桑粒肩天牛幼虫肠道微生态系统。对肠道微生物16S rDNA V3区进行DGGE分离,得到24个不同位置的条带。DGGE图谱亦显示了肠道微生物的季节变化,夏季较冬季菌群丰富。各月DNA样品混合并扩增16S rDNA全长序列,构建16S rDNA克隆文库。用Msp I、Rsa I对文库中175个随机阳性克隆的质粒DNA进行限制性酶切。酶切图谱聚类分析结果显示175个克隆被归为60个不同的类群,这一结果显示桑粒肩天牛幼虫肠道微生物非常丰富。因此,这2种方法都能有效的反应肠道微生物多样性状况,且RFLP比DGGE具有更好的分辨率。结合使用这2种方法,初步反应了桑天牛肠道微生物多样性信息。

苏云金芽胞杆菌内生质粒提取方法的改进

刘晶晶;束长龙;张杰;宋福平;黄大昉;

2008, 0(06): 120-123.

摘要 ( 69 )

PDF (335KB) ( 509 )

相关文章 | 计量指标

改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该方法与传统技术相比,操作简单、耗时短,提取的质粒纯度高、条带清晰,染色体DNA污染较少。为Bt杀虫基因克隆、质粒特性分析等研究创造了有利条件。

利用差异显示法研究刺参表皮再生相关基因

陈秋实;李霞;段晶晶;周伯文;

2008, 0(06): 124-127.

摘要 ( 117 )

PDF (1105KB) ( 424 )

相关文章 | 计量指标

应用mRNA差异显示法对刺参(Apostichopus japonicus)正常表皮组织和手术后再生的表皮组织的基因的差异表达进行了分析。利用经本实验室摸索改进的mRNA差异显示体系,获得了若干差异片段,将其测序结果在GenBank数据库中比对发现,其中一个差异片段与CD151基因具有较高的同源性,并且采用RT-PCR的方法对差异片段进行了验证。进一步分析表明,该基因可能与表皮的再生密切相关。

甲基对硫磷降解菌L1的分离、鉴定及降解酶基因的克隆

李莹莹;李文;张琛;闫艳春;

2008, 0(06): 128-131.

摘要 ( 48 )

PDF (309KB) ( 323 )

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从农药厂的污水处理池中分离到一株能高效降解甲基对硫磷的菌株L1,L1能以甲基对硫磷为惟一碳源、氮源和能源生长;经生理生化实验和16s rRNA同源性分析,初步将L1归为节杆菌属(Arthrobacter sp.)。紫外分光光度法对L1的降解性能研究表明,L1能在12h内将50mg/L的甲基对硫磷完全降解;用PCR方法克隆其甲基对硫磷降解酶基因mpd,这是迄今首次从革兰氏阳性菌中克隆到的mpd基因。

人纤溶酶原kringle 5在大肠杆菌中克隆和分泌表达

张宇;张名姝;李雅雯;郑权;

2008, 0(06): 132-134.

摘要 ( 92 )

PDF (437KB) ( 285 )

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构建能够表达分泌性的人纤溶酶原kringle 5(简称hPK-5)的大肠杆菌工程菌。用PCR方法扩增获得hPK-5基因,构建原核表达载体pET-22b(+)/hPK-5,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达并鉴定其免疫学活性。成功表达14kD的重组hPK-5,且约占菌体分泌性蛋白20%以上,经Western Blot分析表明其具有hPK-5的免疫抗原活性。人纤溶酶原kringle 5在大肠杆菌中BL21(DE3)获得可分泌表达。

地衣芽孢杆菌WS-6 β-葡聚糖酶基因的克隆及表达

山其木格;包慧芳;王炜;杨红兰;胡爽;

2008, 0(06): 135-138.

摘要 ( 63 )

PDF (388KB) ( 577 )

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β-葡聚糖是植物细胞壁中结构性非淀粉多糖,存在于各种饲料农作物中[1]。作为一种抗营养因子,β-葡聚糖使食糜具有很高的粘度,阻碍肠道消化液与食糜的混合,影响营养物质特别是蛋白质和脂肪的消化吸收,降低饲料的利用率。地衣芽孢杆菌分泌的β-葡聚糖酶可分解β-葡聚糖[2]。在青贮发酵过程中,这种酶可降解大麦β-葡聚糖,有效提高家畜、家禽对饲料的利用率[3]。从地衣芽孢杆菌WS-6中克隆到β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因并进行测序,将该基因与大肠杆菌表达载体pET32a进行连接,转化大肠杆菌BL21,使该基因得到了有效的表达,为进一步在食品级宿主菌中的表达奠定了基础。

人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

窦文芳;张莲芬;雷楗勇;张立操;陈蕴;金坚;

2008, 0(06): 139-143.

摘要 ( 77 )

PDF (675KB) ( 410 )

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以人胰高糖素样肽-1(human glucagons-like peptide-1,GLP-1))为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/(GLP-1A2G)2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度>90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。

MicroRNA122真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达与检测

郝美君;张祯祯;张文露;曾爱中;崔静;黄艺丹;黄爱龙;

2008, 0(06): 144-146.

摘要 ( 60 )

PDF (617KB) ( 854 )

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为进一步研究microRNA的功能及作用靶标提供技术平台,构建microRNA真核表达载体。从HepG2215细胞基因组DNA扩增microRNA122前体,克隆到pEGFP-C1的载体上,经测序鉴定后转染至HepG2细胞中,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况并提取基因组总RNA,RT-PCR检测microRNA122表达,TA克隆鉴定。结果表明,成功构建microRNA122真核表达载体,并证实其在真核细胞HepG2中表达。此方法成功构建microRNA表达,并为后续研究提供良好的技术平台。

重组胰高糖素样肽-1融合蛋白的纯化及其活性测定

陈其亮;窦文芳;雷楗勇;王一君;张立操;张文婷;陈蕴;张莲芬;金坚;

2008, 0(06): 147-151.

摘要 ( 72 )

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主要探讨了发酵液中融合蛋白rh(GLP-1A2G)2-HSA的分离纯化过程。发酵上清液经超滤浓缩、离子交换层析、凝胶过滤分离得高纯度的rh(GLP-1A2G)2-HSA。纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带,HPLC分析纯度达98%,125I标记后用TCA沉淀法测定放射性纯度达97%,符合药效学和药代动力学研究的需要,整个纯化过程回收率达到48.5%。通过细胞增殖实验表明纯化后的rh(GLP-1A2G)2-HSA具有类似GLP-1的促胰岛β细胞增殖活性,说明该分离过程保护了融合蛋白rh(GLP-1A2G)2-HSA的生物活性。通过融合蛋白rh(GLP-1A2G)2-HSA的纯化方法,可获得高纯度的重组融合蛋白rh(GLP-1A2G)2-HSA,为进一步的药效学和药代动力学研究奠定了基础。

荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立

张文婷;张莲芬;周利苹;金坚;

2008, 0(06): 152-157.

摘要 ( 88 )

PDF (763KB) ( 418 )

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为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)mRNA表达的方法。提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因(PAI-1)及管家基因(β-actin)的PCR产物。纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果。这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为104~1010拷贝,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%。全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性。因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选。

口蹄疫病毒株AF72 VP1的结构构建与B细胞表位预测

张昱;王永录;张永光;潘丽;方玉珍;刘力宽;蒋守田;吕建亮;张中旺;张淑刚;李正丰;杜进鑫;

2008, 0(06): 158-163.

摘要 ( 74 )

PDF (538KB) ( 458 )

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以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72 VP1的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立AF72 VP1结构蛋白的3D结构,在此基础上,综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72 VP1结构蛋白的B细胞抗原表位。结果显示,VP1结构蛋白呈现较规则的空间构象,其中5~11、24~30、43~47、82~87、132~147和196~203氨基酸区段是AF72 VP1结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供很有价值的参考信息。

一株耐盐细菌的16S rRNA基因序列分析

汪长东;陈鹏;闫旭;景红娟;黄阜峰;汪越胜;杨广笑;何光源;

2008, 0(06): 164-167.

摘要 ( 81 )

PDF (481KB) ( 566 )

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从舟山群岛滩涂土壤中获得了海水和底泥样品,并从中提取到了一株耐盐细菌,通过用不同盐浓度的培养基培养,挑取单菌落,反复划线纯化,得到了耐盐菌的单菌落。通过菌株基因组DNA的提取、菌株的抗性实验、质粒的提取、16S rRNA的PCR扩增及克隆、16S rRNA的全序列分析等手段,对该菌株的16S rRNA的基因序列进行了研究。

一种快速筛选酵母高表达菌株的新方法

冯晶晶;赵媛媛;杨梅;吕茂民;

2008, 0(06): 168-169.

摘要 ( 91 )

PDF (361KB) ( 609 )

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为建立一种快速筛选酵母高表达菌株的方法,将生长在固体培养基上的新转化的表达菌落原位转移到醋酸纤维素薄膜上,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获醋酸纤维素薄膜上的蛋白,然后用免疫印迹的方法检测原位转印到硝酸纤维素膜上菌落分泌蛋白,根据免疫印迹的强弱进行高表达菌株的筛选。结果显示,经过菌落原位转印和免疫印迹显色,显色信号强的菌落表达量相对较高。因此,双膜法原位检测是一种快速、高效的筛选酵母高表达菌株的方法。

脂肪酶产生菌的筛选及鉴定研究

燕清丽;周斌;孟晓娜;李振秀;陈芳;高剑峰;

2008, 0(06): 170-174.

摘要 ( 73 )

PDF (1392KB) ( 657 )

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为寻找合适的产脂肪酶野生菌,以期能高效的催化合成生物柴油。通过添加橄榄油作为惟一碳源进行富集培养,然后以透明圈平板筛选法从油污土壤样品中成功地筛选到了一株酶活力值为10.12U/ml产脂肪酶菌株。通过对该菌株表型、生理生化特征分析及16S rRNA部分序列的系统进化发育分析鉴定该菌为芽胞杆菌属,定名为BacilluspumilusB2。

产酸性脲酶菌株的筛选、鉴定及其脲酶的应用初探

王松华;田亚平;

2008, 0(06): 175-178.

摘要 ( 140 )

PDF (434KB) ( 337 )

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利用传统微生物筛选方法,从动物粪便中经过酸性平板初筛、中性平板复筛,得到一株产酸性脲酶的菌株JN_R12。通过比较形态特征、生理生化以及16S rDNA测序结果,结合系统发育分析,确定该菌为肠出血性大肠埃希氏菌Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7。JN_R12所产脲酶对酒精有较好的耐受性。离心后得到的全细胞在模拟酒样中的尿素去除率接近100%;黄酒中24h孵化后的去除率在60%以上。

西藏卡拉山土样中放线菌的多相分类研究

张迎春;阚丽娟;刘少佳;刘磊;杨秀萍;韩素贞;

2008, 0(06): 179-183.

摘要 ( 62 )

PDF (591KB) ( 372 )

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从西藏念青唐古拉山卡拉山支脉的土样中分离到40株放线菌,对其中的13株菌进行了多相分类。形态、培养特征和系统发育结果表明,所有菌株均属于链霉菌属。从系统发育结果看,840018、850003和Z851023各处于一个独立的分支,分别与Streptomyces rishiriensis、Streptomyces cyanoalbus和Streptomyces albus subsp.albus的相似性达到99%。菌株Z851010、Z851004、850011和850070聚成一个小群,它们之间的相似性达到95%,与Streptomyces sp.YIM26的相似性达到98%;Z851013和Z851024聚成小群,它们之间的相似性达到100%,它们有可能是同一种菌株;850008和Z851020聚成小群,它们的相似性达到95%;Z850007和850040聚成小群,与已知菌种的相似性只有96%,有可能是新的分类单元。

蜂毒疗法和蜂毒针刺疗法现状分析

汪开治;

2008, 0(06): 184-187.

摘要 ( 98 )

PDF (203KB) ( 871 )

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<正>近年来,蜂毒疗法已日益引起世界各国生物医药界的关注。现将《美国蜜蜂杂志》近期刊载的德国吉森大学的科学家Karsten Münstedt以及英国埃克塞特大学和普利茅斯大学的科学家Katja Schmidt等有关蜂毒疗法和蜂毒针刺疗法现状的论述,译介于下。

《生物技术通报》2008年总目次

2008, 0(06): 188-193.

摘要 ( 58 )

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<正>~~

《生物技术通报》稿约

2008, 0(06): 194-194.

摘要 ( 68 )

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<正>《生物技术通报》系中国农业科学院农业信息研究所与生物技术研究所及中国农学会高新技术农业应用专业委员会共同主办的国家级综合性科技刊物。2006年首批进入中国农业核心期刊。主要报道国内外农、牧、林、渔及医学、轻化等领域中生物技术研究的新进展、新技术、新成果与发展趋势,内容包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程以及生物工程的应用、新的实验技术与方法等。

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