生物技术通报

叶绿体功能基因的工程改造

徐昀;胡凯;崔震海;张立军;

2011, 0(08): 1-4.

摘要 ( 87 )

PDF (245KB) ( 520 )

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主要介绍叶绿体功能基因工程改造的目的、受体材料、主要方法、转入外源基因细胞的筛选和鉴定等。

植物抗逆反应中水孔蛋白的表达调控研究

于利刚;解莉楠;李玉花;

2011, 0(08): 5-14.

摘要 ( 119 )

PDF (378KB) ( 815 )

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水孔蛋白(aquaporin,AQP)作为一种功能性跨膜输水蛋白,对植物体形成水选择性运输通道并实现水分的跨膜运输起到重要的作用。当植物处于盐、干旱、低温等逆境胁迫状态时,体内的水分平衡被打破,水孔蛋白在水分运输和胞内渗透压的调控等方面表现出重要作用。综述了植物抗逆反应中水孔蛋白表达调控的研究进展。

水稻褐飞虱抗性基因研究进展

杨震;彭选明;彭伟正;庞爱军;庞伯良;

2011, 0(08): 15-20.

摘要 ( 85 )

PDF (274KB) ( 719 )

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随着全球性气候变暖以及稻作区耕作栽培措施的改变,稻褐飞虱已成为严重危害水稻产量的害虫之一。综述当前水稻褐飞虱抗性基因的定位、克隆以及抗性机制的最新研究进展,并对抗褐飞虱水稻育种的利用现状作报道。

甘蔗宿根矮化病病原菌Leifsonia xyli subsp. xyli基因组学研究进展

赵婷婷;王俊刚;杨本鹏;冯翠莲;熊国如;蔡文伟;王文治;伍苏然;张树珍;

2011, 0(08): 21-25.

摘要 ( 98 )

PDF (244KB) ( 468 )

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综述甘蔗宿根矮化病病原细菌Leifsonia xylisubs.p xyli(Lxx)基因组组成特征、基因组进化、基因组中致病相关基因与寄主适应性等方面的研究进展,并对该病原菌、引起番茄细菌性萎蔫和溃疡的病原细菌、马铃薯环腐病病原细菌的基因组和致病相关基因进行比较,发现它们存在同源致病基因,如celA、pat1基因,其致病机理可能有相似性。

抑菌植物资源的研究进展

王书平;李玉玺;张韩杰;

2011, 0(08): 26-29.

摘要 ( 93 )

PDF (203KB) ( 730 )

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综述国内外对抑菌植物资源的研究概况,植物中存在的主要抑菌活性成分及作用机理,抑菌植物筛选及检测方法,并对问题进行总结及前景展望。

分子系统生物学与细胞发生动力学

曾(杰)邦哲;

2011, 0(08): 30-35.

摘要 ( 123 )

PDF (361KB) ( 406 )

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系统生物学采用系统理论和实验生物技术、计算机数学模型等方法整合研究动态生物系统网络。生物系统的结构理论和生物系统技术,研究基因组——生物体复杂系统与细胞分子网络系统的动态结构发生与进化,分析基因组的逻辑程序和人工设计原理。细胞信号传导、基因调控网络、代谢反应链和基因反馈调控的自组织化人工设计和基因、基因链、基因组人工合成等系统生物工程开发,可用于复杂疾病机理分析、药物分子筛选和转基因表达系统的生物反应器、纳米生物计算机等。

LEA蛋白的分类与功能研究进展

刘洋;邢鑫;李德全;

2011, 0(08): 36-43.

摘要 ( 156 )

PDF (333KB) ( 1320 )

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胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant proteins,LEA蛋白)具有广泛的生物学功能,低温、干旱、盐渍及ABA等均可以诱导LEA蛋白的表达,LEA蛋白的显着特点是具有较高的亲水性与热稳定性。根据LEA蛋白结构特征可将其分为不同的家族,研究发现LEA蛋白具有清除活性氧自由基、稳定膜结构和保护酶活性等功能。介绍LEA蛋白的分类依据、功能和基因表达调控等方面研究的进展。

细菌蛋白分泌途径的研究进展

訾祯祯;杨志伟;

2011, 0(08): 44-50.

摘要 ( 184 )

PDF (1160KB) ( 2889 )

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蛋白质分泌对于细菌的生长和繁殖具有至关重要的作用。在革兰氏阴性菌中,蛋白质分泌包括两步和一步分泌途径,主要涉及Sec、SRP和Tat途径。近年来发现I-VI型途径也参与胞内蛋白质转运。主要介绍革兰氏阴性菌蛋白分泌的机制及生理意义。对于细菌蛋白分泌机制的深入研究将为细菌蛋白质分泌工程和病原微生物的防治带来有益启示。

纤维素酶基因工程研究进展

李旺;张光勤;

2011, 0(08): 51-54.

摘要 ( 185 )

PDF (214KB) ( 776 )

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纤维素酶(cellu lase)是能够分解纤维素产生葡萄糖的一类酶。由于天然纤维素酶不能满足目前的需求,因此纤维素酶的基因工程发展迅速。综述纤维素酶基因的克隆与表达,纤维素酶基因的克隆方法,包括构建文库、PCR扩增、人工合成和宏基因组扩增。同时,综述纤维素酶基因的转化系统,并指出构建基因工程菌、酵母表达系统和真核表达系统是纤维素酶基因工程发展趋势。

统合生物工艺与纤维素分解性高温菌乙醇转化的研究进展

赵立峰;严金平;孙焕民;伊日布斯;

2011, 0(08): 55-59.

摘要 ( 92 )

PDF (246KB) ( 605 )

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生物乙醇是可再生的绿色能源,作为可以完全或部分替代化石能源的新型能源,近年来受到了世界各国的关注。木质纤维素作为生物乙醇的生产原料具有巨大的市场潜力,而统合生物工艺(CBP)能有效降低木质纤维素乙醇的生产成本,为纤维素乙醇的工业化生产提供了新的工艺思路。主要介绍利用高温纤维素分解菌的统合生物工艺策略以及国内外对高温纤维素分解菌代谢工程研究的最新进展。

阿卡波糖的生物合成途径研究进展

冯志华;王远山;郑裕国;

2011, 0(08): 60-67.

摘要 ( 176 )

PDF (899KB) ( 990 )

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阿卡波糖(Acarbose)作为第一个用于临床治疗Ⅱ型糖尿病的α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物,自上市以来,由于其高效、安全而得到广泛应用。目前工业化生产所用的生产菌株都来自Actinoplanessp.SE50/110,其合成途径随着acb基因簇的发现已经基本研究清楚。在另外一种阿卡波糖产生菌Streptomyces glaucescensGLA.O内,同样发现了与acb基因簇具有高度相似性的gac基因簇,其合成途径与acb基因簇遵循相同的路径,而又有显着的差别。就这两种合成途径以及阿卡波糖的产生、转运和代谢进行综述。

输血传播病毒分子生物学研究进展

傅海霞;王志钢;

2011, 0(08): 68-70.

摘要 ( 118 )

PDF (182KB) ( 374 )

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输血传播病毒(transfusion transmitted virus or torque teno virus,TTV)是近年发现的一种DNA病毒,在健康人群、职业献血员和肝炎患者中都有不同程度的感染。TTV感染具有多样性,它可以直接经血液传播,同时还具有血液以外的传播途径,具有嗜肝性。目前对TTV的研究已在病毒与宿主的关系、病毒的分类及起源、进化和变异等方面的研究中产生了深刻的影响。仅就TTV分子生物学方面的研究成果并结合某些问题进行简要综述。

DNA载体的数据分类及查询系统的开发和应用

刘国宪;吕蓓;程奇;李路;

2011, 0(08): 71-74.

摘要 ( 105 )

PDF (345KB) ( 546 )

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DNA载体是基因工程中一个重要的工具,从1977年组建了第一个载体到现在,载体的数量已经达到上百种。为了更好、更充分地利用这些载体为科研人员服务,设计了DNA载体的数据分类及查询系统软件。DNA载体的数据分类及查询系统包括3个模块:数据输入模块、数据查询模块和数据计算模块。首先将载体按照功能的不同进行分类和编号,建立一个较完整的载体数据库。然后利用查询和计算功能,令用户快速地查找到其需要的载体。

小麦、黑麦FISH技术特异序列探针的研究进展

汪慧;郭长虹;郭东林;

2011, 0(08): 75-81.

摘要 ( 109 )

PDF (295KB) ( 805 )

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荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在染色体定位、基因克隆、遗传标记以及染色体畸变研究中得到了广泛的应用。随着分子生物学的飞速发展,用于FISH技术的染色体特异重复序列探针的开发和利用有了巨大进展。就近年来小麦、黑麦等FISH技术中染色体特异重复序列探针的研究进展及应用作一综述。

454测序技术开发微卫星标记的研究进展

程晓凤;黄福江;刘明典;汪登强;

2011, 0(08): 82-90.

摘要 ( 100 )

PDF (362KB) ( 885 )

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第二代测序技术(454测序为例)已成为测定基因组序列的一种成熟技术。454测序亦可应用于目标DNA区域分析,因此可用作微卫星标记的开发。较传统方法而言,具有便捷、高效等特点。目前,运用454技术进行基因组测序或转录组测序开发微卫星标记,用以研究种群生态学、构建遗传图谱等得到越来越多的重视和应用。综述了454测序技术在开发微卫星标记上的应用,并根据其优缺点对其应用前景进行了展望,旨在为应用454测序开发微卫星提供参考。

小麦叶片胞间洗脱液的蛋白质组学检测分析

胡新明;杨友才;潘映红;

2011, 0(08): 91-98.

摘要 ( 110 )

PDF (707KB) ( 360 )

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植物叶片胞间液蛋白主要是一些低丰度蛋白,其中某些种类在植物抗病反应中起着重要的作用。通过改进已有的技术方法,结合超滤和丙酮沉淀处理,从500 g抗条锈病近等基因系小麦Taichung29*6/Yr5的叶片中获得了1.5 mg可溶性的胞间洗脱液蛋白。SDS-PAGE电泳分析显示,胞间洗脱液蛋白样品和总蛋白样品存在着明显的差异。进一步的双向电泳分析证实,两个样品在胶图上可分别检测到1 241±59(n=3)和1 849±138(n=3)个蛋白点,其中胞间洗脱液样品有1 042±47(n=3)个不同于总蛋白样品的蛋白点,与总蛋白样品共有的蛋白点仅198±13(n=3)个。随意取100个差异蛋白点进行MALD I-TOF质谱分析,鉴定到一些已被确证存在于小麦胞间液中的蛋白质,如-β1,3-葡聚糖酶、葡聚糖--βD-1,3-葡萄糖苷内切酶、几丁质酶、过氧化物酶等。从蛋白质组学角度初步分析了小麦叶片胞间洗脱液的组成,为进一步探索小麦叶片胞间液中低丰度蛋白的抗病功能提供依据。

两个大豆MYB转录因子在原核细胞中的高效表达

李晓薇;苏连泰;赵旭;翟莹;张海军;张庆林;李景文;王庆钰;

2011, 0(08): 99-102.

摘要 ( 110 )

PDF (749KB) ( 561 )

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大豆(Glycine max)GmMYB12a与GmMYB12B2基因属于典型的植物R2R3-MYB转录因子。为进一步研究两个MYB12转录因子与相应顺式作用元件的相互作用,构建了两基因的原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效表达。利用PCR技术,将两端带有特异酶切位点的GmMYB12a与GmMYB12B2全长基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+),酶切、测序鉴定确认获得两基因的重组原核表达载体pET-28a-GmMYB12a与pET-28a-GmMYB12B2。然后把重组载体转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了两基因的原核表达载体,在IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导6 h后,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效表达。

SYBR Green实时荧光PCR高通量检测转基因大豆油

王华;梁怀宇;李华;

2011, 0(08): 103-107.

摘要 ( 106 )

PDF (736KB) ( 365 )

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采用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立了食用大豆油转基因成分的检测方法。根据转基因大豆中内源参照基因lectin和外源基因35S启动子、NoS终止子和cp4 epsps基因,设计特异性引物,在Roche荧光PCR仪上进行实时荧光PCR扩增。荧光曲线表明,SYBR Green实时荧光PCR可特异性地检测大豆油中的转基因成分,方法准确、快速,并运用熔解曲线进行产物分析,验证了试验结果的特异性和准确性,检测方法灵敏度高。

野生罂粟RNAi表达载体的构建及遗传转化

任丽蓉;张金文;魏玉杰;何庆祥;雷耀湖;陆则权;

2011, 0(08): 108-114.

摘要 ( 109 )

PDF (1128KB) ( 400 )

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通过PCR方法从质粒pGEM-bc中克隆野生罂粟BBE-COR融合基因片段约760 bp,以pHANNIBAL和植物表达载体pCAMB IA3300为基础,将克隆到的BBE-COR融合基因正向和反向片段分别插入pdk内含子的两边,经酶切、PCR鉴定及序列分析表明,特异性RNA i表达载体p3300-pHR构建成功。采用直接转化法,将重组子导入根癌农杆菌AGL1中。以野生罂粟茎尖生长点为转化受体,用农杆菌介导法将目的基因转入野生罂粟中。经卡那霉素和除草剂筛选后,共获得53株转基因植株,PCR检测后,其中14株表现阳性,可初步确定目的基因已经整合到野生罂粟基因组中。

茶树CsCOR1基因的原核表达

李先文;刘慧娟;余海波;袁红雨;

2011, 0(08): 115-117.

摘要 ( 87 )

PDF (505KB) ( 324 )

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将来自茶树的冷诱导基因CsCOR1与pGEX-6p-1质粒上的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合,构建为融合表达载体,最终实现了在0.8 mmol/L IPTG诱导下的原核表达,获得了36 kD的可溶性融合蛋白,为对CsCOR1基因功能的进一步研究奠定基础。

结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定

王莹;罗国坤;韩烈保;

2011, 0(08): 118-122.

摘要 ( 95 )

PDF (825KB) ( 325 )

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以结缕草基因组DNA为模板,根据已报道Rd29A启动子序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Rd29A启动子的基因片段,通过序列分析与文献报道的基因序列有41.65%的同源性。在GenBank上的登录号为EU346948。利用GFP基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性的pB IG(35S-GFP)和pB IRG(Rd29A-GFP)两个植物表达载体,进而采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行遗传转化,检测Rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性。结果表明,克隆到的Rd29A启动子活性强于组成型的35S启动子,利用GFP瞬时表达的分析方法有效的筛选到用于进行草坪草抗逆育种的启动子。

利用简并引物克隆黑莓、树莓肌动蛋白基因片段及表达分析

张春红;王小敏;王鲁北;吴文龙;李维林;

2011, 0(08): 123-128.

摘要 ( 114 )

PDF (1139KB) ( 528 )

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采用同源克隆法,利用设计的一对肌动蛋白(actin)基因简并引物,从黑莓、树莓和悬钩子杂种3个悬钩子植物品种均得到一条743 bp的actin cDNA片段,推测编码247个氨基酸。序列比对发现,克隆的actin基因推导的氨基酸序列和其他植物的肌动蛋白氨基酸序列具有高度保守性,经数据库搜索后将来自黑莓和树莓品种的actin cDNA片段在GenBank中登录,登录号分别为HQ439558和HQ439559。不同来源的植物actin蛋白系统进化树的聚类结果表明,树莓和悬钩子杂种亲缘关系较为密切。actin基因在3个悬钩子植物品种不同组织中的RT-PCR分析结果表明,其在检测的不同组织中均有一定程度的表达量,可能都属于组成型表达的肌动蛋白基因。研究结果为利用actin基因作为内参进一步研究黑莓和树莓其他基因的丰度奠定基础。

猪基质Gla蛋白基因序列多态及生物信息学分析

李敬瑞;向程举;刘章忠;张义玲;刘若余;

2011, 0(08): 129-132.

摘要 ( 108 )

PDF (485KB) ( 382 )

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选择具有明显品种差异的3个猪品种(可乐猪、白香猪和大约克)构建品种DNA池,采用PCR产物直接测序法研究公猪MGP基因5′侧翼调控区、外显子1共1 112 bp范围内可能与精液品质相关的序列多态性,快速筛查到两个SNPs(C-849T、C-895T)。进一步利用生物信息学分析MGP基因5′侧翼调控序列。预测出评分为95分以上的转录因子结合位点有31个,发现了CpG岛。C-849T和C-895T的变异则使白香猪比可乐猪和大约克多出了两个HSF可能的结合位点(85.9分)。1个TATA可能的结合位点(91.4分),1个cdxA可能的结合位点(92.9分)。研究结果为进一步研究MGP转录效率以及对猪精液品质的影响奠定基础。

托佩克猪SLA-2基因克隆及功能区生物信息学分析

白婧;许崇波;张强;高凤山;

2011, 0(08): 133-139.

摘要 ( 73 )

PDF (1284KB) ( 313 )

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为研究托佩克猪SLA-2基因功能,设计引物,克隆了该品系猪SLA-2基因(SLA-2-TPK)cDNA全长序列,并通过分子生物学软件分析其基因特征。结果显示,SLA-2-TPK cDNA全长为1 119 bp,其中3-1 097为编码区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示,SLA-2-TPK与其他SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为86.0%-98.9%、85.0%-89.4%和84.2%-91.7%。系统进化树显示,SLA-2-TPK与韩国品系猪DQ883211遗传距离较近;各功能区分析,SLA-2-TPK与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2-TPK是典型的SLA-2等位基因,在进化程度上接近于部分韩国品系猪。

小鼠B16黑色素瘤细胞核迁移蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

高德富;牛乐;孙春阳;张小莉;

2011, 0(08): 140-143.

摘要 ( 72 )

PDF (458KB) ( 392 )

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利用RT-PCR方法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆了全长核迁移蛋白C(Nuclear distribution C,NUDC)基因,构建了该基因的毕赤酵母表达质粒pPICZaA-NUDC并在受体细胞Pichia pastorisGS115中获得表达,通过制备融合表达蛋白的多克隆抗体分析其对黑色素瘤细胞活性的影响。结果表明,克隆的NUDC基因全长1 000 bp,含有完整的编码框,经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,该基因相对分子质量约为45 kD。表达的蛋白能与兔抗NUDC抗体发生反应,制备的NUDC蛋白抗体可抑制黑色素瘤细胞生长。

精胺对Nup98基因的调控研究

张磊;万涛;田圆圆;王李英;李凯;秦栋栋;曲嘉琳;汤华;

2011, 0(08): 144-147.

摘要 ( 82 )

PDF (333KB) ( 318 )

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利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。

两种鯻科鱼类线粒体16S rRNA基因片段序列分析

张龙岗;孟庆磊;安丽;董学飒;付佩胜;

2011, 0(08): 148-152.

摘要 ( 95 )

PDF (395KB) ( 545 )

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利用PCR技术成功扩增了高体革鯻(Scortum barcoo)和厚唇弱棘鯻(Hephaestus fuliginosus)的线粒体16S rRNA基因序列。通过序列测定,得到791 bp的基因片段,碱基A、T、G、C平均含量分别为31.4%、21.2%、20.5%和26.9%,序列中的A+T含量明显高于G+C的含量,这与其他鱼类的16S rRNA基因片段研究结果相一致。通过序列分析发现,高体革鯻和厚唇弱棘鯻两序列共存在23处碱基变异,其中碱基转换位点20个,碱基颠换位点3个,转换与颠换比率为6.7,没有发现碱基插入与缺失。与从GenBank中查到的3种鯻科鱼类的同源序列比对,邻接法(ne ighbor-join ing)构建亲缘关系树,结果显示,5种鯻科鱼类聚在一起,分为独立的2支,匀鯻和单色匀鯻及花身鯻聚成1支,高体革鯻和厚唇弱棘鯻聚为1支,说明高体革鯻与厚唇弱棘鯻的亲缘关系比较近,而与其他另外3种鯻科鱼类亲缘关系比较远。

草鱼两个肌肉生长抑制素cDNA克隆、表达及过量表达对胚胎发育的影响

濮剑威;孙成飞;蒋霞云;邹曙明;

2011, 0(08): 153-160.

摘要 ( 70 )

PDF (2833KB) ( 511 )

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肌肉生长抑制素(MSTN)是抑制肌肉生长和发育的重要生长调控因子。通过cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆草鱼MSTN-1型和MSTN-2型全长cDNA。RT-PCR分析结果表明,MSTN-1在草鱼肌肉、脑和眼中的转录量较高,在肝胰脏、脾脏和心的转录量较低,在肠、腮、性腺和肾中无表达;MSTN-2只在脑和肌肉中有表达。在草鱼胚胎发育的0-36 hpf期间,MSTN-1的转录量较低;在胚胎发育的36-48 hpf期间,其转录量呈逐渐升高的趋势;MSTN-2各时相均无表达,可能因为该基因在草鱼胚胎发育过程中不起重要作用。通过分别显微注射MSTN-1型和MSTN-2型mRNA至斑马鱼1-2细胞期胚胎。结果显示,注射MSTN-1型mRNA过表达可导致斑马鱼体节发生期胚胎的前-后轴拉长,背-腹轴变短,脊索轻微扭曲,以及体节发育受到强烈抑制而不分化等现象。注射MSTN-2型mRNA胚胎早期发育有所延迟并未发生明显变化,但发育至60 h之后尾部明显发生严重弯曲。

人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

张嘉萱;卢嘉欣;王蕊;赵振岭;韩波;彭鑫磊;陈伟;刘忠;任哲;王绍祥;马岩岩;刘凯胜;王一飞;

2011, 0(08): 161-166.

摘要 ( 115 )

PDF (523KB) ( 503 )

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应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。

hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响

武卫华;孔璟;叶彬;

2011, 0(08): 167-171.

摘要 ( 87 )

PDF (931KB) ( 556 )

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旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染BIU87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。

A、O型口蹄疫T/B细胞多抗原表位融合基因植物表达载体的构建

谭昕;肖旭倩;言普;沈文涛;王亚;周鹏;

2011, 0(08): 172-175.

摘要 ( 91 )

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通过对(pMD-xsB/xsT/xsBT/xsBTT)4个克隆载体进行PCR,在(xsB/xsT/xsBT/xsBTT)目的基因前接入引导肽序列(用Y表示),克隆中间载体(pMD-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT),再利用同尾酶的酶切及连接得到4个重组植物表达载体(pB I-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT)。经限制性酶切鉴定和测序分析证实表达载体构建正确,为下一步热研2号柱花草转基因植株的获得奠定了基础。

pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体的构建及表达

谢琦;林军;王凤山;

2011, 0(08): 176-180.

摘要 ( 164 )

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旨在构建胸腺融合肽Tα1-TP5原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。化学合成Tα1-TP5基因,与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳和A lphaEase凝胶电泳图像分析系统对工程菌表达的蛋白进行分析鉴定。表达的GST融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和层析和重组肠激酶切割后,电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定胸腺融合肽Tα1-TP5。结果显示,成功构建pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体,工程菌表达的GST融合蛋白占全菌总蛋白的27.8%,且主要以可溶形式表达。经ESI-MS鉴定,胸腺融合肽Tα1-TP5的分子量与理论值相符。胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中得到了高效表达。

MNDA及MNDA-HIN200片段在大肠杆菌中克隆、表达及纯化

李智;刘勇;郑晓峰;张飞云;

2011, 0(08): 181-186.

摘要 ( 107 )

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MNDA蛋白是与免疫反应相关的HIN-200家族成员之一,可作为模式识别受体来识别外源性双链DNA,它在人类免疫性疾病中发挥重要作用。通过PCR扩增获得的MNDA全长cDNA和MNDA-HIN200基因片段克隆到原核表达载体pET-28a中,使其N端带有一个His标签,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,经IPTG诱导后,分别经过亲和层析和分子筛层析对MNDA和MNDA-HIN200进行纯化。DNA测序表明,构建的重组质粒正确,筛选了蛋白最适表达菌株BL21(DE3);由于PYD(88 aa)结构域之间的相互作用影响MNDA的表达量及聚集状态,因此设计了PYD缺失的只含有HIN-200结构域的突变体MNDA-HIN200,最终获得了大量的、均一性好、高纯度的MNDA-HIN200蛋白,为MNDA的蛋白的晶体筛选和结构解析奠定基础。

MXR1基因对毕赤酵母工程菌代谢调控的影响

袁围;叶燕锐;林影;

2011, 0(08): 187-191.

摘要 ( 100 )

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为了研究毕赤酵母中转录因子Mxr1p在毕赤酵母代谢调控中所起的作用,构建一株以南极假丝酵母脂肪酶B基因(CALB)作为报告基因,MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株。将重组质粒pPIC9K-CALB转化毕赤酵母GS115,利用三丁酸甘油酯平板筛选得到分泌表达CALB的重组菌GS115/pPIC9K-CALB。通过重叠延伸PCR方法获得一段中间含有博来霉素抗性基因sh b le,两翼大约各有1 200 bp与毕赤酵母MXR1基因上下游同源的基因片段,将此片段用氯化锂法转化毕赤酵母细胞GS115/pPIC9K-CALB后,利用博来霉素抗性及CALB酶活力丧失双重筛选的方法得到一株MXR1基因完全缺失的毕赤酵母基因工程菌株。该菌株在以甲醇为唯一碳源的培养基中不生长,在以乙醇、葡萄糖或者甘油为唯一碳源的培养基中生长缓慢。结果表明转录Mxr1p因子在毕赤酵母中的多条代谢途径中起着关键性的作用,主要涉及甲醇、乙醇、甘油和葡萄糖等代谢途径。

黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达

邹娴;张茂;许惠;林纯;贺晓燕;刘德武;蔡更元;吴珍芳;

2011, 0(08): 192-197.

摘要 ( 96 )

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通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。

绿色糖单孢菌木质素过氧化物酶的分离纯化及鉴定

丁梦璇;刘炳梅;张国庆;翟楠;谢响明;王贺祥;

2011, 0(08): 198-202.

摘要 ( 77 )

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木质素过氧化物酶是一种重要的具有工业应用前景的木质素降解酶,但已报道真菌来源的木质素过氧化物酶只能在酸性低温条件下发挥作用,限制了其进一步的工业应用。通过培养一株耐热耐碱放线菌——绿色糖单孢菌发酵产酶,采用DEAE-Cellulose,CM-Cellulose和Superdex 75凝胶过滤层析等分离纯化方法,得到一种具有耐热耐碱特性的木质素过氧化物酶。经凝胶电泳检测其为单一蛋白,分子量为41kD。最终纯化倍数达到20倍,活性回收率为6%。采用LTQ法对纯酶进行蛋白质归类鉴定,得到其部分氨基酸片段,为该酶的进一步分子生物学研究奠定基础。

肉葡萄球菌tat-gfp融合基因的构建与表达

于长燕;郑秀;朱燕;孟庆艳;王梦晓;高强;

2011, 0(08): 203-207.

摘要 ( 95 )

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将PCR扩增的肉葡萄球菌铁离子过氧化物酶基因(fepB)的双精氨酸转运(Tat)信号肽DNA序列与绿色荧光蛋白基因(gfp)亚克隆到pCX9质粒中构建可表达的tat-gfp融合基因,再将形成的pCX19-Tat-GFP质粒电转化转入肉葡萄球菌宿主中。提取阳性克隆子质粒进行酶切验证,表明表达载体pCX19-Tat-GFP成功地构建并转化。用木糖诱导重组菌株后,分别使用荧光显微镜和SDS-PAGE检测外源GFP蛋白的表达分泌情况。结果显示,菌体能够发出绿色的荧光,且蛋白电泳能够在细胞质与细胞壁组分中检测到GFP蛋白条带,表明肉葡萄球菌宿主可以将表达载体pCX19-Tat-GFP表达的GFP在细胞质中正确折叠,并以活性形式转运到细胞壁部分。

产异丁醇大肠杆菌工程菌的构建

林丽华;郭媛;庞浩;黄日波;

2011, 0(08): 208-212.

摘要 ( 100 )

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酮酸脱羧酶是异丁醇生物合成的关键酶,而大肠杆菌中没有此基因。将乳脂乳球菌NIZO B1157的2-酮酸脱羧酶基因kdcA克隆到非生产菌株大肠杆菌中,同时串联表达与前体物质酮酸相关的alsS、ilvC和ilvD基因,构建了串联表达质粒pSTV29-alsS-ilvC-ilvD-kdcA。大肠杆菌工程菌成功表达了4个基因,并能利用葡萄糖发酵产异丁醇,发酵24 h后最高产量为3 g/L。

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