人内皮素受体A基因克隆及表达

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (2): 187-192.

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人内皮素受体A基因克隆及表达

潘晓菲¹, 时丽丽², 谭初兵², 吕超君¹, 徐为人², 汤立达²

1.天津医科大学基础医学院，天津 300070；2.天津药物研究院天津市新药设计与发现重点实验室，天津 300193

收稿日期:2013-08-12 出版日期:2014-02-27 发布日期:2014-02-27
作者简介:潘晓菲，女，硕士研究生，研究方向：药理学；E-mail：sumu7@126.com
基金资助:
天津市应用基础及前沿技术研究计划（12JCYBJC18800），国家“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09105102，2011ZX-09401-009）

Clone and Expression of Human ETA

Pan Xiaofei¹, Shi Lili², Tan Chubing², Lü Chaojun¹, Xu Weiren², Tang Lida²,

（1. Basic Medical College，Tianjin Medical University，Tianjin 300070；2. Tianjin Key Laboratory of Molecular Design and Drug Discovery，Tianjin Institute of Pharmaceutical Research，Tianjin 300193）

Received:2013-08-12 Published:2014-02-27 Online:2014-02-27

摘要/Abstract

摘要： 为了建立内皮素受体拮抗剂筛选系统，克隆人ETA基因，构建真核表达载体，并实现pTag-Lite SNAP-ETA在CHO-K1细胞中的瞬时表达。从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETA基因，连接到pTag-Lite SNAP质粒，构建表达载体pTag-Lite SNAP-ETA，用FuGENER HD转染试剂将表达载体pTag-Lite SNAP-ETA转染入CHO-K1细胞内，通过荧光显微镜检测融合蛋白SNAP-ETA的表达。DNA测序结果表明pTag-Lite SNAP-ETA表达载体构建成功，荧光显微镜检测结果表明人ETA在CHO-K1细胞中有效表达。

关键词: 内皮素受体A, RT-PCR, pTag-Lite, SNAP载体, CHO-K1细胞, 表达

Abstract: It was to facilitate inhibitor screening of endothelin receptor, cloning of human endothelin receptor gene ETA, construction of eukaryotic expression vectors and transient expression of pTag-Lite SNAP-ETA in CHO-K1 cells. Method Human ETA gene fragment were amplified from human lung cancer cell line A549 via RT-PCR and inserted into pTag-Lite SNAP plasmid, the recombinant plasmids were then transiently transfected into CHO-K1 cells using FuGENE? HD, expression of ETA was observed via fluorescence microscope. Result Sequencing result showed pTag-Lite SNAP-ETA expression vector were correctly constructed. Fluorescence microscope images indicated that two vectors were expressed in CHO-K1 cells.

潘晓菲, 时丽丽, 谭初兵, 吕超君, 徐为人, 汤立达. 人内皮素受体A基因克隆及表达[J]. 生物技术通报, 2014, 0(2): 187-192.

Pan Xiaofei, Shi Lili, Tan Chubing, Lü Chaojun, Xu Weiren, Tang Lida,. Clone and Expression of Human ETA[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(2): 187-192.

参考文献

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Clone and Expression of Human ETA

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