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磷脂酰丝氨酸合成酶基因pss的克隆与表达

李斌;路福平;刘逸寒;钱磊;戴永鑫;   

  1. 天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室 天津300222,天津300222,天津300222,天津300222,天津300222
  • 出版日期:2007-08-26 发布日期:2007-08-26

  • Published:2007-08-26 Online:2007-08-26

摘要: 磷脂酰丝氨酸合成酶能催化转酯反应,是定向合成特定磷脂类物质特别是磷脂酰丝氨酸的工具酶,但出发菌株产量低,很大程度上限制了酶法合成磷脂酰丝氨酸的工业化应用。利用表达载体pET-22b,实现了大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的同源高效表达。利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,并用HPLC法对纯化后的重组酶的活力进行检测。结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达,蛋白含量是出发菌株的100倍,同时经6h的转酯反应转化率达到33%,重组磷脂酰丝氨酸合成酶活力达到69U/mg蛋白。

关键词: 大肠杆菌, 磷脂酰丝氨酸合成酶, 基因表达, 转酯反应