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重组hIL-10质粒构建及其在毕赤酵母SMD1168中的表达和纯化

封建凯;孙万邦;陈富超;黄俊琼;罗军敏;杜联峰;姚新生;王胜香;   

  1. 遵义医学院免疫学教研室;
  • 出版日期:2010-03-26 发布日期:2010-03-26
  • 基金资助:
    贵州省教育厅自然科学基金重点培育项目(黔教科2008032)

  • Published:2010-03-26 Online:2010-03-26

摘要: 构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础。PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoRI/XbaI双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化法,将其转入毕赤酵母SMD1168,甲醇诱导Mut+型转化子基因表达;对目的蛋白进行检测及纯化。扩增出了目的基因hIL-10cDNA,重组质粒pPICZaA-hIL-10经酶切鉴定和序列测定正确;表达产物经SDS-PAGE分析在42.0kD处可见较浓染条带,Westernblotting分析可见特异条带;ELISA检测72h上清液中目的蛋白浓度可达1.973mg/L;纯化后目的蛋白纯度达67.0%。实现了重组hIL-10在毕赤酵母SMD1168中的成功表达和初步纯化。

关键词: hIL-10, 质粒构建, 毕赤酵母, 基因表达