生物技术通报

基因工程在食品工业中的应用

邵学良;刘志伟;

2009, 0(07): 1-4.

摘要 ( 234 )

PDF (202KB) ( 1776 )

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阐述了基因工程的技术溯源,论述了基因工程在食品工业方面的应用,提出与生产实践相结合的实例;详细介绍了基因工程食品的由来,展望了基因工程技术在食品工业领域中的美好发展前景。

科学出版社新书

2009, 0(07): 4-51.

摘要 ( 103 )

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诱导多能干细胞研究进展

罗庆;宋关斌;袁琳;

2009, 0(07): 5-7.

摘要 ( 189 )

PDF (206KB) ( 814 )

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用4个外源基因从完全分化的人成纤维细胞诱导获得了具有胚胎干细胞特性的诱导多能干细胞(iPS细胞),成功逆转了细胞单向发育的规则,取得了细胞重编程和干细胞研究中的重大突破。围绕c-Myc基因和基因载体、诱导效率和外源基因替代因子等方面的研究内容,综述了自2007年人iPS细胞构建至今,国内外在改进iPS细胞诱导方法上的主要研究进展。

BURP蛋白家族研究进展

饶俊;郑新欣;胡英考;

2009, 0(07): 8-11.

摘要 ( 182 )

PDF (199KB) ( 784 )

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BURP蛋白家族是植物界中广泛存在的比较保守的结构基因家族,在胚胎形成和种子发育过程中具有功能。对BURP蛋白家族的结构特征及其4个亚家族成员的功能进行了综述。

蔗糖转运蛋白的调节

吴转娣;昝逢刚;张树珍;王俊刚;唐建平;

2009, 0(07): 12-16.

摘要 ( 123 )

PDF (337KB) ( 741 )

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对影响植物蔗糖转运蛋白的表达和活性的各种内外调节因子作了综述。分别介绍了蔗糖转运蛋白在转录和翻译水平的调控、蛋白间的互作、激素协调、及外界环境因素等。

植物花粉S基因及其应用研究进展

郭长奎;罗淑萍;于静;李疆;

2009, 0(07): 17-20.

摘要 ( 134 )

PDF (130KB) ( 379 )

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自交不亲和性(self-incompatib ility)研究是探讨植物遗传机制和植物育种的重要基础。在显花植物中,配子体自交不亲和由花柱S基因S-RNase和花粉S基因两个基因控制,这两个基因都具有较高的多态性和序列多样性的特征。花粉自交不亲和性是由花粉特异表达的F-box基因控制,命名为SFB(S hap lotype-spec ific F-box prote in)基因,并认为它就是花粉S基因的首选。就SFB基因的克隆、结构特点和作用机理以及应用予以综述。

慢病毒载体介导RNAi的研究进展

李英明;陈燕慧;

2009, 0(07): 21-26.

摘要 ( 162 )

PDF (223KB) ( 669 )

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RNA i通过双链RNA的介导,特异性阻抑相关序列的表达,从而导致转录后水平的基因沉默。广泛存在于真菌、植物和动物等真核生物中。慢病毒载体是理想的真核细胞基因转移工具,被广泛应用于相关的RNA i研究领域,例如抗病毒研究、癌症及其治疗、遗传性疾病的治疗、基因治疗。现已发现,慢病毒载体能够介导组织特异、时间特异的RNA i,在疾病的基因靶向性治疗上必有广阔的前景。

RNA干扰非特异性研究进展

韩继波;陈晨;陈始明;陶泽璋;

2009, 0(07): 27-30.

摘要 ( 131 )

PDF (266KB) ( 552 )

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RNA干扰(RNA i)靶向基因治疗是目前研究的热点,其依赖序列特异性的基因表达调节为生物学发展带来重大突破。然而在应用RNA i时所产生的一系列非特异性反应阻碍了RNA i进一步的临床应用,这其中主要包括脱靶基因抑制和内在免疫副反应等。主要从非特异性反应的产生机制、脱靶效应的预测和RNA i非特异性的控制3个方面对近几年研究成果进行综述,探讨临床应用前景。

FoxO转录因子的活性调节及对哺乳动物细胞进程的调控

王远孝;王恬;

2009, 0(07): 31-34.

摘要 ( 147 )

PDF (164KB) ( 1186 )

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FoxO转录因子在哺乳动物的细胞分化、增殖和细胞存活中发挥着重要调控作用,其转录活性受PI3K通路、非PI3K依赖通路、乙酰化和泛素化作用等多种途径调控。FoxO受到上游信号分子PI3K/Akt、SGK等的激活,调节靶基因的转录,从而调节哺乳动物细胞周期的进程和凋亡事件。FoxO已成为肿瘤、癌症科学研究的热点之一。

影响骨髓间充质干细胞增殖的调节因素及其信号转导途径

袁琳;宋关斌;

2009, 0(07): 35-38.

摘要 ( 188 )

PDF (378KB) ( 367 )

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骨髓间充质干细胞是一类骨髓来源的成体干细胞,其生长、增殖行为受到多种环境因素的影响。胞外基质、细胞因子、机械刺激等理化因素对骨髓间充质干细胞的生长和增殖起着重要的调节作用,这些调节因素通过不同的信号转导途径影响骨髓间充质干细胞增殖,但又常常出现交叉对话、相互影响。就胞外基质、细胞因子和机械刺激影响骨髓间充质干细胞的增殖及其相应信号转导途径的研究进展作一简要综述。

细胞色素P450调节肝脏药物代谢的途径

王潇;刘华;白洁;

2009, 0(07): 39-41.

摘要 ( 150 )

PDF (106KB) ( 1100 )

相关文章 | 计量指标

大量研究认为细胞色素P450与药物性肝损伤的病理生理过程密切相关,对其在肝损伤的作用已成为当前研究的一个热点。主要介绍细胞色素P450与药物性肝损伤的相关研究进展。

蚂蚁分子系统学研究进展

褚姣娇;徐正会;

2009, 0(07): 42-47.

摘要 ( 176 )

PDF (164KB) ( 666 )

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蚂蚁是分布广泛、种类和数量丰富的社会性昆虫。蚂蚁的传统分类学研究存在一定局限性,而分子生物学为蚂蚁的系统学研究提供了新途径。概述了蚂蚁分子系统学在研究内容和技术方法上的研究进展,并对今后的研究做了展望。

高分辨率熔解曲线及其应用

李旦;王加启;卜登攀;刘开朗;李珊珊;赵圣国;于萍;

2009, 0(07): 48-51.

摘要 ( 193 )

PDF (414KB) ( 1262 )

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饱和荧光染料、未标记探针与实时荧光PCR结合产生的高分辨率熔解曲线(HRM)是一种新的实时定量技术,在检测速度、灵敏度和准确性上具有突出的优点,近几年来在突变扫描、DNA甲基化和基因分型等医学检测中发展迅速。就HRM的原理、应用以及在HRM基础上发展起来的未标记探针(un lab led probe)HMR、弹回探针(snap probe)HMR技术作一介绍。

微生物源α-淀粉酶抑制剂研究进展

王晓婧;薛仁风;李梅;曾凡荣;

2009, 0(07): 52-55.

摘要 ( 187 )

PDF (208KB) ( 523 )

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微生物源α-淀粉酶抑制剂能特异性抑制哺乳动物和某些微生物的α-淀粉酶,在医药上有重要的应用价值,因而成为近年来新的研究热点。论述了国内外分离纯化的微生物源α-淀粉酶抑制剂,对其蛋白、基因结构、作用机理及应用前景等作了概述。

基因打靶技术在乳腺生物反应器中的应用

朱超;冯宝刚;张明;关伟军;马月辉;

2009, 0(07): 56-59.

摘要 ( 107 )

PDF (127KB) ( 337 )

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利用转基因动物的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。目前采用的转基因技术由于其固有的局限性,未能使乳腺生物反应器的研究取得长足的进步。基因打靶克服了随机整合的盲目性和危险性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。简述了制备乳腺生物反应器过程中靶细胞、基因打靶的策略、打靶位点及问题,并对其发展方向进行了小结及展望。

实时荧光定量PCR在猪肺炎支原体检测中的应用

王建波;任杰;张映;

2009, 0(07): 60-62.

摘要 ( 109 )

PDF (202KB) ( 489 )

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实时荧光定量PCR技术是一种利用荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。综述了荧光定量PCR技术的基本原理及其在猪肺炎支原体检测中的应用。

固态发酵技术提高苹果渣附加值的应用研究

王丽媛;仇农学;

2009, 0(07): 63-67.

摘要 ( 120 )

PDF (242KB) ( 590 )

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能源危机和苹果渣带来的环境问题促进了固态发酵技术的发展。相对于液体深层发酵,固态发酵在生产中具有处理量大,操作简单,成本低等独特的优势。综述了以苹果渣为原料利用固态发酵技术生产酶制剂、柠檬酸、酒精和蛋白饲料等的研究应用进展,以及存在的问题和前景展望。

水稻多逆境诱导基因OsMsr4的克隆与表达分析

王曼玲;Rocha Pedro;李落叶;徐孟亮;夏新界;

2009, 0(07): 68-75.

摘要 ( 143 )

PDF (1054KB) ( 466 )

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为深入了解水稻逆境反应的分子机理和发现新的耐逆相关功能基因,采用A ffym etrix水稻表达芯片分析超级稻两优培九母本培矮64S(O ryza sativaL.)不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平,筛选出多个多因子诱导高表达特异基因(待另文发表)。O sM sr4是其中一个在多种逆境条件,各生长发育时期与组织器官,其表达量均显着上调的基因,用实时定量PCR方法对其表达水平进行了进一步的分析,所得结果与基因芯片结果基本吻合。用PCR方法扩增获得长为550 bp全长基因序列,其编码的144个氨基酸残基形成Cys2H is2型双锌指结构蛋白,并且锌指结构的α-螺旋区含有植物锌指蛋白特定的保守序列QALGGH。因此,OsM sr4有可能是TFⅢA型锌指蛋白,作为转录因子参与各种环境胁迫应答反应,调控多个逆境相关基因表达。

OsbHLH1基因过表达载体构建及转化水稻研究

罗伯祥;邓力华;陈芬;陈受宜;李文彬;肖国樱;

2009, 0(07): 76-81.

摘要 ( 163 )

PDF (716KB) ( 1293 )

相关文章 | 计量指标

OsbHLH1基因编码bHLH类转录因子,与水稻耐寒性相关。以pCAMBIA3300为母体,利用玉米泛素(Ubiquitin)启动子构建了能使OsbHLH1基因过表达且含有Bar基因的植物表达载体p3300-Ubi-Ω-OsbHLH1。利用基因枪法将其转化到粳稻品种东稻3号中,获得再生苗47株。选取其中9株进行PCR、Southern检测,结果表明目的基因已经整合到水稻基因组中;草铵膦叶片涂布试验结果表明,Bar基因在水稻植株中正常表达;低温处理后,除45号植株外,其余8株光合速率的变化率显着低于非转基因对照,初步证明OsbHLH1基因在水稻中过表达显着提高了水稻的耐低温能力。

烟草ESTs资源的SSR信息分析

胡重怡;蔡刘体;陈兴江;

2009, 0(07): 82-85.

摘要 ( 121 )

PDF (280KB) ( 395 )

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烟草ESTs数量迅速增加为开发新的SSR标记提供了宝贵的资源。经过软件分析,对242 683条烟草ESTs序列剔除冗余序列,在211 728条非冗余烟草ESTs序列中,共检索出9 339个SSR,SSR之间的距离约为14.21 kb,检出率为4.41%,包括216种重复基元。其中三核苷酸重复类型的SSR占主导地位,占总SSR的50.34%,其次为二核苷酸和单核苷酸,分别为23.00%,16.48%,其余重复类型所占比例均不足5%。在所有重复基元中,A/T重复为主要类型,占所有重复14.68%,其次为AT/TA、AG/TC、AAG/TTC,分别为10.49%、9.48%、6.85%。随机设计10对EST-SSR引物,对6个品种烟草进行扩增,10对EST-SSR引物均能扩增出产物,其中1对引物在6个品种有多态性。本研究为烟草EST-SSR标记的建立和进一步应用奠定了基础。

蒙古冰草Actin基因片段的克隆及序列分析

赵彦;云锦凤;石凤敏;刘亚玲;

2009, 0(07): 86-89.

摘要 ( 107 )

PDF (642KB) ( 316 )

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旨在利用同源序列法分离蒙古冰草(Agropyron mongolicumKeng)Actin基因同源片段,为研究其他基因在蒙古冰草中的表达和调控提供内标参照。根据禾本科植物小麦Actin基因(AB181991)的保守序列设计2对引物A4和A5,采用RT-PCR扩增蒙古冰草的Actin基因片段,分别得到656 bp和848 bp的片段,使用DNAman和DNAuser等分子生物学软件进行序列分析,将2个片段的重复序列合并后获得一段长度为962 bp的基因片段,编码237个氨基酸,将克隆的Actin基因片段命名为MwACT。该序列与其它植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在80%以上,其中与小麦、大麦的同源性达到94%;与氨基酸序列的同源性均在90%以上。

高盐沉淀CTAB法提取温室菊花基因组DNA

马月萍;戴思兰;

2009, 0(07): 90-93.

摘要 ( 123 )

PDF (259KB) ( 659 )

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根据温室菊花植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对CTAB法加以改进:在待沉淀液中加入1/2体积5 mol.L-1NaCl。改进后的方法获得的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰。以提取的DNA为模板,用一对引物扩增菊花中18S基因,得到条带单一,大小与已知一致,说明获得的DNA可以进行PCR扩增,EcoRI酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以满足相关的分子生物学研究。

酶法脱蛋白提取大枣多糖工艺的研究

邱承军;姚文华;

2009, 0(07): 94-97.

摘要 ( 130 )

PDF (416KB) ( 603 )

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讨论了从提取环磷酸腺苷后的枣汁中提取枣多糖的最佳工艺条件,包括枣汁浓缩4倍,加无水乙醇调枣汁中乙醇体积分数为60%,醇沉5 h;木瓜蛋白酶脱蛋白效果最佳,木瓜蛋白酶液与枣汁的体积比为0.4∶1,温度60℃、pH5.0,酶解90m in,蛋白脱除率可达91.8%;AB-8树脂脱色,脱色率为73.64%,多糖得率为94.4%。红外光谱显示,提取的多糖与常规方法提取的多糖成分相同。

PQR转运体基因赋予大肠杆菌BL21百草枯抗性

郭书巧;郑卿;倪万潮;

2009, 0(07): 98-103.

摘要 ( 106 )

PDF (1305KB) ( 453 )

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前期研究中成功地分离了2个对百草枯具有高度抗性的土壤细菌SPQ03和SPQ14。本研究从这两个菌分别克隆了基因PnPQR和OaPQR,二者ORF全长均为1 233 bp,编码410个氨基酸残基,含有11个跨膜区(TMS),属于非典型的主要易化超家族(major facilitator superfamily,MFS)。立体结构分析表明,蛋白的N端和C端分别由5个和6个由α-螺旋组成的跨膜区。只有P151L和P154V两个氨基酸不同。将两个基因在大肠杆菌BL21菌株中异源表达,能提高大肠杆菌对百草枯的抗性,但不能提高其对过氧化氢的抗性。

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIIA基因的序列分析及其B细胞表位预测

李任峰;田香勤;何启盖;王自良;赵坤;李学斌;王三虎;

2009, 0(07): 104-108.

摘要 ( 78 )

PDF (1057KB) ( 362 )

相关文章 | 计量指标

为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneum oniae,App)ApxIIA基因的结构和功能,选取GenBank中6株不同App分离株,采用生物信息学方法对其ApxIIA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对,并选择其中AY232288.1菌株(湖北分离株)ApxIIA基因为研究对象,分析该基因所编码蛋白质的理化性质,并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析。结果表明,6株不同App分离株ApxIIA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65.56(和88.42(,在AY232288.1菌株ApxIIA蛋白的肽链中,745~751和801~807区段可能是其B细胞表位优势区。本研究首次利用生物信息学方法对ApxIIA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测,为ApxIIA基因功能的深入研究及APP多表位疫苗的设计奠定了基础。

大菱鲆MC1R基因克隆与序列分析

郭忠宝;仇雪梅;白杨;刘洋;王秀利;

2009, 0(07): 109-112.

摘要 ( 105 )

PDF (299KB) ( 464 )

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黑素皮质素受体1(melanocortin-1-receptor,MC1R)是黑色素形成调控中的一个关键因子。MC1R通过调节色素产生的数量和类型,决定皮肤表型。本研究根据鱼类的MC1R基因保守区的核苷酸序列设计引物,利用PCR技术扩增出大菱鲆MC1R基因部分片段,纯化后进行克隆测序。经生物软件拼接后,得到大菱鲆MC1R基因编码区951 bp片段。序列分析表明:此片段与GenBank上公布的部分鱼类的MC1R基因序列同源性较高(97%~86%)。本试验结果为进一步研究该基因的结构与生物学功能奠定了基础。

稿件书写规范

本刊编辑部;

2009, 0(07): 112-112.

摘要 ( 65 )

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黄鳝ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

杨浩;陈宏喜;陈欣;杨太有;

2009, 0(07): 113-116.

摘要 ( 96 )

PDF (346KB) ( 316 )

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以黄鳝基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,对各反应因子、引物退火温度和循环参数进行优化。建立了黄鳝的最适ISSR-PCR反应体系,25μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板。最佳反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,48~57℃复性40 s(随引物而确定),72℃延伸1.5 min,循环次数40;72℃延伸10 min。利用所建立的ISSR反应体系,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。

人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的构建及表达

张梅;邬敏辰;金坚;

2009, 0(07): 117-121.

摘要 ( 70 )

PDF (460KB) ( 359 )

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构建人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体,并表达得到该融合蛋白。通过设计强特异性的引物,利用重叠PCR技术,定向定量的拼接得到hPTH(1-34)二联体-HSA融合蛋白的基因;将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K,大量扩增重组质粒,并用SalI线性化,电击转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷和G418抗性双重筛选得到阳性转化子;挑选阳性转化子进行甲醇诱导表达。测序结果表明得到的重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)二联体-HSA与目标设计完全一致;基因组PCR鉴定结果证明成功构建了hPTH(1-34)二联体-HSA融合基因的毕赤酵母(GS115)表达系统;SDS-PAGE电泳表明融合蛋白获得了表达,尿微量白蛋白试剂盒测定甲醇诱导表达3d后融合蛋白的产量为127 mg/L。

Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶真核表达载体的构建及其表达鉴定

樊萍;杨竹;胡接力;崔静;汤雄文;王露颖;甘胜伟;

2009, 0(07): 122-127.

摘要 ( 127 )

PDF (440KB) ( 377 )

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为构建单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1TK)的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK,鉴定其在真核细胞中的表达和功能。以pORF-HSV1TK为模板,PCR扩增的目的基因HSV1TK片段与pMD18-T载体相连接构建重组克隆pMD18-T/HSV1TK。再双酶切出HSV1TK片段,插入pcDNA3.1-EGFP多克隆位点,构建pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK真核表达载体并进行酶切、测序鉴定[1]。分别用荧光显微镜观察和RT-PCR方法检测脂质体介导pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK在卵巢癌细胞SKOV3的表达;分别用MTT法和光镜检测胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1TK/GCV)系统对SKOV3体外杀伤作用及旁观者效应。结果表明,重组载体酶切鉴定结果与预期结果一致,基因序列与GenBank上报道的HSV1TK基因序列完全一致。荧光显微镜观察转染后的细胞发出绿色荧光;RT-PCR结果表明HSV1TK基因能在SKOV3内有效表达。MTT和光镜结果显示转染HSV1TK基因的SKOV3细胞,加入前体药物丙氧鸟苷(GCV)处理后对其有明显的杀伤作用和旁观者效应。成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK能在SKOV3细胞中稳定表达,且HSV1TK对卵巢癌细胞株SKOV3体外有强大的杀伤作用和旁观者效应。

本刊启事

本刊编辑部;

2009, 0(07): 127-127.

摘要 ( 94 )

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survivin启动子驱动的shRNA在宫颈癌SiHa细胞中的特异性表达

袁成福;黄秀凝;程莉;卜友泉;刘革力;易发平;杨正梅;宋方洲;

2009, 0(07): 128-133.

摘要 ( 125 )

PDF (746KB) ( 454 )

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研究survivin启动子驱动的小发夹RNA(shRNA)在宫颈癌SiHa细胞中的特异性表达。PCR扩增survivin启动子,构建以survivin启动子驱动增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达的真核表达载体pEGFP-C1/Surv,并检测survivin启动子的活性;构建针对EGFP的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6,并检测shRNA在U6启动子驱动下的干扰效果;用有活性的survivin启动子取代pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6载体中的U6启动子,从而获得新的shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv;将pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv转染到宫颈癌SiHa细胞及正常人脐静脉内皮HuVEC细胞,观察EGFP在两种细胞中的表达变化。结果表明,成功扩增survivin启动子并验证该启动子具有活性;成功构建EGFP shRNA真核表达载体pGenesil-1-EGFP-shRNA/U6,并验证shRNA在U6启动子驱动下具有较好的干扰效果;成功构建pGenesil-1-EGFP-shRNA/Surv载体,分别转染SiHa及HuVEC细胞,在SiHa细胞中观察到较少的绿色荧光蛋白表达,而在HuVEC细胞中观察到较多的绿色荧光蛋白表达。survivin启动子能驱动shRNA在宫颈癌SiHa细胞中特异性表达,而在正常HuVEC细胞中不表达。

c-flag-ago3质粒在人293细胞系中的表达及AGO3蛋白复合物的细胞定位

刘丽丽;王荣富;

2009, 0(07): 134-136.

摘要 ( 133 )

PDF (641KB) ( 513 )

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将c-flag-ago3质粒转入人293细胞系中,使c-flaga-go3基因稳定表达,为进一步研究AGO3蛋白复合物的结构、功能奠定了基础。利用亲和标签flag对目标蛋白进行检测和监测,将已合成的c-flag-ago3质粒和用于对照的质粒si-ago3(能使ago3基因沉默的质粒)导入人293细胞系中,在荧光镜下观察转染效果。RT-PCR法检测基因含量,蛋白印迹法(WB)检测人293细胞表达的flag-ago3,并对其蛋白复合物进行细胞定位。结果显示,c-flag-ago3质粒和si-ago3质粒成功地导入人293细胞系中,免疫细胞化学显示c-flag-ago3基因在细胞中高表达、并检测到AGO3复合物定位于细胞质中。AGO3复合物在细胞中可稳定表达,为进一步研究AGO3蛋白复合物的构成及其在人体中的功能奠定了基础。

羟基红花黄色素A对脂多糖作用后血管内皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

王银光;张琴;涂利宽;万敬员;李炯;罗文军;

2009, 0(07): 137-140.

摘要 ( 124 )

PDF (275KB) ( 416 )

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旨在探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用后人脐静脉内皮细胞株HUVECs细胞株诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。培养HUVECs细胞株,用1 mg/L LPS及不同浓度的HYSA处理细胞24 h,MTT法检测细胞增殖情况,硝基还原酶法检测培养液中一氧化氮(NO)含量,RT-PCR及Western blotting检测iNOS表达。结果表明0.01、0.1 mmol/L HYSA对LPS引起的iNOS升高无明显作用,但1mmol/L HYSA能明显抑制LPS作用后高度表达的iNOS量。因此,HYSA能下调LPS所致iNOS的异常表达,这可能有助于临床治疗血管炎症疾病。

原子力显微镜观测紫外线诱导的K562肿瘤细胞DNA损伤

刘颖;齐浩;孙润广;陈文芳;郭伟;

2009, 0(07): 141-145.

摘要 ( 114 )

PDF (1054KB) ( 259 )

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利用彗星电泳检测出UVB、UVC短时间照射会使肿瘤细胞的DNA发生断裂,而长时间照射之后彗星电泳无法检测到碎片,推测可能是由于DNA分子交联的原因[1],国内外尚无定论。为了更直观的研究这种现象,提取了UVB,UVA照射后K562细胞的DNA,并调节到合适的浓度在原子力显微镜下观测。实验结果表明UVB对K562肿瘤细胞DNA损伤的影响呈现时间/剂量效应,较短时间照射主要产生DNA的链断裂,较长时间辐射则主要产生DNA链的交联。UVC对K562肿瘤细胞DNA的损伤大于UVB。UVC短时照射即可引起DNA的断裂和交联,较长时间辐射主要产生交联和一些断裂;长时间照射不但产生大量交联,同时有大量断裂产生,并发生凝缩和缠绕等结构破坏。

BMP2诱导C3H10细胞成骨分化的TGFβ-Ⅰ型受体的体外分析

张燕;翁亚光;文巍;冯涛;罗进勇;

2009, 0(07): 146-149.

摘要 ( 175 )

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筛选和分析与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。利用显性负性突变型TGF-βⅠ型受体竞争抑制配体功能的特性,运用碱性磷酸酶定量测定、Real time PCR等方法,初步筛选出可能与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的的TGF-βⅠ型受体,随后运用RNA干扰的方法抑制相应TGF-βⅠ型受体的表达,进一步证实相关TGF-βⅠ型受体与BMP2发挥诱导成骨活性的关系。结果证实,显性负性突变的ALK3和ALK6能够抑制BMP2诱导的C3H10细胞成骨分化;RNA干扰抑制ALK3或(和)ALK6表达后,BMP2诱导C3H10细胞向成骨分化的趋势受到抑制。因此,ALK3和ALK6是与BMP2诱导C3H10细胞成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。

优化重叠PCR法进行单链抗体基因扩增和点突变

符勇耀;李正国;李泮志;邓伟;杨迎伍;王中康;

2009, 0(07): 150-155.

摘要 ( 149 )

PDF (601KB) ( 1115 )

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利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点,国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR,针对影响重叠PCR扩增的拼接类型,引物设计,反应条件等进行优化。结果表明两段重叠连接比三段更容易实现,且扩增效果好;引物的互补序列长度一般应大于15 bp,且在18~24 bp时扩增效果最好;退火温度在52~60℃,Mg2+浓度在1.5~2.5 mM时对拼接的效果影响较小;直接或间接使用拼接模板均可以实现重叠PCR的扩增。利用优化策略,首次构建了抗除虫菊酯的scFv基因文库并引入抗XAC糖蛋白scFv基因的点突变,为除虫菊酯抗体文库构建和抗XAC重组抗体的稳定表达奠定了基础。

添加N-乙酰-D-半乳糖胺消除大豆凝集素抗营养活性的可行性研究

张利鑫;刘强;

2009, 0(07): 156-159.

摘要 ( 103 )

PDF (386KB) ( 455 )

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在以玉米淀粉和生大豆为主的日粮中添加糖配体(N-乙酰-D-半乳糖胺),通过观察肉鸡生长性能和大豆凝集素与肠道细胞结合率的变化,研究添加糖配体消除大豆凝集素(SBA)抗营养活性的可行性,并进一步探讨该糖配体对抑制SBA引起的肉鸡生长性能下降的机理。试验选取40只健康的1日龄AA肉鸡,随机分为两组,每组4个重复,两组动物分别饲喂半纯合对照日粮和添加了500 mg/kg N-乙酰-D-半乳糖胺的试验日粮,自由采食和饮水,试验期25 d。结果显示:试验组肉鸡的平均日增重提高了31.1%,料肉比降低了11.2%;十二指肠和空肠上皮细胞的SBA结合率分别降低了56.5%和51.9%,说明添加N-乙酰-D-半乳糖胺能降低SBA与小肠上皮细胞结合,减少肠道损伤,可起到消除其抗营养活性的作用。

重组运动发酵单胞菌的构建及木糖利用特性研究

张颖;马瑞强;洪浩舟;陆伟;张维;林敏;陈明;

2009, 0(07): 160-165.

摘要 ( 97 )

PDF (444KB) ( 556 )

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将大肠杆菌(Escherichia coli)木糖代谢的关键酶基因。引入到运动发酵单胞菌中,获得能利用木糖发酵生产乙醇的重组工程菌株PZM。混合糖发酵过程中,重组菌利用葡萄糖和木糖生成乙醇的效率分别达到理论值的81.2%和63.1%。

β-甘露聚糖酶产生菌的分离、鉴定及产β-甘露聚糖酶最适条件的研究

黄俊丽;包凌霞;王贵学;

2009, 0(07): 166-170.

摘要 ( 158 )

PDF (453KB) ( 542 )

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以采集的土壤样品为试验材料,经过富集培养及分离纯化,筛选出2株产β-甘露聚糖酶的菌株。采用摇瓶培养分别测定其酶活力,其中1株菌株酶活力较高,酶活力达50.36 U/ml。生理生化性质鉴定及16S rDNA序列相似性结果表明该菌为假单孢菌(Pseudomonassp.)。产酶的最适条件研究发现,1 g/100 ml玉米粉,2 g/100 ml魔芋粉,pH6.0,32℃为最优产酶条件,酶活力达185.37 U/ml,是优化前的3.68倍。该菌产酶迅速,培养12 h后已达产酶高峰。粗酶的性质研究发现,该酶是一种酸性的甘露聚糖酶,作用的最适pH为4.0,最适反应温度为55℃;该酶的稳定性较好,在pH4.0~6.0、温度为40~55℃保持较好的稳定性。

农杆菌质粒DNA的间接酶切鉴定

马滋蔓;王文治;杨本鹏;张树珍;杨志坚;

2009, 0(07): 171-173.

摘要 ( 142 )

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采用常规手段提酶切鉴定法,与普通大肠杆菌质粒小量抽提试剂盒提取农杆菌质粒酶切鉴定法(简称试剂盒法)和农杆菌质粒反导大肠杆菌间接酶切鉴定法(简称间接法)进行对比,发现本试验创新的试剂盒法和间接法可轻松做酶切鉴定,可为农杆菌质粒DNA提取经验不足者参考。

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