当期目录

2014年 第30卷 第4期    刊出日期：2014-04-29

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综述与专论

木薯FEC诱导及农杆菌介导转化的研究进展

程琴, 金刚, 李慧敏, 彭欣怡, 黎萍, 王丽萍

2014, 30(4):  1-5. 

摘要 ( 225 )   PDF  

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在木薯生物技术中，转基因植株的生产很普遍，它主要通过器官发生和体细胞胚胎发生途径，木薯遗传转化的关键技术是FEC的诱导和形成，农杆菌介导的FEC转化在转基因木薯领域被广泛应用。概述木薯再生途径中体胚和FEC制备、诱导及增值，并对农杆菌介导的转化及其在木薯中的应用等进行综述。

拟南芥花分生组织决定基因AGL24对花发育的影响

江为, 谷慧英, 王志敏, 宋明, 汤青林

2014, 30(4):  6-13. 

摘要 ( 319 )   PDF (1376KB) ( 953 )  

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AGAMOUS-LIKE 24(AGL24)基因编码MADS蛋白，在植物花发育的不同时期发挥着重要的作用。综述了AGL24如何通过和其他花分生组织决定基因的相互作用来影响拟南芥花的发育，调节开花时间，这将有助于人们对开花基因调控网络有更进一步的认识，能够在生产上有效的调控开花时间，从而为植物育种提供借鉴。

内生菌对提高植物抗盐碱性的研究进展

李娇, 张宝龙, 赵颖, 辛士刚, 陈强, 宋宁宁, 李雪梅

2014, 30(4):  14-18. 

摘要 ( 254 )   PDF (1126KB) ( 1142 )  

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土壤盐碱化是制约我国农作物产量的主要因素之一。如何增强农作物的抗盐碱特性，已成为我国农业持续高效发展的重大课题。植物内生菌存在于植物内部，在增强植物抗病、抗虫、抗旱等胁迫能力方面具有一定作用。内生菌与植物共生关系对植物的显著影响这一现象引起了国内外学者的广泛关注。主要综述植物内生菌的多样性，并从植物的ROS清除系统、细胞中渗透调节物质、矿质元素吸收以及光合作用等方面来说明内生菌对植物耐盐碱能力的影响。

新鲜蔬果中食源性致病细菌研究进展

刘一倩, 易欣欣

2014, 30(4):  19-24. 

摘要 ( 255 )   PDF (1154KB) ( 690 )  

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食用新鲜蔬果引起的食源性疾病快速增长，恶性事件时有发生。关注于国外与蔬果有关的致病细菌的研究进展，主要介绍了蔬果的微生物性质调查，分析了细菌总数、大肠菌群和致病细菌的分布规律；重要的致病细菌污染来源及影响污染率的原因；致病细菌在蔬果中的存活规律，并对重要因素进行排序；介绍了去除致病细菌通用方法和具有潜在应用价值的方式方法；致病细菌在蔬果中的附着方式，着重介绍了大肠杆菌O157：H7的3种附着方式。另外，还对相关的研究趋势提出了看法。

抗菌肽的临床应用与内源性表达调控研究进展

陈红伟, 李英伦, 刘娟, 吴俊伟, 黄庆洲

2014, 30(4):  25-29. 

摘要 ( 270 )   PDF (1160KB) ( 993 )  

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抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽，具有分子量低、热稳定、广谱的抗菌、抗病毒及抑制肿瘤的生物活性，是动植物防御体系的一个重要组成部分，在机体抵抗病原的入侵方面起着重要的作用。但实践表明，作为抗生素替代品的抗菌肽的开发并非易事。针对近年来抗菌肽研究的热点，对抗菌肽的临床应用和表达调控进行了简要综述。

致病性弧菌外膜蛋白及其免疫原性研究进展

陆盼盼, 郭松林, 关瑞章, 冯建军

2014, 30(4):  30-35. 

摘要 ( 208 )   PDF (1170KB) ( 909 )  

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弧菌为水产养殖环境中常见的条件致病菌，其暴发可导致养殖鱼虾贝类大量死亡。由于常用的化学药物防治方法存在耐药性、药物残留等问题使得弧菌病的防治面临新的挑战，因而如何获得安全有效的防治方法成为弧菌所致疾病研究的重点和难点。弧菌为革兰氏阴性菌，外膜是该类型菌细胞壁特有的结构，由蛋白、糖和脂质构成。其中外膜蛋白易为宿主免疫系统识别为异物，可以激发机体的体液免疫和细胞免疫，有可能作为弧菌疫苗的有效成分。对弧菌外膜蛋白免疫原性的研究进展作一综述，以期为弧菌病的防治在外膜蛋白水平上提供一种有效的解决途径。

海绵共附生真菌多样性及其次级代谢产物的研究进展

宋恺, 胡洁, 林文翰, 季宇彬

2014, 30(4):  36-42. 

摘要 ( 274 )   PDF (1253KB) ( 887 )  

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海绵由于其独特的生理结构、进食方式使其体内部聚集了大量的微生物，这些微生物产生了多种结构新颖的生物活性物质，因此海绵及其共附生微生物的研究成为了海洋药物研发的热点。就海绵中共附生真菌的分布情况，新技术的应用及其生物次级代谢产物的生物活性展开综述。

技术与方法

五种DNA提取方法对鱼加工制品DNA提取效果的比较

李进波, 盛婧, 李想, 潘良文, 吕蓉, 杨捷琳

2014, 30(4):  43-49. 

摘要 ( 308 )   PDF (1443KB) ( 1041 )  

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比较5种DNA提取方法对各种鱼加工制品的DNA提取效果，为后续检测提供更加有效的DNA提取方案。以11种不同加工方式和加工程度的鱼制品为样本，采用5种DNA提取方法——CTAB法以及4种常用市售试剂盒进行DNA提取。对DNA的提取质量、浓度和用于PCR扩增的效果及方法的可操作性等方面进行比较研究。结果显示，5种方法均可用于大多数鱼加工制品的DNA提取，但每种方法各有利弊。因此认为没有一种DNA提取试剂盒可以广泛地对所有类型鱼制品样品均有非常好的提取效果。

人工miRNA沉默基因的研究

张献贺, 孔稳稳, 李勇, 李晶

2014, 30(4):  50-56. 

摘要 ( 454 )   PDF (1592KB) ( 1924 )  

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人工miRNA(amiRNA)是一种高效的基因沉默技术，其原理是以植物内源miRNA的前体为基本骨架，将其茎环结构中的miRNA/miRNA*序列替换为amiRNA/amiRNA*序列，使产生的amiRNA作用于目标靶基因，以实现对靶基因表达的抑制。以拟南芥中转录因子基因MYB28为例，介绍了amiRNA的设计基本原理和构建方法。在MYB28基因序列的3'端、5'端和中间部分分别设计了amiRNA，以拟南芥内源的miRNA 319a前体为骨架，以靶向于MYB28的amiRNA序列替代原有的miRNA 319a序列，在拟南芥中过量表达，获得的转基因植株中MYB28表达水平平均降低了86%。根据试验结果对人工miRNA沉默基因技术的特点及应用前景进行了讨论。

响应面法优化革耳Panus rudis FG-35菌株产漆酶培养基

刘剑, 刘君昂, 周国英, 李河, 杨菁

2014, 30(4):  57-63. 

摘要 ( 210 )   PDF (1412KB) ( 756 )  

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采用Plackett-Burman 设计和响应面分析相结合的方法，对革耳Panus rudis FG-35菌株产漆酶的液体培养基配方进行优化。单因素试验结果显示，发酵培养基中的最优碳源为可溶性淀粉，最优氮源为蛋白胨；Plackett-Burman 设计筛选出影响漆酶产量的 3 个重要因素为可溶性淀粉、金属Ca²⁺离子和吐温-40，在此基础上运用最陡爬坡试验逼近最大响应值区域，最后利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法进行回归分析，获得最佳培养基配方为：可溶性淀粉 10.040 4 g/L、蛋白胨 0.2 g/L、K₂HPO₄ 1.00 g/L、ZnSO₄?7H₂O 0.008 g/L、MgSO₄?7H₂O 0.5 g/L、CuSO₄?7H₂O 0.007 g/L、FeSO₄?7H₂O 0.005 g/L、MnSO₄ 0.035 g/L、CaCl₂ 0.081 6 g/L、VB₁ 0.1 g/L、吐温-40 0.428%。在优化后的条件下摇瓶发酵产漆酶酶活力为263.31 U/mL，与模型预测值接近，发酵产酶量比优化前提高1.07倍，同时优化后的发酵液对木质素降解进行试验发现，优化后漆酶对木质素降解率提高了14.34%。

研究报告

青杄生长素抑制蛋白基因PwARP-1的克隆及表达分析

孙帆, 罗朝兵, 周燕妮, 张凌云

2014, 30(4):  64-70. 

摘要 ( 245 )   PDF (1869KB) ( 674 )  

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从青杄的cDNA文库中筛选出一个生长素抑制蛋白基因PwARP-1(Auxin-repressed protein 1)，并通过RACE-PCR技术获得PwARP-1 cDNA全长。生物信息学分析显示，PwARP-1基因编码155个氨基酸残基的蛋白，分子量为17.1 kD，理论等电点为10.07，富含无规则卷曲。以多年生青杄和青杄幼苗为研究材料，通过RT-qPCR技术检测PwARP-1的组织特异性表达、激素的响应模式及种子萌发过程中的表达量模式。结果表明，PwARP-1在青杄各个组织中均有表达，在花粉中表达量最高，在种子中的表达量最低。PwARP-1在种子萌发过程中表达量呈先上升，在第10天表达量达到最高后开始下降。进一步试验表明，PwARP-1能响应多种逆境胁迫和激素处理。在赤霉素(GA)和生长素(IAA)处理下PwARP-1的表达量被抑制。在干旱胁迫和油菜素内酯(BR)激素处理下PwARP-1的表达量逐渐升高，而在在盐胁迫、茉莉酸甲酯(MeJA)和脱落酸(ABA)等激素处理下PwARP-1的表达量先下降后上升。这些结果显示PwARP-1可能参与了植物种子萌发、多种逆境胁迫和激素响应过程。

香蕉MaBTB基因的表达分析及亚细胞定位

柴文龙, 金志强, 贾彩红, 刘菊华, 苗红霞, 张建斌, 徐碧玉

2014, 30(4):  71-76. 

摘要 ( 241 )   PDF (1447KB) ( 499 )  

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利用荧光定量PCR分析在不同处理下的香蕉采后果实中MaBTB基因的表达，在正常成熟的果实中，MaBTB基因的表达与乙烯的释放量呈正相关；相反，在1-MCP处理的香蕉果实中，该基因的表达相对变化不明显；用乙烯处理的香蕉果实，其表达量在第3天达到高峰，比正常成熟的早11 d。这些结果表明MaBTB基因在香蕉采后果实中是受乙烯诱导表达的。最后，亚细胞定位分析表明MaBTB基因定位在细胞核上。

花青素合成调控转录基因作为直观标记的载体构建及其在玉米幼胚中的瞬时表达

赵欣梅, 吴树彪, 王亦学, 崔贵梅, 王晓清, 杜建中, 王小丽, 尚勇进, 孙毅

2014, 30(4):  77-82. 

摘要 ( 258 )   PDF (1431KB) ( 888 )  

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采用花青素调控因子C1/Bperu分别与玉米胚特异性启动子Glb1和组成型启动子CaMV35S构建成植物转化载体pGlb1CB和p35SCB，并利用基因枪转化方法，将重组表达载体转入玉米幼胚。显微观察结果证实，这两个载体均能在玉米幼胚细胞中瞬时表达。用花青素作为标记基因不仅可以在一定程度上减少公众对转基因生物安全性方面的担忧，而且可以帮助直观地从转化当代和后代种子中通过颜色标记筛选到转化籽粒，从而可以大大简化筛选程序，提高效率，节约检测成本。

地木耳中脂溶性物质抑菌活性研究

刁毅, 杨足君

2014, 30(4):  83-86. 

摘要 ( 277 )   PDF (1264KB) ( 884 )  

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采用索氏提取法从地木耳中提取脂溶性物质，经硅胶柱层析将脂溶性物质分离成石油醚洗脱组分(非极性脂)、苯洗脱组分(弱极性脂)和乙醇洗脱组分(强极性脂)，并对脂溶性物质和3种洗脱组分进行抑菌活性研究，以促进地木耳的综合应用。结果表明，地木耳中脂溶性物质含量为2.62%。其中，非极性石油醚洗脱组分含量最高，占总脂的54%，但无抑菌活性；强极性的乙醇洗脱组分含量其次，占总脂的32%，其抑菌活性最强；弱极性苯洗脱组分含量最低，占总脂的14%，有弱抑菌活性。地木耳脂溶性物质对6种菌有较好的抑制作用，其抑制能力大小为：大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>黑曲霉>酿酒酵母>假单胞杆菌。

牦牛MC1R基因的多态性研究

陈思, 柴志欣, 王永, 钟金城

2014, 30(4):  87-90. 

摘要 ( 223 )   PDF (1472KB) ( 591 )  

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旨在为探究牦牛MC1R基因多态性与毛色形成的相关性，利用PCR-SSCP和DNA测序技术，对64头牦牛(33头黑色九龙牦牛，31头白色天祝白牦牛)的MC1R基因多态性进行检测。结果表明：天祝白牦牛和九龙牦牛均有3种基因型(AA、BB、AB)，但天祝白牦牛的多态性较低，而九龙牦牛表现为中度多态。经χ²适合性检验，2个牦牛品种在该基因多态位点上均偏离Hardy-Weinberg平衡。测序结果表明BB型与AA型在该片段的第179位碱基处存在C→A单碱基突变；第214位碱基处发生T→C突变。

合作猪SLA-DQA基因外显子2多态性分析

张国华, 马小军, 吕伟丽

2014, 30(4):  91-95. 

摘要 ( 227 )   PDF (1419KB) ( 584 )  

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旨在研究合作猪DQA基因外显子2多态性，确定其等位基因数、核苷酸多态位点、氨基酸多态位点及各个等位基因之间的遗传关系，分析其进化意义。选用PCR-SSCP对439只合作猪SLA-DQA基因外显子2的多态性进行检测；测序群体内因变异而产生的各等位基因序列，并分析序列数据。结果显示，在合作猪SLA-DQA外显子2中发现了7个新等位基因，共18个核苷酸多态位点，10个氨基酸多态位点。合作猪SLA-DQA外显子2具有较丰富的多态性，群体内可能蕴藏着更加丰富的遗传资源；合作猪SLA-DQA外显子2基因最初可能由一个等位基因突变分化成一大类基因；合作猪SLA-DQA外显子2序列与各个猪种的SLA-DQA外显子2序列具有较高的同源性，预示着这些猪种的SLA-DQA外显子2基因最早可能来源于其分歧之前的共同祖先原始序列；新发现的7个SLA-DQA外显子2等位基因，可能由遗传关系较近的两个等位基因突变产生。

贵州三个地方猪种的系统发育分析

丁玫, 陈祥, 许厚强, 吴通贵, 冯文武, 柏琳

2014, 30(4):  96-101. 

摘要 ( 233 )   PDF (1372KB) ( 584 )  

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采用PCR产物直接测序方法首次测定贵州3个地方猪种(白洗猪、从江香猪、黔北黑猪)共计57个个体线粒体DNA控制区的全序列，将它们与GenBank上已知的25个国内外猪种一起计算遗传距离，并构建系统发育树。结果表明，3个贵州地方猪种mtDNA D-loop区的序列长度为1 254-1 314 bp之间，贵州地方猪种遗传距离在0.002 9-0.007 2之间，白洗猪与黔北黑猪、从江香猪之间的距离最大，均为0.007 2。系统发育分析的结果支持中国家猪分别有南北两个母系起源的观点，且各地方猪种之间可能有基因交流。

红色原鸡外周血单个核细胞IFN-γ的诱导表达及其荧光定量PCR检测

孙亭亭, 冀斌, 马志亮, 胡文丽, 鲁琼芬, 张雄伟, 陈培富

2014, 30(4):  102-108. 

摘要 ( 283 )   PDF (1465KB) ( 663 )  

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为建立检测红色原鸡外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素γ(IFN-γ)mRNA表达水平的方法，通过优化刀豆蛋白A(Con A)诱导PBMC表达IFN-γ的条件，采用RT-PCR方法以3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参扩增IFN-γ基因，插入克隆载体pMD18-T分别构建重组质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH，以其作为标准品采用SYBR Green I染料法建立荧光定量PCR检测方法，并将该方法应用于34只红色原鸡PBMC IFN-γ表达量的检测。结果发现，PBMC在20 μg/mL Con A刺激培养12 -25 h 时IFN-γ处于高表达水平；标准品质粒pMD-IFN-γ和pMD-GAPDH分别在拷贝数6.72×10²-6.72×10⁹、3.94×10²-3.94×10⁹范围内与其对应的Ct值呈现良好的线性关系(R² > 0.99)，扩增产物的熔解曲线均只有特异的单峰，表明所用引物特异性强。在优化Con A诱导红色原鸡PBMC表达IFN-γ条件的基础上，建立了可用于定量检测红色原鸡PBMC IFN-γ mRNA表达水平的荧光定量PCR方法。

VSV糖蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测

韩岩岩, 宋德光

2014, 30(4):  109-114. 

摘要 ( 331 )   PDF (1404KB) ( 660 )  

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构建水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)酵母双杂交诱饵载体，检测其在酵母细胞中的表达和自激活作用，为进一步研究酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作用蛋白奠定基础。通过RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(VSV)克隆糖蛋白(G)基因，BamH I和Sal I双酶切后连接诱饵载体pSos，获得诱饵质粒pSos-VSV-G，经测序鉴定后pSos-VSV-G转化到酵母菌株cdcH25(α)，在营养缺陷培养基中观察pSos-VSV-G的自激活作用和毒性作用，同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。成功扩增VSV-G基因，并准确克隆入pSos中，诱饵载体pSos-VSV-G成功转化到酵母菌株cdcH25(α)中，经表型筛选检测无自激活作用和毒性作用，蛋白印迹法检测证实pSos-VSV-G在酵母细胞中表达诱饵蛋白。 可以利用酵母双杂交系统筛选与VSV-G相互作的蛋白质。

棉铃虫(Helicoverpa armigera)FK506结合蛋白基因的克隆、表达与纯化

刘小宁, 李芬, 赵文博, 朱燕, 赵洁

2014, 30(4):  115-120. 

摘要 ( 252 )   PDF (1507KB) ( 977 )  

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为了深入了解FK506结合蛋白基因的作用和探索调控棉铃虫CYP6B6的表达机制，基于单酵母杂杂交结果采用RT-PCR的方法从棉铃虫的中肠cDNA中扩增得到了FK506结合蛋白基因，将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET32a中，在大肠杆菌BL21中用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达，通过镍柱离子亲和层析纯化目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果，并用Western blotting进行验证。结果表明，克隆得到的目的基因大小为327 bp，编码108个氨基酸残基，预测蛋白质分子量和等电点分别是11.78 kD和7.87。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框，且没有信号肽。重组质粒pET32a-FKBP在大肠杆菌BL21中获得表达，主要以可溶性形式存在，经亲和层析柱纯化获得目的蛋白，Western blotting检测发现纯化的目的蛋白大小正确且纯度高。

乳酸片球菌L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在重组大肠杆菌JH12中的过量表达

罗璇, 许丽媛, 王永泽, 赵锦芳, 赵筱, 王金华

2014, 30(4):  121-126. 

摘要 ( 246 )   PDF (1411KB) ( 580 )  

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以工程菌Escherichia coli SZ85基因组为模板，克隆得到乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)的L-乳酸脱氢酶基因(ldhL)，连接到pUcm-T载体后，双酶切然后将其连接到表达载体pET-28a上，重组质粒经筛选后转入染色体上含有ldhL基因(来源P. acidilactici)的工程菌Escherichia coli JH12。 P. acidilactici 的ldhL基因过量表达体系E. coli JH12(pET-28a-ldhL)能利用浓度7% 的木糖为碳源进行厌氧发酵，过量表达ldhL使L-乳酸产量提高了10 g/L，达64.86 g/L，糖酸转化率高达96%。

一株耐盐弧菌Vibrio sp.K1-L的分离与鉴定

王菲, 刘抗, 范家同, 成守亮, 王子元

2014, 30(4):  127-131. 

摘要 ( 241 )   PDF (1504KB) ( 726 )  

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从山西运城盐湖水样中分离出一株细菌K1-L，能在2%-10%的MGM固体培养基上出现群游现象。该菌株为革兰氏阴性菌，周生鞭毛，电镜下大小约为0.4 μm×(1-2)μm，其菌落形态为圆形，灰色。菌株K1-L的最适生长盐浓度、温度和pH值的范围分别为2%-6%、30-40℃和6.0-7.0，GC含量为47.06%。通过对其形态学、生理生化试验，16S rRNA基因序列及系统发育学的分析，发现其与Vibrio diabolicus HE800T和Vibrio rotiferianus LMG 21460T等细菌的16S rRNA有高度同源性，最大的相似性均为99％，确定该菌株K1-L为弧菌属(Vibrio)。

短小芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

苏二正, 吴向萍, 高蓓, 魏东芝

2014, 30(4):  132-138. 

摘要 ( 261 )   PDF (1428KB) ( 708 )  

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从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株，经16S rRNA 鉴定属于短小芽孢杆菌，根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物，克隆获得其全长基因，命名为lipS6，大小为648 bp，编码215个氨基酸，经比对其与已报道的脂肪酶基因B26 有96%的同源性。构建重组表达质粒pET32a-lipS6，在大肠杆菌中实现了可溶表达，酶活达到2 000 U/mL。重组脂肪酶LipS6的最适温度为30℃，最适pH为9，低浓度的Ca²⁺与Mn²⁺对其有很明显的激活作用，疏水性有机溶剂对其毒害作用小，在正己烷体系中可以催化酯化反应，最适酯化底物酸为十四酸，底物醇为正丁醇。

海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的整合及表达

李丹, 李成, 孙璐, 邹丹, 刘志文, 丛丽娜

2014, 30(4):  139-146. 

摘要 ( 302 )   PDF (1689KB) ( 813 )  

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采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme，SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys，将B. subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF036468)连接(P43-SjLys)。经BamH I/EcoR I酶切，将P43-SjLys片段连接到B. subtilis整合载体pDG1730上，构建整合重组质粒pDG-P43-SjLys。经Xho I酶切处理，线性化的pDG-P43-SjLys质粒转化B. subtilis WB600细胞。P43-SjLys片段通过同源双交换重组整合到B. subtilis WB600染色体上，成功得到具有稳定遗传的基因工程菌B. subtilis WB600/P43-SjLys。经SDS-PAGE和抑菌试验分析表明，培养60 h后，B. subtilis WB600/P43-SjLys能够表达可溶的，对常见的海洋细菌溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性的SjLys蛋白。首次在B. subtilis表达系统中得到可溶且具有酶活功能的SjLys蛋白，为SjLys的生产提出了一种具有可行性的和潜力的新方法。

产胞外多糖植物内生菌的分离和鉴定

黄怡诚, 刘旸, 庞昕, 马中瑞, 韩东雷, 陈敏

2014, 30(4):  147-151. 

摘要 ( 275 )   PDF (1427KB) ( 808 )  

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利用平板涂布法从胡萝卜、芦荟、土豆、地瓜和紫薯样品中分离得到24株细菌，利用苯酚硫酸法测定菌株胞外多糖的产量，最终得到3株高产胞外多糖的细菌菌株25-Z-1、25-Z-3和12-L-6。经16S rDNA序列测定及系统发育分析，从紫薯样品中分离得到的25-Z-1与Bacillus pumilus strain ST277处于同一分支，相似性达到100%；25-Z-3与Bacillus cereus strain Se05 处于同一分支，相似性达到99%；从芦荟中分离得到的12-L-6与Bacillus sp. GZT 处于同一分支，相似性为99%。在LB液体培养基中，发酵温度30℃，摇床转数170 r /min条件下，发酵7 d后胞外多糖产量可分别达30.3 mg/L、29.1 mg/L及28.2 mg/L。

大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选

李杏春, 何双辉, 戴玉成

2014, 30(4):  152-158. 

摘要 ( 253 )   PDF (1353KB) ( 573 )  

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真菌胞外纤维素酶活可作为高效生防菌株筛选的指标之一，通过测定野生大伏革菌(Phlebiopsis gigantea)菌株在最优条件下所产生纤维素酶活力高低来达到筛选防治针叶树根腐病高效菌株的目的。以大伏革菌菌株液体培养过程中纤维素酶活力为指标，通过单因素和正交试验结合的方法，筛选出大伏革菌最适产纤维素酶条件为(g/L)：葡萄糖30.00，蛋白胨5.00，磷酸二氢钾3.00，硫酸镁1.50，装液量120 mL/250 mL，接种量5%(V/V)，初始pH为4.0。测定野生大伏革菌菌株纤维素酶活力的大小显示：08077号菌株纤维素酶活力最大，13025号菌株最小。研究得出08077号菌株比芬兰商业化生物制剂Rotstop-F具有更好的防治中国小孔异担子菌的潜能。

产耐酸性α-淀粉酶菌株的分离、鉴定、酶学特性研究及发酵培养基的优化

王建玲, 陈志鑫, 刘逸寒, 路福平

2014, 30(4):  159-163. 

摘要 ( 269 )   PDF (1480KB) ( 565 )  

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从富含淀粉的土壤中筛选获得多株产耐酸性α-淀粉酶的菌株，将酶活最高的一株经16S rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，命名为Bacillus subtilis A-7，其所产的耐酸性α-淀粉酶最适温度和pH分别为60℃和4.5。通过单因素筛选及正交试验优化发酵培养基，得到最佳配方为可溶性淀粉 2%，蛋白胨 2%，CaCl₂ 0.07%，Na₂HPO₄ 0.8%，在此条件下耐酸性α-淀粉酶活力达到221 U/mL，是未优化条件下的2.3倍。

基于重组大肠杆菌无细胞体系生产吡咯喹啉醌

孙继国, 韩增叶, 葛喜珍, 田平芳

2014, 30(4):  164-168. 

摘要 ( 305 )   PDF (1423KB) ( 805 )  

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采用无细胞体系生产吡咯喹啉醌(pyrroloquinoline quinone，PQQ)。首先将肺炎克雷伯氏菌PQQ基因簇pqqABC-DEF置于半乳糖苷酶启动子之下，构建表达载体，经转化筛选获得重组大肠杆菌。制备重组菌的细胞匀浆，体外反应后测定PQQ产量。结果显示，与活体重组菌相比，无细胞体系的PQQ产量提高约30%，表明胞内存在PQQ合成的限速反应，而无细胞体系可解除此限速反应。

自养条件下高氯酸盐降解细菌群落研究

谢宇轩, 关翔宇, 于丽莎, 刘菲

2014, 30(4):  169-175. 

摘要 ( 236 )   PDF (1422KB) ( 715 )  

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旨在研究自养条件下以氢气作为电子供体高氯酸根离子(ClO_{4-)的微生物降解机制，利用HiSeq 2000对微生物群落结构及多样性进行高通量测序及分析。结果表明，添加氢气的HD(hydrogen degradation)体系将10 mg/L ClO4-降至检出限以下共经历71 d。ClO4-完全降解后HD体系中总细菌的相对丰度为84.96%，绝大多数降解细菌分布的变形菌门相对丰度为68.11%，占总细菌数的比例达到80.16%。其中属于β-变形杆菌纲的ClO4-代表性降解细菌(perchlorate-reducing bacteria，PRB)Dechloromonas的相对丰度为2.7%，另一种Azospira为3.1%。通过KEGG注释对菌种功能进行分析。参与糖代谢的基因相对丰度为4.75%，参与能量代谢的基因相对丰度为3.35%，其中参与氮循环的基因相对丰度为0.72%，参与氯代物降解和氯循环的基因相对丰度为0.83%，补充氢气对反应体系内生物群落结构变化起到选择纯化作用，使优势菌群趋于单一。}

盐藻小G蛋白DsRab的原核表达及纯化

李秀娟, 柴晓杰, 陶晓迎, 赵欢, 丛玉婷

2014, 30(4):  176-180. 

摘要 ( 273 )   PDF (1413KB) ( 644 )  

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前期对盐藻小G蛋白基因DsRab研究表明，在盐胁迫诱导下该基因转录水平明显提高。为进一步研究该蛋白在盐藻耐盐机制中的作用，PCR扩增DsRab的开放阅读框(ORF)，并将其克隆至带有GST标签的原核表达载体pGS-21a，得到重组表达载体pGS-21a-DsRab。将重组表达载体转化E. coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达，并优化诱导表达条件，利用GST-Sefinose^TM Kit进行纯化，用SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明，成功构建了重组表达载体pGS-21a-DsRab，SDS-PAGE结果显示得到的蛋白与预期分子量相符，并且纯度较高；Western blot检测结果初步证明该融合蛋白为GST-DsRab。

Fe³⁺对小球藻的生长及油脂含量的影响

孙远, 刘文彬, 周铁柱, 谢通慧, 梁斌, 张永奎

2014, 30(4):  181-186. 

摘要 ( 198 )   PDF (1356KB) ( 785 )  

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传统化石能源储量日益减少，生物柴油因其环保可再生性成为优质的石化柴油替代品。利用小球藻生产生物柴油速度快、油脂含量高，受到了广泛关注。为进一步提高小球藻生产生物柴油效率，分别探究了Fe³⁺的浓度及添加时间对自养和异养小球藻生长及产油的影响，获得最优Fe³⁺培养条件为：自养小球藻延滞期添加10^-3 g/L Fe³⁺，生物量及油脂含量达2.80g/L及30.90%；异养小球藻指数期添加10^-5 g/L Fe³⁺，生物量及油脂含量达3.30 g/L及29.05%。经脂肪酸分析，以上条件获得的微藻油脂均可作为生物柴油生产原料。

以STAT3为靶标的抗肿瘤药物高通量筛选模型的建立和应用

潘丽, 张宁, 牛国君, 孟晶, 刘祥, 杨诚

2014, 30(4):  187-192. 

摘要 ( 214 )   PDF (1579KB) ( 1000 )  

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旨在建立稳定可靠的以转导与转录激活子(STAT3)为靶标的抗肿瘤高通量筛选模型，应用该模型筛选潜在的抗癌药物。利用基因重组、蛋白表达纯化技术，获得STAT3目的蛋白，使用酶联免疫吸附法(ELISA)进行高通量药物筛选，将筛选出的抑制剂在细胞水平上利用MTT比色法测定化合物对癌细胞增殖的影响。结果显示，成功构建表达载体pET-28a-STAT3；所建立的模型稳定可行，可用于以STAT3为靶标的抗肿瘤药物的高通量筛选；用该模型对8 248个样品进行筛选，在500 μmol/L药物浓度下，化合物MDC6抑制率为92%，另外，进行IC₅₀值的测定时，分子水平上最低达到3.37 μmol/L，在细胞水平上可达到15.92 μmol/L。建立的高通量药物筛选模型，具有操作方便、成本低、结果稳定等特点，可用于STAT3抑制剂的大规模筛选。