生物技术通报

倪万潮;郭书巧;束红梅;沈新莲;张香桂;徐鹏;

2012, 0(07): 1-6.

摘要 ( 100 )

PDF (4369KB) ( 192 )

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简述我国转基因抗虫棉研发的意义,分析转基因抗虫棉成功产业化以来棉花科技本身和生产上的基本问题,指出转基因抗虫棉促进了我国棉花生产高产稳产的发展,但是发展中也遇到了一系列的新问题,如抗虫资源的过度使用,遗传背景的匮乏,次生害虫的演变,农业现代化的新要求等。分析转基因抗虫棉后时代我国棉花科技取得新的重大突破的可能性。指出棉花科技要坚持生物技术为先导,在超高产的前提下,以品质改良和综合抗性为突破口,再创棉花生物技术研发的高峰,促进棉花生产再上新台阶。

植物基因工程——标记基因的安全利用

周岩;游建;

2012, 0(07): 7-13.

摘要 ( 115 )

PDF (5457KB) ( 361 )

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基因工程自诞生以来,在提高植物的农艺和园艺品质上发挥着巨大作用的同时,其安全性也一直是人们争论的焦点。其安全性争论主要集中在导入的目的基因,以及标记基因是否会对食品安全和生态平衡造成威胁。就植物基因工程中标记基因的安全利用作一论述和评价。

农杆菌介导的植物转基因影响因素

张福丽;陈龙;李成伟;

2012, 0(07): 14-19.

摘要 ( 150 )

PDF (3810KB) ( 458 )

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农杆菌介导法是植物转基因常用的方法,具有费用低、拷贝数少、重复性好以及能转移较大片段等独特优点。转化率是农杆菌介导的植物转基因中的关键问题,多种因素影响着转化率的高低,包括菌株和载体的组合类型、农杆菌的生长状态和菌液浓度、抑菌抗生素、筛选系统中的筛选剂种类和选择压及筛选方法、共培养时间和共培养基的pH值、培养环境的光照度和温度、以及外植体接种方式等方面。

杏褪绿卷叶病研究现状及展望

何天明;韩冰;吴玉霞;李文慧;何峰江;

2012, 0(07): 20-26.

摘要 ( 99 )

PDF (4802KB) ( 276 )

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杏褪绿卷叶病(ACLR)是由ESFY植原体引发的一类昆虫媒传病害,在欧洲许多国家已将其列为检疫对象。近年来在我国新疆部分杏园首次发现类似欧洲ACLR的发病植株。简要介绍杏褪绿卷叶病的田间发病症状,疏理了国内外关于引起杏褪绿卷叶病的ESFY植原体的流行病学和病原检测以及防治方法的研究进展,特别对分子检测技术进行全面综述。另外,分析当前研究中尚存在的问题,并对今后的研究方向进行展望。

光合细菌Rhodobacter sphaeroides新型表达系统研究进展

赵志平;聂鑫;胡宗利;李再新;丁杰;

2012, 0(07): 27-31.

摘要 ( 193 )

PDF (3704KB) ( 201 )

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利用当前商业化的表达系统生产重组蛋白时,在寄主培养过程中都不能快速实时地检测重组蛋白的表达水平。光合细菌Rb.sphaeroides是研究细菌光合作用和膜蛋白形成的重要模式生物,具有开发成为一种新型表达系统的潜能。介绍了光合细菌Rb.sphaeroides新型表达系统的优势和开发情况。

海洋宏基因组学研究进展

王晓辉;张庆芳;迟乃玉;曹海龙;赵勇;杜昱光;

2012, 0(07): 32-35.

摘要 ( 231 )

PDF (2901KB) ( 267 )

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宏基因组学作为研究微生物种群生态分布、群体遗传特征和基因相互作用的新兴学科,在未培养微生物资源的开发利用上取得了突破性进展,已成为海洋等极端环境中分离与鉴定新型工业酶制剂的有效工具。综述海洋宏基因组学研究进展,以及宏基因组学领域中如新一代测序技术等,以期为从海洋环境中开发具有工业潜力和应用价值的新型生物催化剂提供参考。

蛋白质体外定向进化策略研究进展

付畅;林海龙;李海莹;王得江;

2012, 0(07): 36-40.

摘要 ( 207 )

PDF (3650KB) ( 816 )

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定向进化已广泛应用于蛋白质的分子改造,是改善蛋白质特性的最有效策略之一。为了获得更高的突变效率,构建含有更多突变体的文库,不断地发明创新各种高效的蛋白质体外定向进化方法。对近年来出现的几种定向进化方法三核苷酸突变(TriNex)、序列饱和突变(SeSaM)、随机链交换突变法(RAISE)、重叠延伸蛋白域文库法(PDLGO)和迭代饱和突变法(ISM)的原理、特点及应用进行综述。

诱导性多能干细胞构建策略及其提高重编程效率的方法

李佳佳;马利兵;陈秀莉;籍凤宇;

2012, 0(07): 41-48.

摘要 ( 123 )

PDF (6299KB) ( 218 )

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以Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等转录因子于体细胞中异位表达,可获得具有胚胎干细胞特性的诱导性多能干细胞(iPSCs),但是iPSCs技术的重编程效率和应用于临床上的安全性却都很低。目前,iPSCs的研究集中于3个方面:一是增加iPSCs技术的重编程效率;二是增加iPSCs应用于临床时的安全性;三是开创新的构建iPSCs的方法。第一个方面通过调整体细胞的表观遗传特性和细胞信号网络来达到;第二个方面可通过减少致癌性因子的使用及选择合适的载体系统来达到。而且,一些小分子化合物和调节细胞信号网络的方法也被用于诱导体细胞重编程为iPSCs。相对于仅仅使用转录因子重编程体细胞为iPSCs,使用小分子化合物或调节细胞信号网络的方法重编程体细胞为iPSCs的效率更高,而且通过这种方法获得的iPSCs的有更高的临床安全性。新构建iPSCs的方式与依赖含转录因子表达载体构建iPSCs的传统模式区别较大,它们的临床安全性或(和)重编程效率也得到了极大提高。使用4个转录因子的重组蛋白或体外合成并修饰的转录因子的mRNA已经能成功构建iPSCs;而使用miRNAs高效率重编程小鼠和人的体细胞为iPSCs的方法则开创了脱离转录因子重编程体细胞的全新策略。

生物信息学与eQTL作图:问题和展望

李宏;

2012, 0(07): 49-54.

摘要 ( 182 )

PDF (4416KB) ( 934 )

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阐述生物信息学在基因表达QTL作图中的应用。主要对后基因组时代的研究的新领域——遗传基因组学的概念的提出、研究方向和发展进行论述,同时,就eQTL作图的统计学策略、生物信息学软件工具以及遗传网络构建等方面进行讨论,并对今后遗传基因组学的发展前景进行分析。

植物抗逆诱变育种技术研究进展

杜磊;王长彪;

2012, 0(07): 55-59.

摘要 ( 142 )

PDF (3882KB) ( 269 )

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随着分子生物学技术的飞速发展,通过基因工程方法可以更快更好地获得农作物抗逆新品种,其首要任务是通过分离相应的表型改变的突变体来鉴定、克隆在胁迫条件下表达模式发生改变的基因。主要介绍几种常用的及最新的突变体诱变和筛选技术,并分析每种技术的优缺点。

蛋白质组学关键技术及其在茶树研究中的应用

邹瑶;齐桂年;陈盛相;王绍梅;

2012, 0(07): 60-64.

摘要 ( 88 )

PDF (3932KB) ( 353 )

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蛋白质组学是后基因组时代的研究热点,相对于基因组学来说,能更直接、更准确的解释生命现象。对蛋白质组学关键技术如双向凝胶电泳、生物质谱、蛋白质芯片、生物信息学等及其在茶树上的应用作一介绍。

棉花GhDHAR2基因克隆、功能序列分析及原核表达

田大鹏;葛娟;石峰;李鸿彬;

2012, 0(07): 65-69.

摘要 ( 105 )

PDF (3862KB) ( 202 )

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通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-DHAR家族的功能结构域;进化树分析显示GhDHAR2和拟南芥AtDHAR2在进化关系上较近。将GhDHAR2基因连接到原核表达载体pET-28a中,将重组载体pET28a-GhDHAR2转入到表达菌株BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达出重组GhDHAR2蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示重组蛋白大小约为28 kD,诱导表达的重组蛋白具有较高的DHAR活性。首次克隆了棉花GhDHAR2基因,通过结构域分析其可能的作用,并成功进行蛋白体外表达及酶活性分析。

苦荞谷胱甘肽转移酶(FtGST)基因的克隆与序列分析

赵海霞;李双江;李成磊;陈惠;吴琦;

2012, 0(07): 70-76.

摘要 ( 113 )

PDF (4906KB) ( 262 )

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采用RACE技术,从苦荞(Fagopyrum tatarium)中克隆得到一个谷胱甘肽转移酶(Glutathione S-transferase protein,FtGST)基因。序列分析表明,FtGST基因全长DNA序列和cDNA序列编码区分别为746 bp和666 bp,DNA序列含有一个长度为80 bp(342-421 bp)的内含子;开放阅读框(ORF)长666 bp,编码221个氨基酸。生物信息学分析表明,FtGST基因推导的蛋白质含有Tau家族典型的底物结合口袋、谷胱甘肽结合位点(G-site)和疏水性底物结合位点(H-site)氨基酸残基,表明FtGST为Tau家族蛋白。

水稻光敏色素A和B的突变对气孔发育和OsAQP基因表达的影响

梁卫红;张帆;李咪咪;

2012, 0(07): 77-82.

摘要 ( 117 )

PDF (4577KB) ( 180 )

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OsAQP是在水稻叶片保卫细胞中高表达的液泡膜型水通道基因,为研究该基因在水稻发育过程中的表达与光敏色素光信号通路的关系,观察统计了日本晴、光敏色素突变体phyA和phyB 3个水稻品种的生长发育特征,比较了开花时间、叶片气孔密度、气孔器长等指标,并采用半定量RT-PCR以及实时定量PCR技术检测OsAQP基因在3种材料不同时期叶片中的表达特性。结果显示,光敏色素突变体phyB叶片的气孔密度、气孔器长度均低于同时期的日本晴和光敏色素突变体phyA水稻,说明光敏色素B及其相关信号可能与气孔的发育关系密切;表达模式分析显示,OsAQP基因在3个水稻品种的叶片中具有不同的表达特性,并伴随发育时期呈现下降的趋势。本研究结果说明水稻光敏色素B以及相关信号不仅与气孔的发育有关,而且可能通过与光敏色素A及相关信号通路共同调节OsAQP基因的表达,参与气孔开闭的调节。

大豆种质资源SRAP分子标记中的引物筛选

王芳;徐翔;李领川;聂卉;李晓静;周延清;

2012, 0(07): 83-87.

摘要 ( 106 )

PDF (3531KB) ( 208 )

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以113个大豆栽培品种和20个野生品种为材料,从288对引物组合中筛选出12对多态性丰富、条带清晰、可重复性好的SRAP引物组合。用筛选出的12对引物组合对大豆品种进行PCR扩增,获得了带型丰富和清晰可辨的DNA的PAGE指纹图谱;共扩增出251条谱带,其中多态性条带220条,多态性谱带比率为87.6%,平均每个引物扩增出18.3条谱带。结果显示,所筛选出的12对引物组合可以有效的应用于大豆种质资源的SRAP分析。

铁皮石斛微卫星SSR设计与应用

肖冬长;张智俊;管雨;

2012, 0(07): 88-92.

摘要 ( 95 )

PDF (3541KB) ( 284 )

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通过Websat对来源于NCBI公共数据库的2 447条石斛属(Dendrobium)核苷酸序列进行简单重复序列SSR的搜索,剔除冗余序列后,找到124个SSR位点。利用primer3.0软件设计引物75对,并通过改良的方法提取铁皮石斛DNA作为模板,对铁皮石斛(Dendrobium officinaleKimuraetMigo)的SSR引物进行筛选,选出21对有较清晰且稳定的目标扩增产物的引物,对8个种源的铁皮石斛进行多态性分析和聚类分析,得到8个种源的铁皮石斛进行遗传多样性和亲缘关系。

HtrA2转基因鼠的建立与鉴定

柳明杰;沈雁飞;

2012, 0(07): 93-96.

摘要 ( 83 )

PDF (3053KB) ( 295 )

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旨在建立神经特异性过表达HtrA2转基因鼠。通过质粒重组技术构建神经特异性表达HtrA2质粒pNSE-HtrA2,利用EcoR I及PvuI切割pNSE-HtrA2获得转基因。显微注射转基因到FVB/N受精卵并移植到假孕鼠的输卵管中发育,获得的转基因鼠利用Western blot鉴定特异性过表达情况。结果显示,成功建立神经特异性过表达HtrA2转基因鼠,神经特异性过表达HtrA2达到5.4倍。本研究建立了神经特异性过表达HtrA2转基因鼠,可用于HtrA2在神经系统的作用研究。

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)MC4R基因的多态性分析

张丽;仇雪梅;王娟;姜志强;刘洋;王秀利;

2012, 0(07): 97-102.

摘要 ( 135 )

PDF (3913KB) ( 274 )

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采用PCR-SSCP(single strand conformation polymorphism)技术和DNA测序方法分析红鳍东方鲀MC4R(Melanocortin-4receptor)基因编码区多态性。在MC4R基因编码区48 nt和264 nt均发生了碱基的转换突变(G→A),两个突变位点分别位于M1和M2引物扩增产物中。引物M1扩增产物SSCP分析得到两种基因型:AA基因型和AB基因型,并且AA基因型和A等位基因频率明显高于AB基因型和B等位基因。引物M2扩增产物也得到两种基因型:CC基因型和CD基因型,CC基因型和C等位基因频率明显高于CD基因型和D等位基因。遗传变异结果分析表明,两个突变位点均属于低度多态性,而且群体遗传杂合度较低,反映了该群体的遗传一致性较高。

人类多效生长因子(Pleiotrophin)的全基因合成、原核表达与纯化

马兰;季朝能;

2012, 0(07): 103-107.

摘要 ( 193 )

PDF (3791KB) ( 373 )

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PTN作为重要的细胞因子,存在于多种生物体内,参与多种生物学过程,具有刺激细胞增殖、分化、粘附、迁移等多种功能。根据PTN的基因序列及大肠杆菌密码子的偏爱性,人工合成ptn基因,构建pMAL-his-sumo-ptn重组表达载体,将重组表达载体转化到E.coli(Rosetta)中并进行优化表达。融合蛋白在0.4 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导3 h表达量最高。收集菌体、纯化、酶切、SDS-PAGE可检测到分子量为18 kD左右的重组蛋白。

人Notch受体胞内区基因N2ICD和N3ICD克隆及真核表达体系的构建

孙芳;李玉霞;毛艳;凌焱;张小男;李伟东;刘刚;梁龙;陈珊;陈惠鹏;

2012, 0(07): 108-113.

摘要 ( 97 )

PDF (4318KB) ( 192 )

相关文章 | 计量指标

Notch信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关。对该通路中各受体功能的深入研究能够为揭示其致癌作用奠定基础。本研究采用RT-PCR的方法从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的cDNA中克隆人Notch2和Notch3受体胞内区基因(N2ICD和N3ICD基因),并构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体N2ICD/pEGFP和N3ICD/pEGFP,将序列正确的重组质粒转染HeLa细胞,显微镜下可见明显的绿色荧光,并定位在细胞核内。Western blotting检测目的蛋白成功融合表达,并能够提高其下游靶基因Hes1的转录活性。

长野芽孢杆菌普鲁兰酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究

张艳;路福平;刘逸寒;李玉;张春峰;

2012, 0(07): 114-118.

摘要 ( 103 )

PDF (3291KB) ( 276 )

相关文章 | 计量指标

根据NCBI上报道的基因序列设计引物,以长野芽孢杆菌(Bacillus naganoensis)ATCC53909的染色体DNA为模板,PCR扩增普鲁兰酶编码基因pulB。将此基因与表达载体pWB980连接构建重组质粒pWB-pulB,并转化枯草芽孢杆菌WB600。SDS-PAGE结果显示,在100 kD处有特异性条带,经测定重组转化子粗酶液酶活力达10.94 U/mL。酶学性质分析表明,其最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0,且在温度30-60℃及pH4.0-6.0范围内稳定,适合淀粉加工行业的应用。

嗜热糖化酶基因在重组黑曲霉工程菌中的表达及酶学性质初步研究

王凤寰;孟青青;封棣;杨建国;汪兵;

2012, 0(07): 119-125.

摘要 ( 108 )

PDF (4975KB) ( 179 )

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为了提高糖化酶的耐热性能,降低淀粉糖化发酵工艺的生产成本,构建了同源整合载体pEasy-glaAdir以及pEasyssg,将黑曲霉(Aspergillus niger)的糖化酶基因(glaA)灭活,并将硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobus solfataricus)的嗜热糖化酶基因(ssg)插入到黑曲霉基因组中,筛选得到表达嗜热糖化酶的重组黑曲霉工程菌(A.nigerWW1)。重组菌的发酵结果显示,嗜热糖化酶在黑曲霉中得到了分泌表达,发酵液酶活达到3 030 U/mL。重组嗜热糖化酶的最适反应温度为90℃,最适pH为6.0,该酶具有较高的热稳定性,在80℃时的半衰期在60 min以上,具有良好的工业应用前景。

解木聚糖类芽孢杆菌木葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

王宝顺;张梁;丁重阳;顾正华;石贵阳;

2012, 0(07): 126-133.

摘要 ( 140 )

PDF (5446KB) ( 228 )

相关文章 | 计量指标

解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)发酵液经硫酸铵分级沉淀、HiPrep26/10 Desalting柱脱盐、HiPrepDEAE FF16/10阴离子交换柱、HiPrep 16/60 Sephacryl S-100凝胶柱、HiPrep 16/10 Source 30S阳离子交换柱等,最终纯化出单一组分的木葡聚糖酶,经过SDS-PAGE电泳分析,此木葡聚糖酶相对分子量约为39 kD。该菌所产木葡聚糖酶的最适反应温度是50℃,在60℃以下较稳定;最适反应pH是7.0,在pH5.0-10.0范围内酶活力较为稳定。酶的动力学研究显示Km为65 g/L,Vmax为6.49μmol/min,kcat=10.86 s-1。底物特异性研究表明对木葡聚糖具有较高比活力。酶蛋白经质谱分析,比对结果显示与来源于Paenibacillus pabuli的木葡聚糖酶有较高同源性。本研究为首次报道解木聚糖类芽孢杆菌(P.xylanilyticus)产木葡聚糖酶。

鳗鲡病原性维氏气单胞菌的分离与鉴定

杨求华;郭松林;关瑞章;邹文政;刘艺华;王甜毅;

2012, 0(07): 134-139.

摘要 ( 106 )

PDF (3860KB) ( 446 )

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从养殖患病的日本鳗鲡(Anguilla japonica)肾脏分离得到1株优势菌株,形态特征和生理生化测试结果显示,分离菌在4%羊血平板培养基上呈α型溶血,革兰氏阴性,有运动性,氧化酶阳性,在pH6.0和1%NaCl中生长等。结合Biolog自动微生物鉴定系统和16S rRNA、gyrB基因序列分析结果,确定该分离菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。人工腹腔注射感染鳗鲡的试验结果表明,分离菌对鳗鲡的半数致死量LD50为2.15×107CFU/mL。药敏试验结果显示,在13种抗菌类药物中,分离菌对左氧氟沙星、氟哌酸、阿奇霉素和萘啶酸等8种药物敏感,而对利福平和新生霉素等5种药物敏感度低。

一株产细菌纤维素菌株的筛选鉴定及其产物分析

冯劲;施庆珊;冯静;李文茹;陈爱美;欧阳友生;陈仪本;

2012, 0(07): 140-145.

摘要 ( 113 )

PDF (3886KB) ( 233 )

相关文章 | 计量指标

从红茶菌液中筛选获得一株产细菌纤维素的菌株BC-41,经生理生化分析和分子生物学鉴定,现证实该菌株为中间葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius)。对该菌株所产生的细菌纤维素进行了物理特性的表征和分析,获得以下数据:BC-41所产的纤维素纯度达到91.32%,湿纤维素膜含水率达99.16%,每克干纤维素膜能吸水28.59 g;扫描电子显微镜观察,显示该纤维素具有网状结构,且纤维束宽度分布在40-100 nm之间;X射线衍射分析,证实该纤维素的晶型为纤维素I型,结晶指数为48.8%;通过黏度测定法,得出该纤维素的平均聚合度达2 100。

京尼平的微生物转化及其交联特性的测定分析

赵东;荆玮;姚盟成;董逸楠;李玉;

2012, 0(07): 146-151.

摘要 ( 129 )

PDF (4192KB) ( 223 )

相关文章 | 计量指标

从土壤中富集筛选获得一株产β-葡萄糖苷酶的菌株,经菌落的形态和18S rDNA鉴定确定为黑曲霉。将筛选出的黑曲霉菌株接种于发酵培养基,利用含有京尼平苷的栀子粉作为底物发酵,通过对发酵条件优化,得到在装液量50/250 mL,栀子粉浓度为10%,转速为180 r/min,发酵时间为96 h时,京尼平的微生物转化率达到最大22%。这种微生物转化法简化了京尼平的生产工艺,大大降低了生产成本。利用微生物转化获得的京尼平交联胶原蛋白材料,研究表明其具有较好的交联特性,是一种在食品、医药等领域都具有应用前景的生物交联剂。

离子注入选育高产L-乳酸的米根霉突变株及其发酵特性研究

杨英歌;郑之明;

2012, 0(07): 152-157.

摘要 ( 86 )

PDF (4149KB) ( 190 )

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通过氮离子注入获得米根霉突变株RQ4012,其利用木糖的能力比出发菌株提高了1.6倍;通过多次传代,证明其具有良好的遗传稳定性。试验测定菌株RQ4012发酵木糖生产L-乳酸的最佳发酵条件:木糖10%,生理盐水浸泡孢子9 h,(NH4)2SO43 g/L,接种量4%,CaCO3添加量6%,装液量20%,温度37℃,转速200 r/min,在此条件下,乳酸产量达到79.51 g/L。对混合糖的发酵进行了探索,结果表明该菌能高效利用混合糖生产L-乳酸,在利用植物纤维素水解液生产L-乳酸上有良好的应用前景。

两株高糖分利用能力的酿酒酵母呼吸突变体选育

韦缘;张穗生;陈东;陆琦;陈英;黄日波;

2012, 0(07): 158-162.

摘要 ( 77 )

PDF (3653KB) ( 215 )

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以酿酒酵母乙醇发酵高产工业菌株MF1002为始发菌株,对其营养细胞进紫外线诱变,筛选得到两株性状稳定的呼吸缺陷型突变体MF15c和MF11a。菌体细胞对2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)显色测定呼吸强度的结果表明,两突变菌株的相对呼吸强度分别只有始发菌株的57.77%和47.25%。与现有报道的呼吸缺陷突变体不同,两株突变体的细胞生长速率只在培养初期略低于始发菌株,总体生长速率与始发菌株几乎没有差异,在YPD平板上培养也不形成小菌落。比较蔗糖发酵试验表明,两株突变体的乙醇产量较始发菌株只分别略提高6.48%-6.59%(MF15c)和1.66%-1.97%(MF11a),但发酵终止的残总糖含量却显著低于始发菌株,分别减少34.85%和19.70%,发酵效率较始发菌株分别显著提高6.69%和4.71%,表明这两株突变体为新型的呼吸缺陷型突变。鉴于提高乙醇发酵的发酵效率可显著降低生产成本,认为这两株突变菌株具有较高的潜在工业利用价值。

一株铜绿假单胞菌及其产生的鼠李糖脂特性研究

王大威;张健;吕鑫;马挺;齐义彬;

2012, 0(07): 163-169.

摘要 ( 136 )

PDF (4970KB) ( 262 )

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研究高效代谢表面活性剂的菌种,并对菌种和表面活性剂的理化性质进行分析。采用菌种16S rDNA序列分析对菌种进行鉴定,采用紫外光谱扫描、色谱柱层析、薄层层析、单糖分析对生物表面活性剂的种类进行鉴定,并对表面活性剂的理化性质进行研究。从油田采出水中筛选出一株高效代谢生物表面活性剂的菌株T-1,经16S rDNA鉴定为铜绿假单胞菌属(Pseudomonas aeruginosa)。该菌种以甘油和大豆油为碳源的培养基培养4 d后,其发酵液表面张力30.216 mN/m,EI24为100%。根据表面活性剂的红外光谱分析并结合薄层分析,可确定T-1样品中含有糖脂类物质,进一步的表面活性剂的单糖分析显示水解终产物为单一的鼠李糖,最终确定其产物为鼠李糖脂,苯酚-硫酸法测定其鼠李糖脂产率为5.2 g/L,从发酵液提取的棕黄色生物表面活性剂粗品,其表观临界胶束浓度为45 mg/L,该鼠李糖脂对环境(耐温、耐酸碱、耐盐)具有较强的适应性。该表面活性剂对恶劣环境具有较强的耐受性,可应用于微生物采油等用途。

基因敲除提高大肠杆菌工程菌生产异丁醇产量的研究

郭媛;林丽华;郭玲;庞浩;彭建新;黄日波;

2012, 0(07): 170-175.

摘要 ( 178 )

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探究pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株对大肠杆菌工程菌发酵生产异丁醇的影响。运用Red重组系统敲除大肠杆菌BW25113的pflB、frdAB、fnr和AdhE基因,构建pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株E.coliBW25113H,结合本实验室已经构建的表达质粒pSTV29-alsS-ilvC-ilvD-kdcA,并检测该工程菌在1L发酵罐的发酵过程中的生物量、突变菌株的稳定性、异丁醇产量及有机酸含量的变化情况。成功获得pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株BW25113H。发酵结果表明,该工程菌能以较长时间,较高比生长速率保持对数生长期,其稳定性较好,异丁醇产量增加了40%。成功构建pflB、frdAB、fnr和AdhE四基因缺失突变株BW25113H,结合非自身发酵途径使异丁醇的产量由3 g/L提升至4.2 g/L。

肠道菌对苏云金芽胞杆菌杀虫活性的研究

张浩;薛妍;侯艳飞;王开梅;张志刚;李明顺;喻子牛;

2012, 0(07): 176-180.

摘要 ( 175 )

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苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在生长发育过程中伴随芽胞的形成高效表达对昆虫具有特异毒性的杀虫晶体蛋白,从而被广泛应用于害虫防治上。有关Bt的杀虫机制,近年来有学者提出了肠道菌模型,认为肠道菌在Bt发挥杀虫活性中是必须的,也有人提出相反的观点。以棉铃虫作为供试昆虫,利用Cry1Ac10晶体蛋白研究了棉铃虫肠道菌在Bt杀虫过程中所发挥的功能。结果发现,在棉铃虫中肠道菌并非Bt杀虫所必需,并且在肠道菌存在的情况下,Bt杀虫活性反而明显降低,通过肠道菌回接试验发现5号肠道菌对棉铃虫的保护作用最为明显。

免疫捕获PCR法快速检测金黄色葡萄球菌

夏俊芳;刘箐;韩舜愈;刘芳;王婧;刘雅莉;汪小波;樊学军;田绿波;黄超杰;

2012, 0(07): 181-187.

摘要 ( 89 )

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旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特异性检测2株SA菌株,而无法检测到其它8种常见食源性致病菌,说明该方法对SA具有良好的特异性;该方法对纯菌液而言,检测灵敏度可达到2.35×102CFU/mL,是直接PCR的100倍;对5种食品模拟带菌检测发现,无需增菌培养,其灵敏度可达到2.35×103-2.35×104CFU/mL,是直接PCR的10-100倍。免疫捕获PCR法集免疫学与分子生物学检测技术于一体,具有高特异性、高灵敏度、检测快速、易于操作、成本低廉等诸多优点,是一种适合基层实验室使用的检测技术。

稳定转染结合流式分选技术筛选猪GBP1,GBP2基因高表达PK-15细胞

马国剑;黄菁;贾浩;李奎;赵书红;

2012, 0(07): 188-192.

摘要 ( 134 )

PDF (3631KB) ( 188 )

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猪的GBP1,GBP2基因是重要的抗病候选基因,建立其高表达细胞模型可为深入研究基因的抗病能力及机理提供良好的素材。利用pEGFP载体上的Neor抗性筛选标记,采用G418药物筛选方法,结合利用GFP荧光标记,采用流式细胞分选技术,获得了超表达猪GBP1和GBP2基因的PK-15细胞,并通过定量PCR方法对筛选后细胞的超表达效果进行验证。结果显示猪GBP1和GBP2基因在转录水平的表达量相对于正常的PK-15细胞分别升高了近40倍和60倍,表明药物筛选结合流式分选是获得目的基因稳定高表达细胞株的快速便捷的方法。

两种酶谱方法在κ-卡拉胶酶活性鉴定中的应用

王飞飞;姚子昂;吴海歌;张胜霞;

2012, 0(07): 193-196.

摘要 ( 81 )

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对分离纯化后的κ-卡拉胶酶进行SDS-PAGE电泳和酶谱试验鉴定,比较κ-卡拉胶酶活性鉴定中的两种酶谱试验方法。一种是先进行非变性PAGE电泳,电泳完毕,将电泳胶与事先准备好的底物胶叠合在一起,35℃孵育液孵育。另一种是在此试验方法基础上进行改进,直接在电泳分离胶中加入0.2%底物,进行SDS-PAGE电泳,电泳结束,用TritonX-100将电泳胶复性,孵育液孵育。试验结果表明改进后的酶谱方法操作简单,具有良好的灵敏度和精确的定位。同时,利用改进后的酶谱方法对κ-卡拉胶酶活性进行了反应时间的研究,结果显示,反应时间为8 h时,降解条带最清晰,最有利于相似分子量酶的辨别。

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