生物技术通报

孙建锋;赵琦;郭双生;宫喜魁;

2011, 0(09): 1-4.

摘要 ( 232 )

PDF (200KB) ( 681 )

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重力对地球上生物的生长、发育、代谢及繁殖等具有重要影响。植物细胞的重力敏感性已被众多研究所证明,在空间微重力环境或地面模拟微重力环境下,植物表现特殊的微重力反应。微重力或模拟微重力会对植物体生长产生一系列的影响。综述微重力及模拟微重力对植物生长的影响,并对近期这一领域的研究进行了概括。

信号转导蛋白P_Ⅱ的研究进展

王瑞;代淑贤;燕永亮;平淑珍;

2011, 0(09): 5-9.

摘要 ( 202 )

PDF (234KB) ( 1517 )

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PⅡ蛋白是一种信号转导蛋白,存在于细菌、古细菌和植物中,该蛋白通过调节信号传导酶的活性来控制细胞内的碳、氮代谢。就PⅡ蛋白的结构、功能以及在细菌和植物中PⅡ蛋白的研究进行了系统阐述。

典型环境污染物修复基因工程菌的构建及应用

关向杰;杨海君;盛博文;黄水娥;

2011, 0(09): 10-15.

摘要 ( 199 )

PDF (260KB) ( 855 )

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随着人类活动的增加,对有机物和重金属的应用越来越广泛,同时造成的环境污染程度越来越严重。综述了石油、农药、表面活性剂及重金属类污染物治理中基因工程菌的构建及应用的研究进展,指出利用基因工程菌解决环境中的石油、农药、表面活性剂及重金属的污染问题已成为环境污染修复领域的研究热点,并提出基因工程菌的构建及应用过程中的难点及发展趋势。

哺乳动物线粒体遗传和在体细胞克隆胚胎中的命运

巴特尔;孙伟;王丽霞;郭继彤;李喜和;

2011, 0(09): 16-21.

摘要 ( 160 )

PDF (265KB) ( 632 )

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线粒体是哺乳动物重要的细胞器之一,为细胞的生命活动提供能量。线粒体是除细胞核外唯一含有功能性基因组DNA的细胞器。由于线粒体在哺乳动物早期胚胎的发育中有多方面重要的作用,因此线粒体对体细胞克隆胚胎发育的影响成为体细胞克隆动物研究的热点。就线粒体的结构特点和遗传特性及其在同种、异种动物克隆早期胚胎发育过程中的命运以及可能的遗传机制进行综述。同时,也将比较注射异源线粒体后,线粒体在注射胚胎中的发育命运。

海参免疫相关基因的研究进展

王艳玲;李东;王秀利;

2011, 0(09): 22-26.

摘要 ( 136 )

PDF (232KB) ( 620 )

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海参是我国重要的海水养殖动物,其疾病预防在养殖生产中具有重要的地位。从海参的凝集素基因、溶菌酶基因和铁蛋白基因等免疫相关基因方面进行概述。

乳腺癌肿瘤干细胞的研究进展

何大健;吴长清;杨世华;

2011, 0(09): 27-31.

摘要 ( 144 )

PDF (229KB) ( 560 )

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干细胞(stem cell,SC)是一类具有自我更新、多向分化潜能的特殊细胞群体。而肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)不仅具备了干细胞方面的特征,同时还有其自身特殊性。乳腺癌中肿瘤干细胞的发现为乳腺癌的治疗提供了创新性策略。近年来,有关乳腺癌肿瘤干细胞的筛选标记和方法以及信号转导通路方面的研究颇多,但其中也不乏争议。就乳腺癌干细胞研究的最新进展作一综述。

荧光蛋白报告基因在植物寄生真菌研究中的应用

高必达;钟杰;赵慧茹;

2011, 0(09): 32-38.

摘要 ( 136 )

PDF (326KB) ( 779 )

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综述菌根真菌、植物内生菌和植物病原真菌等植物寄生真菌转荧光蛋白基因研究现状。介绍转化载体的构建、转化方法及转基因的检测方法,以及转荧光蛋白基因技术在植物寄生真菌侵染过程研究中的应用,指出真菌转荧光蛋白基因存在的问题和展望。

化学修饰法在酶分子改造中的应用

黎春怡;黄卓烈;

2011, 0(09): 39-43.

摘要 ( 192 )

PDF (231KB) ( 812 )

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酶的体外不稳定性限制了其工业应用,而化学修饰法通过化学手段在分子水平上对酶进行改造,可有效地改善酶的性质,为酶的应用提供更广泛的前景。综述酶分子的化学修饰方法及其影响因素,并介绍修饰产物的常用检测评价方法。

基于雷帕霉素与FRB结合的蛋白质间相互作用的相关技术

李芹芹;史道华;杨牛牛;

2011, 0(09): 44-47.

摘要 ( 265 )

PDF (211KB) ( 1015 )

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FKBP12-rapamycin复合物的结合位点(FKBP12-rapamycin binding,FRB)为雷帕霉素(rapamycin,RAP)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)结合的结构域,基于RAP介导FK506结合蛋白12(12 kD FK506-bin-ging protein,FKBP12)与FRB蛋白质相互作用相关研究技术的发展与应用,使人们对小分子介导的蛋白质相互作用有了更多的认识。就研究RAP作用于FRB域及研究FKBP12-RAP-FRB三元复合物形成的相关技术作一综述,为确认新的mTOR抑制剂的作用机制及认识其他蛋白质间相互作用提供参考。

悬浮芯片技术应用进展

程涛;王慧煜;梅琳;韩雪清;

2011, 0(09): 48-51.

摘要 ( 162 )

PDF (235KB) ( 1199 )

相关文章 | 计量指标

悬浮芯片技术(SAT)是一种新型、高通量的生物芯片技术,它是将流式细胞术、激光技术及应用流体学等技术结合在一起,利用悬浮在液相中的分类荧光编码微球作为检测载体,具有高通量、速度快、灵敏度高、特异性强及检测范围广等特点。近几年来,悬浮芯片技术在免疫学、基因组学、蛋白质组学及临床诊断检测等方面应用较广泛。就其原理、技术特点和应用作一介绍。

宏基因组技术在开发极端环境未培养微生物中的应用

朱允华;李俭;方俊;田云;卢向阳;

2011, 0(09): 52-58.

摘要 ( 144 )

PDF (318KB) ( 695 )

相关文章 | 计量指标

人类对自然环境中约99%的微生物不能用传统的方法进行纯培养,对于极端环境中的微生物更是知之甚少。随着宏基因组技术的出现,人们可对这一庞大的未知世界进行多方面研究。目前研究者利用这一技术已经对地球上的多种极端生境进行了研究,并取得了很多新的成就。简要概述这一技术在极端环境未培养微生物研究中的应用。

微滴培养技术的新应用

霍龙;张岩;吴应积;

2011, 0(09): 59-62.

摘要 ( 161 )

PDF (202KB) ( 540 )

相关文章 | 计量指标

微滴培养技术在卵母细胞培养和胚胎早期发育研究中有广泛的应用。近期研究发现这项技术又有新的应用范围。有科学家发现将该技术应用于胚胎干细胞可以实现高效传代,在精原干细胞培养和精子发生相关过程的研究方面也可取得很好效果,同时,对早期人类胚胎干细胞的分离过程的监控和对精原干细胞生长过程的观察也相对容易。这些研究结果显示,微滴培养技术在这些新领域的研究与常规培养方法相比具有独特的优势。回顾微滴培养技术的主要发展过程,重点探讨微滴培养技术的最新应用及其优点。

表观遗传学研究方法进展

郑小国;陈亮;楼巧君;罗利军;

2011, 0(09): 63-71.

摘要 ( 413 )

PDF (350KB) ( 1891 )

相关文章 | 计量指标

表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正在逐步从定性检测向定量分析方向发展,从个别位点向高通量检测发展。此外,新一代测序技术的应用将大大推动表观遗传研究的发展,包括单分子实时测序法、单分子纳米孔测序法等。综述目前常用的DNA甲基化、组蛋白修饰研究方法以及最新的单分子测序技术,并对它们在表观遗传修饰检测中的应用作了简要对比分析。

玉米AGPase基因启动子的克隆及鉴定

王帅;吴颖;苏胜忠;刘宏魁;李世鹏;单晓辉;原亚萍;

2011, 0(09): 72-75.

摘要 ( 171 )

PDF (1149KB) ( 439 )

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以玉米基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增得到了腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶AGPase基因编码区上游1 912 bp的启动子(AGPasep)序列。该序列包含TATA-box,CAAT-box等一些高等植物特有的启动子基本核心序列,推断其为一种新的启动子。为了验证该序列是否具有启动子功能,构建了含有此序列的植物表达载体pCAM-AGPasep,通过农杆菌介导法转化玉米愈伤组织进行瞬时表达。GUS染色结果表明,该序列可以驱动GUS基因的表达,具有启动子功能。

草莓果实MADS-box基因保守片段的克隆与序列分析

康兆茹;周厚成;赵霞;张敏;李凌;

2011, 0(09): 76-80.

摘要 ( 130 )

PDF (1538KB) ( 532 )

相关文章 | 计量指标

根据多种植物MADS-box基因保守区序列设计简并引物,应用PCR技术从草莓绿果中分离出33条MADS-box基因cDNA片段。序列分析表明,这些片段长度在137-146 bp之间,包含基因起始密码子。推导的氨基酸序列与已登录的草莓的MADS-box基因同源性超过87%。推导的氨基酸序列与已知的草莓和其他物种调控果实发育成熟的MADS-box基因以及拟南芥的MADS-box家族基因进行系统发育分析,可将这些基因片段分别归入拟南芥MADS-box基因不同亚家族中,证明草莓果实中存在各类MADS-box家族基因,克隆的部分片段可能参与调控果实发育和成熟软化的调节。

牡丹PsCS基因的克隆及序列分析

任磊;王雁;周琳;彭镇华;

2011, 0(09): 81-85.

摘要 ( 119 )

PDF (2638KB) ( 324 )

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以牡丹品种‘赵粉’(Paeonia suffruticosa L.cv.‘Zhao Fen’)为试材,采用RT-PCR和RACE方法从雄蕊中获得了一个牡丹柠檬酸合成酶(citrate synthase,CS)基因cDNA全长,命名为PsCS,GenBank登录号为HQ449568。其cDNA全长1 564 bp,包含75 bp的5'非编码区、73 bp的3'非编码区和一个长度为1 416 bp编码471个氨基酸的开放阅读框。序列比对和系统进化分析表明,PsCS与葡萄的亲缘关系最近,相似性达89.4%以上。

ApCl基因在毕赤酵母中的表达

江程记;高建明;刘巧莲;代真真;郑金龙;易克贤;

2011, 0(09): 86-89.

摘要 ( 116 )

PDF (438KB) ( 485 )

相关文章 | 计量指标

为了研究ApCl基因的功能,应用基因重组技术将ApCl基因片段克隆入大肠埃希菌―酵母穿梭质粒pGAPZαA,构建重组真核表达质粒pGAPZαA-ApCl,电转化巴斯德毕赤酵母GS115,Zeocin筛选出阳性克隆转化子。通过比较转化空载体pGAPZαA和重组载体pGAPZαA-ApCl的不同菌株分别在含有高盐和高山梨醇浓度的液体培养基中生长情况,发现毕赤酵母GS115在转化ApCl基因后其抗旱、抗盐能力显著提高(约3倍),进一步验证了ApCl基因对提高生物抗逆能力有显著作用,为将来分离该蛋白及进一步研究奠定基础。

过量表达大叶补血草LgNHX1基因对拟南芥耐盐性的影响

周玲玲;祝建波;王爱英;

2011, 0(09): 90-95.

摘要 ( 123 )

PDF (825KB) ( 433 )

相关文章 | 计量指标

利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌GV3101将LgNHX1(全长1 656 bp)基因在拟南芥中过量表达。在含30 mg/L潮霉素的培养基上筛选获得LgNHX1的纯合转化子,并对其进行了分子鉴定和耐盐性分析。结果显示,经PCR和RT-PCR鉴定,野生型植株(对照)没有出现扩增条带,而转基因株系有相应的扩增条带,表明LgNHX1的确已经整合到拟南芥的基因组中,并已正常转录。在不同盐浓度处理下,转基因株系生长情况好于野生型对照;转基因植株地上部分和根的干重、鲜重相对高于野生型对照,但差异没有达到显著水平;当盐浓度达到150-200 mmol/L时,两个转基因株系的Na+含量显著高于野生型,K+含量极显著高于野生型。以上结果表明,过量表达LgNHX1基因可能增强了拟南芥将Na+区隔化至液泡的能力,提高了转基因拟南芥的耐盐能力。

绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析

胡甜园;白音巴图;罗奋华;吴应积;

2011, 0(09): 96-101.

摘要 ( 279 )

PDF (1853KB) ( 3643 )

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在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5%,说明该基因在进化上是高度保守的。这为制备绵羊CDH1的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究条件。

Wistar大鼠Pdia3 cDNA的克隆及原核表达

乌吉斯古冷;汤睿智;邢万金;

2011, 0(09): 102-107.

摘要 ( 122 )

PDF (640KB) ( 472 )

相关文章 | 计量指标

哺乳动物的精卵融合是一个多分子参与的复杂过程,目前只鉴定出几种影响精卵融合的蛋白因子,对其分子机制还知之甚少。其中位于精子上的Pdia3具有二硫键异构酶活性,可能催化其他精卵融合相关蛋白的二硫键变化而参与精卵膜融合。克隆了Wistar大鼠的Pdia3 cDNA片段,长度为1 620 bp,其中编码区为1 518 bp。测序结果显示,编码区内有两个碱基与GenBank公布的大鼠Pdia3 cDNA不同,分别为第147个密码子GAG(Glu)的第1位碱基和第410个密码子AAG(Lys)的第3位碱基,前者造成氨基酸替换,后者仅为多态性。此外,还在大肠杆菌中成功地表达并纯化了GST-Pdia3融合蛋白,为下一步研究大鼠Pdia3在体外影响精卵融合和与其它蛋白的相互作用奠定了基础。

蜜蜂TPI基因克隆与生物信息学预测

王琦;李玮妮;王荣;

2011, 0(09): 108-113.

摘要 ( 157 )

PDF (1949KB) ( 495 )

相关文章 | 计量指标

利用电子克隆方法获得蜜蜂(Apis mellifera)磷酸甘油醛异构酶(triosephosphate isomerase,TPI)基因,并采用生物信息学方法对该基因编码蛋白从等电点、疏水性/亲水性、二级结构等进行了预测,以及试验验证,结果表明蜜蜂TPI基因全长为1 768 bp,具有完整的开放阅读框架(ORF),并得到了试验证实。

绿色荧光蛋白(ZsGreen)基因在长石莼细胞中的表达

何建华;汤文仲;叶静;田琪琳;何培民;

2011, 0(09): 114-119.

摘要 ( 147 )

PDF (927KB) ( 832 )

相关文章 | 计量指标

主要研究绿色荧光蛋白(ZsGreen)基因在长石莼(缘管浒苔)细胞中的表达。应用绿色荧光蛋白基因、抗除草剂bar基因、CMV 35S启动子和SV40双启动子构建了质粒载体PSV-bar-ZsGeen,采用改进的PEG法将质粒载体PSV-bar-Zs-Geen导入到缘管浒苔原生质体中,经过细胞培养发育再生藻株,通过除草剂筛选出阳性藻株,且转化率达38.58%,进一步PCR分子检测和显微荧光检测表明,绿色荧光蛋白基因在转基因植株中得到表达,为今后转基因浒苔研究奠定基础。

东亚三角涡虫DjPreb基因干扰载体的构建及干扰效果鉴定

袁佐清;赵博生;

2011, 0(09): 120-124.

摘要 ( 153 )

PDF (718KB) ( 561 )

相关文章 | 计量指标

以含有东亚三角涡虫DjPreb基因的pcDNA3-DjPreb重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到干扰载体L4440上,构建重组质粒L4440-DjPreb后转化入大肠杆菌HT115感受态细胞中,IPTG诱导表达dsRNA后喂食涡虫。显微观察喂食dsRNA后的涡虫在再生过程中的表型变化,Real-time PCR检测载体对涡虫DjPreb基因的表达抑制效果。试验结果显示DjPreb基因的RNA干扰表达载体构建成功,DjPreb基因RNA干扰后涡虫不能正常再生。Real-time PCR分析饲喂RNA干扰食物后DjPreb mRNA的表达显著下降,进一步说明DjPreb在涡虫头尾的形成中发挥作用。

asr基因酵母双杂交系统的构建及筛选鉴定

许奕;金志强;刘菊华;贾彩虹;张建斌;徐碧玉;

2011, 0(09): 125-129.

摘要 ( 119 )

PDF (1066KB) ( 495 )

相关文章 | 计量指标

为研究asr作用的分子机制,分析该基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白,分别构建诱饵质粒载体和转基因拟南芥cDNA文库,通过转入酵母细胞中,初步的鉴定分析证实成功构建了诱饵质粒载体和拟南芥cDNA文库。构建的酵母双杂交系统为发现asr基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础。

嗜水气单胞菌毒力基因在传代过程中的稳定性研究

付乔芳;邱军强;胡鲲;杨先乐;安健;

2011, 0(09): 130-135.

摘要 ( 130 )

PDF (1904KB) ( 645 )

相关文章 | 计量指标

为了解嗜水气单胞菌毒力基因在传代过程中的稳定性,对传代前后嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,A.hy-drophila)的毒力和毒力基因进行测定和检测。采用急性毒性试验方法测定10株嗜水气单胞菌原代、第10代及第20代的菌株对异育银鲫(Carassais auratus gibebio)的半数致死量,通过聚合酶链式反应(PCR)检测原代、第10代及第20代的菌株中5种毒力基因aerA、hlyA、ahpA、altA及ast的变化情况。试验结果表明,嗜水气单胞菌在传代过程中毒力基因分布相对较稳定。但是ahpA基因极易发生变异,在培养基上连续多次传代后,毒力逐渐减弱甚至消失。可推知,ahpA基因与毒力相关性最大,并易受传代影响。

一株产耐热普鲁兰酶菌株Anoxybacillus sp. LM14-2分离鉴定及酶学性质研究

孙劭靖;路福平;姜楠;李丽;徐健勇;曹慕琛;宋诙;

2011, 0(09): 136-141.

摘要 ( 159 )

PDF (481KB) ( 371 )

相关文章 | 计量指标

从云南轮马热泉下游淤泥中筛选得到了一株产耐热普鲁兰酶菌株LM14-2。根据形态特征及16S rRNA序列同源性分析,初步判定为Anoxybacillus sp.LM14-2。该菌株发酵上清液中有耐热普鲁兰酶积累,其反应最适pH值为6.0,最适温度为70℃。利用染色体步移技术获得了完整的普鲁兰酶编码基因(HQ660582),经序列相似性进一步分析,确定该蛋白与I型普鲁兰酶保守区b相吻合。通常的普鲁兰酶在高温下很快失活,难以满足淀粉加工,洗涤剂等相关工业的需求,而该新型的耐热普鲁兰酶的作用温度广泛,热稳定性较好,65℃保温55 h后达到其半衰期,具有广阔的开发应用前景。

一种快速分离检测产脂肽类生物表面活性剂枯草芽孢杆菌的方法

王大威;张健;姜伟;张凤久;

2011, 0(09): 142-146.

摘要 ( 164 )

PDF (945KB) ( 820 )

相关文章 | 计量指标

脂肽(Lipopeptide)是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等微生物产生的一类具有较强表面活性的生物表面活性剂。枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因(sfp)是枯草芽孢杆菌中参与脂肽代谢的功能性基因。采用sfp基因PCR对从环境中得到的一组产生表面活性剂的微生物进行筛选,结合Tricine-SDS-PAGE电泳对PCR结果呈阳性的菌株的代谢粗初提物进行检测,初步鉴定得到两株枯草芽孢杆菌。进一步利用16S rDNA序列的系统发育学分析确定这两种菌株为枯草芽孢杆菌,并利用TLC、HPLC鉴定其产物为脂肽类表面活性剂,从而建立了一套快速分离检测产生脂肽类生物表面活性剂的枯草芽孢杆菌方法。

新疆家蚕抗菌肽基因突变及其抗菌活性的研究

刘忠渊;毛新芳;张兰廷;张富春;

2011, 0(09): 147-156.

摘要 ( 127 )

PDF (891KB) ( 392 )

相关文章 | 计量指标

为了改变抗菌肽的结构参数,探讨其结构与活性的关系,采用PCR扩增和人工合成基因的方法,对新疆家蚕抗菌肽基因进行改造及原核表达蛋白的抑菌活性研究。结果表明,α-螺旋、两亲性、疏水性、净正电荷数和关键氨基酸的替换等参数是相互依赖、相互影响,协同发挥作用,任何一个参数的改变都会影响抗菌肽整体的活性。α-螺旋是抗菌肽功能有效性的结构基础,但其所处的位置可能并不影响抗菌活性;两亲性结构是抗菌肽与生物膜相互作用的重要结构;疏水性程度必须保持在一定的范围内;在一定范围内增加多肽的阳离子能够增加抗菌活性,但正电荷数和抗菌活性之间无绝对正相关性;色氨酸的存在及抗菌肽的C-末端酰胺化能增强抗菌活性。

点突变对高加索乳杆菌醇脱氢酶酶活的影响

张伟;陈祈磊;朱宝泉;胡又佳;

2011, 0(09): 157-162.

摘要 ( 121 )

PDF (1235KB) ( 335 )

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从高加索乳杆菌基因组中克隆醇脱氢酶基因,构建重组表达菌后发现不同转化子具有不同的活性,测序结果表明在部分位点发生了点突变。结合生物信息学知识通过对醇脱氢酶结构与作用机理分析,认为在酶关键位点的突变对酶的活性影响较大,而非关键位点的突变对酶活的影响虽明显降低,但其突变的数目可能对酶活的影响呈现一定的累加效应。其中活性最高的重组菌表达了一个可将苯乙酮高选择对映还原成(S)-苯乙醇的醇脱氢酶,该研究结果为酶的定向进化研究提供了理论依据。

双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物

龚益熊;廖翔;朱力;吴兰;周晓巍;梁龙;黄培堂;

2011, 0(09): 163-166.

摘要 ( 107 )

PDF (399KB) ( 434 )

相关文章 | 计量指标

通过蓝色非变性凝胶电泳(BN-PAGE)比较痢疾杆菌福氏5型野生株M90T和大质粒缺失株M90TΔT的膜蛋白复合物,发现一个野生株特有的复合物,其分子量约为290 kD,命名为M90T-290。通过第二向SDS-PAGE分离M90T-290得到6个蛋白亚基,质谱鉴定为:一个由大质粒编码的毒力蛋白Apyrase(ATP-二磷酸水解酶)和5个染色体编码的蛋白,这些蛋白可能以膜复合物的形式影响毒力蛋白IcsA的单极性分布和痢疾杆菌在细胞间的扩散。这个新发现的毒力相关膜复合物在痢疾杆菌的致病过程中可能发挥重要作用。

野生濒危植物掌叶木的ISSR-PCR反应体系的建立

李雪萍;李在留;崔彬彬;贺春玲;彭健;杨婷;周振艳;

2011, 0(09): 167-170.

摘要 ( 106 )

PDF (460KB) ( 353 )

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以野生濒危植物掌叶木的叶片为材料,通过单因子试验分别研究了模板DNA、退火温度、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度等对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,通过各个因子的组合研究建立了适宜于掌叶木ISSR分析的扩增体系,即25μL的反应体系中含模板DNA约30 ng,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.8μmol/L,dNTP0.20 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U。该研究为利用ISSR分析掌叶木遗传多样性、进行掌叶木种质资源研究等奠定了良好的基础。

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

刘胜洪;刘文;刘明峰;杨凤婷;刘庆生;梁红;

2011, 0(09): 171-175.

摘要 ( 159 )

PDF (741KB) ( 561 )

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在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚的猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸。所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品。紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性。通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求。

一种根癌农杆菌介导的简单、快捷转化雪柑的新方法

王会全;曾黎辉;吴少华;徐海峰;

2011, 0(09): 176-180.

摘要 ( 107 )

PDF (696KB) ( 455 )

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以雪柑种子为外植体,以pC1301-PMI-LFY重组载体为转化载体,将蘸有农杆菌侵染液的接种针在种子胚的顶端分生组织部位刺2-3次,深度1 mm左右,当实生苗成活后移栽。通过PCR检测和PCR-Southern杂交检测得到了1株转基因植株,转化率为4.35%。针刺法简便快速,在雪柑上能够成功应用,为木本植物的遗传转化提供了新的思路。

肠上皮细胞RNA干扰Hsp70基因转染条件的研究

钟翔;李兴美;李伟;黄雪新;张莉莉;王恬;

2011, 0(09): 181-186.

摘要 ( 146 )

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旨在研究肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的转染条件,并对4对Hsp70干扰序列进行筛选,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术研究Hsp70对胃肠道的保护功能以及介导信号通路的机理打下基础。以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳离子脂质体转染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和转染试剂Lipo-fectamine 2000不同剂量比例对转染效率的影响,并进一步采用RT-PCR和Western blotting方法对Hsp70干扰序列进行筛选。试验结果表明,采用脂质体转染法可获得较高的转染效率,其中以80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000组的转染效率最高(85.77%)。针对4个不同靶位点,进行Hsp70基因干涉,结果表明,4个组中Hsp70 mRNA的表达显著下降,其中ol-igo 4组的基因表达极显著降低。Western blotting的结果表明,oligo 2、oligo 3和oligo 4组中的Hsp70蛋白表达极显著降低。最终确定80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以oligo 4(Hsp70的基因位点为3672-3692)为最佳RNA干扰靶基因。

SMART技术构建衣藻细胞的酵母双杂交文库

孙银行;潘俊敏;

2011, 0(09): 187-192.

摘要 ( 147 )

PDF (544KB) ( 616 )

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衣藻是用来研究植物光合作用和动物纤毛常用的模式生物。为了研究蛋白质之间的相互作用,利用SMART技术构建了衣藻的酵母双杂交文库。使用Trizol试剂提取鞭毛再生过程和光周期培养的细胞进入分裂前的衣藻细胞的总RNA,经过Oligotex纯化得到mRNA;应用SMART技术和LD-PCR合成双链cDNA,经过CHROMA SPIN TE-400柱子去除短片段的cDNA;cDNA和线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母Y187构建酵母双杂交文库。库容达到3.0×106 CFU,重组率为70%,插入片段平均长度为0.6 kb。以上结果说明该文库质量较好,能够通过筛选文库得到与目的蛋白互相作用的蛋白质,为寻找蛋白质的作用伴侣打下基础。

刺参管足SMART cDNA文库构建及EST分析

李栋;常亚青;王玉丹;丁君;

2011, 0(09): 193-198.

摘要 ( 118 )

PDF (405KB) ( 426 )

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以大连广鹿岛野生刺参的管足mRNA为材料,利用SMART cDNA Construction Kit构建了表达型cDNA文库。初始文库的滴度为1.3×106PFU/mL,蓝白斑估测重组率合格。扩增后获得96 mL文库,滴度为1.8×1010PFU/mL,从扩增文库中随机挑取200个噬菌斑进行PCR检测,电泳检测结果表明重组率大于90%,片段大小在0.25-2.0 kb之间的插入片段占80.4%,文库构建成功。随机选择122个噬菌斑转化为质粒pTriplEx2并测序,测序成功率83.6%,软件处理后100 bp以上的clean ESTs有72条,测通的为65条,占成功测序样品的63.7%。72条序列经SeqMan软件拼接,获得48条contig/singletons,在线Blast比对发现其中26条具有同源序列并获得注释,另外20条可能为新基因,其功能和结构有待进一步利用生物信息学的方法进行分析和研究。

可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA的制备

李晓玲;李克秀;赵洪锟;赵茂林;董英山;

2011, 0(09): 199-204.

摘要 ( 106 )

PDF (581KB) ( 442 )

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对可转化人工染色体(TAC)pYLTAC747NH/sacB文库载体DNA的制备条件进行了较系统的摸索和研究。结果表明,该文库载体经碱裂解法提取、QIAGEN Plasmid Mini kit纯化后,可获得较纯净的载体DNA。对其闭环载体DNA分别用不同酶量的Hind III酶切处理,经琼脂糖凝胶电泳检测得出其最佳Hind III完全酶切条件为2 U Hind III/μg闭环载体DNA、37℃酶切30 min;分别用0.5 MBU和1 MBU HK脱磷酶/μg对其线性载体DNA进行脱磷处理,经电泳和载体自连产物电转化检测表明其适宜的完全脱磷条件为1 MBU HK脱磷酶/μg线性载体DNA,30℃脱磷1 h;将所制备的线性载体DNA与λDNA/Hind III酶切片段进行连接,连接产物转化频率较高,其电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞频率可达到9.6×108。

基于DIG-化学发光法的Southern blot方法优化

张晓;张锐;于源华;史计;孟志刚;孙国清;周焘;郭三堆;

2011, 0(09): 205-210.

摘要 ( 162 )

PDF (677KB) ( 1252 )

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目前,基于DIG-化学发光法的Southern blot技术已在生物实验室广泛应用,但在试验过程中经常会遇到背景黑、目的信号弱等问题,以致不能获得理想结果。在棉花线粒体基因组RFLP分析过程中结合前人经验对基于DIG-化学发光法的Southern blot技术在探针标记、探针浓度、探针剥离等方面进行了优化。优化后的方法重复性好,一张转好的尼龙膜最多可以反复使用11次;一份杂交液在两年内至少可以反复使用5次且不会明显降低杂交效果。

美国出台转基因苜蓿环境影响报告引起的反响

钟舒乐;

2011, 0(09): 211-212.

摘要 ( 114 )

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<正>1美国批准转基因苜蓿无限制商业化种植美国农业部部长威尔萨克2011年2月13日宣布将授权对转基因苜蓿的无限制商业化种植,从而撇开一项已引起尖锐对立的争议性折衷方案。作出这

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