生物技术通报

孙鑫博;代小梅;王怡杰;韩烈保;

2010, 0(11): 1-6.

摘要 ( 193 )

PDF (238KB) ( 652 )

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植物细胞死亡分为坏死和程序性死亡。细胞程序性死亡是具有信号或一系列分子参与,并且由细胞内在的死亡程序介导的有序过程。它在植物生长发育和抵御外界胁迫中具有重要作用。简要介绍了植物PCD的特征,对植物PCD中的信号分子和类caspase的作用等进行了综述,并对植物PCD存在的问题进行分析和展望,为深入研究植物PCD提供参考。

植物蔗糖非发酵-1相关蛋白激酶家族研究进展

王永波;高世庆;唐益苗;刘美英;郭丽香;张朝;赵昌平;

2010, 0(11): 7-18.

摘要 ( 201 )

PDF (1516KB) ( 1243 )

相关文章 | 计量指标

蛋白质磷酸化与去磷酸化过程在细胞的信号转导网络中起关键的作用,是生物体中普遍存在的一种调节机制。植物中的蛋白激酶通过磷酸化和去磷酸化在调节ABA信号传导、能量缺失反应和非生物胁迫反应过程中有着重要的作用。其中,植物蔗糖非发酵-1相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase,SnRK)是植物蛋白激酶家族中一个重要家族,它们与酵母中的SNF1(sucrose non-fermenting-1,SNF1)和哺乳动物中的AMPK(AMP-activated protein kinase,AMPK)同源,具有与它们相似和自身独特的功能,根据其氨基酸序列的同源性和表达模式的差异可分为3个亚组:SnRK1、SnRK2和SnRK3。目前,在拟南芥、水稻、豆科植物、高粱以及苔藓植物等基因组中都发现了大量的SnRK蛋白激酶,它们广泛参与了植物的生长发育、病虫害防御、ABA和非生物胁迫等各种信号的应答反应。

核桃分子生物学研究进展

田荣欢;刘迪秋;陈朝银;葛锋;方松刚;王光勇;

2010, 0(11): 19-24.

摘要 ( 137 )

PDF (906KB) ( 515 )

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核桃与扁桃、腰果、榛子并列为世界四大干果,具有重要的经济价值和基础研究价值。分子生物学及基因工程技术的发展为核桃基础理论研究提供了新的技术手段。从分子水平综述了核桃过敏原和其引发过敏症的机理、再生长期糖运输和叶片水分运输的调控、组织培养技术的发展和利用转基因技术来培育核桃新材料的现状、核桃种质资源的遗传分析研究进展,并对核桃的研究前景进行了展望。

肝细胞治疗的新型种子细胞——诱导性多能干细胞

闫益波;齐巍巍;钟部帅;吴勇聪;王锋;

2010, 0(11): 25-29.

摘要 ( 121 )

PDF (229KB) ( 470 )

相关文章 | 计量指标

在回顾iPS细胞研究的基础上,针对肝细胞治疗的研究现状,就iPS细胞诱导分化为肝细胞的研究进展及其在肝病细胞治疗中的潜力进行了探讨,并提出了目前面对的主要问题,希望促进iPS细胞在肝病细胞治疗上的应用。

线粒体细胞色素b基因在鱼类系统发育研究中的应用

陈欣;杨太有;

2010, 0(11): 30-34.

摘要 ( 169 )

PDF (944KB) ( 542 )

相关文章 | 计量指标

阐述了线粒体Cytb基因在鱼类系统发育研究中的应用进展和方法步骤,分析了Cytb基因在研究中面临的问题并综合了相应的解决办法。

斑马鱼及其胚胎在毒理学研究中的应用

徐立利;徐永学;闫艳春;

2010, 0(11): 35-39.

摘要 ( 189 )

PDF (209KB) ( 1170 )

相关文章 | 计量指标

斑马鱼作为一种新的毒理模式动物,具有其它模式动物无法比拟的优势。就急性毒理表型分析、转录组水平分析、蛋白质组学分析这3种评价化合物对斑马鱼胚胎影响的最常用方法,对斑马鱼及其胚胎在毒理学研究中的应用作一综述。通过这些方法,探究外源毒性物质的毒理学机制、筛选可用于早期预警的生物效应分子,为其合理使用提供科学依据和技术支持。

早期小鼠胚胎中的RNAi应用

刘阳;方廖琼;

2010, 0(11): 40-43.

摘要 ( 145 )

PDF (213KB) ( 425 )

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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是有效双链RNA引起的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)现象,为抑制mRNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径。RNAi现象普遍存在于真核生物,已经广泛应用于疾病相关基因的研究和药物作用靶点的筛选。为了更好地探究小鼠卵母细胞和胚胎中特定基因的功能,研究人员在这一特有生命形成阶段进行了RNAi技术的探索,并且取得了一定的研究进展。

铜绿假单胞菌czcCBA基因与生物修复

李樊;刘义;孙伟峰;何钢;

2010, 0(11): 44-47.

摘要 ( 157 )

PDF (503KB) ( 407 )

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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugionsa)的外排泵系统RND是它产生耐重金属离子胁迫的一个重要原因。阐述了编码RND外排泵czcCBA基因的作用机制,以期为下一步工作奠定基础。

细菌胞外多糖的生物合成与基因控制

王正荣;生吉萍;申琳;

2010, 0(11): 48-55.

摘要 ( 304 )

PDF (494KB) ( 1364 )

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细菌胞外多糖是指细菌在生长发育过程中合成并分泌到细胞外的长链,高分子糖类聚合物。细菌胞外多糖的生物合成途径涉及装配、多聚化及运输三个过程,是多种酶和转运系统的结果,其发生的部位包括胞内和胞外,有些合成过程会发生在细胞壁上,对于胞外多糖合成相关基因的报道,发现控制胞外多糖合成是一大类基因簇,不同的菌株其基因簇的数量和种类各不相同。这些研究的不断更新为将来胞外多糖的应用提供了更加广阔的前景。

黄曲霉素合成相关基因表达与环境因素的关系

路子显;伍松陵;孙长坡;

2010, 0(11): 56-61.

摘要 ( 240 )

PDF (396KB) ( 850 )

相关文章 | 计量指标

简单介绍了黄曲霉毒素的发现、分布、危害和范围,详细叙述了黄曲霉毒素生物合成中相关基因的表达与调控,概述了黄曲霉毒素合成中的关键基因、酶和调控因子重要性,分析了影响黄曲霉毒素合成的环境因素。不仅在基础理论上对黄曲霉毒素合成机理进行了深入探讨,而且在应用研究上为减少粮食和食品受到重金属污染和黄曲霉毒素危害提供了新的思路。

microRNAs在肌肉中的作用研究进展

李粉;陈华群;

2010, 0(11): 62-67.

摘要 ( 124 )

PDF (227KB) ( 412 )

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microRNAs是一类非蛋白质编码小RNA,通常作用于靶基因mRNA的3′-UTR区引起靶基因的翻译抑制或降解。microRNAs的表达具有组织特异性,骨骼肌和心肌中有特异microRNAs的表达。microRNAs在肌肉的增殖、分化等发育过程中发挥重要的调节作用,并且microRNAs的表达异常与某些肌肉疾病的病理过程有关。现就microRNAs在肌肉中的作用研究进展作一综述。

微流控芯片分析技术在生化研究中的应用进展

蔡绍皙;郭志刚;

2010, 0(11): 68-71.

摘要 ( 175 )

PDF (418KB) ( 984 )

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综述了微流控芯片分析技术在生物和化学领域中进展,主要从药物筛选、PCR、细胞研究和微流控芯片电泳4个方面总结目前的进展。

基因芯片在海洋微藻研究中的应用前景

唐晨;田晓玲;贾睿;徐韧;王金辉;项有堂;何培民;

2010, 0(11): 72-75.

摘要 ( 133 )

PDF (222KB) ( 424 )

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基因芯片通常指DNA芯片,其基本原理是将大量的寡核苷酸分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号从而获取结果。多年来,我国在医药疾病研究、微生物检测等领域已成功研制出多种基因芯片,取得了骄人的成绩,但在对海洋微藻研究的应用上成果较少。现着力从实际应用的角度阐述基因芯片及其在海洋微藻研究中的应用。

微量病原检测技术研究进展

刘雅莉;刘箐;韩舜愈;

2010, 0(11): 76-80.

摘要 ( 121 )

PDF (198KB) ( 545 )

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微量病原由于其浓度很低,达不到常规检测技术的检测灵敏度,导致不可避免的漏检。近年来,新发展起来了一些专门针对微量病原的灵敏、特异、快速的检测技术,包括PCR-ELISA、PCR-MPH、IC-PCR、IM-PCR、IMS-ELISA、IMS-PCR、HC-PCR-MPH、HC-realtimePCR、RCA、LAMP等均可不同程度的解决以上问题。

适合水稻悬浮培养细胞蛋白质组分析的双向电泳技术

刘悦萍;杨爱珍;郭蓓;余萍;Horváth Gábor V;Gyula Orosz;

2010, 0(11): 81-86.

摘要 ( 140 )

PDF (464KB) ( 399 )

相关文章 | 计量指标

水稻是研究植物蛋白质组学的一个重要试材,从蛋白质的提取,裂解缓冲液的成份和浓度,第一向聚焦的条件,蛋白上样量和二向胶的选择方面,对水稻悬浮培养细胞的双向电泳条件进行了比较和优化。结果表明,采用甲醇/氯仿沉淀蛋白,裂解缓冲液中加入0.5%的两性电解质、并加入盐桥,17cm的胶条、850μg的上样量可达到较好的等电聚焦效果;8%-16%梯度胶分离蛋白较为适宜。

杂草稻nrDNA ITS序列的测序分析

刘志文;王英;陈温福;

2010, 0(11): 87-90.

摘要 ( 114 )

PDF (1611KB) ( 425 )

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杂草稻nrDNAITS序列的直接测序和克隆测序比较结果表明直接测序和克隆测序均能得到准确的杂草稻nrD-NAITS序列。尽管直接测序方便和经济,但它的峰图差,有叠峰出现。杂草稻的ITS序列在587-589bp之间,其中ITS1长度为193-194bp,ITS2的长度为230-232bp,而5.8S均为164bp。与已公布的部分稻属的ITS进行多重比较,该序列蕴含了大量的系统学信息,可在分子水平为杂草稻的发生机理提供证据。

栽培大豆染色体改构复合体基因SNP5的克隆及序列分析

张春宝;尹光;赵洪锟;刘晓东;董英山;

2010, 0(11): 91-95.

摘要 ( 110 )

PDF (1358KB) ( 439 )

相关文章 | 计量指标

根据大豆耐盐基因表达芯片上提供的表达量下调的EST序列信息,借助了电子克隆方法,根据获得的假定序列设计引物,通过RT-PCR,从栽培大豆克隆了染色体改构复合体SNP5类同源基因。其片段长度为812bp,编码240个氨基酸的多肽,分子重量为27.4kD,等电点pI为5.37。NCBI保守结构域分析表明,其属于SNF5超家族,因此我们将其命名为Gm-SNP5(GenBank登录号:HM068595)。Southern杂交表明,GmSNF5基因在栽培大豆基因中至少有一个拷贝。氨基酸序列及系统进化树分析表明,GmSNF5与其同科的豌豆PsSNF5有较高的同源性,氨基酸序列一致性高达92%。由于其部分EST序列在大豆耐盐芯片中表达量下调,因此推测此基因在功能上与栽培大豆的耐盐性相关。

大豆异戊烯焦磷酸异构酶基因的电子克隆及生物信息学分析

魏琦超;畅丽萍;薛晓锋;周岩;

2010, 0(11): 96-100.

摘要 ( 157 )

PDF (893KB) ( 506 )

相关文章 | 计量指标

利用电子克隆方法获得大豆异戊烯焦磷酸异构酶基因(IPI)的cDNA序列,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的一般理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行了预测和分析。结果表明,大豆异戊烯焦磷酸异构酶基因的cDNA序列全长1384bp,包含一个906bp的ORF,编码301个氨基酸。大豆IPI酶为一亲水性的非分泌蛋白,α-螺旋和无规则卷曲是其主要的二级结构,该酶定位于叶绿体。

枣树内参基因ZjH3的克隆与筛选

孟玉平;曹秋芬;孙海峰;

2010, 0(11): 101-107.

摘要 ( 140 )

PDF (1330KB) ( 593 )

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为了克隆和筛选适合于枣树(Ziziphus jujuba Mill.)基因表达研究用的内参基因,利用枣结果枝cDNA文库ESTs序列,克隆获得4条其它物种常用内参基因的同源基因:组蛋白H3的同源基因全长序列,命名为ZjH3(Ziziphus jujubaH3,GenBank登录号:EU916201);肌动蛋白的同源基因片段,命名为ZjAT1(Ziziphus jujubaACT,GenBank登录号:EU251882);泛素延伸蛋白同源基因全长序列,命名为ZjUBQ(Ziziphus jujubaUBQ,GenBank登录号:EU916200);翻译延伸因子的同源基因片段,命名为ZjEF1(Ziziphus jujubaEF,GenBank登录号:EU916202)。在相同的条件下,用半定量RT-PCR方法分析了这4个潜在内参基因在枣不同生长时期的结果枝及其茎尖和不同器官中的表达,结果表明,ZjAT1、ZjUBQ和ZjEF1基因的表达不恒定,不适合用作枣树内参基因;而ZjH3基因在不同发育阶段的结果枝及其茎尖、根、茎、叶、芽、花蕾、花、幼果、膨大果实和种子中均表达稳定,适合于用作枣树的内参基因。

盐芥ICE1转录因子的克隆及生物信息学分析

轩春雷;肖向文;李晓波;祝建波;

2010, 0(11): 108-114.

摘要 ( 144 )

PDF (1733KB) ( 565 )

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ICE1基因编码一个MYB类型的碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,在冷胁迫条件下调节CBF基因的表达,能够提高植物抗寒性。利用盐芥5′EST序列和拟南芥ICE13′UTR保守序列设计引物,从盐芥基因组中克隆得到了1个2525bp的基因xhICE。生物信息学分析,表明该基因具有4个外显子,4个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。由此推导的cDNA包含一个1500bp的开放阅读框,编码500个氨基酸。与拟南芥ICE1相比,二者的内含子具有相同的类型和相对保守的位置,在核酸水平与氨基酸水平高度同源,并且具有相同的bHLH结构域。以上分析都表明,xhICE基因可能是盐芥ICE1基因,涉及抗寒相关的CBF转录调控途径。

虾夷扇贝遗传结构及微卫星标记与经济性状相关分析

张立冬;王蕾;高悦勉;

2010, 0(11): 115-122.

摘要 ( 129 )

PDF (339KB) ( 455 )

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选用30个多态性微卫星分子标记对大连大长山(96个)、大连獐子岛(96个)及日本青森县陆奥湾(96个)3个地区虾夷扇贝养殖群体(Patinopecten yessoensis)进行遗传多样性分析。结果显示,30个基因座共检测到198个等位基因(Na),平均等位基因数为6.63个,每个座位检测到的等位基因数为3-12,有效等位基因数(Ne)每个位点平均为4.70个,观测杂合度(Ho)平均值0.58,期望杂合度(He)的平均值为0.75,30个位点的平均多态信息含量为0.703,说明3个地区虾夷扇贝群体遗传多样性水平较高。运用统计软件SPSS11.5对30个微卫星标记与大长山群体生长性状相关性进行了分析。结果表明,位点DQ221714和FJ262378与壳长、壳高、壳宽和鲜重显着相关(P<0.05)位点;位点FJ262372与壳宽、软体部重和闭壳肌重显着相关;位点FJ262369与软体部重及闭壳肌重显着相关。对差异显着的位点进行不同基因型间的多重比较,找到了与虾夷扇贝生长性状相关的基因型,进一步将所得显着性标记对大长山虾夷扇贝个体最大的17个和个体最小的13个基因组DNA进行检测,验证其准确性。结果表明,位点DQ221714在两组虾夷扇贝中存在特异性条带,可作为QTL定位候选标记。

文蛤胞内铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析

朱丹;李宏俊;高祥刚;苏浩;赫崇波;

2010, 0(11): 123-128.

摘要 ( 111 )

PDF (1106KB) ( 487 )

相关文章 | 计量指标

文蛤(Meretrix meretrix)是我国重要的滩涂养殖贝类之一,由于病害等原因,特别是红肉病的蔓延,文蛤增养殖业的发展受到严重制约。铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)是活性氧清除酶系中最重要的酶,在生物体内参与清除氧自由基,防御分子损伤和机体衰老等诸多生物事件。通过构建SMART全长cDNA文库和RACE的方法,克隆得到了文蛤胞内Cu/Zn-SOD(icCu/Zn-SOD)的全长cDNA序列。生物学软件分析表明,该序列全长为1383bp,5′UTR为45bp,3′UTR为876bp,开放阅读框长度为462bp,编码153个氨基酸,Cu原子分别与His46、His48、His63、His119配位,Zn则与His63、His71、His80和Asp83配位,半胱氨酸Cys57和Cys145之间形成唯一的链内二硫键。蛋白质结构中心是由8条反向平行的β折叠围成的圆桶状结构。文蛤icCu/Zn-SOD与紫贻贝等其它9种海洋贝类的Cu/Zn-SOD具有较高的同源性。

非洲爪蟾IL-6基因的克隆及生物信息学分析

齐志涛;张启焕;王资生;许伟;黄贝;王爱民;

2010, 0(11): 129-133.

摘要 ( 121 )

PDF (687KB) ( 267 )

相关文章 | 计量指标

生物信息学作为一门新兴学科,已经应用到生命科学、临床医药、工农业等方面。白细胞介素-6(IL-6)是机体重要的免疫因子,但在两栖类中未见报道。采用生物信息学方法对两栖类模式动物非洲爪蟾IL-6进行分析。以人IL-6基因对非洲爪蟾数据库进行搜索、分析,并采用RT-PCR方法对所得序列进行验证。结果表明,非洲爪蟾IL-6基因位于scaffold_52基因架上,具有保守的IL-6家族基序。采用生物信息新方法进行不同物种的免疫基因挖掘、克隆,是一种有效的方法。

核酸疫苗pcDNA3.1-EG95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达

杨娇馥;王志钢;高连山;郝慧芳;李志伟;李洁;湛奎;

2010, 0(11): 134-136.

摘要 ( 151 )

PDF (275KB) ( 546 )

相关文章 | 计量指标

克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95。根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序。重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录。测序结果表明克隆的目的基因包含了471bp的完整ORF并与载体连接正确。RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究。

人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化

陶俊;向军俭;王宏;龚义平;邓宁;

2010, 0(11): 137-141.

摘要 ( 224 )

PDF (1173KB) ( 1767 )

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以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化。以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化。结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%。当转染的DNA=2μg/4×106细胞时,DNA∶FuGene HD的最佳比例为1∶4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠。通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5mg/L提高到了15.1mg/L。

HepaCAM对肾癌786-0细胞Caspase-3活性和表达的影响

张巧琳;罗春丽;颜令;

2010, 0(11): 142-145.

摘要 ( 118 )

PDF (1359KB) ( 526 )

相关文章 | 计量指标

探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中不同表达水平对其凋亡及Caspase-3活性和表达的影响。将携带hepaCAM基因的重组质粒瞬时转染786-0细胞,RT-PCR鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;FCM检测细胞凋亡情况;分光光度计结合Western印迹法检测hepaCAM表达与Caspase-3活性及蛋白水平表达的关系。结果显示,上调hepaCAM基因表达能诱导肾癌786-0细胞凋亡,能上调Caspase-3活性及其蛋白水平且与hepaCAM表达水平呈正相关。上述结果表达,hepaCAM可能通过调节Caspase-3凋亡通路诱导肾癌786-0细胞凋亡。

利用pSOS系统筛选靶向HBV病毒X基因的siRNA

韦德芳;高健;曾春华;彭明利;任红;

2010, 0(11): 146-152.

摘要 ( 113 )

PDF (2523KB) ( 402 )

相关文章 | 计量指标

构建靶向乙肝病毒(HBV)X基因的真核表达载体pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA,转染肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15,筛选和验证高效siRNA。设计4个靶向X基因siRNA,将siRNA和HBx基因插入载体pSOS得重组质粒pSOS-X-siRNA;pSOS-X-siRNA经PacI酶切去除目的片段HBx后得pSOS-siRNA。将质粒pSOS-X-siRNA和pSOS-siRNA分别转HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞株。荧光显微镜下观察HepG2细胞绿色荧光(GFP)减弱程度预估干扰效率。ELISA检测HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg表达,Western blotting检测胞内蛋白HBsAg、HBcAg表达,Real time PCR检测胞内HBsmRNA、HBx mRNA的转录。转染4d后,siRNA4使HepG2细胞的GFP信号表达程度最低,为阴性对照的9%,预测其干扰效果最强。siRNA4使HepG2.2.15细胞转染后4d上清的HBsAg蛋白表达为对照的(13.92±1.14)%(P<0.05)、HBeAg为(21.69±4.92)%(P<0.05),胞内的HBsAg、HBcAg蛋白表达量灰度比值为0.175±0.025、0.0825±0.028,均为各处理组中最低(P<0.01),HBs mRNA和HBx mRNA分别降为对照的0.237±0.028(P<0.01)、0.110±0.022(P<0.01),差异有统计学意义,证实siRNA4为高效干扰位点。利用pSOS成功筛选并验证构建靶向HBV X基因的siRNA靶点。

化学药物对与人遗传病相关的DNA重复序列不稳定性的影响

赵宏宇;蔡禄;赵秀娟;王晶妍;陈元秀;刘水峰;

2010, 0(11): 153-156.

摘要 ( 116 )

PDF (1025KB) ( 484 )

相关文章 | 计量指标

DNA重复序列异常扩增或删除会引起多种人类遗传疾病,目前其不稳定性机制还不清楚。为了探索化学药物对重复序列的作用,采用甲基磺酸乙酯和丝裂霉素C连续多次处理含重复序列质粒的菌体,通过检测重复序列长度的变化,发现两种化学药物在不同程度上可以促使含(GAA)42和(ATTCT)43质粒发生删除,而含(GCCT)18质粒的长度没有发生变化。

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

薛礼长;杨慧兰;

2010, 0(11): 157-161.

摘要 ( 123 )

PDF (2413KB) ( 254 )

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克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达,为进一步研究LAT基因及ORF3的生物学功能奠定基础。用HSV-2333株感染Vero细胞,从Vero细胞培养液中收集HSV-2并提取HSV-2基因组。以HSV-2基因组为模板,PCR扩增得到HSV-2LAT ORF3DAN片段。将ORF3片段连接到pEGFP-C2质粒上,用卡那霉毒筛选阳性克隆,经菌落PCR,双酶切及测序验证pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体构建成功。用Xfect转染试剂将重组载体转染入Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在Vero细胞中的表达。双酶切及测序结果验证ORF3片段正确插入pEGFP-C2质粒,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中的表达。成功构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,该重组质粒能在Vero细胞中成功表达。

重组人睫状神经营养因子肽图分析

杨光;李祎;项光亚;

2010, 0(11): 162-165.

摘要 ( 113 )

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建立重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的肽图分析方法,用于rh-CNTF的质量控制。胰蛋白酶对rhCNTF进行酶切后,利用RP-HPLC方法对酶切液进行分析,以获得胰蛋白酶切最佳条件及色谱条件,并对连续3批样品进行分析。rhCNTF的胰蛋白酶最佳酶切条件为37℃酶切24h,以A(0.1%TFA-H2O)、B(0.1%TFA-CH3CN)为流动相,采用梯度洗脱的方法对酶切液进行分析,结果连续3批rhCNTF制备产品的肽图完全一致,且其检出峰数目与理论推测值相符。3批产品肽图的一致性为rhCNTF产品的结构同一性提供了有利证据,同时,建立了rhCNTF产品质量控制的一项指标。

利用TAIL-PCR克隆耐盐基因及其分析

张伟涛;程国军;周俊初;

2010, 0(11): 166-170.

摘要 ( 151 )

PDF (499KB) ( 409 )

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通过大量筛选得到一株高耐盐的豇豆根瘤菌WME7,最高可耐15g/L NaCl,利用Tn5-sacB转座子对该菌株进行随机插入突变,从突变子中筛选获得30个共生缺陷型突变株。利用TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)方法克隆了突变株Tn5-sacB侧翼序列,通过BLAST发现有1个突变株的插入失活基因与鼠伤寒沙门氏菌抗银的结合蛋白SilE有94%同源性,表明有关Na+离子的抗性基因可能与Ag+离子的抗性基因有某种关系。该基因在其它菌中也能抗其它金属离子(铜、锌、钴、铬)。

晚疫病菌基因组SSR扩增产物两种检测方法的比较与改进

李本金;黄灿强;陈昌盛;兰成忠;陈庆河;翁启勇;

2010, 0(11): 171-176.

摘要 ( 119 )

PDF (478KB) ( 421 )

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以32份马铃薯或番茄晚疫病菌基因组DNA为模板,分析了琼脂糖凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对10对SSR引物多态性检测的影响,同时比较了聚丙烯酰胺凝胶电泳两种银染法(常规银染法和快速银染法)的差异。结果显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳分离效果好,具有更高的多态性检出率,其中快速银染法与常规银染法的检出结果相同,但常规银染步骤繁琐,整个过程要用1-2h,而快速银染只需约15min,且染色背景较浅,条带清晰。聚类分析显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法可将供试晚疫病菌株分布于更多的聚类组,显示出更高的遗传变异度。可见,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法结合SSR分子标记技术,可有效地用于马铃薯或番茄晚疫病菌群体遗传多样性分析。

大肠杆菌ptsHI-crr基因的敲除及其对苯丙氨酸生产的影响

张怀;于立涛;

2010, 0(11): 177-181.

摘要 ( 180 )

PDF (336KB) ( 400 )

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L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)是重要的食品和医药中间体。利用大肠杆菌发酵葡萄糖生产苯丙氨酸时,对葡萄糖转运起重要作用的磷酸烯醇丙酮酸糖磷酸转移酶系统(PTS)对苯丙氨酸产量有很大影响。由ptsHI-crr操纵子编码的磷酸组氨酸载体蛋白(HPr),酶I(EI)和酶IIAGlc是PTS的必要组分,通过敲除ptsHI-crr得到PTS缺陷菌株,可以使葡萄糖代谢更多地流向苯丙氨酸生物合成。采用Red同源重组技术将大肠杆菌染色体上的ptsHI-crr基因替换为四环素抗性基因,得到PTS缺陷菌株。该菌株在以葡萄糖为惟一碳源的培养基中摇瓶培养,菌密度为对照菌株的2.7倍,苯丙氨酸产量为对照菌株的6.3倍。

单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlB/actA双缺失突变株的构建

王莉;冯飞飞;张强;冯莹颖;邓灵福;张晓莉;罗勤;

2010, 0(11): 182-185.

摘要 ( 200 )

PDF (2141KB) ( 436 )

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单核细胞增生李斯特菌inlB和actA毒力基因的编码产物InlB和ActA是与其致病性相关的重要毒力因子,与该菌在细胞间扩散、传播有着直接的关系,其中肌动蛋白聚集因子ActA是细菌由细胞浆扩散至相邻细胞所必须的因子,而内化素InlB在对肝细胞的侵袭过程中起着重要作用。本研究中利用同源重组技术在inlB缺失菌株基础上成功构建了毒力基因inlB和actA双缺失的突变株,获得减毒突变株,为构建预防人类和动物疾病的疫苗载体奠定了基础。

Streptomyces lincolnensis新遗传操作方法的建立以及lmbQ基因功能研究

王增亮;赵群飞;高淑红;陈长华;刘文;

2010, 0(11): 186-190.

摘要 ( 845 )

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以载体pSET152和pKC1139为出发质粒,通过供体菌大肠杆菌ET12567和S17-1转入林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis),建立和优化了接合转移体系。林可霉素生物合成基因簇中,lmbQ基因可能编码一个调控蛋白,构建了S.lin-colnensislmbQ基因中断载体,通过接合转移导入S.lincolnensis野生型菌株,筛选得到基因双交换突变株,通过PCR以及测序验证基因型正确,该突变株即为lmbQ同框敲除突变株。摇瓶发酵结果表明,lmbQ基因是一个正调控基因。

海洋真菌灰绿曲霉蓝光感应基因Agwc1的克隆、鉴定与序列分析

方喆;周祥山;张健;张盈;张元兴;

2010, 0(11): 191-198.

摘要 ( 130 )

PDF (2221KB) ( 508 )

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蓝光感应系统在不同的光感应过程中都起到十分关键的作用,这些生理过程包括无性/有性发育,昼夜节律钟,次级代谢产物的生成等。为了对蓝光感应系统作进一步的研究,通过简并引物PCR和基因组走读方法得到了海洋真菌灰绿曲霉蓝光调节受体基因Agwc1,并通过多种生物信息学方法对其核苷酸和蛋白质序列进行了分析。Agwc1基因全长2724bp,包含3个内含子,编码852个氨基酸,蛋白质分子量是96kD,等电点为8.17,很有可能定位于细胞核中,通过序列比对与系统进化树分析,发现AgWC1蛋白与其他物种中的WC-1蛋白有很高的同源性。在本研究中成功鉴定了Agwc1基因,这是国际上首次在海洋丝状真菌领域鉴定光感应基因,并且AgWC1很有可能在灰绿曲霉蓝光感应系统中发挥重要功能。

代谢途径抑制剂及前体对海洋红树林内生真菌No.1403产抗肿瘤化合物1403C的影响

余超;周祥山;康丽;邹武;张元兴;

2010, 0(11): 199-205.

摘要 ( 109 )

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采用酶抑制剂法和前体喂养试验法初步研究了结构新颖的活性蒽醌化合物1403C的合成途径。研究表明,甲羟戊酸合成途径的关键酶抑制剂邻氨基苯甲酸、柠檬酸三钠对单位菌体1403C产量影响比较小;莽草酸途径关键酶氨基苯甲酸合成酶的抑制剂三甲胺在低浓度时(3、6mmol/L)对单位菌体1403C产量没有影响,而高浓度(12mmol/L)时由于较大程度改变发酵液pH而降低了单位菌体1403C产量;莽草酸途径中间产物莽草酸的添加对单位菌体1403C产量没有明显的影响;添加聚酮合成途径聚酮合酶的专一性抑制剂碘乙酰胺对1403C的合成产生强烈的抑制,抑制程度达94.2%;添加丙二酸对1403C的合成有较大的促进作用,单位菌体1403C产量最大增加了59.2%。乙酸钠和丙二酸混合比例为1∶4时对单位菌体1403C产量具有最大促进作用,最大提高量为102.7%。由此推断Halorosellinia sp.(No.1403)可能通过聚酮途径合成1403C。

嗜热菌Lon蛋白酶的逆境应答作用及其功能分析

葛科学;刘晓晴;

2010, 0(11): 206-211.

摘要 ( 181 )

PDF (384KB) ( 548 )

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Lon蛋白水解酶广泛存在于微生物以及动植物体内。它除了水解蛋白质的功能以外,还参与到细胞生理过程的调节当中。以嗜热栖热菌HB8(Thermus thermophilus HB8)的Lon蛋白酶(TTLon)及其两个片段TTlonL和TTlonS为研究对象,采用RT-PCR技术证明了TTLon在嗜热栖热菌HB8的逆境应答过程中发挥着重要作用,它的蛋白酶活性是受到Mg2+影响的,失去C端的TTlonL和TTlonS没有了蛋白水解酶活性和分子伴侣活性,但是它们仍然具有一定的ATP结合能力。

靶向钠钾ATP酶α1亚单位shRNA质粒表达载体的构建与筛选

周蔚;徐忠伟;王凤梅;陈小义;呼文亮;徐瑞成;

2010, 0(11): 212-218.

摘要 ( 145 )

PDF (2464KB) ( 467 )

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构建编码人钠钾ATP酶(Na+/K+-ATPase)α1mRNA的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体shRNA-ATP1A1(ATP1A11、ATP1A12和ATP1A13),并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。设计、合成靶向ATP1A1的3对DNA序列,分别插入Pgenesil-3中构建3个shRNA表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞荧光检测Na+/K+-ATPaseα1表达变化;MTT法和流式细胞术检测沉默效果最明显的ATP1A13对HepG2增殖活性和细胞周期的影响。构建的质粒表达载体酶切鉴定均可扩增出预期条带,测序符合设计要求,构建成功。ATP1A12和ATP1A13对所转染的HepG2细胞中Na+/K+-ATPaseα1mR-NA和蛋白质表达均有抑制作用,其中ATP1A13最为明显(P<0.05)。ATP1A13可抑制HepG2细胞的增殖;转染48和60h,HepG2细胞细胞周期呈现S期阻滞;实时定量PCR检测ATP1A13敲低HepG2Na+/K+-ATPaseα1mRNA呈时间依赖性,72h后表达降低约90%。试验成功构建靶向钠钾ATP酶α1亚单位的shRNA质粒表达载体,其中shRNA-ATP1A13可显着抑制HepG2细胞增殖引起细胞周期S期阻滞。

大肠杆菌甘露糖异构酶(MI)基因克隆及功能研究

高小倩;张春晓;陈晓波;王丽丽;仪宏;

2010, 0(11): 219-222.

摘要 ( 154 )

PDF (4338KB) ( 549 )

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甘露糖异构酶(EC5.3.1.7,Mannose isomerase,简称MI)能够催化果糖和甘露糖之间的异构转化。甘露糖加氢催化形成甘露醇,因此甘露糖异构酶的研究为工业生产甘露糖和甘露醇提供了新的可能途径。本研究以Escherichia coliJM109基因组DNA为模板,PCR扩增mi基因。结果表明,所克隆的mi基因与E.colistr.K-12substr.MG1655的MI基因序列一致性为99.9%,氨基酸序列一致性为99%。该基因能够在E.coliBL21(DE3)中进行高效诱导表达,诱导出51.4kD的特异性融合蛋白。酶学研究表明,该酶最适反应温度为37℃,最适pH为7.5,甘露糖为最佳反应底物,反应平衡时果糖与甘露糖的比值约为2.7。

毕赤酵母碳源阻遏因子编码基因PpMIG1和PpMIG2的克隆与序列分析

张平;周祥山;张元兴;

2010, 0(11): 223-229.

摘要 ( 127 )

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通过MIG基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)中成功克隆了两个MIG同源基因的核心片段,同时利用Genome Walking的方法获得了基因的全长及其侧翼序列,并分别命名为PpMIG1和PpMIG2。序列分析显示,PpMIG1基因全长1335bp,编码444个氨基酸;PpMIG2基因全长1365bp,编码454个氨基酸。这个两个基因所编码的蛋白质均与酿酒酵母碳源阻遏因子ScMig1同源,在氨基末端具有两个典型的C2H2锌指结构域,该结构域能够与受葡萄糖阻遏的许多基因的启动子相结合。PpMig阻遏因子的获得为毕赤酵母碳源阻遏机制的研究奠定了基础。

酵母Bir1p同源物Survivin对毕赤酵母的分子重组与生长影响

刘琨;陈海龙;马兴元;康燕燕;许玉馨;

2010, 0(11): 230-233.

摘要 ( 115 )

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Bir1p是酵母凋亡途径中抑制细胞凋亡的重要蛋白,Survivin是Bir1p的人源同源物,Survivin第34位氨基酸T向A的突变能使其功能逆转。将Survivin及其突变体Survivin(T34A)的基因分别构建到组成型穿梭表达质粒pGAPZA中,整合入毕赤酵母的基因组,分析对酵母细胞凋亡的影响。酵母生长曲线、MTT及流式细胞仪测定数据显示,Survivin和其突变体基因在酵母中的表达分别抑制和促进了酵母凋亡。多样的工艺对工业用酵母的凋亡提出了不同的要求,本研究为工程酵母的理性改造提供了理论依据。

一株产虾青素酵母菌株的鉴定

马爱瑛;张琇;刘晓飞;

2010, 0(11): 234-237.

摘要 ( 109 )

PDF (300KB) ( 385 )

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从市售海水鱼内脏中分离得到一株产虾青素的酵母,编号为NZ-01。采用传统形态学鉴定方法及rDNA序列分析法分别对从NZ-01进行鉴定。形态学鉴定结果表明该菌为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),分别用特异性引物对rDNA序列的18S rDNA D1/D2区、26S rDNA D1/D2区和ITS区进行扩增,PCR产物测序,将测序结果登录GenBank进行BLAST分析,结果均与形态学观察结果一致,NZ-01为胶红酵母。

混合菌发酵1,3-丙二醇的初步研究

郭铃;杜丽琴;韦宇拓;孙靓;黄日波;

2010, 0(11): 238-241.

摘要 ( 107 )

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将表达酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因(GPD1)和3-磷酸甘油酯酶基因(HOR2)的质粒PSE-gpd1-hor2转化到甘油激酶基因(glpK)和甘油脱氢酶基因(gldA)双缺失的大肠杆菌JM109C中,构建产甘油的工程菌JM109C/PSE-gpd1-hor2。接种JM109C/pSE-gpd1-hor2和Klebsiella在含1%葡萄糖的摇瓶发酵培养基中37℃发酵56h,1,3-丙二醇的最高产量为1.28g/L,葡萄糖摩尔转化率为37.5%;在30L发酵罐中发酵68h,1,3-丙二醇的最高产量为24.09g/L,葡萄糖摩尔转化率为38.0%;5g/L的乙酸、乳酸,10g/L的乙醇分别使1,3-丙二醇的产量降低了91.41%、54.68%和51.56%。

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