生物技术通报

孙国庆;金芜军;宛煜嵩;林敏;

2010, 0(12): 1-6.

摘要 ( 147 )

PDF (231KB) ( 1066 )

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水稻在我国粮食生产和消费中占有重要地位,也是世界上最重要的粮食作物之一。水稻转基因研究已成为当前国内外植物分子生物学和作物育种研究的热点。目前我国转基因水稻研究处于国际领先水平,有望成为转基因抗虫棉之后又一个进入产业化的转基因粮食作物,这可能将在确保我国粮食安全中发挥重要贡献。从国内外转基因水稻研发概况、我国Bt抗虫水稻生物安全评价两方面综述了我国转基因水稻产业化的前景,并在此基础上对产业化提出相关建议与对策。

MicroRNA研究进展

赵奎;庞全海;

2010, 0(12): 7-11.

摘要 ( 248 )

PDF (416KB) ( 811 )

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MicroRNA(miRNA)是生物体内源长度约为21-25个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶mRNA互补配对而在转录水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的翻译抑制或降解。miRNA虽然微小,但它在真核生物发育和基因表达中通过与靶mRNA形成完全或不完全互补配对从而扮演着重要角色。它们参与动物体发育、细胞增殖与死亡、细胞分化等各种过程。综述了miRNA的发现、生物合成、特征与功能、靶基因的预测等方面的研究进展。

小麦胚芽蛋白的研究进展

刘婉;张婷;张艳贞;晏月明;

2010, 0(12): 12-15.

摘要 ( 156 )

PDF (217KB) ( 645 )

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小麦胚芽是面粉加工过程中的副产物,小麦胚芽蛋白具有良好的氮溶解度、起泡性、乳化性以及保水性、氨基酸比例平衡,不仅是饮料、食品以及医疗产品良好的添加剂,而且具有较强的产品开发潜力。对小麦胚芽蛋白的组成成分、理化性质、提取以及麦胚蛋白产品开发利用这四个方面进行简要的介绍,旨在为小麦胚芽蛋白的全面开发利用提供依据。

植物挥发物代谢工程在改良香气品质和植物防御中的应用

马波;

2010, 0(12): 16-24.

摘要 ( 120 )

PDF (1682KB) ( 1110 )

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挥发物次生代谢在植物繁殖、植物防御和改良食物品质方面发挥着重要作用。近年来,随着参与挥发物生物合成的基因和酶类的鉴定以及代谢途径和调控机理等研究的不断发展和深入,挥发物代谢工程已经具备较高的可行性。应用代谢工程改良花、果实的香气品质以及提高植物防御能力的研究成效显着。主要介绍了这些方面的最新进展,同时也讨论了植物挥发物代谢工程应用存在的问题和挑战以及研究思路。

阿维拉霉素生物合成与代谢调控研究进展

刘芳;李晓荣;邹祥;

2010, 0(12): 25-30.

摘要 ( 213 )

PDF (5848KB) ( 610 )

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阿维拉霉素是发酵法来源的新型兽用的消化促进剂和代谢调节剂,具有较高的生物安全性,通过改善动物肠道内细菌群的生态结构促进动物生长。对阿维拉霉素的生物合成和代谢调控进行了综述,同时结合系统生物技术观点,为阿维拉霉素菌种基因工程改造提供参考。

凋亡抑制基因Survivin与肿瘤的关系

王会;赵瑞杰;王广彬;陈献伟;关伟军;马月辉;

2010, 0(12): 31-36.

摘要 ( 89 )

PDF (224KB) ( 290 )

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Survivin是一种新的凋亡抑制蛋白,其具有抗凋亡的特征性结构。Survivin在肿瘤的发生发展中起重要作用,与肿瘤预后密切相关,有望成为一种广谱的肿瘤诊断标记物,并可能是抗肿瘤治疗的重要标靶。

卵黄抗体在兽医寄生虫学中的应用

李文超;顾有方;陈会良;

2010, 0(12): 37-40.

摘要 ( 114 )

相关文章 | 计量指标

卵黄抗体是鸡产生的主要抗体,鸡被免疫后,IgY被持续地被合成、分泌到血液中,并被选择性地转移、富集到蛋黄中。母鸡产生的IgY可为它们的后代抵抗常见的禽类病原体提供有效的体液免疫保护。就有关寄生虫卵黄抗体的研制情况及其在兽医寄生虫病诊断、治疗等的应用情况做一综述。

巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优化策略

樊英;李天保;杨秀生;王建华;滕达;

2010, 0(12): 41-45.

摘要 ( 113 )

PDF (241KB) ( 695 )

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巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统已成为外源蛋白最理想的表达系统之一,诸多的优点体现了其广泛的研究价值和应用价值。综述了P.pastoris表达外源蛋白时在载体选择与利用、外源基因改造、翻译后修饰及表达稳定性等方面的优化策略,以加速其应用。

副猪嗜血杆菌毒力因子研究进展

冯小明;储岳峰;贺英;高鹏程;赵萍;郭晗;樊祜卿;逯忠新;

2010, 0(12): 46-49.

摘要 ( 175 )

PDF (193KB) ( 468 )

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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪上呼吸道的一种常在菌,但却因其被证明是以多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的Glasser病的病原体而广受关注。介绍了巴氏杆菌科一些常见的毒力相关蛋白、神经氨酸酶、血清型以及毒力相关的三聚自身转运载体与HPS毒力之间的关系,另外就近年来对HPS毒力因子方面的一些研究报道和成果作一综述。

细菌对胁迫应答因子RpoS的调控

吴晨紫;杨志伟;

2010, 0(12): 50-55.

摘要 ( 135 )

PDF (4470KB) ( 754 )

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RpoS是细菌一般胁迫反应的主要调控因子,可以诱导RpoS表达的胁迫条件包括碳源和氮源饥饿、渗透压升高、低pH、温度升高等。在细菌体内,大量环境和细胞内信号参与RpoS的调控。这些调控可以发生在转录和翻译水平、降解过程以及活性调节等方面,形成一个复杂的调控网络。RpoS调控机制的阐明对于了解胁迫条件下细菌响应机制具有重要意义。

中国鹿类动物遗传相关试验分析研究简述

卢文林;李秀峰;

2010, 0(12): 56-63.

摘要 ( 81 )

PDF (276KB) ( 373 )

相关文章 | 计量指标

介绍了国内学者对中国鹿类动物与遗传相关的试验研究的基本情况,涉及血液蛋白等分析、性状相关分析、染色体和线粒体相关分析等方面,对各项内容的总体及各项所采用的技术和方法、部分研究成果进行概述,并对其发展趋势进行展望。

分子标记技术在大黄属植物种质资源研究中的应用

胡延萍;王莉;李毅;

2010, 0(12): 64-68.

摘要 ( 98 )

PDF (196KB) ( 252 )

相关文章 | 计量指标

介绍了几种常用分子标记RAPD、AFLP、SSR、ISSR和SRAP的原理和特点,着重论述了分子标记在大黄属植物遗传多样性、亲缘关系和种质鉴定等方面的应用,分析了大黄种质资源研究中存在的问题和提出了今后研究工作的重点。

AFLP分子标记技术在中药研究中的应用进展

肖硕;

2010, 0(12): 69-72.

摘要 ( 94 )

PDF (182KB) ( 498 )

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AFLP(扩增片段长度多态性)分子标记技术是一种结合了RFLP和PCR技术的新型分子标记技术,在药物研究领域的应用日趋广泛。简述了AFLP分子标记技术的基本原理、技术特点与优势,重点阐明其在中药研究中的应用进展,并对其前景进行了讨论与展望。

动物转基因研究中的技术方法

王凌云;成功;周欢敏;

2010, 0(12): 73-77.

摘要 ( 216 )

PDF (199KB) ( 788 )

相关文章 | 计量指标

转基因动物研究的深入为生物学的发展起到了巨大的推动作用。转基因新技术的不断出现,推动了转基因动物的发展。介绍了几种哺乳动物转基因研究中常见的方法,包括原核显微注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法、生殖细胞介导法、基因打靶以及新的比较有应用前景的方法,如PiggyBac、iPS,锌指核酸酶法,并且分别对每种方法的优缺点进行了总结归纳。

微卫星DNA标记在蚌科生物多样性保护中的应用

欧阳解秀;吴小平;欧阳珊;李绍波;

2010, 0(12): 78-83.

摘要 ( 112 )

PDF (222KB) ( 417 )

相关文章 | 计量指标

蚌科动物是世界上最濒危的动物类群之一,对该类动物的生物多样性保护是非常有意义的。微卫星DNA标记的发展和利用将有利于蚌科动物的遗传多样性保护。从微卫星标记的特点、研究方法、研究结果等方面综述了微卫星DNA标记在蚌科动物中的研究进展,并展望了中国蚌科微卫星DNA标记的研究方向。

RNAi技术研究新进展

周红建;黄松;王雄伟;

2010, 0(12): 84-87.

摘要 ( 99 )

PDF (454KB) ( 362 )

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RNA干扰(RNAi)是指双链RNA在细胞内特异性地诱导同源互补的mRNA降解,从而阻断相应基因表达的现象。RNAi在生物界中广泛存在,其发生过程主要分为3个阶段:起始阶段、扩增阶段和效应阶段。它在维持基因组稳定、基因表达调控等方面发挥重要生物学作用。随着人们对RNAi研究的不断深入,目前RNA干扰技术作为基因沉默的一个工具,已被广泛用于基因功能研究、疾病的靶点治疗和寻找新的药物靶标等方面的研究。

变性梯度凝胶电泳在微生物生态学中的应用

李德斌;杨洪一;卢磊;

2010, 0(12): 88-92.

摘要 ( 137 )

PDF (208KB) ( 420 )

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变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)是目前在微生物生态学上应用比较广泛的技术之一,具有简便、准确可靠和重复性好等优点。对DGGE的原理、流程、各项技术要点和在微生物生态学上的应用等方面进行了详细地论述,同时归纳和总结了DGGE的优缺点和局限性。

改进酶稳定性的定向进化技术

程峰;董俐住;柳志强;郑裕国;

2010, 0(12): 93-99.

摘要 ( 144 )

PDF (725KB) ( 689 )

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酶作为一种生物催化剂,以其独特的优良特性,在"绿色化学"和"清洁生产"中得到了广泛的应用。随着酶定向进化技术的建立和发展,通过定向进化改进酶稳定性的研究越来越多。详细综述了各种定向进化方法的特点及在提高酶稳定性方面的应用,并从结构和功能的角度进一步解释了相关机理。

非寄主抗病基因Rxo1介导的水稻对Xanthomonas oryzae pv.oryzicola的抗病反应

王磊;许美容;高晓清;朱苓华;周永力;黎志康;

2010, 0(12): 100-102.

摘要 ( 91 )

PDF (500KB) ( 351 )

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通过表型鉴定、反转录PCR和实时定量PCR方法,利用转基因和非转基因水稻植株,研究由Rxol基因介导的,水稻对细菌性条斑病菌的抗性反应。结果观察到3个涉及过敏性反应的基因由Rxol基因诱导表达,并对其进行了分析。这3个基因参与编码病程相关蛋白,在转基因水稻植株中呈上调表达,表明水杨酸信号转导途径在抗性反应中发挥重要的作用。

玉米直链淀粉生物合成多基因转化载体构建

郭美娜;孙丽芳;杨光;邹宏达;苏胜忠;吴颖;原亚萍;

2010, 0(12): 103-109.

摘要 ( 108 )

PDF (1084KB) ( 298 )

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淀粉分支酶基因sbe是影响玉米直链淀粉含量的主要因素,淀粉分支酶分为3种即sbeI、sbeIIa和sbeIIb,其中sbeIIb对直链淀粉含量影响效应最大,抑制玉米淀粉分支酶sbeIIb基因的表达可减少支链淀粉的含量,从而达到提高直链淀粉的目的;ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是直链淀粉合成的关键酶,通过提高AGP表达量同样可提高玉米直链淀粉含量。以此为目的分别克隆了sbeIIb一段375bp高度保守区,玉米SBE基因一段175bp内含子,AGP完整开放阅读框,大麦胚乳特异启动子和ADPG基因终止子。构建了sbeIIb基因正、反义的hpRNA发夹结构,将该发夹结构与上述基因分别连接到pCAM-BIA3301上;构建得到包含sbeIIb基因干扰结构与AGP基因过表达的pCAMB-RSA多基因胚乳特异表达载体。为此,pCAMB-RSA载体的成功构建将为高直链淀粉玉米的培育奠定基础。

大豆BAC克隆基因注释

王囡囡;

2010, 0(12): 110-112.

摘要 ( 175 )

PDF (396KB) ( 491 )

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根据来源于大豆BAC克隆库中的基因组序列,与其比对的基因或蛋白质序列可以从一些数据库中搜索,如GenBank序列数据库、EMBL数据库、PDB数据库等,然后利用NCBI的Entrz程序在数据库中搜索大豆基因类似物,获取其登录号及核苷酸序列,以及这些基因编码的氨基酸序列,通过GENSCAN等软件分析,得出的是与拟南芥等物种序列比对的结果,根据GENSCAN的预测结果,可以初步得知序列长度、基因数目及具有编码某种功能蛋白的基因存在的可能性,进而对预测出的氨基酸或核苷酸序列利用数据库NCBI中的BLAST进行序列的相似性搜索及比对分析,寻找其保守区域。最后对其功能基因进行注释。

特异性启动子调控甜瓜ACC氧化酶反义基因载体构建及对烟草的转化

陈佰鸿;毛娟;赵鑫;

2010, 0(12): 113-117.

摘要 ( 98 )

PDF (397KB) ( 378 )

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以甜瓜ACC氧化酶反义基因抑制水果成熟过程中内源乙烯的合成为基础,建立甜瓜特异性启动子调控下ACC氧化酶反义基因表达载体。以pCB-ACO1载体为基础,进行平末端连接加入特异性启动子pCAM-ACO1-promoter,对转基因甜瓜表达载体的构建进行特异性启动子的研究,通过叶盘法转化的烟草经过PCR检测已转入含有特异性启动子promoter调控下ACC氧化酶反义基因表达载体,为下一阶段用该反义基因载体转化甜瓜栽培品种奠定基础。

花椰菜温敏型雄性不育系的RAPD标记

胡立敏;陶兴林;侯栋;朱惠霞;张东琴;

2010, 0(12): 118-121.

摘要 ( 84 )

PDF (1186KB) ( 330 )

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选取温敏花椰菜不育系GS-19与GS-31杂交组合的F2高可育和高不育单株构建基因池,利用100对随机引物对其进行RAPD标记。同时,采用正交设计对其反应体系及扩增条件进行优化。试验结果表明,在25μL反应体系中含dNTPs0.625mmol/L,引物0.5μmol/L,DNA模板60ng,Taq酶1.5U,超纯水14.9μL;反应条件为94℃预变性4min,然后进行94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,35个循环后,再72℃延伸7min,花椰菜RAPD扩增效果较好。P21-1800为花椰菜温敏雄性不育基因的连锁标记。

青花菜SRAP-PCR体系优化与品种分子鉴定

荆赞革;唐征;张小玲;罗天宽;刘庆;朱世杨;楼珏;叶珍;陈海英;

2010, 0(12): 122-125.

摘要 ( 90 )

PDF (654KB) ( 290 )

相关文章 | 计量指标

本试验对青花菜基因组DNA的SRAP-PCR体系中主要影响因子Mg2+、dNTPs和引物浓度进行了优化。结果表明,反应体系中适宜浓度为Mg2+1.5-3.0mmol/L,dNTPs0.4mmol/L,引物0.25-0.50μmol/L(模板DNA约20ng,16μL反应体系)。运用优化的反应体系,对20个青花菜品种进行分子鉴定,从10个引物组合中筛选到7个多态性引物组合,获得60个多态性位点,平均每个引物组合在供试品种中产生8.6个多态性位点,鉴别品种数4.3个。双引物组合me1/em6与me2/em9可以区分所有供试材料。

木榄CaM基因的克隆及序列分析

庞俊峰;于卓;张占路;房永雨;唐益雄;吴燕民;

2010, 0(12): 126-131.

摘要 ( 82 )

PDF (1590KB) ( 416 )

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以深圳红树自然保护区的木榄为材料,根据GenBank上已公布的钙调蛋白氨基酸保守区的碱基序列设计引物,RT-PCR扩增木榄CaM序列,获得cDNA全长735bp,命名为BgCaM(GenBank登录号:GU722140)。生物信息学分析表明,BgCaM与拟南芥、花生、大麦、榉木及甘薯等植物钙调蛋白氨基酸保守区具有较高同源性。BgCaM基因完整开放阅读框为450bp,编码149个氨基酸,预测蛋白等电点为4.11,分子量为16.8kD。分析基因序列和相应酶切位点,将扩增获得的BgCaM基因完整开放阅读框与中间表达载体相应酶切产物进行连接,构建植物表达载体pC13rd29A-BgCaM,为BgCaM功能分析和进一步利用奠定了基础,为植物转基因研究与应用又增添了一个新的基因源。

日本结缕草总RNA提取和mRNA分离方法的优化

代小梅;程晓霞;曾会明;韩烈保;

2010, 0(12): 132-136.

摘要 ( 101 )

PDF (347KB) ( 516 )

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介绍了分别以日本结缕草根部、叶部、匍匐茎等为材料的总RNA提取的改良步骤,质量和浓度检测及其注意事项,并采用Promega公司的Poly ATract Systems Ⅲ(Z5300)试剂盒进行mRNA分离,尽管这一方法成熟可行,但仍存在洗脱体积较大,常需先沉淀浓缩后才能进行后续试验(如cDNA合成),在制备少量mRNA时回收率较低等问题。据此,对mRNA分离方法作了改良,介绍了mRNA分离的优化步骤,通过增加体系形成了一种更适合于日本结缕草mRNA分离的方法,从而为日本结缕草的分子生物学研究提供基础资料。结果证明所提取的总RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到日本结缕草cD-NA文库的构建。

三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响

韩健;李文娟;施志仪;郝莹莹;靳雨丽;

2010, 0(12): 137-141.

摘要 ( 103 )

PDF (1153KB) ( 402 )

相关文章 | 计量指标

为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3′-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3′端序列进行克隆,得到850bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%。试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60kD的Nacrein蛋白。此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要早。研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响。本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义。

虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)Vasa基因的克隆与表达

杨晓飞;常亚青;姜玉声;丁君;

2010, 0(12): 142-147.

摘要 ( 127 )

相关文章 | 计量指标

Vasa基因是DEAD-box家族成员中的一种ATP依赖的RNA解旋酶编码基因,在生殖系分化过程中发挥重要作用。采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从虾夷马粪海胆精巢中克隆得到Vasa基因3′端cDNA序列。该3′末端cDNA长1057bp,与太平洋牡蛎、紫球海胆、非洲爪蟾、小鼠及虹鳟经同源进行比对,其中与紫球海胆的同源率最高达到95%,并确定其为DEAD-box家族的Vasa亚家族成员。利用实时定量RT-PCR检测Vasa mRNA在虾夷马粪海胆组织和胚胎发育期的表达情况,研究结果表明Vasa基因在生殖腺表达量最高,雌、雄个体生殖腺中转录水平上的表达差异明显,雄性高于雌性,差异显着(P<0.05),在肠、体腔液、肌肉、围口膜、管足中表达量低,其中体腔液表达量最低。胚胎发育期检测发现Vasa基因在16细胞期时表达量最高,16细胞期后表达量呈下降趋势,囊胚期表达量最低。试验结果为虾夷马粪海胆生殖系统起源、分化研究提供科学依据。对于虾夷马粪海胆生殖系分化途径来讲,Vasa可作为一种有利的研究工具,追溯其生殖系的起源和分化。

厚壳贻贝足丝盘黏附蛋白mcofp-3的重组真核表达

李楠楠;王智平;鲁涛;廖智;

2010, 0(12): 148-153.

摘要 ( 121 )

PDF (2135KB) ( 408 )

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厚壳贻贝(Mytilus coruscus)黏附蛋白分子mcofp-3(M.coruscusfoot protein-3)主要分布于贻贝足丝盘,贻贝在水环境下的黏附过程中起到关键作用,但因其难溶于水且在贻贝足丝盘中含量极低,故妨碍了对其进行深入研究。为建立厚壳贻贝足丝蛋白mcofp-3的真核表达体系,并获得足够的mcofp-3黏附蛋白进行后续研究,采用酵母表达体系对mcofp-3进行了重组表达。通过PCR方法克隆厚壳贻贝的mcofp-3基因,构建mcofp-3的酵母真核表达载体pVT102U/α/mcofp-3,鉴定结果表明,重组表达质粒pVT102U/α/mcofp-3由真核载体pVT102U/α和mcofp-3的成熟肽DNA片段组成,插入的mcofp-3成熟肽DNA片段与预期序列完全一致;采用LiAC转化法将重组表达质粒转化到S78酿酒酵母中,经过RT-PCR分析以及1.0%的琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明,重组的mcofp-3得到了成功的转录;发酵菌液经阳离子交换柱及高效液相色谱分离,以及Tris-Tricine-SDS-PAGE检测,结果表明,重组的厚壳贻贝黏附蛋白分子mcofp-3得到了成功表达,表达产物分子量约为6kD,与预期分子量一致。

微卫星标记在穿山甲个体识别中的应用

高赛飞;于冬梅;王莹;彭建军;

2010, 0(12): 154-157.

摘要 ( 119 )

PDF (3457KB) ( 590 )

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在对非法走私和捕杀穿山甲的犯罪案件研究中,所涉及的穿山甲个体数量是量刑的重要依据,然而对于一些穿山甲鳞片、肉块及其深加工产品,从形态学上却无法进行个体识别。微卫星标记已证实是一种用于动物个体识别的可靠的遗传标记。本研究从已发表的34对穿山甲微卫星引物中筛选出6对多态性较高的引物,用于穿山甲鳞片的个体识别。结果表明:6个位点的观测值杂合度(Ho)为0.653-0.234;期望值杂合度(He)为0.926-0.861;MJA03的PIC最高(0.918),MJA13的PIC最低(0.852),平均PIC为0.884。单个座位的个体识别能力在0.826-0.956之间,累积个体识别能力为99.9999%,表明采用的6个位点适用于国内穿山甲走私案中的个体识别。

表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备

王彦凤;梁燕;王玮;史偈君;金永;王晓晶;郭旭东;王潇;王志钢;刘东军;

2010, 0(12): 158-162.

摘要 ( 88 )

PDF (8198KB) ( 262 )

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旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4,脂质体介导转染绵羊胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。RT-PCR检测Tβ4基因在宿主细胞中的转录。测序结果显示,构建的表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4序列中,Tβ4基因正确连接在CMV启动子下游,顺序连接IRES2序列和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为15%,经G418筛选得到转基因细胞克隆并高效表达红色荧光蛋白。RT-PCR检测显示外源Tβ4基因在绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建具有红色荧光蛋白和新霉素抗性双选择标记的胸腺素β4基因真核表达载体并稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选得到的超表达胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞系为下一步通过核移植和克隆技术获得转基因绵羊提供了条件。

甘肃现代肉羊新品种群羊GH基因外显子1多态性与体重关联分析

张浩;朱爱文;马友记;李发弟;陈国宏;

2010, 0(12): 163-166.

摘要 ( 114 )

PDF (6372KB) ( 348 )

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根据GenBank发表的绵羊生长激素(GH)基因外显子1的序列设计一对引物,采用PCR-SSCP技术分析GH基因外显子1在甘肃现代肉羊新品种选育群羊中的单核苷酸多态性,并与3月龄前的体重进行关联分析。结果表明,GH基因外显子1在新品种群羊中存在多态性,检测到两种基因型(AA、AB),其301bp处有一个T/A突变和305bp处有一个G/A突变,初生重、1月、2月、3月龄体重AA、AB型都无显着性差异(P>0.05),但3月龄AB型个体的体重相对于AA型偏高,由此初步推断GH基因可能是影响绵羊体重性状的主基因或与主基因相连锁,可用以对绵羊体重性状进行标记辅助选择。

狂犬疫苗单克隆抗体制备过程中细胞融合条件的探索

李云霞;司静;李煜;

2010, 0(12): 167-172.

摘要 ( 113 )

PDF (781KB) ( 474 )

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在充分了解SP2/0细胞系的生长、增殖和遗传特性后,以聚乙二醇(PEG)诱导动物细胞融合为契机,意在探索不同分子量、不同浓度的PEG作融合剂对诱导SP2/0细胞与脾细胞融合的最适条件,在HAT选择培养基下通过细胞融合率的变化进行比较。结果表明,分子量为4000,浓度为50%的PEG诱导的细胞融合率最高,为下一步制备狂犬病毒疫苗单克隆抗体奠定基础。

盐酸普鲁卡因对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响

高曰文;朱耀明;王艳林;朱晨宇;秦烨;胡汉卿;韩钰;

2010, 0(12): 173-177.

摘要 ( 107 )

PDF (3750KB) ( 447 )

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旨在探讨盐酸普鲁卡因(procaine,PCA)对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响。应用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测盐酸普鲁卡因处理前后HT-29细胞中Syk基因启动子的甲基化水平。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术观察HT-29细胞内Syk基因表达情况。MSP检测发现人结肠癌HT-29细胞中Syk基因存在甲基化,经盐酸普鲁卡因处理能够使Syk基因甲基化水平下降。RT-PCR和蛋白印迹分析结果显示,人结肠癌HT-29细胞经盐酸普鲁卡因处理后Syk基因表达上调。人结肠癌HT-29细胞中Syk基因启动子甲基化导致基因表达沉默,盐酸普鲁卡因能逆转Syk基因启动子区域CpG岛甲基化,使Syk基因活化并表达上调,提示盐酸普鲁卡因具有治疗结肠癌的潜在应用价值。

小鼠黑质双向凝胶电泳技术的优化

周长青;龙汉春;陈莹;万金城;马英;彭国光;

2010, 0(12): 178-181.

摘要 ( 96 )

PDF (866KB) ( 341 )

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为了优化小鼠黑质双向凝胶电泳(2-DE)技术,比较了不同样品预处理方法、不同胶条和不同上样量对凝胶电泳结果的影响。研究发现,两种样品预处理方法均可顺利升至最高等电聚焦(IEF)电压(10000V)。与Clean-upkit法相比,TAC/丙酮沉淀法预处理后蛋白得率较低,同时丢失了样品中的部分中、小分子蛋白质。pH3-10L胶条中蛋白点主要分布在中间区域;pH3-10NL胶条对中间区域的蛋白点的分离有所改善;pH4-7胶条中蛋白点分布均匀,横条纹较少。80μg上样量的图谱背景干净,但点数最少(411);180μg上样量的图谱蛋白点较多(883),且圆润、清晰,背景干净,分辨率高;300μg上样量的图谱蛋白点虽然最多(904),但背景较深,部分蛋白点融合,横条纹也较多。研究表明,对于小鼠黑质蛋白质,使用Clean-upkit法对样品进行预处理,选取pH4-7的胶条,采用180μg的上样量能获得背景干净、分辨率高的双向电泳图谱,为帕金森病的生物标志物和药物靶点的研究打下了基础。

MAR介导的逆转录病毒包装细胞系的建立

张靖;王天云;张俊河;杨保胜;张继红;

2010, 0(12): 182-185.

摘要 ( 97 )

PDF (4805KB) ( 372 )

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根据GenBank登录的序列号,使用primer5.0进行引物设计,提取人的外周血基因组DNA为模板,PCR方法扩增出人β-珠蛋白MAR序列,将MAR序列插入到逆转录病毒表达载体pLXSN,构建MAR序列介导的逆转录病毒载体。酶切和测序鉴定后,阳离子聚合物转染PA317细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,提取病毒液上清,测定逆转录病毒颗粒滴度,逆转录病毒颗粒的最高滴度为1.6×106CFU/mL,成功建立了MAR介导的逆转录病毒包装细胞系。

一种PCR酶切克隆目的DNA方法

王俐;张俊河;董卫华;王芳;王天云;

2010, 0(12): 186-188.

摘要 ( 125 )

PDF (231KB) ( 481 )

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以PCR扩增克隆survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆survivin启动子。通过软件在线分析扩增的survivin启动子酶切位点,将扩增与预期的片段大小一致的DNA片段进行酶切,再进行测序。结果表明,采取酶切鉴定PCR产物的方法,可以初步对PCR产物是否正确做出判断。

基于多重PCR的DNA Marker制备方法

张俊河;王俐;董卫华;王芳;王天云;

2010, 0(12): 189-190.

摘要 ( 159 )

PDF (276KB) ( 472 )

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报道了一种简便的制备分子量大小为100-1000bp DNA marker的方法,其原理是以一段特异的DNA片段为模板,设计PCR引物,采用多重PCR的方法一次扩增100-1000bp系列条带,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,即可得到条带清晰的DNA marker。

蔓地亚红豆杉3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶基因的克隆与序列分析

黄仕杰;程抒劼;郭心悦;郭丽琼;林俊芳;

2010, 0(12): 191-195.

摘要 ( 93 )

PDF (2518KB) ( 348 )

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3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶(DBTNBT)是催化紫杉醇生物合成最后一步反应所需要的酶,负责将带有不完全侧链的紫杉醇前体催化形成紫杉醇。利用蔓地亚红豆杉的总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆出DBTNBT基因的DNA序列和cDNA序列,测序结果显示长度分别为1465bp和1362bp,编码438个氨基酸的多肽。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT氨基酸序列的一致性为96%。DNA序列和cDNA序列比对发现该基因含有1个内含子。利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其蛋白序列进行了分析,为利用基因工程的方法生产紫杉醇或其前体物质提供了分子基础。

鼠李糖乳杆菌D-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

黄艳燕;黄靖华;卢福芝;孙靓;彭立新;周兴;黄日波;

2010, 0(12): 196-200.

摘要 ( 119 )

PDF (1071KB) ( 402 )

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利用PCR的方法从鼠李糖乳杆菌基因组DNA中扩增到D-(+)-乳酸脱氢酶基因(ldhD),并连接到载体pSE380上,构建表达质粒pSE-ldhD,将重组质粒pSE-ldhD转化大肠杆菌BL21(DE3),重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明ldhD在大肠杆菌中实现了表达,表达产物的分子量约为37kD。同时采用紫外分光光度法测定D-乳酸脱氢酶的酶活,测得重组菌株的D-乳酸脱氢酶活力为5.4U/mL,最适反应温度为35℃,最适pH为5.6。

葡萄球菌A蛋白基因的克隆及其IgG受体区新型表达载体的构建

张益谋;邱海霞;稽慧珍;

2010, 0(12): 201-205.

摘要 ( 123 )

PDF (23994KB) ( 188 )

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旨在克隆SPA基因并将该基因的IgG结合区亚克隆至毕赤酵母表达载体中。以金黄色葡萄球菌CowanI菌株基因组为模板,对葡萄球菌A蛋白(SPA)基因全长序列进行PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒,将DNA测序所得的结果用Blastn软件进行在线同源比对,经鉴定为SPA基因序列后,在线对其进行功能区域(IgG-Fc受体区)的预测,将该区域亚克隆入表达载体pPICZaA。结果显示,从CowanI菌株中成功地扩增到SPA基因,与NCBI中公布的序列同源性高达97%,同时构建了IgG-Fc受体区新型的表达载体

二氢黄酮醇4-还原酶的生物信息学分析

陈大志;周嘉裕;李萍;

2010, 0(12): 206-212.

摘要 ( 97 )

PDF (505KB) ( 464 )

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花色素苷是影响花色的主要色素,DFR是花色素苷合成的关键酶。采用生物信息学的方法分析已经在Gen-Bank上注册的拟南芥、金鱼草、兰花、山茶、番茄、水稻、矮牵牛和玉米等植物的DFR核酸及相应氨基酸序列,并对其理化性质、生化功能、系统发育关系和结构特征等进行预测。结果表明,金鱼草和山茶DFR定位于叶绿体,矮牵牛DFR定位于线粒体,山茶和矮牵牛DFR都是跨膜蛋白。DFR拥有一个NADB_Rossmann superfamily保守结构域和coiled-coil结构;所构建的DFR基因系统发育关系与形态学上的物种发育关系基本吻合;α-螺旋和无规则卷曲是DFR的主要二级结构元件;DFR的空间结构分为两个部分,松散C-末端和致密球状结构。

转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究

赵杰宏;赵德刚;韩洁;

2010, 0(12): 213-216.

摘要 ( 112 )

PDF (720KB) ( 338 )

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拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显着提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。

四株抗荔枝病原菌的芽孢杆菌的分离鉴定

黄庶识;黄曦;许兰兰;张荣灿;许铭本;黄荣韶;

2010, 0(12): 217-221.

摘要 ( 96 )

PDF (1372KB) ( 499 )

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荔枝果树根际土壤中筛选出4株芽孢杆菌OR-1、OR-2、OR-3、ON-6,都显示出抗荔枝病原菌的活性。采取对该菌株形态特征、培养特征、生理生化特征和遗传特性进行研究的方法,结果表明菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的特征一致;将4菌株的16S rDNA序列在GenBank中进行序列比对,结果亦显示其与Bacillus subtilis的16S rDNA的序列片段的相似性均达99%以上;以相似性为基础构建系统进化树,分析表明菌株与Bacillus subtilis同源关系最近。最终得出结论为菌株OR-1、OR-2、OR-3、ON-6为枯草芽孢杆菌。

应用随机PCR方法鉴定一株真养产碱杆菌

姚四新;赵淑秋;王宪文;王丽荣;赵朴;陈仕钧;张兆沛;王青;刘兴友;刘金华;

2010, 0(12): 222-225.

摘要 ( 87 )

PDF (228KB) ( 366 )

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采用随机引物PCR技术从新建细胞培养室空气中获得一段长414bp的片段,通过克隆测序及序列分析,结果表明所测序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性分别高达79%-83%,由其推导的氨基酸序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性高达86.4%-89.1%,从而确定所分离菌株为真养产碱杆菌。

《生物技术通报》2010年总目次

2010, 0(12): 226-238.

摘要 ( 80 )

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