生物技术通报

口蹄疫疫苗研究新进展

杜进鑫;王永录;

2009, 0(03): 1-5.

摘要 ( 158 )

PDF (209KB) ( 643 )

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口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。接种疫苗是预防该病的重要手段之一,而研制高质量、安全有效的疫苗,不但是决定疫苗免疫效果的关键,也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。目前,除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色以外,国内外诸如亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、可饲疫苗和多表位疫苗等的研究和探索已全面展开,有望为口蹄疫的有效防控提供新的途径。

保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展

李正丰;王永录;

2009, 0(03): 6-10.

摘要 ( 103 )

PDF (169KB) ( 775 )

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保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提出展望。

蛋白质新功能定向进化研究策略

吴振芳;陈惠;曾民;吴琦;

2009, 0(03): 11-15.

摘要 ( 137 )

PDF (241KB) ( 1097 )

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利用定向进化策略改造蛋白质功能已经在农业、工业和医药等领域得到了广泛的应用。蛋白质工程的最新进展是利用定向进化策略对自然界蛋白质引入新功能,但由于其决定因素比较复杂,是研究者面临的一个重大挑战。详细介绍了国外近年发展的蛋白质新功能定向进化研究策略:对传统突变体库构建策略进行改进以及非同源重组改造技术的开发,是早期引入蛋白质新功能的常用手段,利用计算/理性设计与定向进化相结合引入蛋白质新功能是近年定向进化研究的一个重大突破,而噬菌体展示技术是蛋白质新功能筛选的主要策略。蛋白质新功能的分子进化模型已逐渐成为蛋白质工程改造的新思路。

糖蛋白的研究进展

郭慧;邓文星;张映;

2009, 0(03): 16-19.

摘要 ( 294 )

PDF (148KB) ( 1925 )

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糖蛋白是由糖链与多肽链以多种形式共价修饰而形成的一类重要生理活性物质。糖蛋白在生物体内种类繁多,分布广泛,具有重要的功能。糖蛋白的性质及功能和糖链的结构有关,因此糖蛋白中糖链的结构及作用机制研究成为生物学基础理论的课题之一。就近年来糖蛋白研究中糖蛋白样品的提取分离、糖链释放及结构分析的技术方法及研究领域作了简要介绍。

PIN蛋白在生长素极性运输中的作用

于胜楠;崔继哲;

2009, 0(03): 20-24.

摘要 ( 351 )

PDF (348KB) ( 2462 )

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PIN蛋白是生长素流出载体,它在细胞中的不对称分布决定细胞间生长素流方向。PIN蛋白网络系统决定生长素的极性运输,为植物体各部位的细胞提供了特异的位置和方向信息。从细胞水平上介绍PIN蛋白在生长素极性运输中的作用及对PIN蛋白功能调节的研究进展。

PTH融合蛋白研究进展

张梅;邬敏辰;金坚;

2009, 0(03): 25-28.

摘要 ( 178 )

PDF (237KB) ( 701 )

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甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone)是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素,是人体内维持血钙恒定的主要激素。PTH在人体内的生理功能非常广泛,PTH类似物已被开发成为治疗骨质疏松症的一系列新型药物。为了克服人PTH分子量小、在人体内代谢快、临床应用不方便的缺点,长效融合蛋白体的研究逐渐成为一种趋势,并且取得了一定的成就。主要依据国内外对PTH重组体和PTH融合蛋白体的研究现状,对PTH的构效关系与生理活性、PTH类似物的研究成果及PTH的应用前景进行综述。

海胆主要卵黄蛋白研究进展

耿慧君;周遵春;董颖;赫崇波;

2009, 0(03): 29-32.

摘要 ( 118 )

PDF (248KB) ( 530 )

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海胆的主要卵黄蛋白(major yolk protein,MYP)大量存在于海胆卵中,同时存在于海胆精巢和卵巢中,为配子发生及胚胎发育提供营养。经比对发现,海胆MYP cDNA序列与其他物种卵黄蛋白原并无明显相似性,而与铁传递蛋白具有更高的相似性,有研究认为MYP为铁传递蛋白。据其存在场所和合成时期的差异,MYP可分为为CFMYP(存在于体腔内,受精后合成)和EGMYP(存在于卵中,母源性),二者均由同一基因编码。就CFMYP和EGMYP合成时期、场所和功能作用等加以比较;并对海胆MYP与其他物种卵黄蛋白(原)发生、结构与分子量和功能等方面进行了综述。

毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化

高炳淼;长孙东亭;罗素兰;安婷婷;

2009, 0(03): 33-36.

摘要 ( 187 )

PDF (181KB) ( 722 )

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随着基因重组技术的快速发展,基因工程产品的利用越来越广泛,但其分离纯化的成本约占总成本的60%~70%。因此,探索一些简单有效的分离纯化方法尤为必要。简单介绍了目前较为流行的毕赤酵母表达体系,着重概述了重组蛋白分离纯化技术方法的应用情况。

脲酶在生物工程中的应用

赵圣国;王加启;刘开朗;李旦;于萍;卜登攀;魏宏阳;周凌云;李发弟;

2009, 0(03): 37-41.

摘要 ( 232 )

PDF (283KB) ( 2279 )

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脲酶是一种高效的尿素分解催化剂,化学反应速度是常规化学催化的1014倍,广泛应用于工业、农业和医药行业。论述脲酶在生物工程中的应用,内容包括检测血、尿、酒饮料、天然水和环境污水中尿素;检测肌酐和精氨酸;消除肾衰竭病人体内多余尿素,消除酒饮料和废水中尿素;回收太空飞船上的废水和控制多级酶促反应中的pH。

雨生红球藻对环境胁迫的分子防御机制

苏忠亮;程江峰;梁成伟;张媛媛;刘杰;

2009, 0(03): 42-45.

摘要 ( 116 )

PDF (243KB) ( 1004 )

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虾青素是一种具有极强的生物抗氧化性的类胡萝卜素,在医药,食品等方面均有广阔的应用。雨生红球藻在逆境下能够大量积累虾青素,已成为目前研究的热点。从雨生红球藻生存的角度来看,虾青素的积累是细胞对逆境防御的方法之一。除此之外,雨生红球藻还通过调整相关酶的表达类来使细胞度过难关。主要综述了雨生红球藻对环境胁迫防御的两种分子机制,即早期机制和长期机制。

氧化亚铁硫杆菌亚铁氧化系统的研究进展

欧阳建平;陈新华;

2009, 0(03): 46-49.

摘要 ( 216 )

PDF (229KB) ( 525 )

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氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)为无机化能自养菌,革兰氏阴性,能在极端酸性环境中生长。由于在生物冶金中的应用及特殊的生理学效应,该菌受到研究者的广泛关注。A.ferrooxidans能氧化亚铁、元素硫及还原态硫化物获得电子,并通过一系列电子载体将电子传递给氧生成水,同时释放能量供生命活动需要。目前对A.ferrooxidans电子传递系统的研究主要集中于亚铁氧化电子传递系统,已发现多种与亚铁氧化电子传递相关电子载体和操纵子,如电子载体铜蓝蛋白(Rustocyanin,Rus)、细胞色素C(Cytochrome C,Cyc)、细胞色素C氧化酶(Cytochrome Coxidase,Cox)、亚铁氧化酶(Iro)、细胞色素bc1复合物(cytochrome bc1 complex,bc1)等,以及rus操纵子和pet操纵子。综述了近年来有关A.ferrooxidans亚铁氧化电子传递链相关蛋白载体,rus和pet操纵子结构与功能及表达调控等方面的研究进展。

莽草酸生物合成途径的调控

汪华;崔志峰;

2009, 0(03): 50-53.

摘要 ( 343 )

PDF (208KB) ( 3002 )

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莽草酸是合成生物碱等许多其它物质的前体。近年来,莽草酸作为临床上惟一有效的抗禽流感药物——达啡的原料而倍受关注。简述了莽草酸生物合成的途径,着重从基因工程角度分析了莽草酸合成过程中的关键酶及其对莽草酸产量的影响,旨在为研究和开发微生物工程菌生产莽草酸提供参考。

PCR-DGGE技术及其在植物微生态研究中的应用

刘琳;刘洋;宋未;

2009, 0(03): 54-56.

摘要 ( 163 )

PDF (146KB) ( 450 )

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植物中微生物种类较为丰富,在植物微生态系统中发挥重要作用。变性梯度凝胶电泳(denaturinggradient gel electrophoresis,DGGE)技术作为研究微生物物种多样性和种群动态变化的分子检测工具之一,广泛应用于植物微生物群落多样性和群落动态变化研究中。概述了DGGE技术的原理,及其在植物微生物生态学中的应用以及在该领域研究中导致DGGE偏差的因素和相应解决方法,对DGGE检测结果的分析提供参考,为进一步研究植物微生物相互作用提供帮助。

cDNA文库技术在植物抗旱机制研究中的应用

宋晓宏;沙伟;

2009, 0(03): 57-60.

摘要 ( 114 )

PDF (177KB) ( 492 )

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cDNA文库是指生物不同生长发育时期特定组织或器官所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA与载体连接后形成的克隆的集合,在基因分离、克隆及功能研究中具有重要作用。就cDNA文库构建及其在植物抗旱机制研究中的应用进行综述。

玉米C_4型NADP-ME的生物信息学分析

李振华;张立军;崔震海;朱延姝;樊金娟;阮燕晔;汪澈;

2009, 0(03): 61-64.

摘要 ( 120 )

PDF (318KB) ( 593 )

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利用生物信息学软件对GeneBank上注册的玉米C4型NADP-ME进行氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、导肽、亚细胞定位、蛋白质功能及系统进化分析和预测。结果表明,NADP-ME蛋白是等电点为6.09的亲水性不稳定蛋白,包含一个结合NAD(P)的结构域和一个N-末端区域,属于裂解酶类,具有能量代谢的功能,定位于叶绿体中;α螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,β折叠和伸展链散布其中;玉米C4型NADP-ME与高粱、水稻等植物的NADP-ME基因有较高的同源性。

抗旱、耐盐基因P5CS转化向日葵自交系

程继东;安玉麟;孙瑞芬;

2009, 0(03): 65-69.

摘要 ( 155 )

PDF (363KB) ( 441 )

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以向日葵保持系75-33B和恢复系Ht80-97的子叶为转化受体材料,用携带P5CS基因的双元载体系统的根癌农杆菌进行叶盘转化,获得抗Kan的转化芽。提取转化芽总DNA进行PCR检测及PCR-Southern杂交检测,证实获得阳性抗性芽75-33B 2株,Ht80-97 4株,转化率分别为3.17%和4.65%。

河套蜜瓜花粉管通道法转化hALR基因

张立全;哈斯阿古拉;扈廷茂;刘明秋;

2009, 0(03): 70-73.

摘要 ( 118 )

PDF (248KB) ( 515 )

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为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到含有甜瓜果实黄瓜素(Cucumisin)基因启动子的果实特异性表达载体pPZP-CGN中,构建了hALR甜瓜果实特异性表达载体pPZP-CAN。花粉管通道法转化试验大田自花授粉花63朵,收获T0代果实27颗,结实率为42.9%。提取T0代种子无菌苗DNA,经PCR、PCR-southern和斑点杂交检测有13株呈阳性。

沙枣细胞悬浮培养体系的建立

王巍巍;宋继园;詹亚光;

2009, 0(03): 74-77.

摘要 ( 92 )

PDF (311KB) ( 496 )

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分别以沙枣幼嫩叶片,茎段为外植体诱导沙枣愈伤组织,选择生长旺盛的松散愈伤组织进行细胞悬浮培养,探讨了培养基种类和激素组合对其产生的影响。结果表明,最适的沙枣愈伤组织诱导培养基为NT(包括0.1 mg.L-1BA和0.1 mg.L-1 TDZ);沙枣悬浮细胞在MS,NT,WPM,B5和IS培养基中均可生长,其中在NT培养基中生长状态最好,呈现生长均一的绿色疏松状态。激素组合对沙枣细胞生长影响很大,其中附加BA 0.1 mg.L-1和TDZ 0.1 mg.L-1组合的NT液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞,细胞增长系数达5.73。HPLC测定结果证明沙枣细胞中含有一定量的浓缩鞣质达5.2022 mg/gDW,这为利用沙枣悬浮细胞生产次生代谢产物提供了一条有效途径。

猪下丘脑发育差异表达基因的分离、克隆与表达

潘孝青;张刻;丁家桐;宋晓娟;陈涛;张玉玲;

2009, 0(03): 78-80.

摘要 ( 138 )

PDF (260KB) ( 355 )

相关文章 | 计量指标

在小梅山猪下丘脑不同发育阶段,用mRNA差异显示技术分离并筛选出一个差异表达片段,命名为CQ01,221 bp。测序与BLAST分析发现,CQ01与猪血管内皮生长因子A(VEGFA)高度同源96%。半定量分析结果显示,CQ01在初情期时下丘脑中表达量较高。

酶法对猪皮胶原蛋白水解物紫外吸收能力的影响

项智锋;

2009, 0(03): 81-83.

摘要 ( 107 )

PDF (251KB) ( 474 )

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旨在获得具有良好紫外线吸收能力的猪皮胶原蛋白水解物,使之能作为一种天然的防晒素材应用于保养品中。以猪皮为材料,获取胶原蛋白后,经不同温度预热,应用凤梨酶、木瓜酶、胃蛋白酶等进行不同时间水解。结果显示,所得的水解液均对短波紫外线吸收能力最佳,其次为中波紫外线,三者中以胃蛋白酶组较佳。以0.5%胶原蛋白经95℃预热30 min,再以1%胃蛋白酶水解1 h,可获得最佳紫外线吸收能力。

奶牛结核病诊断方法的比较研究

邓铨涛;陈颖钰;郭爱珍;余波;周家喜;谭永龙;纪雯雯;杨翠华;邓绍慧;

2009, 0(03): 84-87.

摘要 ( 127 )

PDF (289KB) ( 572 )

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旨在比较目前实验室用于检测牛结核方法及PPD皮内变态反应检测牛结核的敏感性和特异性。对145头进行了PPD结核菌素实验的牛进行了IFN-γ体外释放试验,ELISA方法检测ESAT-6,CFP-10,MPB70,MPB83四个蛋白的抗体,胶体金检测两种相似蛋白MPB70和MPB83。结果表明,IFN-γ体外释放试验的敏感性和特异性最高,与PPD皮内变态反应有较高的符合性。在抗体检测方面,iELISA的敏感性高于胶体金方法。虽然抗体检测(iELISA和胶体金方法)比细胞介导的免疫方法(IFN-γ和PPD)敏感性要低,前者更适合于检测处于结核病程发展后期的样本,并且可以有效降低假阳性反应。

富甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的直接表达和纯化

冯志国;陆婕;郎君;李燕娇;陈正望;

2009, 0(03): 88-90.

摘要 ( 124 )

PDF (181KB) ( 384 )

相关文章 | 计量指标

利用RT-PCR技术从果蝇总RNA中克隆出富甘氨酸果蝇抗菌肽基因,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)的Nde I和Xho I酶切位点之间,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)利用乳糖操纵子的葡萄糖效应IPTG诱导表达,经15%SDS-PAGE、Western blot分析,在大约8 kD处出现了含6×His标签的抗菌肽蛋白。再以Ni-N TA纯化树脂进行亲和层析、脱盐、冻干,成功制备了富甘氨酸果蝇抗菌肽蛋白。

家蝇幼虫抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌活性

陈曼;胡启飞;文阳安;周义文;涂植光;

2009, 0(03): 91-94.

摘要 ( 104 )

PDF (286KB) ( 436 )

相关文章 | 计量指标

通过超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,观察抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌作用。超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果表明,术后对照组小鼠相比其他两组活动减少,且3组白细胞计数均减少。14 d后对照组存活率为30%,明显少于磺胺米隆组90%(P<0.05)和抗菌肽组80%(P<0.05)。对照组小鼠的重量在第6 d开始下降,明显少于其他两组(P<0.05)。而无菌对照组无死亡,重量持续增加。因此,超声处理能诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,其对铜绿假单胞菌感染的ICR小鼠创面有较强抗感染作用,能明显增加其存活率。

脂多糖快速银染检测方法的改良

徐先栋;谢珍玉;王世锋;周永灿;

2009, 0(03): 95-97.

摘要 ( 269 )

PDF (238KB) ( 1777 )

相关文章 | 计量指标

为了建立一种快速、高效的脂多糖(LPS)银染检测方法,利用大肠杆菌(Escherichia coli 0111:B4)制备的LPS为研究对象,在传统LPS银染检测方法的基础上,通过调整凝胶的固定氧化试剂和银染试剂等措施,对LPS经SDS-PAGE电泳后的结果进行银染检测。结果表明,改良的LPS快速银染检测方法在保持传统方法灵敏度的基础上,操作过程更为简单,安全性、经济性和染色效果等方面也比传统的方法均有明显提高,是一种快速高效的LPS银染检测方法。

新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定

崔涛;兰欢;杜刚;刘革力;易发平;卜友泉;宋方洲;

2009, 0(03): 98-101.

摘要 ( 101 )

PDF (608KB) ( 536 )

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克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达。成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础。

人类3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、纯化和鉴定

李毅;万涛;杨琴;蔡雪飞;张文露;汤华;

2009, 0(03): 102-105.

摘要 ( 142 )

PDF (352KB) ( 454 )

相关文章 | 计量指标

为了研究3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)化生物学功能,以pcDNA3.1-GAPDH质粒为模板,PCR方法扩增GAPDH基因,经BamHI和SalI双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,构建His-GAPDH融合蛋白表达质粒pET32a(+)-GAPDH;转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选,扩增目的质粒;转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生融合蛋白,亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blotting检测GAPDH蛋白表达情况。结果表明,构建的人GAPDH基因表达载体经序列测定证实,与GenBank数据完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET32a(+)载体;表达质粒pET32a(+)-GAPDH在大肠杆菌BL21中成功地诱导表达了可溶性His-GAPDH融合蛋白,纯化后SDS-PAGE和Western blotting检测证实融合蛋白表达成功。人GAPDH原核表达载体的成功构建,及6His-GAPDH融合蛋白的正确表达,为进一步深入研究GAPDH的生物学功能奠定了基础。

重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究

张业尼;路福平;李玉;王建玲;

2009, 0(03): 106-110.

摘要 ( 141 )

PDF (342KB) ( 697 )

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利对重组枯草芽孢杆菌(pBES-pss)表达的磷脂酰丝氨酸合成酶进行分离纯化及酶学性质研究。pBES-pss发酵后的粗酶液经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP-Sepharose HP离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析,基本获得电泳纯的重组磷脂酰丝氨酸合成酶,比活力可达13.62 U/mg,分子量约为53 kD。酶学性质研究表明,该酶催化卵磷脂水解反应的最适pH8.0,最适温度为35℃。稳定性研究表明:该酶在pH 6.5~9.5区间和低于45℃温度下稳定。表面活性剂及金属离子对该酶水解活性的影响结果表明,SDS、Tween20、Tween80对该酶有抑制作用,Triton X-100对该酶有增强作用;Mg2+、Zn2+、K+对该酶有抑制作用,Ca2+、Mn2+和EDTA对该酶有增强作用。

Ⅴ型磷酸二酯酶的活性测定及其抑制剂的研究

王琴琴;陈源;刘先俊;

2009, 0(03): 111-114.

摘要 ( 184 )

PDF (209KB) ( 452 )

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研究以3′,5′-环鸟苷酸(cGMP)为特异底物的Ⅴ型磷酸二酯酶(PDE5)活性及新合成的化合物CYⅠ、CYII、CYIII和CYIV对该酶的抑制作用。以人血小板为原料,通过快速蛋白液相色谱系统(FPLC)分离纯化得到PDE5,利用3H-cGMP同位素两步分析法检测PDE5的活性。再以不同剂量的4种化合物作用于PDE5,观察它们对PDE5的抑制效应,从而筛选出PDE5的高效抑制剂。结果表明,CYII对PDE5具有很好的抑制作用。

合成己酸乙酯脂肪酶产生菌的筛选及发酵条件的研究

刘维英;韩亚杰;胡坤;代斌;

2009, 0(03): 115-118.

摘要 ( 103 )

PDF (275KB) ( 553 )

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以有机相中合成酶活为指标,通过对薰衣草根际土壤产脂肪酶菌株的筛选,获得了一株在有机相中合成己酸乙酯转化率相对较高的细菌Arthrobacter Y-605,其己酸乙酯转化率为67.53%。考察了影响该菌株产脂肪酶的各项因素,确定其最佳培养基组分:2%玉米粉,1%黄豆粉,0.1%尿素,0.05%MgSO4,0.1%K2HPO4,0.15%KCl;最适培养条件:初始pH8.0,温度为和35℃,装液量60 ml,转速为160 r/min;同时,表面活性剂Tween80的添加对脂肪酶的产生具有促进作用。通过对Arthrobacter Y-605培养条件的优化,脂肪酶活力由3.8 U/ml提高到13.33 U/ml,为该菌株的菌种改良及其在有机相合成领域的应用奠定了基础。

纳米金基因芯片结合通用PCR同时检测多个病原性真菌

鲁卫平;涂植光;

2009, 0(03): 119-122.

摘要 ( 107 )

PDF (616KB) ( 611 )

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基于致病性真菌rDNA基因分型技术,构建采用通用引物的一次PCR法,并结合纳米金新型基因芯片检测系统实现一次对多个临床常见致病性酵母菌的检测分析。用生物素标记的通用引物扩增各真菌DNA片段并与基因芯片杂交,然后将链酶亲和素标记的纳米金结合到杂交体上,杂交信号通过银染反应被放大形成裸眼可见的显色信息。结果表明,通用引物可扩增临床常见的真菌DNA,选用的各探针特异性强、可靠性好,芯片的最低检测值达50 fmol/L。临床样品检测结果与常规鉴定方法结果一致。该技术检测时间短、操作简单、不需要特殊设备,能部分满足临床检测的通量要求,具有很好的临床应用前景。

溶解肠杆菌的交流电电解刺激过程

宋波;

2009, 0(03): 123-126.

摘要 ( 127 )

PDF (299KB) ( 568 )

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以葡萄糖为惟一碳源,研究了溶解肠杆菌(Enterobacter dissolvens)在外加电场交流电的刺激下细胞的生长和代谢的过程。研究表明,在低电流10 mA刺激下,交流电刺激下的细菌没有明显的刺激效应;当采用100 mA的电流通电24 h,交流电刺激下的细菌出现了明显的刺激效应,当通电12 h后,菌液葡萄糖的降解率和脱氢酶活性分别为对照参比的1.4倍和2.17倍,细胞浓度呈现明显的增长。分析原因可能是由于电极产物中没有过氧化氢的产生。

变性高效液相色谱检测沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌

徐君怡;曹际娟;郑秋月;刘淑艳;徐杨;

2009, 0(03): 127-131.

摘要 ( 103 )

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应用多重PCR反应(multiplex PCR,mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquidchromatography,DHPLC)技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测方法。以编码沙门氏菌的fimY基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码肠出血性大肠杆菌O157:H7的rfbE基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了快速鉴别沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为284、159和499 bp,并验证了该多重PCR具有特异性。沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:沙门氏菌1.5 CFU/ml、空肠弯曲菌15 CFU/ml、肠出血性大肠杆菌O157:H7 15 CFU/ml。在随机采集的226份冷冻鸡肉类样品中,检出了7份样品为沙门氏菌阳性、10份为空肠弯曲菌阳性、1份为肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性。研究建立的多重PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测。

福州森林红壤细菌的菌群结构及其功能分析

黄钦耿;田宝玉;江贤章;柯崇榕;徐燕;杨欣伟;黄建忠;

2009, 0(03): 132-136.

摘要 ( 130 )

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福建地区是我国的第二大林区,土壤类型主要表现为红壤。对福州地区森林中因木材腐朽而形成的树洞中的土壤样品进行筛选,构建了一份具有强木质纤维素降解能力的酸性红壤的细菌16S rRNA基因文库,利用限制性片段长度多态性(RFLP)对随机克隆进行筛选;对该生态环境下的细菌菌群进行了系统发育分析。结果表明土壤pH偏酸性严重影响了细菌类群的多样性,酸杆菌门Acidobacteria(71.5%)和变形菌门Proteobacteria(24.1%)是该酸性土样中的优势菌群,其中酸杆菌门在该生态系统中占有绝对优势。变形菌菌群中的主要类群为光合细菌,固氮细菌和溶菌细菌。研究表明,在木质纤维素自然降解的过程中,存在于酸性树洞土壤中的细菌参与了碳素和氮素的固定与循环,并对其微生态的稳定起到重要作用。

洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

王筱青;喻晓蔚;徐岩;顾玲;

2009, 0(03): 137-142.

摘要 ( 102 )

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高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍,通常粘粒载体的容量为30~50 kb,因此提取的HMW DNA应不小于500 kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力,以免DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的DNA胶块经裂解和纯化后发现其DNA长度远大于500 kb,明显优于商品化试剂盒提取和酚抽提法。用BamHⅠ、Sau3AⅠ、XbaⅠ和HindⅢ对DNA胶块进行不完全酶切研究表明,构建文库常用的Sau3AⅠ并不适合胶块内酶切反应,而BamHⅠ酶切B.cepacia HMW-DNA效果较好,产生的DNA片段集中在20~50 kb之间,完全适合粘粒基因组文库的构建,为B.cepacia大插入片段基因组文库的构建以及功能基因组的研究奠定了良好的理论基础。

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