生物技术通报

本期目录

2013, 0(2): 0-0.

摘要 ( 127 )

PDF (441KB) ( 592 )

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植物锌铁转运相关蛋白家族的研究进展

李素贞, 陈景堂

2013, 0(2): 8-14.

摘要 ( 252 )

PDF (882KB) ( 1856 )

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锌和铁在植物的生长发育过程中参与体内的许多生化反应。锌、铁缺乏或过剩都会对植物产生一定的影响。因此，植物需要一系列金属转运体的协同工作以保持体内离子平衡。这些转运体可分为吸收蛋白和排出蛋白两大类，它们参与细胞内锌铁离子的跨膜运输，以及调节细胞内锌铁离子的平衡与分配。目前，植物细胞中锌铁转运蛋白的转录表达水平与锌铁离子在植物体中的积累与分布之间的联系已被揭示，并分离克隆了许多相关基因家族成员。综述近年来发现并鉴定出的参与锌铁转运的蛋白家族的表达、定位等相关的研究进展。

斑马鱼在转基因动物研究中的应用

刘丽丽, 王健, 吴巍, 王海胜, 闫艳春

2013, 0(2): 15-21.

摘要 ( 289 )

PDF (3217KB) ( 1282 )

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近年来的研究表明，脊椎动物斑马鱼已发展成为一种十分重要的模式生物，在基因表达调控、发育与分化、形态发生、发病机理、药物筛选和环境检测等诸多研究领域都有重要的应用价值。在回顾模式生物应用与发展的基础上，着重概述斑马鱼作为模式生物的优越性、斑马鱼转基因技术的发展现状、转基因斑马鱼的应用领域，并提出斑马鱼转基因技术进一步发展可能面临的问题。

中国外生菌根真菌研究进展

温祝桂, 陈亚华

2013, 0(2): 22-30.

摘要 ( 331 )

PDF (1440KB) ( 1677 )

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较为全面地介绍近10 年我国在外生菌根真菌方面的研究现状，从菌根多样性调查、分类鉴定、菌种纯培养、菌根生态效应、食用菌开发等多方面的研究进展进行阐述；同时分析我国菌根研究与应用等方面存在的主要问题，并展望今后的研究重点。

除氨氮菌在污水处理中的研究进展

赵翠娟, 宋文军, 朱高雄, 魏纪平, 李博志, 张军

2013, 0(2): 31-34.

摘要 ( 260 )

PDF (1256KB) ( 1713 )

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氨氮是污水中的主要污染物，其含量也是水质的一项重要指标。除氨氮菌可快速降解水中的氨氮，具有脱氮彻底、易操作、无二次污染等独特优点。综述近几年氨氮菌在除氨氮机理、筛选技术及工业应用的研究进展，并讨论该技术在污水治理过程中的发展前景。

纤维素酶及其基因研究进展

赵燕, 陈庚华, 周卫, 侯亚利, 杨忠华

2013, 0(2): 35-40.

摘要 ( 324 )

PDF (1254KB) ( 1433 )

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纤维素是广泛存在于自然界的多糖类物质，纤维素酶能有效地将纤维素物质水解成单糖进而发酵生产乙醇、氢气以及微生物油脂等，因此对其合理利用可以缓解全球能源压力。近十几年来纤维素酶受到国内外的关注。结合纤维素酶与生物能源的关系及市场化的需求，概括近年来国内外对纤维素酶基因的研究进展。

细菌漆酶的研究及应用进展

马莹莹, 贾红华, 韦萍

2013, 0(2): 41-48.

摘要 ( 470 )

PDF (1727KB) ( 1603 )

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漆酶作为一种绿色环保的多酚氧化酶类，目前被广泛地应用于染料降解、造纸等领域。细菌漆酶与真菌漆酶相比，有更好的热稳定性和更宽的最适pH 范围。因此，在工业应用方面更具优势与潜力。综述细菌漆酶的来源、分布、分子结构等基本信息，以及目前细菌漆酶发酵生产水平，并对固定化细菌漆酶进行总结。此外，对细菌漆酶在染料废水、电化学应用及造纸等工业生产方面的应用作简要的介绍。

支原体脂蛋白及其变异与宿主互作研究进展

倪博, 白方方, 刘茂军, 冯志新, 熊祺琰, 魏建忠, 邵国青

2013, 0(2): 49-54.

摘要 ( 245 )

PDF (1251KB) ( 2297 )

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脂蛋白是支原体的重要结构，在支原体与宿主间的互作中有重要作用，近些年越来越多的报道指出脂蛋白在支原体毒力及致病性中占有重要地位。介绍支原体脂蛋白的特性和功能，黏附作用，致炎性反应和诱导细胞凋亡的作用。进一步阐述脂蛋白在基因家族的调控下通过ON/OFF 开关、大小变异、结构重组、基因水平转移及抗原调节等发生抗原?相位变异的机制，以及脂蛋白变异在支原体致病力方面的影响和重要生物学意义。

POZ 锌指蛋白在发育和肿瘤发生中的作用

梅竹, 杨予涛, 徐志卿

2013, 0(2): 55-60.

摘要 ( 238 )

PDF (1303KB) ( 947 )

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POZ 锌指蛋白是一类在进化中高度保守的蛋白，具有多种重要的生物学功能。POZ 锌指蛋白主要作为一种转录抑制因子而存在，通过POZ 结构域招募一些转录辅阻遏物而调节靶基因的表达。近年来的研究发现，POZ 锌指蛋白在发育和肿瘤的发生中有着重要的作用，综述5 个POZ 锌指蛋白在肿瘤的发生和生物体发育中的作用及功能，为人们进一步了解POZ 锌指蛋白的功能提供资料。

纳米基因载体研究进展

卢艳敏

2013, 0(2): 61-66.

摘要 ( 226 )

PDF (1233KB) ( 1119 )

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纳米颗粒具有高的安全性、良好的生物相容性、易于生产、可以运载不同大小的DNA 片段，保护DNA 免受核酸酶的降解作用，纳米颗粒在生物体及细胞内具有较高的稳定性，不易被降解等优点，利用纳米颗粒作为基因载体可以提高转染效率。纳米颗粒作为非病毒载体在基因治疗上的应用成为研究热点。介绍纳米材料的性质，纳米基因载体的特点和转运机制，以及纳米基因载体的研究进展。

蛋白片段互补分析方法及其应用

张洁, 柳长柏

2013, 0(2): 67-71.

摘要 ( 539 )

PDF (1433KB) ( 1929 )

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蛋白片段互补分析技术是近年发展起来的一种分析蛋白质- 蛋白质相互作用的新方法。典型的蛋白片段互补分析技术已经成功地利用二氢叶酸还原酶，β- 内酰胺酶，绿色荧光蛋白以及荧光素酶片段互补进行胞内蛋白分子相互作用研究。这一技术不仅可以动态、定位分析细胞内蛋白质分子相互作用、绘制细胞内信号传导、蛋白质生物化学网络，还可以应用到蛋白质文库、cDNA 文库和高通量药物筛选等。综述了蛋白片段互补分析技术的原理、方法及其应用。

四种草本花卉的染色体核型分析

齐宇晴, 李新玲, 张彦妮, 李凤

2013, 0(2): 72-75.

摘要 ( 273 )

PDF (1671KB) ( 1814 )

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采用常规制片方法对4 种草本花卉的染色体数目、核型等进行了研究。结果分别为石竹（Diranthus chinensis）染色体数2n=14，核型公式为K（2n）=14=12 m+2 sm，其核型为“1A”；裂叶花葵（Lavatera trimestris Linn.）染色体数2n=14，核型公式为K（2n）=14=6 m+8 sm，核型为“2A”；观赏椒（Capsicum frutescans）染色体数2n=24，核型公式K（2n）=24=24 m，核型为“1B”；凤仙（Impatiens balsamina）染色体数2n=14，核型公式为K（2n）=2x=14=10 m+4 sm，核型为“1B”。此4 种植物的染色体核型均为首次报道，可为花卉的良种选育和分类提供必不可少的依据。

高温处理对转基因作物种子Bt 蛋白含量的影响

张坤, 谭桂玉, 王保民, 南铁贵

2013, 0(2): 76-79.

摘要 ( 247 )

PDF (1441KB) ( 736 )

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转基因作物食品安全问题日益受到社会关注，作物种子作为食物的重要来源之一，转基因作物种子的安全性研究更有待加强。分别利用转Bt 基因棉花和玉米品种及非转基因品种种子进行高温处理（55-130℃），并用双抗夹心酶免疫检测方法（ELISA）研究其中的外源Bt 蛋白的动态变化过程。结果表明，不同作物种子中的Bt 蛋白对高温的耐受程度不同，棉花种子中Bt蛋白较玉米种子耐高温能力强；高温处理条件下，种子中的Bt 蛋白在10 min 内含量显著下降，其后降解缓慢；130℃以上的高温处理条件下，玉米和棉花种子中的外源Bt 蛋白均能显著降解。

山羊Klf4 基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化

辛桂瑜, 王丽霞, 叶新慧, 申魁魁, 符欣蕙, 李恭贺, 张明, 卢晟盛, 卢克焕, 郑喜邦

2013, 0(2): 80-85.

摘要 ( 295 )

PDF (2477KB) ( 703 )

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旨在克隆山羊Klf4 基因，构建重组质粒pET30a-Klf4，通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4 融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA，用RT-PCR 的方法扩增Klf4 基因编码区序列，通过TA 克隆构建pMD18-T-Klf4 重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4 的cDNA 亚克隆至pET-30a 载体，构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21 中，用IPTG 诱导表达，SDS-PAGE 和Western blotting 检测确认，镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4 融合蛋白。结果表明：（1）从山羊生殖脊中克隆了Klf4 基因，其开放阅读框由1 434 个核苷酸组成，编码478 个氨基酸，而且该序列与绵羊的同源性最高，达到98.5％；（2）经过SignalP 4.0 在线分析，Klf4 的编码蛋白不存在信号肽；（3）经SDS-PAGE 和Western blotting 分析表明，重组质粒pET30a-Klf4 在大肠杆菌中得以表达；在变性条件下纯化，获得了His-Klf4 融合蛋白。

奶牛体细胞核移植胚胎产业化生产条件优化

孙伟, 巴特尔, 郭继彤, 李荣凤, 王建国, 李明, 胡树香, 王春生, 李喜和

2013, 0(2): 86-92.

摘要 ( 203 )

PDF (1942KB) ( 599 )

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通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎体外生产技术条件，制备高质量的奶牛克隆胚胎，旨在提高奶牛体细胞核移植产业化应用效率。就受体卵母细胞去核方法、不同年龄供体牛细胞来源、血清饥饿与否以及不同气相组成培养等条件对奶牛体细胞克隆胚胎生产效率的影响进行了研究和探讨。结果表明，虽然荧光染色辅助去核和盲吸法的去核率、囊胚发育率分别为100%、24.83% 和92.44%、28.26%，两者之间无显著差异（P>0.05），但盲吸法操作简单、效率高；不同年龄来源供体牛的细胞系构建的克隆胚胎的囊胚发育率分别为31.43%、25.68%，两者之间没有显著差异（P>0.05）；经血清饥饿和未饥饿供体细胞重构的克隆胚胎囊胚发育率分别为24%、29.9%，两者之间没有显著差（P>0.05）；富氧和低氧气相培养的克隆胚胎的囊胚发育率分别为28.26%、31.55%，两者之间差异不显著（P>0.05），低氧气相组成更有利于囊胚的发育。根据上述结果，奶牛体细胞核移植胚胎（克隆胚胎）的产业化生产条件为：供体细胞无需进行同期饥饿处理，直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎，融合后的克隆胚胎在密封的混合三气（5% CO2-5% O2-90% N2）的气相组成下进行体外培养，能保持稳定的囊胚发育率。

甘蔗脱落酸胁迫成熟诱导蛋白基因（SoASR）的克隆和表达分析

黄杏, 杨丽涛, 张保青, 宋修鹏, 李杨瑞, 王盛

2013, 0(2): 93-99.

摘要 ( 229 )

PDF (2999KB) ( 725 )

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采用同源克隆和RT-PCR 技术克隆了甘蔗SoASR 基因全长cDNA，GenBank 登录号为JX470187，长度为753 bp，包括一个429 bp 的开放阅读框，编码142 个氨基酸的蛋白。同源性分析表明，甘蔗SoASR 与大蕉、玉米和高粱聚为一小组，同源性分别为79%、93% 和88%。将SoASR 在大肠杆菌中表达，获得一个约32.0 kD 的外源蛋白。实时荧光定量PCR 分析结果表明，低温胁迫下该基因在抗寒性强的甘蔗品种桂糖28 号（GT28）中表达量先升后降，在抗寒性弱的甘蔗品种园林6 号（YL6）中则呈下降趋势；该基因的表达在两个甘蔗品种中均受ABA 的诱导。这说明SoASR 基因在甘蔗抗寒机制中发挥一定作用。

根癌农杆菌介导甘蔗遗传转化Bt（cry1Ab）基因

李晓梅, 王闵霞, 秦廷豪, 阳翠, 安琪, 张军

2013, 0(2): 100-105.

摘要 ( 263 )

PDF (15535KB) ( 374 )

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以自育甘蔗品种“川蔗23 号”诱导的胚性愈伤为受体材料，首次用较低的根癌农杆菌侵染浓度（OD600=0.1 左右）与较短的侵染时间（1.5 min）成功实现甘蔗遗传转化Bt（cry1Ab）基因。结果表明，胚性愈伤分化与小芽生根最适潮霉素筛选浓度分别为20 mg/L 和30 mg/L ；愈伤组织胚性的一致性是影响筛选阶段愈伤再生的重要因素，培养40 d 的愈伤组织为转化最适受体；转化材料经连续的潮霉素抗性筛选后，获得65 株抗性植株，通过特异性引物的PCR 扩增检测，有2 株获得阳性条带，初步表明目的基因已整合到甘蔗染色体基因组中。

四翅滨藜Osmotin-like Protein 基因的克隆、序列分析及其原核表达

王升阳, 张勇, 王健, 刘言志, 刘金亮, 潘洪玉

2013, 0(2): 106-110.

摘要 ( 326 )

PDF (2537KB) ( 513 )

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在构建四翅滨藜（Atriplex canescens）全长cDNA 文库中通过随机克隆测序并进行EST 分析基础上，得到四翅滨藜osmotin-like protein 的1 个cDNA 序列，命名为AcOLP。AcOLP cDNA 包含一个全长为687 bp 完整开放阅读框，编码229 个氨基酸，属于GH64-TLP-SF 超家族，是一种病程相关5（PR-5）蛋白，其核酸序列与大洋洲滨藜（Atriplex nummularia）的osmotin-likeprotein 基因的同源性为94%，对应编码氨基酸序列同源性为87%。将得到的序列提交GenBank，序列号为JN632587.1。与其他植物PR-5 蛋白的氨基酸序列比对，AcOLP 具有保守的半胱氨酸残基，与二硫键的形成有关。对AcOLP 与其他植物的氨基酸序列的进化分析表明，其与大洋洲滨藜的亲缘关系较近。将AcOLP 基因与原核表达载体pET-28a 连接，进行融合表达，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达出分子质量约29 kD 的蛋白。

优雅蝈螽卵巢Piwi 蛋白亚家族成员Giwi cDNA 序列全长的克隆与生物信息学分析

刘静, 周志军, 常岩林

2013, 0(2): 111-117.

摘要 ( 277 )

PDF (5206KB) ( 924 )

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旨在进一步研究piwi 基因在半变态昆虫干细胞自我更新和生殖系细胞发育中的作用。首先对实验室前期测定的优雅蝈螽（Gampsocleis gratiosa）转录组数据进行搜索，成功挑选出piwi 基因的同源体，命名为giwi。通过设计特异性引物，采用巢式RT-PCR 和RACE 末端扩增技术克隆获得该基因cDNA 序列。序列分析表明，优雅蝈螽giwi 基因cDNA 序列全长为3 462 bp，包含1 个完整的开放阅读框2 742 bp，编码913 个氨基酸，以及一个长度为111 bp 的5' 端非编码区和609 bp 的3' 端非编码区。预测的理论蛋白分子量为102.7 kD，等电点为9.55。Giwi 蛋白具备Piwi 蛋白亚家族全部特征，C 端的保守PIWI 结构域，中部的保守PAZ 结构域和N 端可变结构域。同源比对分析得到PIWI 结构域具有类似RNA 酶H 活性中心的DDH 三联催化模体，暗示该蛋白具有切割活性。系统发育分析指出昆虫的Piwi 和Aubergine 可能源于远古基因的重复事件。通过二代测序技术获得的转录组数据可以很好地服务于未来的功能基因研究。

毕赤酵母高效表达整合有CBD 的米黑根毛霉脂肪酶

薛冲冲, 张俊辉, 林影, 韩双艳

2013, 0(2): 118-123.

摘要 ( 319 )

PDF (3071KB) ( 792 )

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CBD 是一类存在各种水解酶（木聚糖酶，纤维素酶等）中的能够结合并识别纤维素的结合域，能有效地增加酶在底物周围的浓度，增强酶水解底物的能力。尝试将来源于哈茨木霉内切葡聚糖酶II（THEGII）的CBD 及连接肽基因融合到S7-xyn的N-末端区域中，以期能获得高酶活力的融合米黑根毛霉脂肪酶应用于工业生产，研究通过将融合基因克隆到pPICZαA 载体中，构建分泌性表达质粒pPICZαA-CBD-RML，载体经线性化后在毕赤酵母GS115 中融合表达。通过与没有融合CBD 的RML 比较，两者具有相似的最适温度和温度稳定性曲线，而融合蛋白CBD-RML 的分泌量提高了17%。研究结果表明，来源于THEGII 的CBD可以作为异源蛋白在毕赤酵母中表达的分泌增强子。

PDGF-GAL 真核表达载体的构建及细胞表达

荣曼, 张锐虎, 刘田福

2013, 0(2): 124-129.

摘要 ( 230 )

PDF (4459KB) ( 921 )

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旨在构建真核表达载体pcDNA-PDGF-GAL，观察重组质粒转染N-2a 细胞后甘丙肽基因（galanin，GAL）的表达水平。采用PCR 方法，以重组质粒pUC18-PDGF-GAL 为模板，扩增PDGF-GAL 基因序列，最终定向克隆入载体pcDNA3.1 并替换该载体的CMV 启动子与增强子序列，从而构建具有神经细胞特异性的表达载体pcDNA-PDGF-GAL。然后利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠N-2a 细胞，分别在转染后24、48 和72 h 收集细胞及细胞培养物，采用RT-PCR 和ELISA 方法，鉴定GAL 基因在神经细胞中的过表达。结果显示，经PCR 和DNA 序列测定证实，目的基因已插入表达载体，RT-PCR 和ELISA 证明，脂质体法瞬时转染N-2a 细胞实现GAL 基因的过表达。成功构建pcDNA3.1-PDGF-GAL，实现GAL 基因在N-2a 细胞过表达，从而为制作过表达GAL 的稳转细胞及进一步研究GAL 在神经系统的生物学功能奠定基础。

葡萄穗霉木聚糖酶XYA6205 在黑曲霉中的表达及酶学特性分析

王红霞, 王华明, 张大龙, 罗成

2013, 0(2): 130-134.

摘要 ( 277 )

PDF (2450KB) ( 753 )

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木聚糖酶是涉及半纤维素水解的主要酶，具有重要的应用价值。将葡萄穗霉上可能为木聚糖酶的基因xya6205（含信号肽）克隆到载体pGm 上，进而通过原生质体-PEG 转化到黑曲霉G1 上。得到的目的转化子经过摇瓶培养发酵，SDS-PAGE 分析表明，产生了大小为20 kD 左右的蛋白条带。DNS 法测定1 L 发酵液5 d 酶活，比活达392 U/mg，其最适温度为50℃，最适pH为5.8，在不同pH 缓冲液中处理18 h 后，最高仍有83% 残余酶活。

裂谷热假病毒颗粒研制及鉴定

邓俊花, 林祥梅, 张永宁, 冯春燕, 王彩霞, 吴绍强

2013, 0(2): 135-139.

摘要 ( 262 )

PDF (2405KB) ( 1440 )

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裂谷热是危害严重的人畜共患病，为了给该病的分子生物学检测提供RNA 阳性质控品，制备了裂谷热假病毒颗粒并进行了检测和验证。将pGEM-T-RVF 质粒与假病毒载体p-MS2 质粒分别进行Pst I 和Hind Ⅲ双酶切，然后连接构建p-MS2-RVF重组质粒。将p-MS2-RVF 重组菌进行表达、酶消化及盐沉淀后纯化假病毒颗粒，在特性检测的基础上，借助荧光RT-PCR 方法进行鉴定。结果表明，裂谷热假病毒颗粒耐核酸酶，室温至少保持1 个月，稳定，易运输；荧光RT-PCR 检测表明最低可达到4.25×102copies 检测限。构建的裂谷热假病毒颗粒将为裂谷热分子生物学检测提供阳性质控物质。

乙肝病毒X 基因可调控表达细胞模型的构建

白荷露, 刘蕊, 朱乃硕

2013, 0(2): 140-146.

摘要 ( 247 )

PDF (3464KB) ( 1011 )

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利用四环素诱导型慢病毒系统（Lentil-XTM Tet-On Advanced Inducible Expression System）构建了含有乙肝病毒X 基因（HBx）的可诱导表达载体质粒，利用慢病毒包装细胞系HEK293T 细胞分别获得含有调控元件rt-TA 和HBx 基因的病毒颗粒，滴度达到108 LPs/mL。将两种病毒先后感染HepG2 肝癌细胞系，分别利用G418 和Puromycin 抗生素筛选获得整合有HBx 基因的稳定细胞株。在体系中加入Dox 时，应用RT-PCR 和Western blot 方法验证了HBx 基因的可诱导表达。可诱导表达细胞模型构建成功，为进一步研究HBx 基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了一种较理想的试验模型。

改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA 的应用初探

王燕, 彭莉萍, 陈锦珍, 刘星, 罗镇明, 周天会

2013, 0(2): 147-150.

摘要 ( 206 )

PDF (2712KB) ( 585 )

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旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA 的方法。以乳腺癌细胞株MCF7 和非癌乳腺上皮细胞HBL100 为材料，用RNA 分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt 的RNA 片段，3' 端添加poly（A）尾后利用smart 技术进行反转录，在反转录体系中加入生物素标记的dATP，得到单链cDNA ；结合生物素- 磁珠分离技术将cDNA 与待测RNA 进行消减杂交并以U6 为内参验证消减结果；最后利用巢式PCR 扩增杂交产物，PCR 产物插入T 载体后，挑取阳性克隆进行测序。结果显示，总RNA 按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，于100 nt 以下显示较亮条带；以U6 为内参检测杂交效率，杂交后U6 于33 个循环时可见少量扩增条带；杂交产物经巢式PCR 和电泳表明在100 nt 范围内有明显条带，得到差异表达的非编码小RNA。经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA。

苹果锈果类病毒属属级寡核苷酸芯片筛查方法的建立

张永江, 辛言言, 朱水芳, 李世访

2013, 0(2): 151-156.

摘要 ( 205 )

PDF (4002KB) ( 666 )

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苹果锈果类病毒属是重要的植物类病毒属，目前尚无有效的筛查方法。通过对该属类病毒的核苷酸序列进行分析筛选，设计了35 条用于该属类病毒筛查的属级特异性探针并制备了寡核苷酸芯片。应用苹果锈果类病毒及柑橘矮化类病毒标准样品对该芯片进行验证，结果表明所建立的属级芯片可以获得有效的杂交信号，其灵敏度与RT-PCR 电泳法相当。该芯片可用于苹果锈果类病毒属类病毒的筛查，为该属类病毒的检疫与防控提供技术支撑。

动力学模型在荧光定量PCR 数据处理中的优势

刘彦礼, 李旭, 苏振成, 徐明恺, 张惠文

2013, 0(2): 157-162.

摘要 ( 250 )

PDF (1840KB) ( 992 )

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近年来荧光定量PCR 技术凭借其基因定量的优势而得到了广泛应用，上游技术的发展保障了原始数据的精确性，但定量结果的可靠性仍取决于PCR 扩增效率和所采用的数据处理模型，基于不同数学模型对原始数据处理后的结果会有较大差异。试验通过对样品进行5 倍梯度稀释后获得相应梯度的荧光定量PCR 原始数据，并应用2 －△△ Ct 法、相对标准曲线法和动力学模型处理原始数据，所得定量结果（x-±s）依次为1.76±0.70、0.89±0.14 和0.99975±0.06，与理论值1 比较表明，动力学模型在定量结果的可靠性、方便性及经费节约方面都具有良好应用前景。

新疆蜂胶提取物抗氧化活性及槲皮素和白杨素含量测定

布威海丽且姆阿巴拜科日, 木塔力甫艾买提, 阿米尼姑丽买买提, 尼砸木艾海提, 依米提热合曼

2013, 0(2): 163-171.

摘要 ( 478 )

PDF (2778KB) ( 49857 )

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旨在探讨新疆伊犁蜂胶和库车蜂胶不同溶剂提取物清除1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基和抗油脂过氧化力的作用，并测定新疆伊犁蜂胶的主要生物活性物质槲皮素和白杨素的含量。处理原蜂胶，以4 种溶剂提取蜂胶，用DPPH 自由基法和抗亚油酸过氧化法对新疆伊犁蜂胶和库车蜂胶提取物进行抗氧化活性的测定。以70% 乙醇和甲醇作为提取溶剂从新疆伊犁蜂胶中提取槲皮素和白杨素；用高效液相色谱法对所提取的槲皮素和白杨素进行含量测定，测定波长分别为370 nm 和268 nm。结果显示，对DPPH 自由基的清除能力在蜂胶不同提取物和不同浓度之间则有差异，部分试验组的清除能力优于同浓度的茶多酚；对亚油酸均有抗氧化活性，其中伊犁蜂胶抗亚油酸过氧化活性较好。在乙醇提取液里槲皮素的含量最低，为2.2950 mg/g，而在经脱脂的甲醇提取液里其含量最高，为2.8150 mg/g ；在甲醇提取液里白杨素的含量最低，为60.72 mg/g，而在经脱脂的甲醇提取液里其含量最高，为74.37 mg/g。伊犁和库车蜂胶具有一定的抗氧化作用；DPPH 自由基法是一种快速、灵敏、简便的方法，结果表明，新疆产蜂胶可作为天然抗氧化剂进一步开发和利用；经过高效液相色谱法（HPLC）的分析结果表明，活性成分槲皮素和白杨素从新疆伊犁蜂胶样品中可被检测出。

阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用

周鹤峰, 邵敏, 李长福, 葛正龙

2013, 0(2): 172-176.

摘要 ( 225 )

PDF (3450KB) ( 682 )

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制备阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii，ES）胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒，标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体，采用双抗夹心法，将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫，另一单抗和二抗（羊抗鼠IgG 抗体）分别包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）和控制线（C）上，制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条，进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验，借助于简单的增菌过程，在6 h 内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量，灵敏度达到1×104 CFU/mL，与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点，可用于ES 的检测。

一种新型海洋生物活性物质逆转K562/A02 细胞多药耐药的研究

张玉霞, 梁琼, 雍国新

2013, 0(2): 177-183.

摘要 ( 203 )

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旨在研究福安泰（FAT）对人类白血病K562/A02 细胞多药耐药的逆转作用。用噻唑蓝（MTT）法检测药物敏感性及FAT 对细胞耐药性的影响；用流式细胞仪检测细胞内罗丹明123（Rhodamine 123）的含量；采用生物化学DTNB 法测定细胞内GSH 含量。结果显示，低浓度FAT 对K562/A02 细胞和K562 细胞均无直接细胞毒作用。FAT 可以降低阿霉素对K562/A02 细胞的IC50 值，对K562 细胞没有明显影响。FAT 可增加K562/A02 细胞内罗丹明123（Rhodamine 123）的含量。K562/A02 细胞内GSH 含量高于K562 细胞内GSH 含量，FAT 可降低K562/A02 细胞内GSH 的含量。表明FAT 降低K562/A02 细胞内GSH 的含量是FAT 逆转MDR 的机制之一。

纳豆激酶生产菌BSNK-5 鉴定及发酵条件优化

李淑英, 聂莹, 杜欢, 赵仲麟, 袁超, 李燕, 宋晓燕, 唐选明

2013, 0(2): 184-189.

摘要 ( 300 )

PDF (2119KB) ( 710 )

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对分离的纳豆激酶生产菌BSNK-5 进行初步鉴定；并对其液体发酵产酶条件进行了初步研究，旨在提高纳豆激酶的产量。通过鉴定BSNK-5 为枯草芽孢杆菌属菌株。试验优化了发酵培养基的最适氮源和碳源种类及百分含量，发酵培养基的起始pH 值，最适种子接种量，发酵温度，培养时间等。最终确定了两个最适的产酶条件，在该条件下，BSNK-5 通过液体发酵产纳豆激酶的活力高达1 160 U/mL，比优化前提高283%。

一种改进的赖氨酸浓度测定方法

姜安娜, 曹名锋, 李庆刚, 郑平, 杨洪江, 孙际宾

2013, 0(2): 190-194.

摘要 ( 561 )

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茚三酮显色法是一种常用的氨基酸测定方法，可以对游离氨基酸进行定性、定量分析，但检测赖氨酸的选择性和准确度却较差。本研究通过对传统茚三酮方法的改进实现赖氨酸的特异性检测。研究发现，在pH2.2 的磷酸氢二钠- 柠檬酸缓冲液中只有赖氨酸可与茚三酮- 铁试剂在480 nm 处发生特征显色反应，其最佳测定条件为100℃反应35 min ；并发现改进的方法赖氨酸的有效浓度为0-200 mmol/L。此方法可以排除脯氨酸、鸟氨酸、甘氨酸、精氨酸和组氨酸等杂质氨基酸的干扰，而且适用于对发酵液中赖氨酸浓度进行直接测定，结果准确可靠。

家庭冰箱中的微生物种类调查

羊宋贞, 冯广达, 姚青, 王永红, 姚雨欣, 朱红惠

2013, 0(2): 195-200.

摘要 ( 319 )

PDF (3891KB) ( 997 )

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旨在了解家庭冰箱中的主要微生物种类及其致病风险。随机选取了5 个家庭冰箱为研究对象，采用营养琼脂（NA）、马铃薯葡萄糖（PDA）和高氏1 号培养基对冰箱内不同位置的微生物进行了采集和分离。通过16S rRNA、26S rRNA 或ITS 基因序列分析和扫描电镜观察形态对其进行了鉴定，共分离到细菌84 株和真菌74 株。研究结果表明，家庭冰箱中的细菌主要以芽孢杆菌（Bacillus）、葡萄球菌（Staphylococcus）、库克氏菌（Kocuria）和假单胞菌（Pseudomonas）属的菌株为主。真菌则以枝孢菌（Cladosporium）、曲霉（Aspergillus）和青霉（Penicillium）属的霉菌为主。家庭冰箱中的致病菌主要为葡萄球菌，其他致病菌分布则较为随机。家庭冰箱中存在着种类丰富的细菌和真菌。葡萄球菌的污染较为普遍，冰箱的安全问题应引起足够的重视。

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