生物技术通报

植物中赤霉素代谢酶与株高的关系

乔枫;赵开军;

2011, 0(03): 1-6.

摘要 ( 112 )

PDF (338KB) ( 864 )

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赤霉素是高等植物体内调控植物发育的重要激素。介绍了赤霉素的生物合成过程及赤霉素代谢酶与株高关系的研究概况。

CBF/DREB转录因子与植物矮化的相关性研究进展

包永霞;满达;肖波;韩烈保;

2011, 0(03): 7-12.

摘要 ( 96 )

PDF (264KB) ( 408 )

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CBF/DREB转录因子即干旱应答元件结合蛋白,是一类可以调控多个与干旱、高盐及低温耐性有关的功能基因表达的转录因子家族。很多报道称CBF/DREB转录因子的过量表达使转基因植株产生矮化、晚花现象。着重探讨CBF/DREB转录因子与植物矮化现象相关性与其矮化机理,并对草坪草育种新方向进行展望。

鱼类线粒体DNA及其研究进展

陈四海;区又君;李加儿;

2011, 0(03): 13-20.

摘要 ( 180 )

PDF (333KB) ( 796 )

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鱼类是脊椎动物中最原始而在种属数量上又最占优势的类群,其起源复杂,分布广泛,拥有丰富的遗传多样性。鱼类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)同其他脊椎动物的mtRNA一样,呈共价闭合环状,是细胞核外具自主复制、转录和翻译能力的遗传因子。与核DNA相比,鱼类mtDNA具有分子较小、结构简单、进化速度快、遗传相对独立性和母系遗传等特点,是一个相对独立的复制单位。由于鱼类线粒体DNA具有上述特点,以mtDNA作为分子标记,探讨鱼类的群体遗传结构与系统演化,已成为鱼类分子群体遗传学和系统学研究中的热点。综述了鱼类mtDNA的结构特征、进化和多态性检测方法及其在鱼类分子群体遗传学和鱼类系统学研究中的应用。

鱼类细胞系在病毒学研究中的应用进展

周广舟;景红娟;

2011, 0(03): 21-26.

摘要 ( 132 )

PDF (268KB) ( 825 )

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鱼类细胞培养尽管起步较晚,但截至目前已有近280余株不同的鱼类细胞系相继建立起来,在生理学、病毒学、毒理学、肿瘤及基因工程等多个领域发挥重要作用。主要对鱼类细胞系在病毒学研究中的最新应用,并结合作者自身的研究,尤其侧重于鱼类病毒分离、重要功能基因鉴定、抗病毒免疫和病毒致病机理研究等方面的进展作一概述。

海洋无脊椎动物抗菌肽研究进展及其在食品保鲜中的应用

宫晓静;吴燕燕;

2011, 0(03): 27-32.

摘要 ( 99 )

PDF (524KB) ( 609 )

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海洋无脊椎动物抗菌肽抑菌广谱,稳定性高,且对生物体本身无害,其应用日益引起大量研究者的关注。综述了抗菌肽的几种类型、抑菌机理,介绍了海洋无脊椎动物抗菌肽研究进展、存在的问题并分析其在食品保鲜中的应用前景。

抗菌肽及其临床应用研究进展

吴静;李玉峰;林树乾;马秀丽;宋敏训;

2011, 0(03): 33-43.

摘要 ( 85 )

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抗菌肽是生物体在抵抗病原微生物的防御反应过程中产生的一类具有抗微生物活性的小分子多肽。抗菌肽是机体天然免疫系统的重要组成部分,具有广谱的抗革兰氏阳性、阴性菌活性,对真菌、某些有包膜的病毒、寄生虫以及肿瘤细胞也有抑制活性。抗菌肽具有不同于传统抗生素的独特抗菌机制,病原菌不宜对其产生耐药性,有可能成为一种新的抗生素替代品。介绍了抗菌肽的来源与分类、理化特性与生物学活性,并重点阐述其最新的临床应用进展。

肌苷酸及其相关酶的研究进展

徐善金;虞德兵;杜文兴;

2011, 0(03): 44-53.

摘要 ( 154 )

PDF (1550KB) ( 964 )

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肌苷酸(IMP)是一种重要的核酸代谢中间产物,同时也是重要的风味物质。从以下几个方面进行综述:(1)IMP结构与特性;(2)IMP的代谢,包含"从头合成","补救途径"以及分解IMP的酶;(3)IMP代谢相关酶的结构、功能以及酶的基因研究;(4)IMP检测技术以及该技术在各个研究领域的应用情况;(5)IMP含量的调控,主要论述各种外源性调控手段以及对每种调控方法的评价;(6)IMP研究展望。从而使人们能够更加深入地了解、研究和利用IMP,用于指导人们的生产和生活。

应激诱导对体外培养早期胚胎细胞凋亡的影响

刘涛;李向臣;赵倩君;关伟军;马月辉;

2011, 0(03): 54-58.

摘要 ( 107 )

PDF (234KB) ( 520 )

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细胞凋亡是早期胚胎清除由于自身或外界环境影响产生的不良细胞的主要途径之一。体外培养的早期胚胎易受一些环境及外源刺激,如氧化剂、机械刺激、重金属和生物类的毒素等产生一系列的刺激性反应,包括细胞转导路径,基因的表达和蛋白的合成,细胞的分裂增殖及凋亡,甚至是坏死;维生素E,维生素C,金属硫蛋白对细胞的凋亡起抑制作用。从凋亡的分子机制进行深入研究,利于从根本上改变胚胎质量,提高囊胚率和附植率。

产β-葡萄糖苷酶微生物育种研究进展

石彩蕊;王义强;陈介南;张伟涛;

2011, 0(03): 59-65.

摘要 ( 83 )

PDF (305KB) ( 559 )

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β-葡萄糖苷酶在纤维素降解方面有着重要的作用,可以把纤维二糖水解成葡萄糖。对产β-葡萄糖苷酶微生物的育种进行了概述,包括自然选育、诱变育种、原生质体育种和基因工程育种等。目前,通过基因工程手段构建工程菌或通过蛋白质工程手段改造酶蛋白,以获得高活性的β-葡萄糖苷酶已成为研究的热点。

真菌α-淀粉酶的研究进展

李松;王正祥;

2011, 0(03): 66-71.

摘要 ( 200 )

PDF (270KB) ( 1641 )

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真菌α-淀粉酶在现代淀粉糖浆、焙烤制品、啤酒酿制及生料酒精等行业已得到广泛的应用。随着现代制糖工业与发酵工业的发展及其对真菌α-淀粉酶的使用需求,使得真菌α-淀粉酶在现代工业酶制剂中占有重要地位。对真菌α-淀粉酶的研究和利用,为满足国内市场需求、调整我国酶制剂工业结构和带动相关食品或发酵行业的发展等具有重要意义。从真菌α-淀粉的催化机制、来源、异源表达及应用等方面进行了介绍。

植物转基因育种的分析与研究

赵彦平;赵春海;

2011, 0(03): 72-77.

摘要 ( 110 )

PDF (258KB) ( 1471 )

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自1983年培育出第一株转基因植物——转基因烟草以来,转基因育种研究已取得飞速发展。应用转基因技术培育了一批抗除草剂、抗虫、抗病、抗逆和优质的转基因材料,有些已实现产业化。就近年来转基因研究在转化技术体系、转化效率和筛选鉴定方面作一概述,就热点问题,如如何培育安全型无选择标记转基因植物和提高外源基因稳定性、表达量等进行分析,并就有关问题提出建议。

PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用

顾青雷;刘昊;张绍红;

2011, 0(03): 78-81.

摘要 ( 87 )

PDF (242KB) ( 603 )

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PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点广泛应用于植物病毒的检测。阐述反转录聚合酶链式反应、免疫捕捉反转录PCR、PCR-单链构型多态性、实时荧光定量PCR、差异显示PCR和巢式PCR等相关技术的原理及其在植物病毒检测中的应用现状,以期为我国植物病毒的检疫检测提供有益参考。

实时荧光定量PCR在固氮酶基因检测中的应用

孙傲雪;徐凤花;刘洋;郭慧娟;曹艳花;张晓霞;

2011, 0(03): 82-85.

摘要 ( 96 )

PDF (215KB) ( 609 )

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实时荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合。与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,扩大了PCR的应用范围。概述实时荧光定量PCR技术在固氮酶(nifH)基因检测中的应用与研究进展,并探讨该技术的发展和应用前景。

玉米逆境诱导型启动子克隆及其植物表达载体构建

刘晓敏;张莉弘;刘金亮;魏毅;潘洪玉;张世宏;

2011, 0(03): 86-90.

摘要 ( 71 )

PDF (813KB) ( 514 )

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设计特异引物,利用PCR方法从玉米(Zea mays)基因组DNA中克隆低温和盐相应蛋白(low temperature andsalt responsive protein,LS)基因上游1 735 bp,命名为Lsp。利用在线启动子预测工具PlantCARE分析表明,序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还包含各种胁迫响应元件。以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将克隆得到的启动子片段与GUS报告基因融合构建了重组表达载体pCAM-Lsp,并用反复冻融法将其导入农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法转化烟草,GUS组织化学染色显示出Lsp驱动GUS基因表达。结果表明,该Lsp启动子片段具备一定的启动活性,为探明玉米逆境胁迫启动子表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。

农杆菌介导法向玉米茎尖导入抗草甘膦EPSPS基因的研究

孙传波;李海华;郭嘉;陶蕊;曲文利;孟凡梅;张举仁;刘文国;袁英;

2011, 0(03): 91-93.

摘要 ( 104 )

PDF (368KB) ( 573 )

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以玉米自交系郑58的茎尖为受体,通过农杆菌介导法将抗草甘膦EPSPS基因转入玉米中,研究以茎尖为受体的农杆菌转化体系的可行性。98株转化苗,经过300 ppm的除草剂(农达)筛选,共获得13株转基因植株,经PCR检测,其中7株表现阳性,转化率达7.14%。初步证明外源基因已经整合到玉米基因组中,以玉米茎尖作为受体的转化系统用于基因转化是可行、高效的。

通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

梁燕;严建萍;谭湘陵;

2011, 0(03): 94-96.

摘要 ( 80 )

PDF (486KB) ( 320 )

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克隆通育粳1号水稻乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)基因,并在原核系统中进行体外表达。取通育粳1号水稻幼根,提取总RNA,RT-PCR法扩增ADH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pGEX-4T-1表达质粒中。将质粒转化至BL21(DE3)宿主菌中,平皿培养,挑取阳性菌落培养,提取重组质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。pGEX-4T-1-ADH/BL21进行常规LB扩大培养,IPTG(1 mmol/L)作用2、3和4 h诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果显示,插入质粒中的ADH片段序列和方向正确无误,表达蛋白分子量符合预期值42 kD,表达至最大值的诱导时间为3 h。因此,该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ADH的作用和应用生物工程法大量获得ADH奠定基础。

植物内生枯草芽孢杆菌纳豆激酶同源基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

姜嵛;梁晨;姜国勇;

2011, 0(03): 97-99.

摘要 ( 91 )

PDF (258KB) ( 352 )

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利用基因组学和生物信息学的方法,从一种植物内生枯草芽孢杆菌菌株Bs0922的基因组DNA中克隆了纳豆激酶的同源基因NK-Bs0922,长度为1 149 bp。通过重组和转化在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了一个大小为48.0 kD的重组蛋白。

巴西橡胶树线粒体50S核糖体蛋白L21 cDNA的克隆与分析

邹智;杨礼富;

2011, 0(03): 100-104.

摘要 ( 118 )

PDF (360KB) ( 395 )

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在橡胶生产中,"死皮"生理综合症严重制约了橡胶树(Hevea brasiliensis)单产的提高。在早期构建的差减文库中,筛选到一条在死皮植株中下调表达的基因片段,该片段编码的蛋白与线粒体50S核糖体蛋白L21(mRPL21)同源。通过ESTs序列拼接和RT-PCR,获得一条853 bp的cDNA序列(命名为HbmRPL21,GenBank登录号为HM800425),该序列包含一个完整的开放读码框,编码271个氨基酸,理论分子量为30.52 kD,等电点为8.40。同源比对表明,植物和动物界间mRPL21序列差异很大,而植物界内则相对比较保守。生物信息学分析表明,HbmRPL21是一个包含Ribosomal_L21p保守结构域的线粒体定位蛋白。

稳定携带山羊痘病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建

尹传宝;程振涛;朱琦;彭彩丽;鲜思美;周碧君;文明;

2011, 0(03): 105-110.

摘要 ( 75 )

PDF (563KB) ( 480 )

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为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显着高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。

乐至黑山羊PRLR基因外显子10多态性与产羔数的关系研究

穆晓琨;字向东;王永;黄磊;徐华伟;马力;付锡三;朱万岭;林世武;

2011, 0(03): 111-115.

摘要 ( 59 )

PDF (575KB) ( 417 )

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设计2对特异性引物对乐至黑山羊PRLR基因第10外显子进行了PCR-SSCP检测,并研究该基因与产子性能的相关性。结果表明,P1引物扩增片段不存在多态性;P2引物扩增片段存在多态性,表现为AA,AB,AD和CD 4种基因型,测序结果表明,4种基因型都在该片段第89、94、146和157位存在C→T、A→C、C→G、G→C的突变;此外AA型还在61位发生C→T的突变;AD型还在175位发生A→G的突变;CD型还在24位发生T→C的突变,96位发生C→T的突变,通过统计分析发现AD型平均产羔数优于其他3种基因型,并且与AB型差异达到显着水平(P<0.05)。因此认为PRLR基因对于乐至黑山羊产子性能有一定的影响。

牦牛OB基因的克隆及原核表达

唐懿挺;姬秋梅;张成福;柴志欣;赵上娟;白雪;信金伟;钟金城;

2011, 0(03): 116-119.

摘要 ( 63 )

PDF (420KB) ( 340 )

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肥胖基因(obese gene,OB gene)表达产物瘦蛋白(leption)具有调节体重、影响动物生长和繁殖率等一系列生物学功能。通过牦牛脂肪组织总RNA的提取,利用RT-PCR克隆出牦牛OB基因的成熟肽cDNA,构建OB基因的原核表达载体OB-pET32a(+),在大肠杆菌表达系统使融合蛋白表达,通过SDS-PAGE检测所表达的融合蛋白。结果表明,克隆的OB基因成熟肽片段为456 bp包含EcoR I和BamH I两个酶切位点,与普通牛、瘤牛该基因的相似性达98.6%。原核表达产物为包涵体形态,大小为31 kD,符合预期结果,为OB基因的高效表达系统的构建奠定基础。

曼氏无针乌贼GT微卫星位点的筛选

吴璋;张晓菊;蒋霞敏;薛良义;

2011, 0(03): 120-124.

摘要 ( 94 )

PDF (612KB) ( 357 )

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采用链霉亲和素包被的磁珠富集法筛选曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)微卫星位点。试验样品来自舟山六横岛,提取4个样品的DNA混合成DNA pool,用限制性内切酶Sau 3A I酶切。接上接头后构建基因组PCR文库,用生物素标记的(GT)15探针筛选。将筛选获得目的片段进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入DH5α感受态大肠杆菌里,扩大培养后PCR筛选阳性克隆。总共选取278个克隆,对120个经过检测含有插入片段的克隆进行测序,发现102个克隆含有微卫星序列,阳性克隆比率为85%。除去重复测序和侧翼链不足的序列,可以设计引物的微卫星序列有64条。

广东省平胸龟遗传多样性的RAPD分析

于冬梅;彭建军;沈梓粤;王莹;

2011, 0(03): 125-129.

摘要 ( 108 )

PDF (720KB) ( 355 )

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由于栖息地的破坏和人为的滥杀滥捕,平胸龟野外资源数量急剧下降,现已处于濒危状态。将13条可重复的、扩增图谱清晰的RAPD引物用于广东省内20个平胸龟个体的遗传多样性分析。扩增所得的条带显示,多态性位点含量为60.71%,Nei’s基因多样性指数为0.1196,Shannon’s多样性信息指数为0.1966,表明平胸龟遗传多样性仍较丰富。同时,计算20个个体间遗传距离为0.0507-0.2925,并采用UPGAM方法绘制聚类分析树状图,20个个体聚类较分散,主要聚为1个大群体,表明广东省内的野生平胸龟并没有形成明显的种群的分化。了解平胸龟的遗传现状、种群结构,可为该物种的种质资源保护、野生资源恢复与利用提供理论依据。

三个野生群体日本囊对虾遗传多样性的SSR分析

郭慧;申玉春;

2011, 0(03): 130-134.

摘要 ( 86 )

PDF (300KB) ( 434 )

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为了解野生种群日本囊对虾遗传分化和改良遗传育种,用SSR技术对福建厦门(XM)、广东湛江(ZJ)、广西北海(BH)3个地区野生日本囊对虾进行遗传多样性的研究。采用了10对微卫星引物对3个野生种群进行分析,10个微卫星位点在3个种群中均表现为高度的多态性,每个位点平均检测到3.87个等位基因;平均多态信息含量为0.5893;3个群体的观测杂合度分别为0.6243、0.5704、0.4661,全部群体观测杂合度平均为0.5536;期望杂合度分别为0.7193、0.6189、0.6226,全部群体平均期望杂合度为0.6536。这说明3个野生种群在10个微卫星位点上均具有丰富的遗传多样性。基于Nei's遗传距离的聚类分析显示厦门群体和湛江群体的遗传距离较近。

江苏海域几种绿潮藻类rDNA ITS序列分析

陈淑吟;胡传明;陆勤勤;孙中响;许广平;丁亚平;

2011, 0(03): 135-140.

摘要 ( 98 )

PDF (443KB) ( 379 )

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于2009年5-7月定点采集了江苏海域绿潮藻类,测定、分析了这些藻类核糖体rDNA ITS序列,并进行分类鉴定。研究结果显示,ITS+5.8S序列片段长度为552-578 bp,其中ITS1序列部分长度为179-182 bp,5.8S序列全长为155-158 bp,ITS2序列全长为180-196 bp,序列的平均GC含量(contents)为61.6%-63.3%,不同ITS序列存在不同的插入/缺失位点。扩增得到27个序列中有7个不同序列,依据NCBI数据库相似性查找、系统进化关系及遗传距离等分析结果,确定有4个种类:浒苔(Ulva prolifeya),缘管浒苔(U.linza),石莼属(Ulva sp.)1种及盘苔属(Blidingia sp.)1种。分析表明,ITS序列可作为石莼科种类鉴定的标记。

构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞

李彬;鲍文蕾;张涛;侯鑫;郭旭东;王潇;王志钢;刘东军;

2011, 0(03): 141-145.

摘要 ( 98 )

PDF (549KB) ( 410 )

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旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。

丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建

刘娇;周帆;陈庆美;单晓亮;唐霓;

2011, 0(03): 146-149.

摘要 ( 94 )

PDF (1007KB) ( 523 )

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旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。

肠道病毒71型安徽、河南株的分离与VP1序列进化分析

邵强;杨全中;冯真真;于翔;苏志国;

2011, 0(03): 150-154.

摘要 ( 76 )

PDF (527KB) ( 392 )

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旨在研究手足口病患者中肠道病毒71型分离株的病毒基因型特征。采集手足口病患者的粪便标本,进行病毒分离和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,同时选取其中9株EV71分离株,对其抗原决定簇部位VP1区进行核酸序列测定,并参考EV71 A、B、C各基因型的参考株和以往中国EV71的分离株进行同源分析和构建系统发生树。结果显示,所分析的9株病毒株均为C4亚型,3株安徽株H7、H8和H9的VP1序列相似度很高(≥98.8%,其中H7、H9的相似度为100.0%),4株河南株H3、H4、H5和H6相似度较高(≥98.4%,H3、H4和H5≥99.6%,其中H3、H4的相似度为100.0%),它们同河南株H1、H5的相似度也较高(≥97.2%),河南株H2虽然与其他河南株具有较高的序列相似度,但进化分析表明,其与安徽株同源性较高。结果表明,安徽株H7、H8和H9株变异速率明显加快,这可能导致了手足口病在安徽省的率先爆发与大流行,河南株H2最初可能由安徽传入河南。

高表达精脒/精胺N~1-乙酰基转移酶对人肺癌A549细胞株生长的影响

柳蔚;韩钰;蔡富强;王艳林;

2011, 0(03): 155-159.

摘要 ( 68 )

PDF (599KB) ( 370 )

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旨在研究人精脒/精胺N1-乙酰基转移酶(spermidine/spermine N1-acetyltransferase,SSAT)高表达对人肺癌A549细胞生长的影响。以pCR2.1-SSAT质粒为模板,PCR法扩增人SSAT基因并克隆至pcDNA3.1表达载体。重组质粒转染A549细胞后,RT-PCR法和Western blotting法筛选SSAT高表达的细胞株。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。成功构建pcDNA3.1-SSAT重组质粒,用该质粒转染A549细胞后,筛选获得稳定高表达SSAT的细胞株。SSAT高表达导致细胞生长抑制,S期细胞减少和自发性凋亡细胞增多。结果显示,稳定高表达SSAT可在A549肺癌细胞中部分模拟多胺类似物类抗癌药物的药理活性,导致瘤细胞生长抑制和细胞凋亡。

轮状病毒VP7基因的克隆与表达

柴晓杰;王晓庆;张婷;代靖宇;

2011, 0(03): 160-162.

摘要 ( 62 )

PDF (415KB) ( 359 )

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应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增轮状病毒VP7基因,并将其克隆到pMD18-T simple载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定DNA全序列。结果显示,克隆片段全长为981 bp。将轮状病毒VP7基因定向的克隆到原核表达载体pET-32a启动子下游,构建原核表达载体pET-32aVP7。将质粒pET-32aVP7转化Transetta表达菌株进行诱导表达,裂解菌体细胞抽提蛋白质进行SDS-PAGE。结果表明,轮状病毒壳蛋白VP7基因在Transetta表达菌株内得到成功表达。

一种构建新型T载体的简便方法及应用

齐向辉;陈辉;沈琦;何晨曦;刘学;郭齐;陈华友;徐虹;

2011, 0(03): 163-165.

摘要 ( 101 )

PDF (357KB) ( 1332 )

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T载体能够用于PCR产物的快速克隆且易于操作。以常用的克隆载体pGEM-3zf(+)为出发材料,将其进行改造为通用的T载体。通过一步反向PCR方法在该载体中插入带有Xcm I酶切位点的一段序列,在Xcm I酶的切割下产生两端含有T核苷酸的线型核苷酸序列,最终获得用于克隆PCR产物的T载体。外源基因xdh克隆试验表明该载体构建成功,此载体完全可以用于PCR产物的基因克隆试验,为相关载体的改造提供了思路。

群体感应信号分子及其抑制剂快速检测方法的建立

储卫华;刘永旺;朱卫;

2011, 0(03): 166-169.

摘要 ( 185 )

PDF (585KB) ( 903 )

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细菌能自发产生、释放一些特定的信号分子,并能感知其浓度变化,调节微生物的群体行为,这一调控系统称为群体感应。细菌群体感应参与包括人类、动植物病原菌致病力在内的多种生物学功能的调节,群体感应抑制剂成为抗感染药物开发的靶点。利用紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum)和根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)作为指示菌,建立检测高丝氨酸内酯(AHLs)及其抑制剂的简便方法。结果表明,通过平板交叉划线接种,使用指示菌能够有效地检测AHLs,并且通过薄层层析(TLC)与细菌生物感应器相结合的方法可以快速、方便地鉴定AHLs的种类;通过双层平板法观察指示菌色素产生情况,能够有效地检测群体感应信号分子AHLs抑制剂,且该方法简单易行。

菌种11371 16S rRNA序列分析及鉴定

陈飞;吴红艳;桓明辉;关艳丽;郭玲玲;于广峰;

2011, 0(03): 170-174.

摘要 ( 146 )

PDF (598KB) ( 523 )

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通过PCR方法扩增菌种11371的16S rRNA基因并测序,将序列提交GenBank(登录号:DQ531606),并与其他链霉菌属种进行比较,通过DNAStar软件得到菌种16S rRNA基因序列进化树。同时采用插片法、显微镜观察等方法对株菌11371进行形态特征、培养特征、生理生化特征鉴定。结果表明,11371的16S rRNA序列与其他链霉菌具有一定的同源性,结合生理、生化指标鉴定结果,进一步确定菌种为不吸水链霉菌一株新亚种(Streptomyces ahygroscopicus subsp.wuzhouensis n.sub-sp.),菌株11371 16S rRNA序列为GenBank中首例Streptomyces ahygroscopicus的16S rRNA序列。

高温蛋白酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学性质分析

廉立慧;高丽君;王德才;张显忠;李艳玲;

2011, 0(03): 175-179.

摘要 ( 91 )

PDF (314KB) ( 716 )

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从徂徕山温泉附近土样中分离到9株产高温蛋白酶菌株,选取一株碱性蛋白酶高产菌株L7为出发菌株,进行显微形态、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。研究该菌株发酵条件,确定产酶的最佳培养基组成为葡萄糖40 g/L,蛋白胨20 g/L,磷酸氢二钠1.4 g/L,氯化钙0.6 g/L,硫酸镁0.4 g/L,通过培养基优化,酶活达到103.08 U/mL。最佳培养条件为250 mL三角烧瓶中装液量50 mL、pH8.0、培养温度为55℃、培养时间为24 h。对该菌株酶学性质研究,L7菌株所产高温蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为10,并且具有良好的温度稳定性和pH稳定性,酶活性受PMSF强烈抑制。

嗜酸氧化亚铁硫杆菌半胱氨酸合成酶的表达、纯化及其性质鉴定

郑春丽;李艳君;钱林;柳建设;

2011, 0(03): 180-184.

摘要 ( 92 )

PDF (580KB) ( 518 )

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半胱氨酸合成酶是半胱氨酸合成反应的关键限速酶,催化了半胱氨酸合成的最后一个步骤。以A.ferro-oxidans ATCC 23270基因组为模板,通过PCR扩增得到编码半胱氨酸合成酶(cysM)的基因,与原核表达载体PLM 1构建重组体,转入大肠杆菌DH5α中,测序正确后,加IPTG诱导表达,用一步亲和层析法纯化出了浓度和纯度都较高的半胱氨酸合成酶。由蛋白颜色和紫外分析,确定是以PLP辅基作为活性中心。表达产物进行SDS-PAGE分析,证实分子量为32 kD。

α1,2-岩藻糖基转移酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

贾红红;李玉;刘逸寒;王尧;梁晓梅;路福平;

2011, 0(03): 185-190.

摘要 ( 103 )

PDF (654KB) ( 473 )

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利用PCR方法从幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)基因组DNA中获得α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fuco-syltransferase,α1,2-fuct)基因,得到大小为906 bp的目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET-22b(+)中,得到重组表达载体pET-fuct。将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,25℃,0.1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达4 h,并用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况。结果表明,可表达出相对分子质量为33 kD的蛋白,与预期分子量一致,说明α1,2-岩藻糖基转移酶在大肠杆菌BL21中实现表达,应用HPLC法进行酶活检验,酶活达到了13.21 pmol/(mgPr.h)。

DEV-NP基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测

张荷;代淑燕;毛君婷;王开功;周碧君;文明;

2011, 0(03): 196-199.

摘要 ( 90 )

PDF (461KB) ( 507 )

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为构建鸭肠炎病毒(DEV)核衣壳蛋白(NP)基因酵母双杂交诱饵载体,采用PCR技术扩增出DEV-NP基因,克隆至酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,以PCR检测、限制性酶切和序列测定等方法进行鉴定;然后采用PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-NP转化酵母Y2HGold,在不同营养缺失型培养基进行自激活检测,结果显示,经PCR检测和EcoR I/BamHⅠ双酶切,可见到与预期相一致的目的片段;测序表明该片段含DEV NP基因全部序列;转化Y2HGold酵母菌后,在SD/-Trp/X-α-Gal固体培养基上长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA固体培养基上未见有菌落生长。无自激活作用的诱饵载体pGBKT7-NP的成功构建,为DEV NP宿主结合蛋白的筛选奠定了基础。

木质素降解菌Bax的筛选及特性研究

姜明国;黎海菲;陆冠颖;夏璐;

2011, 0(03): 200-203.

摘要 ( 95 )

PDF (352KB) ( 702 )

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为了高效降解造纸污水中木质素类化合物,采用苯胺兰和鞣酸平板法从腐木分离、筛选得到一株具有高降解木质素活性的丝状真菌,经鉴定为绿色木霉,命名为Bax。最适碳源为葡萄糖和蔗糖,最适氮源为蛋白胨和尿素,最适酸碱度为pH 5.0,最适温度为30℃。通过对木质素氧化酶系分析,主要起作用的是漆酶和木质素酶,为造纸污水的处理奠定了基础。

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