生物技术通报

张丽霞;李国婧;王瑞刚;黄荣峰;

2010, 0(09): 1-7.

摘要 ( 100 )

PDF (291KB) ( 886 )

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乙烯具有复杂的生物学功能,它调节着植物生长发育和许多的生理生化过程。乙烯也被认为是一种胁迫应答激素,直到近几年关于乙烯生物合成及信号转导途径与植物盐胁迫的关系才逐渐被挖掘出来。乙烯在不同水平、层次参与盐胁迫反应,包括乙烯合成关键酶(ACS)和乙烯受体,细胞质中CTR1和EIN2以及细胞核中EIN3传导、响应盐信号。但是乙烯合成和信号转导途径在植物盐胁迫响应过程中仍然存在许多未解决的问题。主要介绍乙烯合成及信号转导途径的各组分与盐胁迫关系的最新研究进展,并讨论其存在的主要问题。

植物病原生物基因组测序进展

傅本重;刘丽;伍建榕;

2010, 0(09): 8-15.

摘要 ( 121 )

PDF (286KB) ( 1097 )

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随着基因组学的迅猛发展,越来越多的生物全基因组序列已经测定完成或正在进行之中。植物病原生物基因组序列的测定为理解植物与病原物互作分子机制有重要意义,并为植物病理学的发展作出了重要贡献。目前已有9种病原细菌和1种病原真菌的基因组序列彻底完成,另外还有更多的基因组草图正在组装或测序工作正在进行之中。对NCBI上主要的植物病原真菌和细菌全基因组测序进展作了整理和概述。

绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用

张雨丽;张桂征;苏红梅;蒙艺英;闭立辉;

2010, 0(09): 16-20.

摘要 ( 117 )

PDF (212KB) ( 1428 )

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绿色荧光蛋白(green fluorescent prote in,GFP)是一种能够自身催化形成生色团并在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光的蛋白。有现代生物学北斗星之美誉的它,在生物学的很多领域都有广泛应用。GFP具有荧光稳定、易于检测、表达调控简单、生物安全性好等优点,在转基因研究中的各个方面均应用颇多。就GFP在转基因研究中的应用特点及应用进展做一综述。

转基因家畜对环境和食品的安全性分析及应对策略

魏庆信;刘西梅;乔宪凤;熊忠良;郑新民;

2010, 0(09): 21-24.

摘要 ( 97 )

PDF (178KB) ( 442 )

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应用转基因技术对家畜进行遗传改良,必将给畜牧业生产带来革命性的变化。与此同时,与其它转基因生物一样,其安全性也引起了广泛关注。为促进转基因家畜研发工作的健康发展,对其可能影响环境和食品安全性的因素进行了分析,并提出相应的应对策略和技术措施,供参考。

在哺乳细胞中构建不同MicroRNA载体的研究

曾洁琼;王峰尖;潘坤;向波;

2010, 0(09): 25-27.

摘要 ( 82 )

PDF (199KB) ( 301 )

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RNA干扰技术是分子生物学研究的热点,同时也是有效阐明基因功能的有力工具。利用载体表达的小干扰RNA在疾病的治疗研究中意义更为重要。针对RNA干扰技术的发展,构建载体的研究及其应用前景作了简单概述,对如何在哺乳动物中构建不同microRNA载体作了详细报道。

结肠癌肿瘤干细胞的研究进展

吴长清;杨世华;

2010, 0(09): 28-31.

摘要 ( 87 )

PDF (781KB) ( 387 )

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肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是一小群能够自我复制和分化的细胞,它既具有干细胞的特征,又有自身独有的特点。结肠癌中肿瘤干细胞的发现为治愈结肠癌提供了新的治疗策略。目前关于结肠癌中肿瘤干细胞的分选标记和分子细胞学特性研究较多,但仍然存在较多争议。

肠道特异性基因表达调控元件研究进展

翟亚峰;束刚;张志岐;王松波;江青艳;

2010, 0(09): 32-37.

摘要 ( 131 )

PDF (1290KB) ( 705 )

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外源性基因在特定靶组织的高效、稳定表达是转基因动物研究和基因治疗的重要前提。外源基因在非靶组织中的异位表达一直是制约基因治疗技术的发展,影响转基因动物的安全性的重要因素。目前,一系列肠道特异性基因表达调控序列相继被克隆并鉴定。就上述调控序列的结构、功能和转录活性以及组织特异性作简要综述,为构建稳定、高效、特异性的嵌合型肠道转录调控元件提供理论依据,对环境友好型转基因动物的生产以及肠道性疾病有效的基因治疗研究具有重要参考价值。

微管骨架在丝状真菌极性生长中的作用

梁蒙;陈志玲;

2010, 0(09): 38-41.

摘要 ( 93 )

PDF (170KB) ( 437 )

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细胞极性的确立是真核生物发育过程中的关键环节,丝状真菌作为微生物具有典型的极性生长模式,微管骨架在极性生长中具有重要的作用。对近年来微管骨架在丝状真菌极性生长中的作用进行了综述。

纳他霉素及其生产菌育种研究进展

亓芳;王振东;刘霆;卢彩鸽;刘伟成;

2010, 0(09): 42-47.

摘要 ( 114 )

PDF (247KB) ( 599 )

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纳他霉素是一种高效、广谱、安全的抗真菌天然产物,广泛用做食品防腐添加剂和医用抗菌剂,对植物病原真菌也有强烈抑制作用。由于其主要通过褐黄孢链霉菌等发酵生产,因此高产菌种的选育是纳他霉素研究的热点之一。介绍了纳他霉素的主要理化性质、抑菌特性及其在不同领域的应用,综述了其生产菌育种研究进展,并对不同的育种方法进行了简要的比较分析,探讨了纳他霉素高产菌种选育的发展前景。

利用微生物治理重金属污染的几种途径

李樊;刘义;孙伟峰;何钢;

2010, 0(09): 48-50.

摘要 ( 91 )

PDF (175KB) ( 648 )

相关文章 | 计量指标

综述了当前利用微生物治理重金属污染的几种途径,重点突出了利用植物内生菌途径以及尝试应用生物代谢网络手段的间接途径,同时也涉及了利用微生物基因构建转基因植物途径、植物微生物联合修复途径,以期为从事微生物环境治理、微生物冶金的科研工作者提供思路。

基因打靶技术的研究进展

张丽娜;刘国安;杨红;

2010, 0(09): 51-55.

摘要 ( 144 )

PDF (203KB) ( 1642 )

相关文章 | 计量指标

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术,是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞(ES细胞)技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的试验手段,具有广阔的应用前景。对基因打靶技术原理、步骤、条件性基因打靶以及应用进行综述。

中国兰花资源分子标记鉴定研究进展

武海;蹇黎;朱利泉;

2010, 0(09): 56-60.

摘要 ( 97 )

PDF (198KB) ( 537 )

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系统阐述了RAPD、SSR、RFLP、AFLP和其它几类分子标记在中国兰花种质资源鉴定及遗传多样性研究中的应用进展。同时指出,应用分子标记研究兰属植物的遗传多样性对兰属的科学分类及新品种选育等具有指导意义,并提出展望。

基因预测与PCR技术相结合从cDNA文库中获取表达基因的研究

谢小燕;谭有将;李景全;陈芳;高剑峰;

2010, 0(09): 61-64.

摘要 ( 135 )

PDF (326KB) ( 568 )

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应用计算机工具、GenScan软件预测中国美利奴绵羊MHC Class I区段的BAC文库中453oⅡ克隆的基因数目、特性及结构,建立一种可以从cDNA文库中简便有效获取表达基因的技术方法。选取4个预测基因作研究对象设计引物,应用PCR技术,对已构建好的cDNA文库进行PCR扩增,回收"目的基因"片段并连接pGEM-T载体,转DH5α大肠杆菌中扩增后测序。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,cDNA文库中有目的条带,测序结果与GenBank进行Blast分析,分析结果表明这些基因与羊的基因均具有99%以上的相似性。因此应用基因预测分析与PCR结合技术可简便迅速的从cDNA文库中获取表达基因。

大豆脂肪氧化酶-3基因(Lox3)启动子的克隆及其瞬时表达分析

赵艳;史岩玲;钱丹丹;张庆林;闫帆;王庆钰;张艳;李景文;

2010, 0(09): 65-69.

摘要 ( 118 )

PDF (357KB) ( 427 )

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利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3p。通过农杆菌介导法在大豆种子中进行瞬时表达,GUS组织化学染色及荧光测定都显示出Lox3p驱动GUS基因表达的强度高于CaMV35S启动子。结果表明,该Lox3p启动子片段具备一定的胚特异表达特性,为探明大豆脂肪氧化酶-3基因启动子胚特异表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。

箭筈豌豆两个肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

张磊;刘志鹏;张吉宇;张妙青;王彦荣;

2010, 0(09): 70-75.

摘要 ( 84 )

PDF (1644KB) ( 438 )

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通过同源克隆获得了箭筈豌豆两个不同的Actin基因片段,为研究该箭筈豌豆其它基因的表达状况提供了内标参照。根据近缘物种Actin基因序列设计一对引物,通过RT-PCR技术分别从叶片和果实材料中克隆获得了两条不同的Actin基因片段。生物信息学分析表明,叶片中克隆的片段长度604 bp,编码201个氨基酸;果实中克隆的片段长度677 bp,编码225个氨基酸。两条序列与其它物种Actin基因的碱基序列相似度高于80%,氨基酸序列相似度高于93%。将来自叶片和果实的两条序列分别命名为VsACT7和VsACT11,并在GenBank注册,登录号分别为HM004434和GU946218。

香蕉MuNPR1-1基因的克隆与表达分析

李康;李胜军;于洋;董轶博;温瑞明;陈世凯;叶尚;裴新梧;

2010, 0(09): 76-81.

摘要 ( 98 )

PDF (1518KB) ( 528 )

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利用同源序列法克隆了中山大蕉中的MuNPR1-1和MePR-1基因,RT-PCR分析了MuNPR1-1和MePR-1基因对香蕉枯萎病4号小种的应答反应,结果表明抗病的中山大蕉幼苗叶片经香蕉枯萎病4号小种接菌诱导后,MuNPR1-1基因的表达水平在诱导后12 h达到最高,高表达持续到24 h,在72 h降到接近起始状态,病原相关蛋白MePR-1基因的表达在24 h达到最高,48 h开始下降,72 h又恢复到起始水平。而感病的粉蕉中MuNPR1-1在0、12和24 h无明显变化,在48-72 h表达增加,病原相关蛋白MePR-1基因的表达在0、12和24 h无明显变化,在48-72 h有增加,但表达强度低于中山大蕉。这表明了抗病的中山大蕉的MuNPR1-1基因对病原菌信号分子的反应比感病品种粉蕉敏感,有助于激活下游防卫基因的表达。

甘蔗液泡ATP酶C亚基基因克隆及序列分析

许志宇;王俊刚;杨本鹏;张树珍;

2010, 0(09): 82-86.

摘要 ( 94 )

PDF (1672KB) ( 497 )

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根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术分离了一个甘蔗ATP酶C亚基基因,命名为ShVHA-C。该基因cDNA全长1 312 bp,含有1 056 bp的完整阅读框架,编码351个氨基酸。序列比对及结构预测分析表明,ShVHA-C编码的氨基酸序列与水稻、小麦、苜蓿、绿豆和蓖麻中相应基因氨基酸序列的一致性分别达到94.10%、93.22%、91.15%、91.15%和91.74%,与水稻一致性最高。在整个二级结构中,含有233个α-螺旋(alpha helix),占66.38%;含有5个延伸链(extended strand),占1.42%;含有113个无规则卷曲(random coil),占32.19%。此蛋白不具有导肽。整个多肽链表现为亲水性,没有明显的疏水区域,初步认为甘蔗ShVHA-C编码蛋白是亲水性蛋白。

柑橘膨胀素相似基因的克隆及在采后胁迫条件下的表达

高雪;

2010, 0(09): 87-92.

摘要 ( 78 )

PDF (1171KB) ( 370 )

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从柑橘果皮褐变差减cDNA文库中分离出了一个编码膨胀素相似基因的片段,通过RACE技术分离获得了1 083 bp的全长cDNA(CsEXP,GenBank登录号FJ769424),编码254个氨基酸,开放阅读框为52-816 bp间;该成熟蛋白质的分子量为27.05 kD,等电点为7.93。CsEXP在褐变果皮中的表达明显高于对照。CsEXP在胁迫初期的表达分析显示,高温(40℃)抑制CsEXP的表达,而在伤害、低温(4℃)、无氧和乙烯处理后24 h内,CsEXP的表达都上升,表明这些处理诱导了CsEXP基因表达,可能CsEXP在对胁迫刺激的反应中起作用。由于低氧、伤害等胁迫条件都可能诱导果皮褐变的发生,因此CsEXP可能在对果皮褐变相关的胁迫反应中起作用。

南丰蜜橘β-胡萝卜素羟化酶基因内含子的鉴定和分析

冯唐锴;王幸斌;韩柱;叶水英;

2010, 0(09): 93-99.

摘要 ( 89 )

PDF (556KB) ( 342 )

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植物β-胡萝卜素羟化酶(简称β-羟化酶)是玉米黄素合成过程中的关键酶。柑橘、拟南芥、大白菜等多种植物β-羟化酶基因都已被克隆。柑橘中合成玉米黄素的中间产物β-隐黄素的含量远远高于其它植物,推测柑橘与其它植物的β-羟化酶基因相比有一些特殊的差异。本研究以南丰蜜橘为材料,克隆了柑橘β-羟化酶全长基因,并对该基因内含子进行定位和分析,结果表明南丰蜜橘β-羟化酶基因具有6个内含子,其中内含子6的长度远大于拟南芥和大白菜中相应的内含子。进一步研究发现内含子6中有两段特殊序列,一段长122 bp,另一段长95 bp。特别是122 bp序列两端具有反向重复序列,全序列中含有许多不同的转录起始原件。二级结构预测其对应RNA二级结构能构形成较稳定的发夹结构。

牡丹CTR1基因家族基因片段及其cDNA 3′-末端的克隆与序列分析

高娟;董丽;

2010, 0(09): 100-105.

摘要 ( 104 )

PDF (2301KB) ( 357 )

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以牡丹品种‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa‘Luo Yang Hong’)花瓣为材料,用CTAB法提取总RNA,根据已报道的CTR1(Constitutive Triple Response 1)蛋白的保守氨基酸序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增得到3条牡丹CTR1基因同源片段。利用其已知中间序列,通过3′快速扩增cDNA末端技术(3′RACE)及序列拼接,最终得到了这3个基因片段除5′末端外的全部cDNA序列,分别命名为PsCTR1、PsCTR2和PsCTR3。分析结果表明,由PsCTR1、PsCTR2和PsCTR3基因翻译的氨基酸片段与拟南芥和番茄的CTR1蛋白氨基酸序列的同源性均较高,分别为88%和85%;61%和61%以及70%和69%。

番茄LeDREB1转录因子基因RNAi载体的构建和鉴定

王迎波;单曙光;王贺;王磊;白由路;程宪国;

2010, 0(09): 106-110.

摘要 ( 130 )

PDF (355KB) ( 445 )

相关文章 | 计量指标

利用rd29A基因启动子的DRE元件从番茄(丽春)cDNA文库中通过酵母单杂交技术筛选得到转录因子基因LeDREB1。核苷酸序列测定结果表明,该基因片段全长1 782 bp,具有900 bp的cDNA开放阅读框序列,编码300个氨基酸。该基因属于AP2/EREBP家族[1],可能调控许多逆境应答基因的表达。运用RNA干扰的思路,设计特异性引物,扩增正向和反向基因片段。将LeDREB1正向+反向基因片段插入到pCAMBIA2300-OCS的35s启动子下游,构建干扰载体pCAM-RNAi-LeDREB1,通过酶切和测序鉴定证明目的片段与载体片段连接正确。这一载体的成功构建为进一步研究LeDREB1的功能和调控作用机制提供有效的材料与技术支撑。

大叶补血草质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因SOS1的克隆及对番茄的遗传转化

马苏勇;祝建波;王爱英;周玲玲;

2010, 0(09): 111-115.

摘要 ( 88 )

PDF (308KB) ( 353 )

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根据大叶补血草(Limonium gmelinii(Wildl.)Kuntze)SOS1基因序列(登录号:EU780458)设计特异性引物,通过RT-PCR方法从叶片中克隆得到质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因LgSOS1,将该基因重组于质粒pCAMBIA1390的CaMV35S启动子下游,构建含LgSOS1基因植物表达载体pCAMBIA1390-LgSOS1。通过根癌农杆菌介导法转化番茄(Lycopersicon esculen-tum),在1.2 mg/L6-BA、0.2 mg/L IAA、20 mg/L潮霉素和200 mg/L羧苄青霉素的MS培养基上进行选择培养,从抗性愈伤组织中获得再生植株。经PCR和RT-PCR检测,初步证实LgSOS1基因已整合至番茄的基因组中。

芸薹属原花青素跨膜转运蛋白TT12、AHA10基因家族RNA干扰载体的构建

冯瑜;马丽娟;闫楠;何芳莹;柴友荣;

2010, 0(09): 116-122.

摘要 ( 119 )

PDF (605KB) ( 405 )

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拟南芥TT12和AHA10基因分别编码MATE类型和H+泵类型的跨膜转运蛋白,介导原花青素单体向液泡的转运,对种皮色素的积累起重要作用。甘蓝型油菜是重要的油料作物,但缺乏黄籽基因型,现有黄籽材料表型不稳定,黄籽性状的分子机理不清,缺乏相关的分子育种。克隆了芸薹属TT12和AHA10基因家族的RNA干扰载体片段BTT12I和BA-HA10I,以基于pFGC5941而改造的植物RNA干扰基础载体pFGC5941M为骨架,构建了相应的RNAi载体pFGC5941M-BTT12I(简称pBTT12I)和pFGC5941M-BAHA10I(简称pBAHA10I),通过分子鉴定后转化农杆菌,获得工程菌株,有利于通过基因沉默技术研究TT12和AHA10基因在芸薹属种皮色素跨膜转运中的作用和机理,探索黄籽性状的分子育种。

四数獐牙菜ISSR-PCR反应体系的正交优化

杨路存;陈桂琛;周国英;宋文珠;李春丽;许璟瑛;

2010, 0(09): 123-128.

摘要 ( 91 )

PDF (1631KB) ( 414 )

相关文章 | 计量指标

采用正交试验与单因素设计相结合的方法,对四数獐牙菜ISSR-PCR反应体系中的4种主要因素(Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化筛选,PCR结果用统计软件SPSS16.0分析。结果显示,Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP这3因素的不同水平对PCR反应结果都有显着影响,其中Mg2+的浓度影响最大。筛选出各反应因素的最佳水平,建立四数獐牙菜ISSR-PCR反应的最佳体系(25μL)为3.0 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTP,0.6μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶,40 ngDNA,2.5μL10×buffer。这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行四数獐牙菜遗传多样性分析以及物种保护奠定了技术基础。

大薯ISSR-PCR反应体系的优化

程文杰;罗欣;周鑫;黄小龙;黄东益;

2010, 0(09): 129-133.

摘要 ( 101 )

PDF (460KB) ( 296 )

相关文章 | 计量指标

以大薯为材料,通过试验优化了ISSR-PCR反应体系中的主要成分用量及浓度、退火温度对大薯ISSR扩增结果的影响。试验表明:在20μL的反应体系中,Mg2+的浓度为1.875 mmol/L,dNTPs浓度为0.500 mmol/L,引物的浓度为1.0μmol/L,TaqDNA聚合酶的用量为1U,模板DNA的用量为60 ng,在48℃的退火温度下45个循环,能得到清晰、多态性高的ISSR带谱。

cDNA-AFLP比较当归早薹基因转录差异反应体系的建立

于光;段金廒;宋秉生;何子清;

2010, 0(09): 134-137.

摘要 ( 80 )

PDF (317KB) ( 426 )

相关文章 | 计量指标

建立了利用cDNA-AFLP技术对当归早薹相关的差异表达基因进行筛选的方法,优化了影响cDNA-AFLP试验结果的关键因子,包括选择性扩增模板量、酶离子浓度、dNTP浓度。结果表明,以1μL稀释10倍的预扩增产物作为模板、1.5 mmol/LMgCl2、0.6 mmol/L dNTP,进行的选择性扩增反应获得DNA片段分子量范围较广,在100-1 000 bp长度范围中均有扩增片段,是较为理想的选择性扩增的结果。聚丙烯酰胺凝胶电泳验证了试验结果,在优化条件下利用部分引物组合可以较好地比较早薹当归在基因转录水平发生的差异。

向日葵菌核病根际拮抗菌的筛选与鉴定及其拮抗机理的初步研究

侯启会;丁延芹;杜秉海;靳奉理;路晓萌;孙臻鑫;周瑞军;姚良同;

2010, 0(09): 138-142.

摘要 ( 116 )

PDF (642KB) ( 440 )

相关文章 | 计量指标

利用梯度稀释和对峙试验的方法,从向日葵根际土壤筛选到18株对向日葵菌核病病原菌—核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)有拮抗效果的细菌,其中1株具有较强的拮抗效果,命名为XRK4。经过形态观察及16S rDNA序列分析,将XRK4鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。研究表明XRK4具有β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性。设计引物以XRK4的基因组DNA为模板扩增得到长度为732 bp的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的完整基因,其开放阅读框架编码243个氨基酸。XRK4可能因产生葡聚糖酶,降解病原菌细胞壁而具有拮抗活性。

两株高DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制活性的药用植物内生真菌筛选

杨国武;黄秀丽;赖心田;黄雅丽;周世宁;

2010, 0(09): 143-148.

摘要 ( 86 )

PDF (477KB) ( 427 )

相关文章 | 计量指标

从7种中国南方药用植物中分离了278株内生真菌,分析了其发酵液甲醇提取物对人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTo-poI)松驰活性的抑制能力。对2株具有高hTopoI抑制力的内生真菌(LF4-7L和LF6-1)进行了深入研究。通过发酵物对hTo-poI抑制能力的时间变化曲线,表明2株内生真菌的hTopoI抑制物质在其生长停滞阶段才大量产生和积累。经分子鉴定,LF4-7L可能是阴炭团菌(Hypoxylon stygium),而与LF6-1L最相近的是毛竹基腐病菌(Arthrinium phaeospermum)。

甘草内生真菌的分离及鉴定

帖卫芳;胡鸢雷;祝建波;林忠平;

2010, 0(09): 149-153.

摘要 ( 119 )

PDF (447KB) ( 676 )

相关文章 | 计量指标

植物体内普遍存在着内生菌,为了探寻传统药材甘草的质量与其内生菌之间可能存在的关系。对采自新疆的甘草根部进行了内生真菌的分离及鉴定。选用CYM真菌培养基,对其内生真菌进行分离及纯化,选择其中最占优势的两种菌落分别进行了菌落形态观察及菌丝形态(棉兰染色)观察,以及基因组DNA的18S rDNA和ITS rDNA序列鉴定和系统进化分析。本研究结果表明从甘草根部主要分离到两种内生真菌,分别属于Fusarium镰刀菌属和Gibberella赤霉菌属。

RNP免疫沉淀技术在斑马鱼胸苷酸合成酶基因翻译调控研究中的应用

宋春霞;牛荣丽;王征;林秀坤;

2010, 0(09): 154-158.

摘要 ( 128 )

PDF (1504KB) ( 488 )

相关文章 | 计量指标

为检测斑马鱼胸苷酸合成酶基因的表达产物TS蛋白在体内是否结合于自身的mRNA,并进一步检测TS蛋白与c-myc mRNA的结合情况。采用免疫沉淀结合得到相应的RNA,即RNP免疫沉淀技术,进一步结合RT-PCR技术分析与蛋白结合的核酸序列,并用Western蛋白印迹分析了TS蛋白。结果显示,人的TS106单克隆抗体可以免疫沉淀斑马鱼的TS蛋白,抗体免疫沉淀的核酸中含有TS mRNA和c-myc mRNA。在斑马鱼中,TS蛋白在体内结合于自身的TS mRNA,并能结合c-myc mRNA,参与基因的表达调控,阐明了TS的翻译调控机制在体内条件下的作用方式,同时也为构建斑马鱼抗肿瘤药理模型提供了理论基础。

科学出版社新书

2010, 0(09): 158-164.

摘要 ( 63 )

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纳米金标记基因芯片技术的优化

郑志伟;常弘;党华;张国萍;肖白玉;杨登亮;钟惟德;

2010, 0(09): 159-164.

摘要 ( 96 )

PDF (734KB) ( 352 )

相关文章 | 计量指标

为了建立稳定的纳米金标记基因芯片技术,对点样液,预杂交,纳米金浓度,银染时间等进行了优化,并研究了该芯片方法的灵敏度。结果表明,使用50%DMSO作为点样液效果最好,预杂交会导致杂交信号降低70%,银染时间控制在15 min时候显色清晰且背景较低。该检测方法的灵敏度可达到80 fmol/L,可望在芯片检测领域得到更多的应用。

金葡菌肠毒素促鸡淋巴细胞增殖及增强疫苗效价的初步探讨

冯永宁;张惠文;徐明恺;徐威;张成刚;

2010, 0(09): 165-168.

摘要 ( 81 )

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为了探讨了金黄色葡萄球菌肠毒素C2(rSEC2)作为家禽免疫增强剂的可行性,利用MTT比色法,研究了rSEC2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞的增殖影响;利用微量凝集抑制试验(HI),研究了连续口服rSEC2对家禽疫苗免疫效果的影响。试验结果表明,最低浓度为1 ng/mL的rSEC2即可在无ConA情况下显着提高淋巴细胞活性,浓度梯度组间差异显着,存在剂量依赖性;对点眼免疫新城疫(ND)减毒疫苗的鸡群进行抗体检测结果显示,给药组明显高于对照组,且延长了抗体持续时间。证明了rSEC2可有效激活家禽免疫系统,并有可能作为免疫增强剂而应用于家禽饲养。

大鼠gremlin1真核表达载体的构建及表达

刘艳玲;张贺吉;吴江锋;柳长柏;

2010, 0(09): 169-172.

摘要 ( 102 )

PDF (2777KB) ( 326 )

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构建大鼠gremlin1的真核表达载体pcDNA-gremlin,并观察其在真核细胞中的表达。从大鼠脑组织中提取mR-NA通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(nest-PCR)获得编码gremlin1的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染HSC-T6细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内grem-lin1的表达。结果显示,构建了大鼠gremlin1的真核表达载体,转染HSC-T6细胞培养48 h后,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染HSC-T6细胞内gremlin1的表达显着增高。成功构建了真核表达载体pcDNA-gremlin,为研究gremlin在大鼠肝纤维化发生发展过程中的作用及作用机制奠定了基础。

鼠OAZ1基因的真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

刘梦瑶;韩钰;蔡富强;何玲;王艳林;

2010, 0(09): 173-176.

摘要 ( 102 )

PDF (1371KB) ( 365 )

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构建鼠OAZ1基因真核表达质粒,观察OAZ1-GFP融合蛋白在绿猴肾细胞COS7中的表达。利用RT-PCR的方法获得鼠OAZ1基因,再利用重叠延伸PCR缺失掉OAZ1序列中的205位碱基T,由此获得无需阅读框移码即可编码全长OAZ1的突变基因。将此突变基因克隆入真核表达载体pEGFP-N1获得重组质粒pEGFP-N1-OAZ1-T。将此质粒瞬时转染COS7后,采用RT-PCR,Western blotting,免疫荧光技术观察检测目的基因的表达情况。结果显示,酶切和测序证明质粒pEG-FP-N1-OAZ1-T构建正确,转染COS7细胞后,OAZ1-GFP融合蛋白能在细胞中高效表达。成功构建了pEGFP-N1-OAZ1-T真核表达质粒,在COS7细胞内,该质粒能成功指导OAZ1-GFP融合蛋白合成。

透明颤菌血红蛋白在枯草芽孢杆菌WB800中的表达及其对菌体生长的影响

廖瑜玲;任楠;李俊星;杨慧林;

2010, 0(09): 177-180.

摘要 ( 114 )

PDF (288KB) ( 440 )

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通过基因工程的方法,将透明颤菌血红蛋白基因(vhb)置于大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pBEP43-DFE的强启动子P43下,构建重组质粒pBEP43-vhb,并通过化学感受态法转入枯草杆菌WB800中,转化子经过酶切和PCR验证。采用一氧化碳差异色谱法测定转入的血红蛋白基因具有表达活性。通过限氧试验表明,血红蛋白基因能在低氧环境下促进菌体的生长。

枯草芽孢杆菌BS224的16S rDNA序列测定及系统进化分析

刘杰;张琼;房春红;蔡文君;

2010, 0(09): 181-184.

摘要 ( 93 )

PDF (816KB) ( 403 )

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利用细菌通用引物,通过PCR的方法,对菌株BS224的16S rDNA基因进行扩增,PCR产物经胶回收试剂盒纯化后测序,测序结果与GenBank上已登录的高同源16S rDNA序列进行比较,并构建系统进化树,结果BS224与Bacillus subtilisstrain ZHA9相似性最高,达到99.38%,与模式菌株Bacillus subtilisstrain 168的相似性也达到98.55%,结合其形态特征、培养特征、生理生化特性的分析结果,可以确定BS224属于枯草芽孢杆菌属。

从虎皮鹦鹉粪便中分离产细菌素菌株及其细菌素特性分析

陈新练;陈仪本;

2010, 0(09): 185-190.

摘要 ( 127 )

PDF (434KB) ( 623 )

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从虎皮鹦鹉(Melopsittacus undulatus)的粪便中分离得到一株产广谱细菌素的菌株,其细菌素产物对革兰氏阳性和阴性细菌均有较强抑制作用。经形态学、生理生化反应和16S rDNA分子方法鉴定,该菌株初步鉴定为干酪乳杆菌。用硫酸铵分级沉淀得到的细菌素粗提物,作温度、pH值、蛋白酶的敏感性测定,结果显示该细菌素经100℃处理10 min抑菌活性不变,当pH4.0时,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到99.06%和86.14%,并且对多种蛋白酶表现出敏感性。与Nisin标准品的抑菌效价对比,得到粗提物的效价为204.87 IU/mL。

病毒感染条件下家蚕ORC的表达变化

杨慧鹏;罗素娟;李轶女;张志芳;沈桂芳;张耀洲;

2010, 0(09): 191-193.

摘要 ( 84 )

PDF (732KB) ( 325 )

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DNA复制原点识别复合体(origin recognition complex,ORC)识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能。利用荧光定量PCR技术监测感染核型多角体病毒(BmNPV)后,家蚕五龄起蚕脂肪体组织中ORC各个亚基的表达的变化。在感染早期,ORC的拷贝数有所下降,随后表达量增加,并出现两个峰值。病毒感染36 h后,ORC各个亚基的表达量均下降。家蚕感染病毒后,脂肪体组织中ORC的表达趋势与病毒DNA复制的趋势相近,推测BmORC参与了病毒DNA的复制。

家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

金小宝;王婷婷;朱家勇;李小波;马艳;褚夫江;卢雪梅;

2010, 0(09): 194-197.

摘要 ( 106 )

PDF (1719KB) ( 442 )

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拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。

动物病原大肠杆菌K88的绿色荧光蛋白基因标记及其稳定性研究

车建美;刘波;蓝江林;

2010, 0(09): 198-204.

摘要 ( 117 )

PDF (682KB) ( 963 )

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成功地将gfp/luxAB双标记基因整合到K88染色体上,得到绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌K88∶gfp/lux,其菌体和菌落形态与原始菌株K88完全一致,引入的新质粒不影响菌株的基本形态。从含gfp基因的质粒DNA和K88∶gfp/lux基因组DNA上均可扩增出大小约700 bp的gfp基因片段。大肠杆菌特异性基因检测结果表明,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约260 bp的大肠杆菌特异性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株均为大肠杆菌。在相同的培养条件下,K88∶gfp/lux和K88的生长曲线的变化趋势基本相同。通过检测肠毒性基因(estA)发现,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约158 bp的肠毒性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株在肠毒性方面未发生变化。在无选择压力条件下将K88∶gfp/lux菌株每隔12 h连续转接10次后,所有菌落均保持着均匀并且强烈的绿色荧光,说明标记基因在K88∶gfp/lux中的表达稳定性很高。K88∶gfp/lux和K88在中性偏酸性的环境中生长较好,当初始pH值偏碱性时,生长较差。

高碱性纤维素酶产生菌的筛选及鉴定

吴琼;苑琳;路福平;申明华;刘纯燕;白宇辰;

2010, 0(09): 205-209.

摘要 ( 106 )

PDF (394KB) ( 485 )

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从化纤厂土样中分离得到菌株AC-4,碱性纤维素酶活力达0.602 IU/mL。通过分析菌株形态学特性、培养特征及16S rDNA序列,确定该菌株为短小芽孢杆菌。对该菌所产碱性纤维素酶的酶学性质进行测定,确定其最适作用pH为9.5,最适作用温度为50℃。

一株石油烃降解菌分子鉴定及特性分析

孙国华;任利华;刘爱英;姜向阳;刘义豪;

2010, 0(09): 210-214.

摘要 ( 93 )

PDF (970KB) ( 504 )

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从受污海水中分离筛选了具有石油烃降解能力的降解菌Bac1020,经PCR扩增得到1 497 bp长16S rDNA序列,通过Blast比对,与主要石油烃降解菌属16S rDNA序列构建系统发生树,鉴定其为不动杆菌(Acinetobactersp.)。降解菌(Acinetobactersp.)在72 h内生长稳定,对石油烃的降解率随时间的延长而不断增加。建立了快速筛选及鉴定石油烃降解菌的方法,应用于海洋石油烃污染的生物降解。

菌落PCR快速扩增工业酿酒酵母基因组DNA片段

阳辛凤;高秋芳;李锡敏;郭安平;孔华;贺立卡;

2010, 0(09): 215-219.

摘要 ( 152 )

PDF (514KB) ( 1140 )

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针对工业酿酒酵母细胞破壁难和提取基因酵母组DNA费时长(2-3 h/样品)的问题,研究了SDS-微珠涡旋破壁的方法。以破壁液上清为模板进行菌落PCR扩增酿酒酵母南阳K基因组中铜抗性蛋白基因(cup1)片段和rDNA片段。结果表明,在不需要提取酵母基因组前提下,利用该方法能有效地扩增酵母基因组DNA片段,同时该方法也适用于对转基因酿酒酵母进行菌落PCR从而实现对转化子的准确和快速地鉴定筛选,是一种成本低和易于操作的适于处理大量样品的方法。

《中国中医药现代远程教育》征稿启事

2010, 0(09): 220-221.

摘要 ( 77 )

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