生物技术通报

付畅孙玉刚傅桂荣

2013, 0(1): 1-7.

摘要 ( 267 )

PDF (1189KB) ( 1276 )

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盐生植物是研究植物耐盐分子机制和分离耐盐基因的良好材料，可以反映植物对盐胁迫的适应策略。综述盐生植物响应盐胁迫的转录因子、渗透平衡调节、离子平衡调节、氧化还原平衡调节、光合作用调节及代谢变化，反映盐生植物在多个方面适应盐胁迫的策略。此外，还对盐生植物耐盐分子机制的研究前景作了展望。

烟草早花机理研究进展

杨静, 陈杰, 郭鸿雁, 陈建军, 贺广生, 邓世媛, 王维

2013, 0(1): 8-15.

摘要 ( 239 )

PDF (1287KB) ( 1325 )

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早花严重影响着烟草的质量与产量，随着对植物开花机理研究的不断深入，对烟草早花的研究也已从对温度、光照、水分和养分等生理方面的研究发展到了分子水平研究，然而烟草早花的成因及其影响因素至今仍未有明确的定论。从影响烟草成花的生理与分子机理及外界环境条件等方面进行分析和综述，以期为传统的研究方法与分子技术相结合提供参考依据，为烟草早花机理的研究提供参考。

利用转基因途径提高植物非生物胁迫耐受性的研究进展

刘春, 曹丽敏, 李玉中, 彭晚霞, 麻浩

2013, 0(1): 16-24.

摘要 ( 302 )

PDF (1406KB) ( 1187 )

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包括干旱在内的非生物胁迫是农业生产中导致作物减产的主要因素。利用现代分子生物学技术阐明非生物胁迫耐受性的控制机理，以及工程化胁迫耐受性作物均基于特异胁迫相关基因的表达。因此，发展胁迫耐受性植物的基因工程可能是增强作物品种胁迫耐受性的一条捷径。但转基因品种产生不仅受限于转化过程的是否成功，而且受限于胁迫耐受性是否适当整合；仍需阐明胁迫条件下转基因植物的评价，以及转入基因在整体植株水平的生理效应。综述利用转基因技术提高植物非生物胁迫耐受性的研究进展，讨论在接近大田环境条件下的非生物胁迫响应的评估和转基因植物耐受性的检测标准。

小RNA 的组成和功能——三类内源小RNA 的研究概况

李泽, 白荷露

2013, 0(1): 25-30.

摘要 ( 245 )

PDF (2372KB) ( 1631 )

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生物体中存在许多非编码的小RNA，可通过与靶mRNA 完全或不完全的碱基互补配对，致使mRNA 断裂或翻译抑制，从而达到调节基因表达的目的。这些小RNA 组成了细胞中高度复杂的RNA 调控网络，在生物的各项生理活动、生长发育过程中发挥着十分重要的作用。内源小RNA 主要包括miRNA、siRNA 和piRNA 三类，概述这3 种小RNA 的生物发生，作用机制及功能等方面的研究进展。

人参皂苷CK 的研究进展

于雷, 李成龙, 于珊珊

2013, 0(1): 31-35.

摘要 ( 545 )

PDF (1266KB) ( 2261 )

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人参皂苷coumpound K（CK）是人参中原人参二醇型皂苷在人体肠道内的主要代谢产物，属于稀有人参皂苷。人参皂苷CK 独特的生物活性已经引起了人们广泛关注，针对它的科学研究也日益增多。因此，有必要介绍近年来人参皂苷CK 药理活性和制备方法方面的研究进展。

C 型尿钠肽在动物繁殖过程中的作用研究进展

贾振伟, 张家新, 安磊, 吴中红, 田见晖

2013, 0(1): 36-40.

摘要 ( 239 )

PDF (1242KB) ( 544 )

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C 型尿钠肽（CNP）为尿钠肽家族成员之一，作为自分泌及旁分泌因子不仅具有维持心血管系统功能稳态、调控细胞增殖及促进骨骼生长等功能，并且在动物繁殖过程方面具有重要的作用。近年研究揭示CNP 是小鼠体内减数分裂抑制物质，而且CNP 能够促进卵泡发育，增加促性腺激素刺激后的排卵数量。基于此，CNP 在用作生理性的减数分裂抑制剂增强卵母体外发育及提高家畜的超排效率方面具有重要的应用前景。因此，综述CNP 结构、作用机制、在动物繁殖过程的作用及应用前景。

海洋动物Toll 样受体的研究进展

孙红娟, 周遵春, 崔军, 王秀利

2013, 0(1): 41-48.

摘要 ( 210 )

PDF (2552KB) ( 1478 )

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Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）是先天性免疫系统中古老的模式识别受体家族，一直都是免疫学家研究的焦点。从最古老的后生动物——海绵到高等的海洋脊椎动物——硬骨鱼中都有TLR 存在。阐述处于不同进化地位海洋动物的TLR 及其信号通路分子，TLR 基因结构域混编和多态性机制，有助于揭示脊椎动物TLR 的起源和预防海洋经济动物病害。

代谢组学研究进展及其应用

周秋香, 余晓斌, 涂国全, 王强, 胡文军, 李汉广

2013, 0(1): 49-55.

摘要 ( 365 )

PDF (1232KB) ( 2867 )

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代谢组学是系统生物学的重要组成部分，其通过研究生物体代谢物的变化来认识生命体的生理与生化状态，从而找出其中隐藏的规律。对代谢组学的含义，研究任务进行介绍；综述代谢组学的产生和技术平台及其在植物、微生物、疾病诊断及毒物学等领域的应用，并对代谢组学的发展趋势以及面临的挑战等问题进行评述。

乙型脑炎及其疫苗概况

沈强, 史子学, 魏建超, 马志永

2013, 0(1): 56-62.

摘要 ( 292 )

PDF (4657KB) ( 1037 )

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乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的，在自然界中主要以鸟、猪为宿主，经蚊为主的虫媒传播的一种人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲地区及环西太平洋地区，已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一，严重威胁着人类健康，并影响畜牧业特别是养猪业的发展。WHO 公布数据显示，每年大约有50 000 例乙型脑炎患者，造成至少10 000 例死亡及15 000 例神精后遗症患者，但至今仍无有效的治疗措施，接种疫苗依然是预防JEV 感染的最佳途径。介绍JE 的流行病学特点，乙型脑炎的发病情况，重点综述国内外市场上使用的JE 疫苗情况及其最新研究进程，希望对我国JE 疫苗的使用及研发提供有益参考。

几种DNA 分子标记技术及其在茶树种质资源研究中的应用

晏嫦妤, 李家贤, 黄华林, 吴华玲, 乔小燕, 何玉媚

2013, 0(1): 63-67.

摘要 ( 219 )

PDF (1237KB) ( 781 )

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对近年来发展的几种DNA 分子标记技术ACGM、SRAP、TRAP、SCAR、RSAP 及SCoT 的原理、特点进行介绍，综述这些DNA 分子标记技术在茶树种质资源研究中的应用，并对其在茶树种质资源研究中的应用前景进行了分析。

D-氨基酸检测方法研究进展

李辉欣, 鞠建松, 张琳琳, 徐书景

2013, 0(1): 68-72.

摘要 ( 255 )

PDF (1722KB) ( 1640 )

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自然界中存在20 种基本氨基酸，除甘氨酸外都有两种互成镜像的对映体D-型和L-型。长期以来，人们认为D-氨基酸仅存在于微生物中，参与构成细胞壁肽聚糖层。但随着分析方法的发展，人们相继在多种生物体中（包括人体）发现了多种 D-氨基酸，D-氨基酸才引起人们的高度重视，并意识到它们在医药、农药和食品等的组成中起着重要作用。D-氨基酸检测方法还需要不断发展与完善，以便更好地分析和认识D-氨基酸的重要作用。主要介绍酶法、气相层析法、高效液相法及生物传感器等检测方法。

拟南芥RPS14 基因的克隆表达及功能初步研究

范艳荣, 刘莹, 张飞云

2013, 0(1): 73-77.

摘要 ( 232 )

PDF (1918KB) ( 886 )

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拟南芥RPS14（Ribosomal protein S14）是从拟南芥中分离出的一种核糖体蛋白，是核糖体40S 亚基的组成成分，属于S11P 核糖体蛋白家族，主要负责RNA 转录后加工。提取拟南芥总RNA，用RT-PCR 技术得到RPS14 全长基因，经T-A 克隆插入到pEASY-T3 载体上。利用亚克隆法成功构建pGEX-6P-1-RPS14 原核表达质粒。GST-RPS14 融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，分子量约为43 kD。运用同样方法构建pET-28a-AK6 原核表达质粒，获得大小约为26 kD 的HIS-AK6 融合蛋白。运用体外pull-down 技术，并用SDS-PAGE 和Western blot 进行验证，证明拟南芥RPS14 蛋白与AK6 蛋白之间存在相互作用。因此，推测拟南芥的AK6 与RPS14 蛋白共同参与核酸代谢过程，影响RNA 转录后加工，进而抑制拟南芥茎细胞的生长，使植株表现矮小特征。

转ZjAPX 基因拟南芥对NaCl、干旱胁迫的耐性研究

郭慧娜, 孟玉平, 郝子琪, 李倩, 曹秋芬

2013, 0(1): 78-82.

摘要 ( 196 )

PDF (2314KB) ( 857 )

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旨在探讨枣树抗坏血酸过氧化物酶基因ZjAPX 在植物渗透胁迫中的作用。将ZjAPX 基因转入到模式植物拟南芥，以野生型（WT）、转ZjAPX 拟南芥株系T2 为试材，进行不同浓度NaCl 胁迫和干旱胁迫。结果表明，转基因株系的种子萌发、植株生长均优于野生型株系；荧光定量PCR 检测转基因拟南芥植株在干旱和盐胁迫处理10 d 后目的基因ZjAPX 的表达量显著高于野生拟南芥，表明ZjAPX 的高表达明显提高了植株的抗旱和耐盐性。

巴西橡胶树HbNTL1 基因启动子的克隆与序列分析

康桂娟, 黎瑜, 曾日中, 聂智毅

2013, 0(1): 83-88.

摘要 ( 170 )

PDF (1615KB) ( 943 )

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膜结合NAC 转录因子（NTLs）是植物NAC 转录因子家族中一类C 端具有跨膜结构域（transmembrane motifs，TMs）的转录调控因子，在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中具有重要的功能。根据巴西橡胶树（Hevea brasiliensis）膜结合类NAC 转录因子HbNTL1 基因cDNA 序列，利用基因组步移的方法从巴西橡胶树叶片基因组DNA 中克隆获得了HbNTL1 基因上游1 718 bp 的调控片段。序列分析表明，该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域，转录起始位点A 位于起始密码子上游206 bp 处。该启动子序列除了含有多个TATA-box、CAAT-box 等基本顺式作用元件外，还存在赤霉素、茉莉酸和脱落酸等激素响应元件以及大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件，如ABRE、DOFCOREZM、MYBCORE、W-box 和MYCCONSENSUSATHSE等反应元件，表明HbNTL1 转录因子可能是一个逆境胁迫相关NAC 转录因子，在橡胶树抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要功能。

应用基因芯片分析植物内生菌醇提取物处理条件下水稻的基因表达图谱

肖军, 杨涛, 杨镇, 王红, 王丽萍, 陈珣, 肇莹, 王娜, 龚娜

2013, 0(1): 89-95.

摘要 ( 204 )

PDF (1775KB) ( 929 )

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为探索植物内生菌R（人参）与D（越橘）醇提取混合物RD 对水稻的促进生长、增强抗病性的作用机制，采用基因芯片技术对RD 处理的水稻基因组进行分析，检测RD 处理水稻后差异表达基因。结果显示，检测到差异表达基因1 171 个，其中上调表达基因671 个，下调表达基因500 个。根据基因芯片的试验结果，采用Go 注释系统对差异表达基因进行功能注释表明，主要为刺激应答、转录调控、生理功能、结合功能、细胞过程、代谢功能等。代谢途径的变化存在明显差异，表达量上调代谢通路39 条，表达量下调代谢途径24 条。说明植物内生菌R 与D 醇提取混合物处理影响水稻性状的表达不是某个基因孤立、单一的作用，而是多方面、多层次共同作用的结果。

转基因水稻华恢1 号检测用质粒标准分子研制

李亮, 王晶, 臧超, 隋志伟, 赵正宜

2013, 0(1): 96-101.

摘要 ( 202 )

PDF (1717KB) ( 666 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究，未能成为国家级标准物质。因此，按照国家一级标准物质技术规范，研制了用于检测转基因水稻华恢1 号的质粒标准分子，内容包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、可替代性研究、均匀性检验、稳定性考察、定值与不确定度评估。结果表明，该质粒分子标准物质半年内稳定，可替代基因组作为华恢1 号定量的阳性标准。

转基因玉米种子快速筛查方法研究与应用

吴明生, 云晓敏, 宋歌, 牛茜, 彭瑞迪

2013, 0(1): 102-106.

摘要 ( 204 )

PDF (1783KB) ( 761 )

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转基因种子快速筛查技术研究与应用对于加强农业转基因生物安全管理至关重要。将DNA 热碱提取法和复合荧光PCR 技术相结合，建立起玉米种子转基因成分快速筛查方法。结果显示，该方法不仅能保证检测的准确性和灵敏性，而且还大大降低假阳性发生率，提高转基因筛查的效率，适合大批量样品的快速检测。

复合EST-SSR 标记在大白菜品种鉴定中的应用

赵新, 王永, 兰青阔, 陈锐, 李欧静, 余景会, 朱珠, 郭永泽

2013, 0(1): 107-110.

摘要 ( 179 )

PDF (9976KB) ( 502 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

利用EST-SSR 分子标记技术，对12 份大白菜品种鉴定方法进行了研究。通过对GenBank 数据库中公布的大白菜EST 序列的分析，合成了30 对核心EST-SSR 引物，其中21 对均可得到有效扩增，10 对具有较高的多态性。为了更加高效的对大白菜品种进行鉴定，根据这10 对多态性较高的引物对12 份市售大白菜品种鉴定的结果及扩增条带的相互位置差异，研制了由多个引物对组成的2 套复合EST-SSR 标记，建立了多重SSR 的反应体系及反应条件。筛选得到的2 套标记组合，多态率分别为88.9% 和97.0%，多态信息量均为0.910%，数据表明这2 套复合标记技术可以表达大白菜品种间的多态性，高效准确的对12 份大白菜品种进行鉴定。

甘蓝型油菜高效离体再生体系的建立

杨长友, 袁中厚, 郑小敏, 张涛

2013, 0(1): 111-115.

摘要 ( 188 )

PDF (2690KB) ( 836 )

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以甘蓝型油菜（Brassica napus L.）HC8 为材料，从无菌苗苗龄、预培养基激素浓度、预培养天数、6-BA 及NAA 的浓度等方面对影响油菜组织培养的因素进行了分析研究，建立了甘蓝型油菜品系HC8 的离体再生技术体系。结果表明，该油菜组织培养的最佳苗龄为5 d ；最佳预培养时间为5 d，最佳2，4-D 浓度为1.0 mg/L ；子叶最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/LNAA+3.5 mg/L AgNO3 或MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+3.5 mg/L AgNO3，该条件下子叶愈伤组织诱导率最高可达100%，再生频率及分化频率分别可达88.0% 和108.33% ；下胚轴最佳诱导培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+3.5 mg/L AgNO3，子叶愈伤组织诱导率最高可达95.24%，再生频率及分化频率分别可达81.82% 和104.55% ；最佳生根培养基为MS+0.5 mg/L NAA，生根率最高为90.0%。

四倍体刺槐枝条韧皮部总蛋白质双向电泳体系建立及应用

张胜, 赵忠, 刘昭军, 张博勇, 宗建伟, 张玲玲

2013, 0(1): 116-122.

摘要 ( 191 )

PDF (2963KB) ( 746 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

采用TCA/ 丙酮法对四倍体刺槐枝段韧皮部全蛋白质进行提取，通过对IPG 胶条pH 梯度、分离胶浓度的选择，上样量、等电聚焦条件的优化，建立起四倍体刺槐枝段韧皮部蛋白质双向电泳体系。研究结果表明：采用TCA/ 丙酮法提取四倍体刺槐枝段韧皮部全蛋白质，选用pH4-7 的17 cm IPG 胶条，考马斯亮蓝染色上样量550 μg，等电聚焦IEF 聚焦总伏小时数从60 000 Vh 提高到80 000 Vh，并采用12% 的分离胶对四倍体刺槐枝段韧皮部全蛋白进行双向电泳，能得到背景清晰、蛋白质点数相对较多，分离度高且重复性好的电泳图谱。利用建立的体系进行双向电泳分离蛋白质，能直接挖点送质谱分析。采用该体系分析四倍体刺槐硬枝扦插生根愈伤组织阶段蛋白质表达差异，共筛选出83 个差异蛋白质点，其中上调蛋白15 个，新产生蛋白22 个，下调蛋白22 个，缺失表达24 个。

Bloom 综合症(BS) 和Rothmund-Tho-Bloom 解旋酶突变体的克隆与表达

张金彪, 许厚强, 骆衡, 许庆贺, 陈祥, 李坤

2013, 0(1): 123-128.

摘要 ( 328 )

PDF (2903KB) ( 753 )

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blm 基因的突变可导致Bloom 综合症（BS），Bloom 综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病，患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS 患者细胞中的BLM 的RecQ-Ct 区域的1 036 位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术，通过两轮重组PCR，构建985 位和1 036 位氨基酸突变的BLM 解旋酶多点突变基因，克隆到载体pET-28a 中，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。分离纯化获得了高纯度（>95%）的双突变型BLM 解旋酶，并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS 的致病机制奠定基础。

Ezrin 多克隆抗体制作及应用

张宏玲, 万骏, 严飞, 张新胜, 曹威, 陶伟, 黄来强

2013, 0(1): 129-133.

摘要 ( 194 )

PDF (2072KB) ( 730 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

构建Ezrin 原核重组表达载体pET-28a（+）-ezrin，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，诱导获得Ezrin 蛋白，将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠（KM），获得抗血清，采用ELISA 和Western blotting，免疫荧光测定其效价和特异性。ELISA 对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应；通过Western blotting 对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带，其相对分子量为82 kD，与预测分子量相符；免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin 蛋白，且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G 对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的Ezrin 多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。

GST-Smad4 融合蛋白的表达与纯化

梅竹, 杨予涛, 徐志卿

2013, 0(1): 134-138.

摘要 ( 245 )

PDF (2741KB) ( 652 )

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旨在原核表达Smad4 基因，纯化获得GST-Smad4 融合蛋白。以人表皮HaCaT 细胞的cDNA 为模板，利用PCR 扩增含有BamH I 和Sal I 酶切位点的Smad4 基因；然后将其克隆到pGEX-4T-1 原核表达载体中，将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21（DE3）；用IPTG 诱导表达，再利用MagneGST particles 亲和纯化GST-Smad4 融合蛋白；最后通过Western blot 鉴定此融合蛋白。结果显示，成功构建pGEX-4T-1-Smad4 原核表达载体；30℃条件下，0.2 mmol/L 的IPTG 能诱导出大量的可溶性GST-Smad4 蛋白；经MagneGST particles 纯化的GST-Smad4 蛋白可被Smad4 的抗体特异识别。纯化的GST-Smad4 蛋白可用于后续的生物学研究。

利用转基因烟草表达人胰高血糖素样肽1 的研究

梁宏伟, 陈发菊, 王玉兵, 李凤兰, 陆海

2013, 0(1): 139-143.

摘要 ( 248 )

PDF (3878KB) ( 565 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

人胰高血糖素样肽1（hGLP1）是一种短肽激素，是近年来备受关注的治疗糖尿病最有前景的候选药物。在设计合成hGLP1 基因并构建植物表达载体的基础上，通过农杆菌介导将hGLP1 基因导入烟草基因组中，获得转化再生植株，经过PCR扩增和Southern blot 分析，证实hGLP1 基因已整合进入6 个株系的烟草基因组中。GUS 组织化学染色表明，与目的基因融合的报告基因在转基因烟草中获得表达。Western blot 检测表明，其中2 个株系转基因烟草叶片中能够检测到hGLP1 融合蛋白的表达。初步的动物试验表明该融合蛋白具有一定的降血糖生物活性。

噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽

徐富勇, 徐玲, 刘仁荣, 裘雪梅, 朱立鑫

2013, 0(1): 144-150.

摘要 ( 217 )

PDF (2238KB) ( 700 )

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拟用p Ⅷ 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮（Zearalenone ，ZEN）模拟表位肽，并验证其反应原性。通过将含有ZEN 模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I 和BamH I 双酶切的pC89S4 噬菌粒连接，构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN 转化感受态XL1-Blue 得到工程菌pC89-ek-zen，然后用KM13 超感染、IPTG 诱导表达，纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13 超感染时菌体浓度OD600、IPTG 诱导时菌体浓度OD600、IPTG 加入量以及诱导表达温度和时间进行优化，以探索最佳表达条件；通过ELISA 测定反应原性，对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN 抗体的结合效果。结果显示，成功构建了表达载体pC89-CZEN，最优表达条件为KM13 超感染时菌体浓度OD600 为0.4、IPTG 诱导时菌体浓度OD600 为0.6 以及IPTG 加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h，酶切后结合效果明显高于酶切前。

海洋真菌梅花状青霉FS83 抗菌抗肿瘤活性研究

李浩华陈玉婵王磊章卫民

2013, 0(1): 151-155.

摘要 ( 228 )

PDF (1304KB) ( 723 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

采用滤纸片法测定海洋真菌梅花状青霉（Penicillium herquei）FS83 的发酵提取物对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和大肠杆菌（Escherichia coli）的抑菌活性，采用生长速率法测定提取物对绿色木霉（Trichoderma viride）、黑曲霉（Aspergillus niger）、黄曲霉（Aspergillus flavus）、链格孢（Alternariaalternata）和胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）的抗真菌活性，并采用连续稀释法测定提取物对所有细菌和真菌的最低抑制浓度（MIC 值）。此外，还通过MTT 法测试提取物对人肺癌细胞（NCI-H460）、人乳腺癌细胞（MCF-7）和人神经胶质瘤细胞（SF-268）的细胞毒活性。结果表明，菌丝体提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑制活性，抑菌圈分别为18.1 mm、17.3 mm，最低抑制浓度均为1.56 mg/mL，对所有供试真菌也有较好的抑制作用，抑菌率均达50% 以上，最低抑制浓度为0.78 -3.12mg/mL ；发酵液提取物对枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈达16.4 mm，最低抑制浓度均为1.56 mg/mL，对所有供试真菌也有较好的抑制作用，最低抑制浓度为1.56 -6.25 mg/mL。菌丝体提取物对3 种肿瘤细胞株有较强的细胞毒活性，IC50 值为55.9-63.5μg/mL，发酵液提取物对肿瘤细胞株MCF-7 有较强的细胞毒活性，在200 μg/mL 浓度下的抑制率为84.3%。

日本蟾蜍聚集素cDNA 的克隆与序列分析

袁进强徐跃杨仙玉诸葛慧张姝芳

2013, 0(1): 156-161.

摘要 ( 183 )

PDF (10624KB) ( 482 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

为研究蟾酥、蟾衣、蟾皮中多肽类有效成分，通过菌落PCR 对日本蟾蜍（Bufo japonicus formosus）皮肤cDNA 质粒文库进行了筛选，获得了聚集素（clusterin，CLU）全长cDNA 序列（GenBank 登录号为JX035891）并对其进行了生物信息学分析。日本蟾蜍clu cDNA 全长为1 616 bp，包括1 332 bp 的开放阅读框（open reading frame，ORF）、5' 端30 bp 及3' 端254 bp 的非翻译区（untranslated region，UTR）。根据cDNA 序列推导的日本蟾蜍CLU 前体蛋白由443 个氨基酸残基组成，其中含20 个氨基酸残基组成的信号肽，6 个糖基化位点，10 个可形成二硫键的半胱氨酸残基和2 个卷曲螺旋区域。氨基酸序列同源性分析显示，日本蟾蜍CLU 与非洲爪蟾（Xenopus laevis）的同源性为65%，与其他7 种动物的同源性则介于41%-48% 之间。

甲醇利用型吡咯喹啉醌产生菌的筛选及鉴定

徐文, 许然, 张利平

2013, 0(1): 162-165.

摘要 ( 204 )

PDF (1429KB) ( 1065 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

从虎杖内生细菌和黏细菌中筛选吡咯喹啉醌（PQQ）产生菌。采用3 种以甲醇为唯一碳源的培养基对160 株供试菌株进行摇瓶培养发酵，发酵产物采用光谱学分析法及HPLC 法筛选。结果显示，通过初筛和复筛共得到甲醇利用型菌134 株，PQQ 产生菌4 株，其中菌株083114 的PQQ 产量为64.34 mg/L。菌株083114 的16S rRNA 基因序列分析结果显示，其序列与酸快生芽孢杆菌（Bacillus acidiceler）的系统发育关系最近。虎杖内生细菌及黏细菌中存在PQQ 产生菌。

高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备

王洪星, 龚殿, 孙玉娟, 张雨良, 王健华, 刘志昕

2013, 0(1): 166-171.

摘要 ( 168 )

PDF (4613KB) ( 740 )

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高粱花叶病毒（Sorghum mosaic virus，SrMV）是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一，引起甘蔗花叶病，对甘蔗产业危害很大。根据SrMV 外壳蛋白（coat protein，CP）基因序列合成一对引物，以海南（SrMV-HN）染病植株总RNA 为材料，采用RT-PCR 方法克隆了长约987 bp 的目的片段。将CP 基因与质粒pET32a（+）连接，构建了含SrMV CP 基因的融合蛋白原核表达载体pET32a-SrMVCP。然后用正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3），经IPTG 诱导后，SDS-PAGE 检测出一条约36kD 的特异融合蛋白表达谱带。融合蛋白主要以可溶性蛋白形式稳定表达。通过优化诱导条件，确立了CP 基因表达的最佳条件：IPTG 终浓度为0.1 mmol/L，诱导时间为4 h，诱导温度为30℃。用Ni2+-NTA 琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白，免疫家兔制备出抗血清。通过酶联法（ID-ELISA）测定本试验制备的SrMV CP 抗血清工作浓度为1∶1 000，Western blotting 检测结果表明，抗血清与SrMV-HN 诱导表达的CP 蛋白发生特异性反应。对田间25 个甘蔗样品进行检测，结果表明该抗血清的效价高、灵敏度高、特异性强，可以应用于田间样品的检测。

南方红豆杉内生真菌的分离鉴定及其细胞毒活性研究

张庆波, 陈玉婵, 李浩华, 潘清灵, 王磊, 李冬利, 陶美华, 章卫民

2013, 0(1): 172-177.

摘要 ( 164 )

PDF (3980KB) ( 953 )

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采用平板培养法对采自广东省的南方红豆杉进行内生真菌的分离，并通过形态学和分子生物学方法进行分类鉴定；共分离鉴定内生真菌22 株，主要为刺盘孢属（Colletotrichum）、球座菌属（Guignardia）、座腔菌属（Botryosphaeria）、节菱孢属（Arthrinium）、炭角菌属（Xylaria）、毛壳菌属（Chaetomium）、交链孢属（Alternaria）、拟茎点霉属（Phomopsis）、长蠕孢属（Helminthosporium）等属。还采用MTT 法测定了这些内生真菌发酵粗提物的细胞毒活性，活性研究发现有6 个菌株的粗提物在作用浓度为100 μg/mL 时，对至少1 种受试肿瘤细胞株的抑制率在50% 以上，其中菌株A223 和A240 对人乳腺癌细胞MCF-7 的抑制率在90％以上。表明南方红豆杉内生真菌多样性丰富，有些菌株具有良好的细胞毒活性，值得进一步深入研究。

原油微生物群落构成及降解菌降解特性的研究

王中华, 梁静儿, 杨建强, 周君, 李成华, 李太武

2013, 0(1): 178-185.

摘要 ( 164 )

PDF (3766KB) ( 605 )

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为分离得到高效原油降解菌，直接向原油中加入营养物刺激，培养一段时间后原油乳化降解。气相色谱法、红外光谱法和紫外吸收均表明降解菌体系具有较强的降解原油烃的能力。采用细菌 16S rDNA 通用引物和 PCR 扩增等方法，构建原油降解菌体系 16S rDNA 克隆文库，并对所构建的文库进行分析。同时，从降解菌体系中分离得到一株降解菌，鉴定结果表明所分离的细菌为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）。采用气相色谱技术对降解过程中的原油烃的变化进行分析，结果显示原油烃类组分会随着降解时间的变化而发生变化，降解菌表现出其对烷烃类物质的降解能力。

原生质体融合技术选育分解草酸乳酸菌菌株的研究

张禹, 毛淑红, 路福平, 聂实践

2013, 0(1): 186-190.

摘要 ( 200 )

PDF (1208KB) ( 728 )

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将具有草酸分解能力的乳双歧杆菌和具有耐氧特性的嗜酸乳杆菌进行原生质体融合，其最佳条件为：50% 的PEG 6000，融合温度30℃，融合时间为7 min，CaCl2 浓度为0.02 mol/L，MgCl2 浓度为0.5 mol/L，在此条件下融合率可达7.6%。从中筛选出同时具有耐氧特性和草酸分解能力的融合子，草酸分解率为13.4%。

逆境对红酵母发酵生产类胡萝卜素的促进作用

史馨怡, 刘丹, 陈黎黎, 陈欣

2013, 0(1): 191-197.

摘要 ( 207 )

PDF (2557KB) ( 837 )

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类胡萝卜素广泛存在于细菌、藻类、真菌和植物中，是一类具有重要的生理保健功能的呈黄色、橙红色或红色的多烯类化合物。考察了不同逆境条件，包括低温、低温处理时间、酸处理及高浓度盐处理对促进一株红酵母（Rhodotorula sp.）发酵生产类胡萝卜素的影响，并利用响应面分析方法研究了其交互作用。结果表明，低温，酸处理、高浓度盐的影响以及低温和酸处理、低温和高浓度盐以及低温处理时间和酸处理的交互作用对类胡萝卜素产量的影响均显著，在温度为15℃处理48 h，pH3.5，NaCl 浓度为2 mol/L 的条件下，类胡萝卜素最高产量达到31.04 mg/L，说明逆境对红酵母发酵生产类胡萝卜素具有促进作用。

四种测定纤维素酶发酵过程生物量方法的比较

李晨, 赫荣琳, 武改红, 马立娟, 路福平, 陈树林

2013, 0(1): 198-202.

摘要 ( 186 )

PDF (1413KB) ( 745 )

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分别采用测定菌丝体蛋白的方法、测定核酸的方法、酸洗干燥法和纤维素测定仪的方法测定以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中的生物量。通过对发酵液取样测定比较，结果发现，采用测定核酸的方法精密度最高，其RSD 值为6.32%，该法同纤维素测定仪的方法均可用于精确测定以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中的生物量。酸洗干燥法的测定结果精密度较差一些，但由于操作简便，也可用于常规分析。而测定菌丝体蛋白的方法无论是在精密度上还是操作简便性上均不占优势，该方法可作为另外3 种方法的补充。为以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中生物量的分析检测提供了选择方法的依据。

脂肪酶活力测定方法及其在筛选产脂肪酶微生物中的应用

王欢, 何腊平, 周换景, 张义明, 李翠芹, 陶菡

2013, 0(1): 203-208.

摘要 ( 327 )

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比较了罗丹明平板法、橄榄油乳化法、对硝基苯酚法测脂肪酶水解酶活和对硝基苯酚法测脂肪酶酯合成酶活4 种常用的脂肪酶活力测定方法。结果表明，罗丹明平板法只适合脂肪酶活力的定性和初步定量判断，后3 种方法适合于脂肪酶活力的定量检测，但只有对硝基苯酚法有较好的重现性。而且，脂肪酶水解酶活力和其合成活力无对应关系，所以在筛选产脂肪酶微生物时要选择合适的脂肪酶活力测定方法。也即，筛选产水解酶活的菌株应选择水解酶活测定方法，否则，选择酯合成酶活力测定方法。基于这一原则筛选到了预期产脂肪酶微生物。

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