【目的】鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii, AB）是引起医院内感染的重要条件致病菌之一，耐药性AB是目前防治的棘手问题。细菌外排泵是引起耐药性的重要原因之一，拟通过PCR检测鲍曼不动杆菌耐药结节分化家族（resistance-nodulation-division,RND）外排泵基因adeLFGH的分布，探索其与耐药性的关系；建立adeG耐药基因模型，利用CRISPR/Cas9系统对其进行靶向敲除的初步研究。【方法】运用肉汤微量稀释法检测耐药性分布；PCR筛查13株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH外排泵基因并分析其分布；扩增RND外排泵关键基因adeG并构建耐药细菌模型；设计特异性sgRNA，利用CRISPR/Cas9系统进行靶向敲除,药敏实验检测其敲除效果。【结果】13株临床鲍曼不动杆菌对多黏菌素E敏感，对左氧氟沙星耐药率较低，仅为38.5%，对头孢他啶的耐药率为92.3%，对妥布霉素耐药率为84.6%，对其他临床常见药物耐药率均为100%。13株多重耐药鲍曼不动杆菌adeLFGH携带率为100%。药敏实验结果显示adeG模型耐药菌株的哌拉西林、替卡西林/克拉维酸以及哌拉西林/他唑巴坦由敏感转为耐药，氯霉素、美罗培南、米诺环素由敏感转为中介。特异性sgRNA介导CRISPR/Cas9系统靶向敲除效率不同。pCas9-sgRNA1（adeG）靶向后哌拉西林/他唑巴坦的耐药性得到了逆转，对妥布霉素、四环素、多西环素、米诺环素的耐药性也有不同程度的降低；pCas9-sgRNA2（adeG）和pCas9-sgRNA3（adeG）使哌拉西林/他唑巴坦由耐药恢复到了中介，但对其他药物的耐药性逆转效果并不显著。【结论】特异性 CRISPR/Cas9 系统可以特异性敲除耐药基因，提示可为耐药菌的治疗提供新的思路和方法。
