生物技术通报

王涛;王长春;张维林;严成其;杨玲;

2012, 0(05): 1-8.

摘要 ( 173 )

PDF (494KB) ( 803 )

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水稻白叶枯病由Xanthomonas oryzaepv.Oryzae(Xoo)致病菌引起,为水稻三大病害之一,对世界水稻生产造成了严重危害。水稻与Xoo互作符合"基因对基因"假说,是研究植物与细菌互作的典型模式系统。水稻基因组以及Xoo基因组测序的完成,极大地推动了水稻-Xoo互作分子机理的研究。就有关水稻与Xoo互作机制的最新研究进展作一概述。

棉花主要逆境及研究方法

杜磊;王长彪;

2012, 0(05): 9-14.

摘要 ( 142 )

PDF (275KB) ( 718 )

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随着耕地面积日益减少,作为开发盐碱地的先锋作物——棉花对其的抗逆研究显得尤为重要和紧迫。简述棉花的几个主要的非生物胁迫,分析逆境条件下棉花自身防御策略及人们在农业生产中有效的应对策略,以期对棉花育种和生产发挥一定指导作用。

施加外源物质对盐胁迫下水稻生长发育的影响

潘兴;王宇;蒋滢;辛士刚;徐昕;马莲菊;

2012, 0(05): 15-19.

摘要 ( 113 )

PDF (195KB) ( 558 )

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水稻是重要的粮食作物之一,属于不耐盐的甜土植物,土壤盐渍化是影响其产量和生长发育的主要因素。消除或缓解盐胁迫是当务之急,目前主要应用传统育种、转基因技术及外源物质缓解盐胁迫。拟从外源物质对盐胁迫下水稻的影响作一综述,旨在为水稻生产及抗性育种提供理论依据和实践方法。

植物病程相关蛋白及其在烟草中的研究进展

张玉;杨爱国;冯全福;蒋彩虹;耿锐梅;罗成刚;

2012, 0(05): 20-24.

摘要 ( 195 )

PDF (195KB) ( 1123 )

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植物在受到病原物侵染时,会产生一系列抗性反应,病程相关蛋白是其中参与抗病性的重要物质,能够被病原物诱导产生并在植物体内积累,对于诱导植物系统抗性,阻止病原物侵染具有重要作用。对植物病程相关蛋白的性质、诱导因素、分类和功能进行综述,并概述病程相关蛋白与烟草系统抗性的紧密联系以及烟草病程相关蛋白基因在增强系统抗性中的应用,为烟草抗病育种和病虫害防治提供了理论。

Cre/lox位点特异重组系统在植物基因工程中的应用

陈广东;崔继哲;付寅生;弭晓菊;

2012, 0(05): 25-30.

摘要 ( 134 )

PDF (446KB) ( 1424 )

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Cre/lox位点特异重组系统是植物基因工程中的重要工具,利用其可以在转基因植物中对目的基因实现精确删除和定点整合。概述Cre/lox系统的基本结构及作用方式,并以基因删除和定点整合为重点,详细介绍该系统在这两方面的应用。

抑制型Smad对TGF-β信号通路的负调控研究进展

高磊;林葵;吴更;

2012, 0(05): 31-37.

摘要 ( 162 )

PDF (364KB) ( 719 )

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转化生长因子TGF-β超家族是一类在结构上相关的蛋白,目前发现在哺乳动物中有超过30多个细胞因子可能属于这一超家族。它们在各类细胞中广泛参与细胞生长、黏附、迁移、分化及凋亡等过程。其中抑制型Smad(I-Smads,包括Smad6和Smad7)是TGF-β/BMP信号通路里重要的抑制型蛋白,在多种细胞与组织的发育过程以及疾病的发生过程中扮演着重要的角色。对其研究已经过10多年,取得许多重大的进展,但也还有很多重要的问题还没有解决。着重介绍I-Smads对TGF-β信号通路的负调控研究进展。

Tol1转座子研究进展

靳涛;伍莎;张薪;许莉佳;Oscar Ortegon;叶勤;李云;

2012, 0(05): 38-41.

摘要 ( 158 )

PDF (238KB) ( 460 )

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Tol1和Tol2是在青鳉基因组中发现的具有自主活性的DNA转座子,而Tol1转座子的自主活性是新近才发现的,因此对它的报道较少。较之Tol2,Tol1可以携带更大片段的DNA进行转座,且Tol1的转座不受转座酶"过量表达抑制"的影响。研究已证实,Tol1转座子在秀丽线虫、斑马鱼、爪蟾和人等多种生物中具有转座活性。因此,在动物转基因和基因功能研究等方面有重要的应用前景。从Tol1转座子的结构特征、转座机制和作为基因转移载体的优点,以及应用研究等方面进行了简要的综述。

蛋白编码基因在细菌分类学中的应用

陈伟峰;洪舒音;赵秀玲;

2012, 0(05): 42-48.

摘要 ( 141 )

PDF (246KB) ( 979 )

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为弥补16S rDNA在细菌分类应用中的不足,人们应用了一些编码重要蛋白的看家基因作为系统分类的分子标记。蛋白编码基因具有分辨能力强、准确度高、与基因组一致性好等优点,在近缘菌株的鉴别中效果突出,与其他分类标记结合使用则能够取得更加出色的成效。同时,介绍蛋白编码基因在细菌分类和相关技术中的应用情况,并对这一工具的发展前景作展望。

大型真菌免疫调节蛋白的研究进展

李淑英;赵仲麟;李燕;唐选明;

2012, 0(05): 49-53.

摘要 ( 186 )

PDF (199KB) ( 779 )

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真菌免疫调节蛋白是一类具有抑菌、抗肿瘤和免疫调节等生物学功能的小分子蛋白质。概述真菌免疫调节蛋白的序列特性、空间结构、生物学功能及调控机理等研究进展,并对其研发的发展趋势进行展望。

PCR技术检测猪肺炎支原体的研究进展

张旭;白方方;武昱孜;刘茂军;冯志新;熊祺琰;张映;邵国青;

2012, 0(05): 54-60.

摘要 ( 203 )

PDF (268KB) ( 858 )

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猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是引起猪支原体肺炎的重要病原,该病常引起继发感染和混合感染,严重威胁养猪业发展,造成巨大的经济损失。利用PCR技术对猪支原体肺炎早期正确诊断具有非常重要的意义。从猪肺炎支原体的特异性靶基因、临床样品采集方法与样品DNA处理方法、关键技术因素及普通PCR技术、多重PCR技术、套式PCR技术、荧光定量PCR技术、芯片检测和环介导等温扩增技术等在猪肺炎支原体检测中的研究进展、主要优缺点及应用进行综述。

利用P5CS基因转化白三叶的研究

李志亮;杨清;叶嘉;邢浩春;黄丛林;吴忠义;

2012, 0(05): 61-65.

摘要 ( 134 )

PDF (609KB) ( 356 )

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为了培育抗旱白三叶,构建了植物表达载体pBPC-P5CS,利用基因枪法转化白三叶的愈伤组织,PCR检测和Southern blot鉴定证实白三叶中已导入P5CS基因。对转P5CS基因白三叶植株的不同抗旱指标进行了分析。结果表明,与对照相比,转P5CS基因株系的抗旱能力得到了较大的提高。干旱胁迫下,与对照相比,转P5CS基因植株的脯氨酸含量和相对含水量分别比对照高20.0%-21.2%和5.6%-8.5%。

一种安全高效大豆转化筛选体系的建立

张敏;杨素欣;邵群;孙式静;李祥;冯献忠;

2012, 0(05): 66-70.

摘要 ( 131 )

PDF (524KB) ( 667 )

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以灭草烟作为筛选剂,利用基因枪法建立一种安全高效的大豆遗传转化体系。比较不同筛选剂对大豆胚尖外植体丛生芽诱导数目的影响。与卡那霉素、潮霉素和草胺膦等传统筛选剂相比,以灭草烟作为筛选剂可使丛生芽的数目增加1倍以上。克隆了拟南芥突变体csr1-2中突变的乙酰羟基酸合成酶基因(ahas),以其作为筛选标记基因,构建可利用灭草烟作为筛选剂的植物表达载体。利用基因枪法将该载体转化大豆,获得6棵灭草烟抗性植株,分子检测证明外源ahas基因整合到5棵转基因大豆植株的基因组中。

茎瘤芥(榨菜)高效离体再生体系的建立

沈进娟;范永红;冷容;李娟;冉广葵;

2012, 0(05): 71-75.

摘要 ( 93 )

PDF (312KB) ( 458 )

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利用离体培养技术,以榨菜的3个主栽品种的子叶、带柄子叶和下胚轴为外植体,对影响榨菜植株再生的关键因素进行了优化。结果表明,培养25 d不定芽的分化率最高;最佳不定芽诱导的激素组合为6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L,其中带柄子叶不定芽的分化率达94.4%;"蔺市草腰子"和"郫县榨菜"容易诱导不定芽,而"永安小叶"不容易被诱导,说明基因型的影响比较大;不定根的最佳诱导激素为NAA 0.2 mg/L,其生根率为83.4%。榨菜高效离体再生体系的成功建立,为榨菜遗传转化、突变体筛选和种质资源保存打下了基础。

器官特异EST随马铃薯不同基因型分化表达

蔡倩;崔雪琼;冯秀娟;黄琦;戴海霞;姚新灵;

2012, 0(05): 76-80.

摘要 ( 107 )

PDF (447KB) ( 769 )

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匍匐茎是马铃薯的产量构成因素,匍匐茎形成早晚与成熟期早晚紧密关联,但关联的分子基础尚属未知。以两基因型马铃薯匍匐茎及块茎为材料,构建了两基因型两器官消减cDNA文库4个,文库筛选识别了参与两器官形成EST 21个,转录水平检测显示,其中的6个EST呈现基因型及匍匐茎或块茎特异表达,随着块茎形成一些EST表达水平显著降低;对21个EST在20个不同基因型中的表达分析表明,其中9个EST表现基因型特异表达,最低表达频率仅为1/9;其中一些EST仅在早熟或晚熟基因型中表达;研究首次为匍匐茎形成早晚与成熟期早晚获得了分子证据,同时,也进一步明确了马铃薯各基因型间相对独立而稳定的遗传基础。

菊花CmDFR与CmANS基因启动子序列克隆与瞬时表达分析

唐杏姣;韩科厅;胡可;孟丽;戴思兰;

2012, 0(05): 81-88.

摘要 ( 143 )

PDF (491KB) ( 760 )

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DFR和ANS是花青素合成途径下游两个关键的结构基因,其不仅决定花青素苷最终结构及其呈色,还在花器官中特异性表达,研究其启动子区域对花色改良的分子育种具有重要参考价值。利用接头染色体步移法(genome walking),从菊花的叶片基因组DNA中克隆到了2个DFR基因同源序列CmDFR的启动子片段,1个ANS基因同源序列CmANS的启动子片段。生物信息学软件分析结果显示,这3个启动子片段除了含有多个TATA-box、CAAT-box等基本的启动子元件,还含有很多与MYB转录因子相结合的元件,以及G-box等参与光响应的顺式作用元件。利用双酶切方法,将克隆到的启动子片段替换载体pBI121上的35S启动子,将新构建的植物表达载体转入农杆菌中,采用叶盘法侵染菊花叶片和花瓣进行瞬时表达研究。结果表明,这3个启动子片段均具有驱动下游报告基因表达的功能。因此,可以开发成菊花分子育种的有效基因构件。

人生存素survivin的克隆与分泌表达

代晓华;姜琳琳;程昕;纪庆;朱惠芳;熊冬生;周圆;

2012, 0(05): 89-92.

摘要 ( 103 )

PDF (331KB) ( 559 )

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旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达。结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体。融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。

稳定表达重组小鼠FAPα蛋白细胞株的构建

张欢;方瑞;黄思超;杨倩之;杜军;蔡绍晖;

2012, 0(05): 93-98.

摘要 ( 111 )

PDF (754KB) ( 469 )

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采用RT-PCR方法从BALB/c胚鼠成纤维细胞克隆FAPα基因,将其连接至表达载体pTd-FL-N,转化Stbl3感受态。筛选重组质粒,经酶切、PCR检测及测序鉴定,证实表达质粒构建正确。将表达载体转染HEK293细胞,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术证实稳定表达FAPα细胞株构建成功。通过流式细胞术确定FAPα蛋白可定位表达于细胞膜上。

南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因在乳酸乳球菌MG1363中的整合及表达

尹建洪;罗立新;王成;

2012, 0(05): 105-109.

摘要 ( 112 )

PDF (364KB) ( 457 )

相关文章 | 计量指标

根据南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)的基因序列将CALB基因进行TA克隆、酶切鉴定及测序后,亚克隆至大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭表达载体pMG36e-NisI中,构建重组表达载体pMG36e-NisI-CALB。设计特异性引物P3和P4,对重组质粒pMG36e-NisI-CALB进行红霉素抗性基因的敲除,以构建食品级表达载体pMG36N-CALB,后再将两种重组质粒分别电转化入乳酸乳球菌MG1363,以Nisin为选择压力,考察CALB在MG1363中的表达情况。结果显示,成功构建了表达载体pMG36e-NisI-CALB及pMG36N-CALB,两株重组菌在含有20 IU Nisin/mL的培养基中均生长情况良好,遗传性能稳定,且经水解圈鉴定,CALB能够进行活性表达。进一步研究发现,CALB基因整合到乳酸乳球菌MG1363染色体中。

大肠杆菌酸性磷酸酶基因克隆表达及应用

黄莹;丁庆豹;欧伶;魏晓琨;许彦梅;张春艳;王玥;

2012, 0(05): 110-115.

摘要 ( 128 )

PDF (668KB) ( 354 )

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将大肠杆菌K-12的酸性磷酸酶(AphA)完整基因和去信号肽基因分别克隆到pET-28a(+)载体上,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。经诱导检测,重组菌均能表达出高活性的可溶性酶蛋白,去信号肽表达更稳定。对重组菌的活性研究表明,相对于野生菌,重组菌酶活力得到大幅度提高,同时,以pNPP、肌苷为底物进行磷酸转移催化反应,在pH4.0-6.0、反应温度37℃条件下,约有30%的肌苷可转化为IMP,但随着反应的进行所形成的IMP又被该酶降解,向反应液中加入EDTA即可明显抑制酶的水解活性,减缓IMP的降解速率。

蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化

杨辉;吴崇超;陈佳;陈伟;杨依丽;罗勇;姚冬生;熊盛;

2012, 0(05): 116-120.

摘要 ( 129 )

PDF (553KB) ( 319 )

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蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。

分选酶A(SrtA)的GST融合表达、纯化及活性测定

邓思;罗立新;

2012, 0(05): 121-125.

摘要 ( 152 )

PDF (388KB) ( 879 )

相关文章 | 计量指标

构建GST/金黄色葡萄球菌分选酶A(SrtA)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化分选酶,并利用展示在酵母表面的底物检测分选酶的活性。以pMD20-SrtA为模板,PCR扩增得到SrtA△N59基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-SrtA△N59,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST亲和层析分离纯化得到SrtA△N59,与展示在酵母表面的底物序列QALPETGEE-linker-EGFP作用,产生游离的EGFP,通过酶标仪检测EGFP荧光强度确定分选酶的活性。结果显示,重组表达载体pGEX-SrtA△N59经IPTG诱导,表达出相对分子质量约为42 kD的融合蛋白,SDS-PAGE分析,该融合蛋白是以可溶形式表达。分离纯化得到的分选酶与底物作用,其荧光强度由568.66±12.14增加至921.43±13.02。以上结果表明,成功构建了重组表达载体pGEX-SrtA△N59,并在大肠杆菌中获得了可溶表达的有活性的分选酶。

RNAi介导的OsBTF3基因沉默及其对水稻籽粒相关性状的影响

李广旭;陈华民;刘维振;吴静;吴茂森;何晨阳;

2012, 0(05): 126-131.

摘要 ( 107 )

PDF (541KB) ( 385 )

相关文章 | 计量指标

为了创制OsBTF3基因沉默的水稻植株、验证该基因在水稻籽粒相关性状中的功能、评价其在水稻遗传改良中潜在的应用价值,设计和合成OsBTF3基因序列的引物、扩增部分基因片段,构建RNAi基因沉默载体、通过农杆菌介导转化愈伤组织、植株再生、潮霉素抗性筛选和PCR验证、定量分析OsBTF3基因表达量,测定转基因水稻籽粒相关性状。结果表明,成功地获得了20个T1代OsBTF3-RNAi转基因株系,OsBTF3基因表达量得到显著的抑制和干扰,抑制效果平均达到85%;与野生型对照株相比,5个所测定RNAi转基因株系的穗长、穗粒数、千粒重和穗粒重等籽粒相关性状明显地减小或降低。因此,RNAi介导的基因沉默导致了OsBTF3基因表达水平抑制以及在籽粒性状中的功能缺失;OsBTF3可能是一个调控水稻籽粒相关性状重要的功能基因。

高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响

王凤雪;师新川;温永俊;胡嘉欣;刘准;武华;

2012, 0(05): 132-137.

摘要 ( 122 )

PDF (700KB) ( 661 )

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旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。

hRFT2基因单核苷酸多态性的生物信息学分析

谢云飞;解博红;杨子善;

2012, 0(05): 138-143.

摘要 ( 111 )

PDF (334KB) ( 880 )

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旨在筛选可能与人类疾病有关的hRFT2基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)和突变位点,从SNP数据库中检索并筛选出395个有效的hRFT2基因SNPs,其中包括30个同义SNPs(synonymous SNPs,sSNPs)和31个非同义SNPs(non-synonymous single nucleotide polymorphisms,nsSNPs)。分别采用SIFT、SNPs3D和PolyPhen-2方法分析nsSNPs引起的氨基酸替换是否可能影响hRFT2的功能。结果表明,5个nsSNPs(rs11477762、rs146302587、rs146492942、rs76947760和rs145431028)可能严重影响hRFT2蛋白的功能,其中rs76947760和rs145431028的影响已得到临床证明,另外3个nsSNPs(rs148387972、rs140391358和rs3746802)也可能对hRFT2有较大的影响。

薰衣草高质量DNA提取及ISSR-PCR多重化体系的建立

权俊萍;贾晓鹰;戴丽娜;肖俊辉;田琴;牛攀新;吕国华;

2012, 0(05): 151-157.

摘要 ( 139 )

PDF (754KB) ( 422 )

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以伊犁薰衣草‘701’新鲜叶片为材料,对4种基因组DNA提取方法进行比较,并通过单因子梯度比较试验结合L9(34)正交优化设计,对ISSR-PCR扩增体系中退火温度、DNA、Mg2+、dNTP和引物浓度进行最佳条件及配比筛选。结果表明,改良3×CTAB法是薰衣草高质量DNA少量提取的最佳方法 ;建立薰衣草ISSR-PCR扩增优化体系为,20μL反应体系中包括模板DNA 50 ng,Mg2+3 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,引物0.3 mmol/L,Taq酶1 U;扩增程序退火温度为56℃。运用本试验建立的ISSR-PCR优化体系,对5份薰衣草种质进行了初步验证,获得了良好的多样性扩增条带。

香鱼基因组DNA提取方法的优化

范慧慧;李明云;

2012, 0(05): 158-162.

摘要 ( 132 )

PDF (669KB) ( 447 )

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为获得高质量的基因组DNA,分别采用传统酚-氯仿法、高盐法、试剂盒法和改进酚氯仿法提取香鱼肌肉基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,改进酚氯仿法提取的基因组DNA电泳条带整齐明亮且无降解。紫外分光度计测定DNA浓度和纯度,结果表明,改进酚氯仿法提取的鱼类基因组DNA浓度约为300μg/mL,A260/A280为1.80-1.86。用改进的酚氯仿法提取的DNA进行AFLP分析,扩增结果稳定,电泳条带清晰。综上所述,改进酚氯仿法能够获得高质量DNA,且可以用于进一步的分子生物学研究。

三种提取柱状黄杆菌基因组DNA方法的比较

李莉;李春梅;谢旭阳;

2012, 0(05): 163-166.

摘要 ( 114 )

PDF (275KB) ( 648 )

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采用酚氯仿抽提法、CTAB法和SDS-蛋白酶K法分别对鱼类病原菌柱状黄杆菌提取基因组DNA。使用超微量紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测所提取的基因组DNA的产量和质量,并用PCR扩增对DNA进行了评价。结果显示,3种方法均可提取到柱状黄杆菌的基因组DNA,并能有效扩增细菌16S rDNA序列,但CTAB法提取的DNA产量和质量最高,CTAB法可以作为柱状黄杆菌DNA提取以开展分子生物学研究的首选方法。

棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因启动子活性检测条件的优化

李芬;刘小宁;

2012, 0(05): 167-172.

摘要 ( 83 )

PDF (381KB) ( 567 )

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旨在用阳离子脂质体介导携带有pGL3-Basic报告基因的棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6启动子pGL-CYP6B6-promoter重组质粒转染Sf9细胞,对启动子活性的检测条件进行优化。将长度为999 bp的棉铃虫CYP6B6基因启动子亚克隆至荧光素酶报告载体pGL3-Basic上,提取无细胞内毒素的质粒,转染处于对数生长期的昆虫细胞Sf9,通过检测荧光素酶的表达量验证启动子的活性。对转染后的检测时间、加入转染质粒的量,转染质粒与内对照质粒pRL-TK的比例分别进行了优化,进而确定检测的最优条件。结果表明,转染后的最适检测时间为24 h,转染质粒的最适用量为3.2μg,报告质粒与内对照质粒用量的比例为10 1时转染效率最高。

响应面分析法优化重组原动蛋白2β诱导条件的研究

闻崇炜;刘瑞江;毛春友;胡萍萍;王亚丽;

2012, 0(05): 173-178.

摘要 ( 110 )

PDF (490KB) ( 461 )

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原动蛋白2β(PK2β)是近年新发现的一个选择性激活PKR1的蛋白质因子。采用响应面分析法(RSM)研究了利用重组BL21(DE3)表达PK2β的最优诱导条件。结果表明,诱导时机与诱导物浓度对PK2β的表达水平具有显著性影响,但诱导时间不具有显著性影响。试验数据拟合与极值分析表明最优诱导条件为工程菌OD600为0.50时,采用终浓度为0.11 mmol/L的IPTG在37℃诱导培养7.73 h,此时PK2β表达水平可达242.78 mg/L。验证试验结果表明,重组PK2β的表达水平比优化前提高了46%,而IPTG的用量减少了89%,有利于大量制备该蛋白质进行后续功能研究及应用研究。

多肽抗体检测原发性肝癌血清标志物ELISA方法的建立及应用

周晓明;傅海媛;黄亚娟;侯利平;孙云波;原剑;杨保安;郑俊杰;甄蓓;肖汉族;貌盼勇;魏开华;

2012, 0(05): 179-184.

摘要 ( 102 )

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血清多肽是癌症诊断信息的重要来源,建立、优化了检测多肽标志物的直接ELISA法,并应用于肝癌血清中的多肽标志物的检测。制备及纯化针对多肽标志物Pep5的单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,用其建立检测相应抗原的直接ELISA法。方法线性范围为1.5-20 ng/mL,检测限为1.24 ng/mL;标准品批内及批间CV分别小于3.66%及4.89%,血清样本批内及批间CV分别小于11.69%及18.18%;线性范围内(9、12和15 ng/mL)的回收率分别为98.98%,99.61%和101.58%。应用该方法共检测160例正常血清、104例肝硬化及156例肝癌患者血清,正常组与肝硬化组及肝癌组间差异显著(P<0.001),Pep5诊断肝癌的敏感性和特异性分别为80.8%和96.2%。同时检测94例HCC血清中的AFP和Pep5,AFP检出率为63.8%,Pep5检出率为90.4%,AFP联合Pep5检测时,能将HCC的检出率提高至94.7%。

中国大单孢属真菌一新纪录种

金宇溪;王爽;

2012, 0(05): 185-186.

摘要 ( 136 )

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<正>大单孢属(Aplosporella)隶属于真菌界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota),盘菌亚门(Pezizomycotina),座囊菌纲(Dothideomycetes),葡萄座腔菌目(Botryosphaeriales),葡萄座腔菌科(Botryosphaeriace-ae)的一个无性态属。大单孢属成员常常生于植物的小枝条上,引起植物小枝条枯死。该属包含多个异源种,这些异源种需要进一步归到其他相关属里去[1]。

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