生物技术通报

原核生物的NHEJ修复途径

殷亮;宣慧娟;鲁琳;杨志伟;

2010, 0(05): 1-6.

摘要 ( 271 )

PDF (405KB) ( 806 )

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DNA双链断裂(DSBs)是严重的DNA损伤形式之一,生物体对DSBs的修复可通过同源重组(HR)或非同源末端连接途径(NHEJ)进行。长期以来,人们普遍认为HR是细菌DSBs修复的惟一途径,但在分支杆菌和其它原核生物体内NHEJ途径的发现,使这一观念得以颠覆。最近的研究表明,细菌NHEJ修复系统是一个双组分系统,包含一个多功能的DNA连接酶(LigD)和DNA末端结合蛋白Ku,具有DSBs修复所需的断裂末段识别、末端加工和连接活性。重点综述细菌NHEJ修复系统的组成、结构以及生理功能。

DNA甲基化与基因表达调节

陈秀莉;马利兵;

2010, 0(05): 7-10.

摘要 ( 153 )

PDF (174KB) ( 573 )

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DNA异常甲基化是一种表观遗传改变,常发生在启动子区的CpG岛。某些基因甲基化与基因表达密切相关,在生命过程中扮演着重要功能。一方面,DNA甲基化与高等动物的生长发育密切相关,另一方面,DNA甲基化和其他生命过程也有重要的联系。如X染色体失活、基因组印记、发育调控及细胞分化和肿瘤发生发展中起重要作用。

基因组文库的构建和池化筛选

陈献伟;娜日苏;朱超;王会;雷娜;高剑峰;关伟军;马月辉;

2010, 0(05): 11-15.

摘要 ( 86 )

PDF (396KB) ( 377 )

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作为物种保护策略的重要部分,建立濒危畜禽的基因组文库,可有效保存濒危畜禽种质资源。BAC(bacterialartificial chromosome)文库具有高容量、遗传特性稳定和嵌合体少等优点,因而被用于畜禽基因组文库的构建。对BAC文库的构建方法和文库池化筛选系统作一综述。

科学出版社新书

2010, 0(05): 15-33.

摘要 ( 89 )

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核糖开关的结构和调控机理

王少伟;李锡香;

2010, 0(05): 16-22.

摘要 ( 303 )

PDF (792KB) ( 1194 )

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一种新发现的RNA分子——核糖开关,通过感知代谢物浓度的变化调控目标基因的表达。它可以调整自身的结构直接结合代谢物小分子,而不需要蛋白因子的参与。在原核生物中发现了大量的核糖开关,在真核生物如植物和真菌中也发现了核糖开关。核糖开关由适体域和表达平台两个功能域组成,能在不同水平调控基因的表达,如转录终止、翻译起始、mRNA剪辑和加工。核糖开关不需要蛋白因子的参与,因此人们认为它可能是古代RNA世界的遗留物。核糖开关作为RNA传感器可以设计成一种基因控制元件,在未来的基因治疗方面可能具有很大的应用前景。

植物甲酸脱氢酶的研究进展

梅岩;陈丽梅;

2010, 0(05): 23-26.

摘要 ( 248 )

PDF (252KB) ( 469 )

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植物甲酸脱氢酶(FDH)是一种依赖NAD+的酶,它催化甲酸氧化成二氧化碳的可逆反应,是植物一碳代谢的一部分,在植物响应各种环境胁迫、低氧或缺氧过程中发挥着重要的作用。综述了植物FDH的生理作用、酶学特性及调控机制方面的研究进展。

转基因植物作为生物反应器在畜禽疫苗生产中的应用

曾作财;张晓东;王金洛;杨兵;李国平;

2010, 0(05): 27-33.

摘要 ( 103 )

PDF (303KB) ( 381 )

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植物生物反应器为人类提供了更为安全的疫苗生产"车间"。与传统疫苗相比,转基因植物疫苗具有更安全、稳定、经济和使用方便等优点。综述了转基因植物在畜禽疫苗应用方面的研究进展,并对存在的问题及解决方法进行了探讨。

烟草抗非生物逆境分子育种研究进展

黄强;王津津;侯学文;

2010, 0(05): 34-37.

摘要 ( 141 )

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双子叶模式植物烟草是重要的经济作物,烟草抗非生物逆境分子生物学的研究一方面可以验证异源抗逆境基因的功能,另一方面有可能获得抗非生物逆境能力提高的烟草新品种。综述了近年来国内外利用转基因技术,在验证抗非生物逆境基因功能、提高烟草抗寒、抗旱、抗盐和重金属等非生物逆境方面的研究进展,以期为其它作物的抗逆研究提供参考。

哺乳动物精卵相互作用的分子机制的研究进展

谷辰;汤睿智;邢万金;

2010, 0(05): 38-42.

摘要 ( 128 )

PDF (238KB) ( 454 )

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哺乳动物受精是由一系列有序步骤组成的复杂细胞相互作用过程组成,最终导致精卵质膜融合形成受精卵。近来运用基因组学和蛋白质组学技术在哺乳动物精子和卵子表面鉴定出若干可能参与精卵质膜粘附与融合过程的蛋白分子,并对其结构和生物学功能进行了研究,但精卵识别与融合的分子机理仍然不清楚。综述了与精卵识别和融合有关的蛋白的最新研究进展,为进一步研究精卵相互作用的分子机制提供参考。

奶牛乳房炎抗性候选基因的研究进展

张婧敏;陈宏;张春雷;杜毓;石秀英;房兴堂;

2010, 0(05): 43-46.

摘要 ( 96 )

PDF (183KB) ( 429 )

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乳房炎是奶业生产中的一种常见病,发病率很高,每年给世界各国奶牛饲养者造成严重的经济损失。乳房炎的影响因素很多,但遗传因素对其起着重要作用。综述了乳铁蛋白基因、MHC/BoLA基因、ToLL样受体家族基因、趋化性细胞因子受体基因、牛锌指蛋白313基因、β-防御素基因和热休克蛋白70基因等奶牛乳房炎抗性候选基因的研究现状。

VHL基因的研究进展及其在肾癌基因治疗中的应用

徐志忠;梁淑芳;

2010, 0(05): 47-50.

摘要 ( 150 )

PDF (268KB) ( 1206 )

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VHL基因是抑癌基因,定位于染色体3p25-26,其产物pVHL与Wnt-β-catenin信号通路、缺氧诱导因子、氧化磷酸化的调控有关。VHL基因的失活会导致VHL蛋白不能正常合成,这与散发性肾透明细胞癌的发生、发展有着密切的关系。VHL基因的失活机制主要包括基因突变,杂合性缺失和甲基化。通过对VHL基因失活机制的研究有助于筛选用于肾透明细胞癌早期诊断与预后的新分子标志物。目前利用VHL基因开展了肾癌基因治疗的试验探索。

肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的研究进展

王自闯;陈小永;王磊;李爱玲;万丹;刘迎宾;

2010, 0(05): 51-54.

摘要 ( 103 )

PDF (177KB) ( 415 )

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肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)学说的成熟发展和研究成为当前肿瘤治疗研究的热点之一,因其特殊的生物学特性在肿瘤防治中起重要作用。以CSCs为靶点为肿瘤治疗开辟了一条新思路。传统的治疗不能有效靶向CSC,开发针对CSC靶向治疗的新方法,将对肿瘤的耐药、复发、转移具有革新意义。

糖苷酶的研究及其改造策略

黄红卫;刘艳丽;李春;

2010, 0(05): 55-60.

摘要 ( 189 )

PDF (242KB) ( 514 )

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糖苷酶作为水解酶家族的一员,其性质和功能是现在研究的热点。主要阐述了α-甘露糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、β-木糖苷酶、β-D-葡萄糖醛酸苷酶、日本曲霉产β-呋喃果糖苷酶、壳三糖苷酶、耐高温β-甘露糖苷酶以及硫代糖苷酶8种常见的糖苷酶及其基本性质。并综述了近几年对糖苷酶的改造、糖基化合物生物改性以及糖苷酶作用机理的研究方法。

乳酸乳球菌作为基因工程受体菌研究进展

李芳;李永明;徐子伟;张磊;

2010, 0(05): 61-64.

摘要 ( 178 )

PDF (520KB) ( 368 )

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乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是一种"公认安全"的革兰氏阳性细菌,广泛存在于人、畜的肠道中并发挥许多重要的生理功能。由于它兼具安全性与益生性,近几年来研究者们开始关注用乳酸乳球菌作为受体菌来表达外源蛋白。随着生物技术的发展,人们对乳酸乳球菌基因表达及调控过程的认识不断深入并构建了一系列表达,成功地表达了许多外源蛋白,初步展示出良好的应用前景。主要对近年来国内外将乳酸乳球菌作为外源蛋白表达受体菌方面的研究进展做简要综述。

细菌抗生素和重金属协同选择抗性机制研究进展

季秀玲;魏云林;林连兵;

2010, 0(05): 65-69.

摘要 ( 159 )

PDF (343KB) ( 1050 )

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随着各类抗生素和新型复合金属材料的不断开发和使用,环境中抗生素和重金属离子协同污染的机率不断提高,对环境选择最为敏感的细菌通过自身的进化和发展形成了二者协同选择的抗性机制,如协同抗性、交叉抗性、协同调控和生物膜诱导机制。

口蹄疫诊断技术的研究进展

刘明;徐娜;李志勇;柳纪省;

2010, 0(05): 70-73.

摘要 ( 105 )

PDF (180KB) ( 476 )

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口蹄疫是偶蹄动物的一种急性,热性,高度接触性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。本文综述了目前口蹄疫诊断技术的研究进展,其中包括了病毒分离技术等传统的诊断方法,以及血清学诊断方法,还介绍了环介导等温扩增技术等几种新的诊断技术。

RAPD技术及其在植物研究中的应用

胡裕清;赵树进;

2010, 0(05): 74-77.

摘要 ( 134 )

PDF (174KB) ( 278 )

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RAPD技术利用一个10碱基序列的引物,通过PCR扩增的多态性来检测受试材料基因组间的遗传变异关系。介绍了RAPD技术的基本原理及其优缺点,并根据前人的研究成果总结了RAPD技术在植物研究中的应用情况,最后展望了该项技术的一些应用前景。

现代生物技术在植物研究中的应用

倪福太;李长有;刘强;王占武;

2010, 0(05): 78-81.

摘要 ( 146 )

PDF (169KB) ( 548 )

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伴随着生物科学世纪的到来,生物技术广泛应用于农业、医药、轻工业、食品、环保、海洋和能源等方面。列举了几项现代生物技术在植物学研究领域中的应用,从几个角度揭示了现代生物技术在人们日常的生产生活中所扮演的重要角色。

水稻OsRhoGDI2蛋白生物信息学分析及亚细胞定位研究

彭威风;梁卫红;

2010, 0(05): 82-86.

摘要 ( 92 )

PDF (436KB) ( 594 )

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水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白的理化性质、修饰位点和亚细胞定位特点,并进一步构建了受控于CaMV35S启动子的与绿色荧光蛋白融合表达的OsRhoGDI2基因的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布特点。OsRhoGDI2和OsRacD具有一些相似的理化特性和翻译后修饰位点,在洋葱表皮细胞中,OsRhoGDI2主要分布在细胞质、细胞膜和细胞核。OsRhoGDI2与OsRacD在蛋白理化特性和胞内分布上存在一定的相关性,OsRhoGDI2蛋白可能在调控OsRacD的胞内分布和活性中发挥重要作用。

增强UV-B辐射对小麦幼苗基因组DNA的影响及RAPD分析体系的建立

李苗;高丽美;李永锋;韩榕;

2010, 0(05): 87-92.

摘要 ( 80 )

PDF (377KB) ( 268 )

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采用改进的CTAB法提取小麦总基因组DNA,并以之为模板对RAPD反应体系中的一些重要参数进行梯度试验,建立了一套适合本研究的最佳反应体系。即25μL反应体系:模板DNA 20 ng、引物浓度0.5μmol/L、dNTPs浓度200μmol/L、Taq酶0.750 U。反应程序:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环,72℃延伸10min,4℃保存。此外,利用扩增结果稳定的引物对正常光照组及增强UV-B辐射处理组的小麦DNA进行RAPD分析。结果表明,增强UV-B辐射处理组的DNA,经引物S22、S40扩增后分别出现了分子量为2 144 bp和2 082 bp的差异条带,这能否从一定程度上揭示UV-B对植物造成损伤的分子生物学机制,还有待进一步的研究。

油菜叶片总蛋白质双向电泳样品制备方法的改进

孔芳;蒋金金;吴磊;葛才林;王幼平;

2010, 0(05): 93-96.

摘要 ( 85 )

PDF (288KB) ( 367 )

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以甘蓝型油菜"扬油6号"的叶片为试验材料,分别采用传统的TCA/Acetone(三氯乙酸/丙酮沉淀法)和改进的PEG(polyethylene glycol)分步提取法提取叶片可溶性总蛋白,并利用条件一致的蛋白质双向电泳体系进行比较。TCA/Acetone法提取的蛋白质双向电泳图谱背景中由于高丰度"housekeeping"结构蛋白的存在,特别是叶片中参与光合作用的Rubisco蛋白的干扰,图谱中低丰度调控蛋白受到了高度覆盖和遮蔽现象,影响双向电泳图谱的质量。而PEG分步提取法提取的蛋白质样品,可以剔除Rubisco蛋白,使获得的双向电泳图谱清晰,无斑点间的遮蔽现象,为油菜叶片蛋白质组定量和定性分析提供了丰富的信息。

葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究

杨相昆;田海燕;牛建新;王林;代永欣;

2010, 0(05): 97-100.

摘要 ( 110 )

PDF (1359KB) ( 281 )

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旨在建立适合葡萄的葡萄病毒B的RT-PCR检测技术。从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA,以其为模板合成cDNA第一链,并利用两对引物分别进行PCR扩增;回收PCR特异扩增产物,与pUCm-T载体连接,并进行转化、重组克隆的筛选、重组质粒的酶切鉴定和序列测定。结果显示,两对引物均能获得与预期片段大小一致长约460 bp和470 bp的扩增产物扩增片段序列与已报道GVB序列(序列号:X75448)的核苷酸同源性均为81%,经反复多次试验证实,利用总RNA为模板合成cDNA并进行PCR扩增检测GVB是准确、可靠的。

高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究

黄东亮;覃肖良;廖青;高轶静;方锋学;

2010, 0(05): 101-106.

摘要 ( 93 )

PDF (642KB) ( 475 )

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甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物。目前,甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一。基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础。本研究设计含一系列SDS浓度的提取液,同时设加液氮和不加液氮研磨的对比试验,提取甘蔗不同部位叶片的基因组DNA并进行产量和纯度检测以及分子生物学分析。结果表明,所有提取液提取的甘蔗基因组DNA纯度均很高,A260/A280在1.8-2.0之间,A260/A230大于2,但提取液I(0.75%SDS)提取的甘蔗基因组DNA产量较低;加液氮与否对甘蔗基因组DNA的提取产量和纯度没有影响;以提取的甘蔗基因组DNA为模板,分别用一对扩增SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因部分片段的引物和一对ISSR引物进行PCR扩增,所有DNA均能扩增出预期的条带;用不同的限制性内切酶对所提取的甘蔗基因组DNA进行酶切,所有DNA样品均能完全酶切。本研究得出最佳甘蔗基因组DNA提取方法如下:磨碎甘蔗叶片后,加DNA提取液(SDS:1.5%;Tris:100 mM;EDTA:20 mM;NaCl:500 mM)于65℃裂解30 min,经酚∶氯仿和氯仿各抽提一次,可获得高产量高质量的甘蔗基因组DNA,能满足后续分子生物学研究的要求。

西瓜根际枯萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

赵丽明;丁延芹;路晓萌;姚良同;杜秉海;

2010, 0(05): 107-110.

摘要 ( 108 )

PDF (257KB) ( 343 )

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从西瓜根际分离获得了32个放线菌分离物,通过离体拮抗试验,筛选出3株对西瓜枯萎病有良好拮抗效果的放线菌,编号为XF9、XF18和XF22。通过对其进行形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,初步确定XF9为灰色链霉菌(Streptomyces griseus),XF18为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae),XF22为脱叶链霉菌(Streptomyces exfoliates)。XF9、XF18和XF2216S rDNA序列的GenBank登录号分别为EU723881、EU723880和EU723879。

三株甜瓜拮抗细菌的筛选与鉴定

路晓萌;姚良同;赵丽明;杜秉海;丁延芹;

2010, 0(05): 111-115.

摘要 ( 95 )

PDF (452KB) ( 287 )

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以甜瓜根腐病病原菌(Fusarium solani)为指示菌,从甜瓜根际筛选到两株具有明显拮抗效果的细菌,编号为F22,T5b。以甜瓜霜霉病病原菌(Pseudoperonospora cubensis)为指示菌,从甜瓜健康叶际中筛选出一株具有拮抗效果的细菌,记为B11b。经过形态学观察、生理生化测定,16S rDNA序列及系统发育分析,初步鉴定T5b为芽孢杆菌属(Bacillussp.),F22,B11b为斯式假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。T5b,F22,B11b的16S rDNA序列的GenBank登录号分别为EU771077,EU771075,EU771074。

蛋白芯片载体表面修饰对探针固定影响的研究

王涛;郭子瑜;张瑞;聂利利;贾芸芳;邢克礼;

2010, 0(05): 116-120.

摘要 ( 161 )

PDF (601KB) ( 683 )

相关文章 | 计量指标

采用3-氨基丙基-三甲氧基硅烷((3-aminopropyl)trimethoxysilane,APTES)、戊二醛(glutaraldehyde,GA)、多聚-L-赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)修饰芯片载体表面,对3种不同修饰方法制备的蛋白质芯片进行对比研究。将Cy3标记羊抗鼠IgG固定在修饰后片基上,选择蛋白探针的固定率作为检测指标;将小鼠IgG作为探针固定在芯片上,靶蛋白为Cy3标记羊抗鼠IgG,通过生物芯片扫描仪检测反应后荧光强度,选择蛋白探针的反应性作为检测指标,探讨制备蛋白质芯片较佳的表面修饰方法。结果显示,戊二醛修饰玻片对蛋白固定较好,有较高的反应活性,检测限较宽,但背景噪声较高。

染色质免疫沉淀试验中基因组DNA超声破碎条件优化策略

李敏俐;关善辉;陆祖宏;

2010, 0(05): 121-125.

摘要 ( 369 )

PDF (370KB) ( 1979 )

相关文章 | 计量指标

染色质免疫沉淀试验中对共价交联的基因组染色质进行超声处理以获得适当大小的DNA片段是ChIPSeq和ChIP-chip成功的前提。影响基因组DNA破碎的因素很多,细胞浓度、细胞裂解方式、超声体积、探头深度、超声环境、超声时间和超声功率等都会对超声效果产生影响。如何获得各个可变参数的优化组合是一个需要多次摸索的过程,借鉴其它研究者已经建立的优化条件进行探索是一条比较省时简便的途径。本研究针对超声时间、细胞裂解方式、超声环境和超声功率等因素进行优化;利用优化的条件超声,得到适合大小的DNA片段;对这些片段进行染色质免疫沉淀试验,获得已知靶基因的特异性富集;证明超声优化条件是成功的。本研究提出的超声优化策略及获得的优化条件为后续ChIPSeq试验创造了前提条件,也对其他研究者具有借鉴意义。

运用酶切自连法分析鉴定肺炎链球菌体内诱导基因

庞丹;王虹;尹楠林;杨晓亮;胥文春;尹一兵;张雪梅;

2010, 0(05): 126-129.

摘要 ( 91 )

PDF (1242KB) ( 326 )

相关文章 | 计量指标

肺炎链球菌是严重侵袭性感染和上呼吸道感染最重要的条件致病菌之一,分析鉴定体内诱导基因序列变得尤为重要。本研究利用酶切自连法成功从129个体内诱导表达的肺炎链球菌中获得13个融合重组自杀质粒,通过与肺炎链球菌株TIGR4基因组序列的同源性比对,共得到10个不同的体内诱导基因,其中8个是从血液中筛选出的,另2个为从肺组织中筛选出;通过分析得到18个开放阅读框,其中大部分为已知功能基因,参与细菌多种生命活动,有2个为未知功能基因,编码假想蛋白。可见,酶切自连法可有效用于筛选基因的分析鉴定。

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对淋巴瘤细胞Jurkat生长的影响

任玉珊;韩钰;蔡富强;王艳林;

2010, 0(05): 130-134.

摘要 ( 121 )

PDF (1013KB) ( 286 )

相关文章 | 计量指标

探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)反义RNA是否对人淋巴瘤细胞Jurkat的生长具有抑制作用。含反义RNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Rodc用脂质体转染Jurkat细胞,G418筛选ODC表达抑制的细胞株,MTS法分析细胞增殖,Western blotting检测细胞中ODC蛋白表达水平,半定量RT-PCR检测细胞中ODC mRNA含量,流式细胞术检测细胞周期的变化,DNA片段化分析细胞凋亡。结果显示,成功获得ODC表达抑制的淋巴瘤细胞株J/o,ODC反义RNA转染细胞后,引起Jurkat细胞生长缓慢和S/G2细胞周期停滞,细胞对抗癌药物DFMO敏感性显着增加。由此证明,ODC反义RNA能抑制人T淋巴瘤Jurkat细胞的生长,具有治疗人白血病的潜在应用价值。

人IL-6基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化

史继静;刘朝奇;杨凡;杨祖伟;

2010, 0(05): 135-140.

摘要 ( 175 )

PDF (488KB) ( 393 )

相关文章 | 计量指标

构建人白细胞介素6(IL-6)的原核表达载体并优化其表达条件,为IL-6的高效表达提供试验依据。以人T细胞cDNA为模板通过PCR方法扩增IL-6基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用Western blotting及人IL-6检测试剂盒分析鉴定。在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、卡那霉素浓度、培养温度等来优化IL-6表达条件。结果显示,原核表达载体pET28 a(+)-IL-6成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约22 kD的IL-6蛋白,经Western blotting鉴定正确,经人IL-6试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。在IPTG浓度400μmol/mL,卡那霉素浓度50μg/mL,40℃培养6 h的条件下,目的蛋白表达量最高,可占总蛋白表达量的40%。成功构建人IL-6原核表达载体且获高效表达,为研究IL-6生物学活性及产品开发提供了试验基础。

甲醇利用菌SDM11中glyA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

孔庆胜;张向阳;韩晓琳;林强;董全林;

2010, 0(05): 141-144.

摘要 ( 98 )

PDF (346KB) ( 285 )

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对甲醇降解菌Methylobacterium.sp SDM11中的glyA基因进行克隆及特性研究,以获得更多的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)资源。根据GenBank中已报道的Methylobacterium extorquensAM1中的glyA基因序列(登录号:L33463)设计引物,以SDM11的基因组DNA为模板,PCR扩增glyA基因。利用pETblue-2载体将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。PCR扩增到一个1.40 kb大小的DNA片段,经过blast软件比对分析,发现该片段与已报道的Methylobacterium extorquensAM1的glyA基因的序列相似性为95%,氨基酸序列的相似性为98%。该基因编码468个氨基酸,预测的分子量大小为52.2 kD,等电点为7.02,发现纯化后的目标蛋白具有SHMT酶活性,并初步测定了酶活力。

猪肝沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

刘茜;

2010, 0(05): 145-148.

摘要 ( 106 )

PDF (580KB) ( 292 )

相关文章 | 计量指标

根据动物产品中沙门菌的分离和耐药性分析,来评估猪肝中沙门菌的危害程度。对猪肝沙门菌采用分离培养,并进行药敏纸片扩散试验法分析,得出猪肝中沙门菌耐药现象严重的结论。从猪肝中所分离出的5株沙门菌都有不同程度的耐药存在,而且多重耐药现象也普遍存在,特别是对庆大霉素、利福平、多粘菌素B等常用药物耐药(耐药率100%),建议近期对猪沙门菌病的治疗用药为阿米卡星、头孢克肟、头胞噻肟。这些提示当用药物进行治疗时,必须在用药前对病原菌进行药敏试验,只有这样才能有针对性地筛选敏感药物,以提高疗效。

猪卵泡液样品制备方法对双向电泳图谱的影响

孙艳玲;周虚;李晓艳;王兴龙;李成娇;

2010, 0(05): 149-153.

摘要 ( 76 )

PDF (360KB) ( 298 )

相关文章 | 计量指标

比较不同的蛋白制备方法,寻找适合猪卵泡液的双向电泳样品制备方法,提高2-DE图谱的分辨率和重复性。利用ProteoExtract Albumin/IgG Remove Kit去除卵泡液中的高峰度蛋白;然后分别用丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法和超滤法进行样品浓缩,比较分析对2-DE图谱的影响。结果表明,TCA/丙酮沉淀法制备的蛋白样品获得的电泳图谱质量较好,蛋白斑点数目较多,斑点较清晰、圆滑,分辨率较高,重复性较好。TCA-丙酮沉淀法更适合于制备猪卵泡液的双向电泳蛋白样品,为进一步对猪卵泡液2-DE图谱进行分析、鉴定及寻找生物标记物提供了保证。

猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在毕赤酵母中的表达

于天飞;王君伟;胡森;靳淼;

2010, 0(05): 154-157.

摘要 ( 107 )

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采用基因重组的方法构建了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K-ts,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达外源蛋白的毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-ts。表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性。本研究为TGE的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。

免疫刺激复合物疫苗制备及其对小鼠免疫功能的影响

章玉涛;王加启;赵圣国;张春林;卜登攀;

2010, 0(05): 158-161.

摘要 ( 115 )

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确定了免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的安全有效剂量及其对小鼠免疫功能的影响。选取体重25 g左右的昆明小白鼠60只,分为12组,每组5只,腹腔分别注射不同剂量(5-200μg)的ISCOM疫苗,观察小鼠健康状态。选取体重28 g左右的昆明小白鼠60只,分为4组,分别在腹腔注射相同剂量的灭菌生理盐水,Lipase+生理盐水,空ISCOM,Lipase+ISCOM疫苗,利用间接ELISA检测血清中特异性抗体效价。结果表明,当注射剂量为5-25μg/只时,小鼠无任何异常症状。免疫后8 d,小鼠血清特异性抗体效价(log2)可以达到10.5,显着高于对照组。因此,ISCOM疫苗能有效引起小鼠的免疫反应。

牛奶掺豆浆和奶粉的PCR检测

陈沁;徐仙;姚丽萍;

2010, 0(05): 162-165.

摘要 ( 124 )

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以光明纯牛奶和酸奶、蒙牛纯牛奶和酸奶为材料,按不同浓度在牛奶中掺杂豆浆和奶粉,提取DNA,利用PCR技术检测牛奶掺杂后的多态性情况。结果表明,用引物S111进行PCR扩增可以有效地区分牛奶、酸奶、豆浆,并且区分不同品牌牛奶的产品;用引物S1015和S109进行PCR扩增能检测出牛奶中是否掺杂了豆浆,检出限为3%;用引物S111进行PCR扩增能检测出牛奶中是否掺杂奶粉,检出限为40%。

东北梅花鹿居群内亲缘关系的AFLP指纹分析

蔡志华;蒋德梅;陶红梅;姜计;温新福;

2010, 0(05): 166-172.

摘要 ( 89 )

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用扩增片段的长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记分析研究了东北梅花鹿同一居群内27个个体的亲缘关系,并以此作为优良种鹿选育种的辅助手段。筛选出9对AFLP引物组合,用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,对27只东北梅花鹿基因组DNA进行AFLP检测,共获得15 169条扩增带,检测出多态性条带11 443,多态性比率78.43%,平均每对引物检测到1 271个多态性位点。群体内相似系数AFLP研究结果,平均为0.7841(0.6809-0.8648),27只鹿聚为Ⅰ和Ⅱ两大类群,Ⅱ大类群分为5组,说明该鹿群个体间有较丰富的遗传变异,且与人工定向选配种有关。Ⅱ-4组群体内相似系数最高,在0.82以上,个体之间遗传距离最小在0.1354-0.1563之间,与繁殖记录的亲缘关系基本一致。该研究表明AFLP指纹技术用于梅花鹿遗传多态性分析,品种鉴定及亲缘关系分析是可行的。

24种食蟹猴MHC B座位等位基因序列特征与进化分析

郑宇凌;蒋琼橙;卓敏;王小宁;

2010, 0(05): 173-178.

摘要 ( 108 )

PDF (785KB) ( 404 )

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食蟹猴(Macaca fascicularis,Mafa)是重要的医学研究动物模型,被大量用于药物及移植医学试验。为探讨本地食蟹猴MHC I类基因B座位的多态性,本研究经大量PCR,克隆与测序,从10只食蟹猴中分离到24种Mafa-B等位基因的全长序列,其中4种为新序列,已递交NCBI数据库,并给予系统命名。在每个个体中均获得6至11条Mafa-B等位基因,显示食蟹猴的MHC-B座位出现扩增,食蟹猴MHC-B为重复基因座的特征与恒河猴类似。氨基酸序列比对分析得出,MHC-B基因在抗原肽结合区高度多态。

圆斑星鲽肌钙蛋白Ⅰ基因的克隆和序列分析

王健;苏浩;高祥刚;李云峰;赫崇波;

2010, 0(05): 179-182.

摘要 ( 92 )

PDF (341KB) ( 259 )

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通过建立圆斑星鲽肌肉cDNA文库,大规模的EST测序和PCR技术得到了圆斑星鲽肌钙蛋白Ⅰ的完全表达序列,该序列全长845 bp,编码171个氨基酸。经同源性分析结果表明,与多种鱼类的肌钙蛋白Ⅰ具有较高同源性,其中与鳜鱼的肌钙蛋白Ⅰ同源性最高,为86%。序列提交GenBank收录,登录号为GU229275。

短蛸AFLP分子标记分析体系的优化与建立

张龙岗;杨建敏;刘相全;

2010, 0(05): 183-188.

摘要 ( 100 )

PDF (496KB) ( 264 )

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本研究构建了短蛸扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。得到了一种适于短蛸AFLP技术分析的优化体系,该体系中各优化因素为:模板DNA浓度为200 ng/μL;酶切体系中,MseI和EcoR I各加入5 units,缓冲液使用MseI buffer Tango,反应时间为3-4 h;连接最适反应时间为12 h;预扩增产物最适稀释倍数为20倍。该体系的构建为AFLP技术在短蛸分子遗传多样性研究中的应用奠定了基础。

原生质体紫外诱变选育γ-癸内酯高产菌株

徐勤;王昌禄;李风娟;王玉荣;陈勉华;

2010, 0(05): 189-191.

摘要 ( 85 )

PDF (980KB) ( 260 )

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为选育γ-癸内酯高产菌株,以毕赤酵母TT009(Pichia guilliermondiiTT009)为出发菌株进行原生质体紫外诱变,确定原生质体形成和诱变的最佳条件为菌龄16 h,酶解浓度1%,酶解时间50 min,酶解温度28℃,15 W紫外灯于30 cm处照射25 min。经初筛和复筛,得到γ-癸内酯高产菌株M6,利用该菌株进行摇瓶发酵,γ-癸内酯产量达到1.25 g/L,比出发菌株提高了28.8%。

重组Hepcidin融合蛋白的氧化复性及活性鉴定

王继雯;谢宝恩;甄静;周伏忠;陈国参;

2010, 0(05): 192-195.

摘要 ( 110 )

PDF (368KB) ( 431 )

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将诱导表达的His-hepcidin融合蛋白包涵体通过固定化金属离子配体亲和层析(IMAC)柱分离纯化后,在cys-teine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,稀释复性后用肠激酶将融合蛋白的his-tag切除。酶切后所得的Hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有抗菌活性。

一株异养型亚硝酸盐氧化细菌的分离及其降解特性的研究

李焱生;魏民;张艾晓;武斌;钟卫鸿;

2010, 0(05): 196-202.

摘要 ( 101 )

PDF (1591KB) ( 600 )

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以亚硝酸盐和琥珀酸钠作为惟一氮、碳源从活性污泥中筛选分离一株能够高效氧化亚硝酸盐的硝化菌株,并对其形态学、生理生化及16S rDNA同源性进行分析,在此基础上研究pH、温度、转速、初始亚硝基氮的浓度以及盐浓度对其氧化亚硝酸盐的影响。结果显示,在好氧条件下,该菌株能在12 h内将356.004 mg/L亚硝酸盐降解99.53%。根据形态学特征、生理生化特性以及16S rRNA同源性分析,初步将该菌株鉴定为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri),并将其命名为LYS-86。该菌株氧化亚硝酸盐的最适pH8.0-10.0,温度30℃,转速180 r/min,盐浓度1 g/L。当培养基中初始亚硝酸盐浓度为0.5 g/L时,菌株LYS-86的硝化活性最高,随着培养基中初始亚硝基氮浓度的不断提高,菌株LYS-86的硝化活性会不断下降。本研究利用硝化细菌选择性培养基从活性污泥中筛选到了一株异养型亚硝酸氧化菌菌株,该菌株具有高效的硝化活性,为今后该菌株的实际应用及理论研究奠定了基础。

康宁木霉QF-02纤维素酶酶学性质的研究

邹水洋;郭祀远;

2010, 0(05): 203-206.

摘要 ( 119 )

PDF (285KB) ( 266 )

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对康宁木霉QF-02生产的纤维素酶的一般酶学性质进行了研究。该纤维素酶系中滤纸酶、羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、β-葡萄糖苷酶的最适作用温度分别为55℃、65℃、50℃和70℃,最适作用pH为4.0-5.0;在40-50℃范围内热稳定性较好,24 h保温后的残留酶活在48.5%以上;在pH3.0-8.0范围内比较稳定,4℃保存24h后的残留酶活在75.7%以上。与几种商品纤维素酶相比,该纤维素酶对未处理和碱预处理稻草都表现出较强的糖化能力。

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