生物技术通报

邓平建;周向阳;杨冬燕;王学林;侯红利;杨永存;吴水清;张海龙;杨小柯;

2011, 0(05): 1-9.

摘要 ( 79 )

PDF (1090KB) ( 452 )

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筛查转基因作物非预期效应遇到的最大难题是难以鉴别其非预期效应和自然变异。从转基因作物非预期效应与自然变异的发生机制、食用安全风险和遗传特性的比较分析阐述两者在发生机制及遗传特性方面的差异和特征,为设计减少自然变异干扰的非预期效应筛查模式和方案提供重要启示。

高等植物基因组测序回顾与展望

刘蓉蓉;

2011, 0(05): 10-14.

摘要 ( 79 )

PDF (753KB) ( 1234 )

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全基因组序列测定为揭示植物重要性状形成的分子和遗传机制提供了强大工具,基因组学研究正开始指引着农作物新品种培育向定向化和精确化转变。在新一代测序技术的带动下,植物全基因组测序的热潮已经到来。对迄今开展的高等植物基因组测序工作进行简要回顾,并对未来的研究热点进行展望。

植物MicroRNA的特点与研究方法

周立敬;高飞;马亭亭;刘冉;马玲;姚尧;周宜君;

2011, 0(05): 15-20.

摘要 ( 130 )

PDF (1323KB) ( 571 )

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MicroRNAs(miRNAs)是一类在植物、动物、单细胞藻类和病毒等中存在的具有调控基因表达作用的内源非编码小RNA(small RNAs)。在植物中,miRNAs主要依靠与靶基因之间完全或近乎完全的互补配对切割靶基因或翻译抑制实现其调控功能。主要综述植物miRNA的特点,并介绍miRNA的获得方式、靶基因预测及验证方法。

RNA编辑功能和RNA干扰

代鹏;沈辉;马军武;刘光远;

2011, 0(05): 21-25.

摘要 ( 122 )

PDF (1303KB) ( 475 )

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RNA编辑被认为是生命体一种新的基因加工与修饰现象,是指DNA转录成RNA后除RNA剪切外的其他加工过程,以核苷酸的删除、插入或替换等方式改变遗传信息,揭示生物进化过程中基因修饰和调控的另一个重要途径,是对中心法则的重要补充。而RNAi是一种由dsRNA介导的,在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因表达的基因调节途径。着重介绍RNA编辑功能、RNA编辑与RNA干扰关系。

抗肿瘤药物对小鼠早期胚胎发育的影响

陈秀莉;马利兵;李佳佳;籍凤宇;

2011, 0(05): 26-30.

摘要 ( 88 )

PDF (1654KB) ( 511 )

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表观遗传修饰在基因表达和克隆胚胎的早期发育方面有重要作用。表观遗传修饰至少发生在两个关键时期——配子形成期和植入前胚胎,如果在此期间发生异常,则会导致胚胎的死亡及出生后各种疾病的发生。其中DNA的甲基化是最重要的一种表观遗传修饰类型,DNA甲基化在哺乳动物发育过程中起关键作用。综述几种类型抗肿瘤药物作用机制——其使胚胎的DNA甲基化降低,引起转录活性降低,进而导致胚胎发育停滞。

梭热杆菌纤维小体研究进展

李爽;吴宪明;陈红漫;阚国仕;曲谨郁;任大明;

2011, 0(05): 31-37.

摘要 ( 97 )

PDF (1173KB) ( 663 )

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梭热杆菌(Clostridium thermocellum)是一种嗜热厌氧细菌,通过分泌大量纤维素酶高效降解纤维素。根据作用纤维素的不同部位,梭热杆菌分泌的纤维素酶分为内切纤维素酶和外切纤维素酶。纤维小体是由支架蛋白、锚定元件、黏合蛋白、纤维素结合域和催化单位组成的复合体,其独特的结构,使得它可以比真菌纤维素酶更紧密地结合到纤维素表面,这个复合结构结合着多种催化单位,而此特殊的结构是梭热杆菌高效降解纤维素的必要条件。近年来,为更深入透彻地了解纤维小体的结构与功能进行了大量的研究工作,现对相关研究进展进行综述,并给出了未来可能的发展方向。

乳酸菌双组分信号转导系统研究进展

刘伟;崔艳华;曲晓军;

2011, 0(05): 38-42.

摘要 ( 110 )

PDF (901KB) ( 575 )

相关文章 | 计量指标

乳酸菌中存在着一种重要的调控机制——双组分信号转导系统,它可以通过调控乳酸菌的多种生理生化过程来适应外界环境的变化。就双组分信号转导系统的组成、作用机制以及乳酸菌中调控耐酸机制、细菌素的合成和黏性吸附等生理过程的双组分信号转导系统作一综述。

里氏木霉及其纤维素酶高产菌株的研究进展

覃玲灵;何钢;陈介南;

2011, 0(05): 43-49.

摘要 ( 141 )

PDF (1669KB) ( 1436 )

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随着纤维素在能源、材料及化工等领域的广泛开发和应用,里氏木霉作为一种重要的产纤维素酶工业用菌种,越来越受到人们的广泛关注。为了提高其酶活,人们做了大量的工作,获得了一些相当好的突变株。对里氏木霉及其突变株的基因组进行研究,有助于人们理解其高效产酶的机制,同时也有利于构建其基因工程菌。介绍里氏木霉Trichoderma reesei的背景及其部分高产纤维素酶突变株,并阐述近些年来对其突变株的基因组的研究进展。

混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-酮基-L-古龙酸研究进展

吕淑霞;赵朔;杨宇;张忠泽;陈宏权;

2011, 0(05): 50-54.

摘要 ( 78 )

PDF (1588KB) ( 458 )

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利用混合菌发酵L-山梨糖生产2-酮基-L-古龙酸(2-KGA),再经化学转化合成维生素C(Vc),是我国工业生产Vc的主要途径,具有简化工艺,减少污染,降低能耗等诸多优点。从菌系组合、菌种选育、代谢途径与酶学特性、工程菌构建、伴生作用机制及发酵工艺等方面出发,综述混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-KGA的研究现状和最新进展,并提出进一步研究和探索的方向。

呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1、NS2的研究进展

卜选运;

2011, 0(05): 55-57.

摘要 ( 117 )

PDF (522KB) ( 741 )

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呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染的重要病原体之一。由于该病毒的致病机理还不太清楚导致目前尚无有效治疗RSV的方法。研究表明,呼吸道合胞病毒的非结构蛋白NS1、NS2具有抗细胞凋亡的作用,同时可以逃避宿主免疫系统(IFN)对病毒的干扰,有利于病毒复制。敲除这两种基因的减毒活疫苗和表达沉默NS1的小干扰RNA(siRNA)的质粒研究已经取得了一定的进展。对非结构蛋白功能的深入研究有助于了解RSV的致病机理,同时为预防和治疗RSV感染奠定理论基础。

DNA条形码技术及其在保护生物学中的应用

杨帆;雷光春;张爱兵;

2011, 0(05): 58-63.

摘要 ( 104 )

PDF (758KB) ( 785 )

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物质文明及生活水平的提升为人类带来诸多好处的同时,也使人们越来越清晰地意识到保护生物多样性及生态系统稳定性的重大意义。DNA条形码技术作为现今生物分类学中重要的分子技术,可以快速准确地鉴定物种。多国科学家都在致力于对DNA条形码的研究,以便能共同组建数据库。将现有物种正确分类并期望用于发现新种,为生物的保护及生态系统的维护作出巨大贡献。细胞色素C氧化酶亚单位I(COI)是现在动物种类鉴定中最常用的基因之一。综述DNA条形编码技术的产生、原理、发展概况与操作及其在保护动物分类中的应用。阐明该技术在保护生物学中应用的意义与可行性,并讨论DNA条形编码在生物分类应用中可能存在的问题。

基因打靶与RNA干扰技术在丝状真菌基因功能组学研究中的应用

冀颖;李梅;蒋细良;

2011, 0(05): 64-70.

摘要 ( 92 )

PDF (666KB) ( 753 )

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随着丝状真菌模式生物基因组测序工作的进行,其提供的大量未知功能的基因序列,为研究丝状真菌的基因功能开辟了新的方向,并已成为生命科学领域研究的热点。对基因功能研究中最新的两种方法——基因打靶和RNAi技术的原理、技术路线和特点以及应用情况进行综述。

狂犬病毒作为神经示踪剂的研究进展

宋艳;李宁;黄飞;单晶辉;张茂林;段铭;关振宏;

2011, 0(05): 71-74.

摘要 ( 190 )

PDF (886KB) ( 1857 )

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狂犬病毒是仅有的完全特异的示踪剂,因为它能逆向通过化学突触进行神经示踪且不改变神经细胞的代谢,可以逐级的,时间依赖的方式感染大量的突触联系的神经网络。根据狂犬病毒的特性解释该病毒作为神经示踪剂的优势,总结狂犬病毒跨神经进行示踪的方法,并对基因修饰的狂犬病毒的新兴技术进行讨论和展望。

DGGE技术在森林土壤微生物多样性研究中的应用

王洋清;杨红军;李勇;

2011, 0(05): 75-79.

摘要 ( 92 )

PDF (343KB) ( 700 )

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微生物在森林土壤物质转化中扮演着重要角色,与森林的林型、土壤理化性质存在着密切关系。森林土壤微生物多样性及其变化在一定程度上反映了土壤环境的生产力和稳定性,对表征森林演替,土壤生态修复等有重要意义。变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术测定微生物多样性具有快捷、高效和可重复性高等优点。简要介绍DGGE技术的原理,分析这一技术的局限性和优化方法。重点以实例说明该技术在森林土壤微生物多样性研究中的应用现状,展望该技术的发展前景,以期能为今后这一领域的研究提供科学依据。

农杆菌介导法向玉米萌发种子转化bar基因的研究

张明义;张彦芹;杨丽莉;梁改梅;董春林;孙洁;李洁;谢宝妹;

2011, 0(05): 80-86.

摘要 ( 90 )

PDF (702KB) ( 552 )

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以玉米(Zea mays L.)自交系‘昌7-2’的种子作为受体,质粒pCAMBAR.CHI.11为供体,采用农杆菌介导植物萌发种子基因转化方法将bar基因导入受体材料。PCR和Southern blotting杂交分析结果证明转化成功,转化率在6%左右。转化材料以0.2%Basta溶液喷雾后可正常生长发育。结果证明,农杆菌介导植物萌发种子转化,是适于玉米基因遗传转化的有效方法。

蒙古冰草MwLEA3基因ihpRNA表达载体的构建

石凤敏;云锦凤;赵彦;

2011, 0(05): 87-92.

摘要 ( 87 )

PDF (970KB) ( 341 )

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采用RT-PCR方法从蒙古冰草中克隆出MwLEA3基因的特异性cDNA序列,并连入克隆载体pGM-T中。根据植物中ihpRNA原理,成功构建了35S启动子调控的具有MwLEA3基因反向重复结构的ihpRNA表达载体pART27-MwLEA3(HB)-MwLEA3(EX),并通过冻融法转化将MwLEA3基因的ihpRNA表达框架成功导入根癌农杆菌LBA4404中。

绵羊Myostatin基因敲除载体的构建

孙丹;金梅;杜立新;魏彩虹;张莉;路国彬;陆健;吕延飞;

2011, 0(05): 93-97.

摘要 ( 130 )

PDF (1672KB) ( 416 )

相关文章 | 计量指标

根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除载体。利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9 kb,包括全部的exon1,intron1,exon2及部分启动子和大部分intron2;同源短臂1.1 kb,包括部分exon3和3′非翻译区序列,将二者连入PloxpII正负筛选敲除骨架载体,利用骨架载体上Neo基因替代Myostatin基因的exon3,从而成功构建专门针对Myostatin第3外显子区域缺失的置换型敲除载体PloxpⅡ-OVIS-MSTN。酶切和测序鉴定证明载体构建正确,为后续获得绵羊Myostatin基因缺失型体细胞株奠定试验基础。

小鼠beta-防御素2真核表达载体的构建及表达

魏晓丽;温浩;金一帮;蒋中华;李明远;

2011, 0(05): 98-101.

摘要 ( 88 )

PDF (1449KB) ( 320 )

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构建小鼠beta-防御素2(murie beta-defensin 2,mBD2)的真核表达载体pcDNA-mBD2,并观察其在真核细胞中的表达。从小鼠肝组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应扩增得到mBD2基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)获得pcDNA-mBD2;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染siha细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内mBD2的表达。结果显示,构建了小鼠mBD2的真核表达载体,转染siha细胞培养并采用G418稳定筛选后,获得稳定转染细胞,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染细胞内mBD2的表达。成功构建了真核表达载体pcDNA-mBD2,为研究mBD2在宫颈癌发生发展过程中的作用及作用机制奠定基础。

穴蚁蛉幼虫全长均一化cDNA文库的构建

杨展;李广宏;邱壮伟;王欢歌;苏志坚;黄亚东;

2011, 0(05): 102-107.

摘要 ( 92 )

PDF (548KB) ( 388 )

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通过构建穴蚁蛉幼虫(俗称蚁狮)全长均一化cDNA文库,以期了解蚁狮的抗菌肽、毒素蛋白以及其它药用蛋白种类,为日后筛选、克隆表达和分离纯化这些药用蛋白奠定基础。用针刺诱导蚁狮产生抗菌物质后,分离纯化总RNA,结合SMART全长文库与DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建全长均一化cDNA文库,并通过平板计数和菌落PCR方法鉴定文库。随机挑选192个单克隆进行5′端测序,并与NCBI数据库进行比对分析。结果显示,构建出的文库平均插入片段长度为1 200 bp,原始文库的滴度达到7.5×105CFU/mL,而扩增文库则为1.95×1011CFU/mL。在所挑选的单克隆中,共获得190条有效序列,平均读长1 340 bp,文库重组率达到98.96%。与NCBI数据库比对后发现,这些序列可能是一些编码蚁狮免疫、消化及毒性蛋白的基因。

柔嫩艾美耳球虫新基因的生物信息学分析与克隆表达

姜连连;林矫矫;韩红玉;董辉;赵其平;朱顺海;马卫娇;程军;曾艳波;黄兵;

2011, 0(05): 108-113.

摘要 ( 81 )

PDF (1533KB) ( 438 )

相关文章 | 计量指标

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583。该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征。利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段。将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD。免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。

接种丛枝菌根真菌和有机土栽培对甜椒根际微生物分子多态性的影响

王林闯;贺超兴;张志斌;

2011, 0(05): 114-120.

摘要 ( 68 )

PDF (1024KB) ( 415 )

相关文章 | 计量指标

通过采用变形梯度凝胶电泳(DGGE)技术对普通土、普通土+GM、有机土和有机土+GM 4个不同处理下甜椒根际土壤微生物的多样性进行研究。结果表明,接菌处理使细菌的种类在数量上有所增加,其中有新的细菌类型的出现,也有一些细菌类型的减少和消失,一些共有细菌种类的数量也得到了丰富;应用有机土栽培有利于一些菌群的生长繁殖,有助于促成优势菌群的建立;对电泳图谱的相似性系数分析表明,有机土对细菌菌群多样性的影响强于接种菌根真菌处理;普通土接种菌根真菌对土壤微生物种群的影响强于有机土;接种菌根真菌使土壤的细菌种群结构发生了变化,并增加其菌群种类的相似性。

白地霉遗传多样性与生态地理起源地的相关性分析

刘天明;王会会;王娟娟;

2011, 0(05): 121-125.

摘要 ( 86 )

PDF (1662KB) ( 303 )

相关文章 | 计量指标

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记方法从22个随机引物中筛选出TubeB-03、TubeB-07、TubeB-12三个最佳引物分析来源于7个省区的23株白地霉的种内遗传多样性,并用UPGMA聚类分析法评价它们之间的亲缘关系。结果表明,不同来源地的白地霉通过RAPD分析显示出较高的遗传差异性,并且,在系统进化树上处于同一分枝的菌株来源于生态地理相近的区域,仅有个别例外。因此,应用RAPD分子标记技术对来自不同生态区的白地霉种内遗传多样性和亲缘关系进行分析是可行的。

云南传统发酵豆豉中高产豆豉纤溶酶菌株的筛选及其酶谱分析

宋园亮;黄文宇;张忠华;吴少雄;殷建忠;柳陈坚;

2011, 0(05): 126-131.

摘要 ( 86 )

PDF (847KB) ( 369 )

相关文章 | 计量指标

从云南昆明、元阳、玉溪、昭通地区采集豆豉样品26个,通过琼脂-纤维蛋白平板试验,SDS-fibrin-PAGE蛋白电泳结合Zymography活性染色对相应酶谱进行分析;同时采用茚三酮法测定其豆豉纤溶酶活性,筛选得到5株豆豉纤溶酶活性较高的菌株,其中尤以ZT-13菌株纤溶酶活性达到97.09 U/mL,是工业化生产豆豉纤溶酶的潜在优良菌株。

亚麻纤维脱胶菌的筛选及脱胶效果研究

林静;谭晓明;王臻;李德舜;

2011, 0(05): 132-136.

摘要 ( 95 )

PDF (1815KB) ( 436 )

相关文章 | 计量指标

为筛选亚麻纤维脱胶菌株,从麻脱胶废水、废麻堆积物等7个含麻胶质样品中分离得到39株能分解果胶的菌株。采用水解圈法复筛选出8株果胶酶活性较高的菌株,经果胶酶、纤维素酶活性测定和菌体脱胶试验,最终确定8-1是优良的亚麻脱胶菌株,该菌株果胶酶活可达663.17 U/mL,而纤维素酶活仅为9.13 U/mL。菌株8-1经形态观察、Biolog菌种鉴定系统鉴定以及基于16S rDNA序列构建的系统进化树分析为一株芽孢杆菌。

产葡萄糖酸荧光假单胞菌的分离鉴定及解磷作用

彭帅;韩晓日;马晓颖;韩梅;

2011, 0(05): 137-141.

摘要 ( 80 )

PDF (1601KB) ( 431 )

相关文章 | 计量指标

从番茄根际土壤中分离到1株解磷荧光假单胞菌LAD6,并对其进行了形态特征、生理生化鉴定及16S rDNA同源性序列分析。高效毛细管电泳仪(HPCE)分析结果显示,LAD6能够产生葡萄糖酸。对LAD6的解磷能力的测定结果表明,培养液中的磷溶解量的变化与菌株LAD6的生长和生理代谢的变化相关,其最大磷溶解量达到了24.5μg/mL。

一株酸性淀粉酶产生菌的分离、鉴定及酶学特性初步研究

张丽靖;沈江锋;金庆超;杨郁;

2011, 0(05): 142-145.

摘要 ( 98 )

PDF (1498KB) ( 531 )

相关文章 | 计量指标

从富含淀粉的土样中筛选到一株酸性α-淀粉酶产生菌,经生理生化分析和16S rDNA序列测定,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为B.subtilis B6。这株菌产生的酸性淀粉酶的最适作用pH为5.0,最适作用温度为55℃,酶活性对Ca2+没有依赖性,Fe2+,Mn2+等对酶活性没有明显地抑制作用,Mg2+有较明显的促进作用。

分离自甘肃天祝五台岭土壤的放线菌拮抗性的初步研究

韩素贞;王静;吕超;

2011, 0(05): 146-150.

摘要 ( 98 )

PDF (1071KB) ( 362 )

相关文章 | 计量指标

从甘肃天祝县土壤中分离到的27株放线菌,作为测试放线菌拮抗性的供试菌株。抗菌试验表明,14株放线菌对6株革兰氏阳性菌和阴性菌以及白色念珠菌等指示菌有抗性。菌株WTL-4、WTL-20和WTL-26抗菌谱最广,WTL-4能抗3种革兰氏阳性菌,WTL-20能抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌、革兰氏阴性的沙门氏菌及真菌白色念珠菌,WTL-26能抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌及革兰氏阴性的沙门氏菌。抗肿瘤试验表明,有8株菌株对肿瘤细胞有抑制作用,其中抑制率在60%以上的菌株占18.5%。对抗肿瘤活性较高的3株菌WTL-4、WTL-14和WTL-15以及没有抗菌和抗肿瘤活性的菌株WTL-27进行了系统发育分析。从系统发育树可以看出,4株菌均属于链霉菌属(Streptomyces)。菌株WTL-4与Streptomyces viridochromoqenes的相似性为98%;菌株WTL-14和WTL-15的相似性达到99.2%,它们与S.flavoli-mosus174457的相似性达到99.4%;WTL-27与S.mycroflavus的相似性为99%。

谷氨酸棒杆菌aroⅡ、trpEGD基因的过量表达及其对色氨酸合成的影响

李智涛;伍展红;郑穗平;

2011, 0(05): 151-156.

摘要 ( 109 )

PDF (724KB) ( 453 )

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以谷氨酸棒杆菌SPT9(Phe-、Tyr-、4-FPr、6-FTr)为出发菌株,采用PCR方法扩增色氨酸合成途径中解除了反馈抑制的关键酶aroⅡ和trpEGD基因,应用大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌穿梭表达载体pEC-XK99E在谷氨酸棒杆菌SPT9中对其进行了分别过量表达和串联过量表达。首先对aroⅡ和trpEGD基因分别进行过量表达,得到菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD,摇瓶发酵试验表明,菌株SPT9-aroⅡ、SPT9-trpEGD的色氨酸产量相对于出发菌株SPT9分别提高了30%、23%;进一步对aroⅡ和trpEGD进行了串联过量表达,得到菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ,摇瓶发酵试验表明,该菌株色氨酸产量相对于出发菌株SPT9提高了84%。荧光定量PCR检测表明,菌株SPT9-trpEGD-TP-aroⅡ中aroⅡ、trpEGD基因的表达量分别为出发菌株SPT9的4.0倍和1.3倍。

肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因在大肠杆菌中的表达

隋姗姗;马江锋;侯顾伟;奚永兰;姜岷;

2011, 0(05): 157-161.

摘要 ( 99 )

PDF (1628KB) ( 637 )

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以肠膜明串珠菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1 581 bp的蔗糖磷酸化酶(SPase)DNA片段。将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,构建获得重组质粒pET-SPase。测序结果与GenBank上已公布的基因序列比较,有1个碱基发生变化,但该碱基的改变未引起氨基酸序列的改变。将pET-SPase转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态中,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约为55 kD,与预期大小一致,结果表明SPase基因在大肠杆菌中进行了表达。酶活分析,产物的比活为1.8 U/mg,证明了表达产物具有预期的酶活性。进一步考察了IPTG浓度、诱导温度和时间等因素对重组菌表达的蔗糖磷酸化酶的影响。在优化条件下,该蔗糖磷酸化酶的比活可以达到16.6 U/mg,比优化表达条件前的酶比活提高了9.2倍,比已报道的肠膜明串珠菌粗酶液比活(7.1 U/mg)提高了2.34倍。

重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的性质研究

陆敏;许黎明;吴宏宇;张继恩;李国栋;黄青山;

2011, 0(05): 162-166.

摘要 ( 111 )

PDF (1216KB) ( 435 )

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溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶,已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染,但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据。现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究。检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑、杀菌活性。结果显示,重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状;并且重组溶葡萄球菌酶在39℃牛奶中可以稳定存放至少20 h以上,酶活性保持稳定;同时重组溶葡萄球菌酶在牛奶中对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌仍然保持了良好的抑杀菌效果。该研究为今后溶葡萄球菌酶用于奶牛乳腺炎的治疗提供参考依据。

不同碳源对解磷真菌溶解低品位磷矿能力的影响

李露莉;邱树毅;

2011, 0(05): 167-171.

摘要 ( 86 )

PDF (380KB) ( 390 )

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以磷酸三钙作为唯一磷源,从磷矿区筛选出一株高效浸磷真菌。经过核糖体间隔区(ITS)扩增序列分析,确定该菌株属于黑曲霉。研究不同碳源条件下该菌株对低品位磷矿中磷浸出能力的影响;此外,还利用高效液相色谱法(HPLC)和耦合等离子体-发射光谱仪对溶磷机理进行了初探。结果表明,以可溶性淀粉作为碳源的条件下,真菌对低品位磷矿的磷浸出率最高,可能与其代谢产生的草酸和苹果酸及其有机酸总量有关,同时,磷浸出率与培养介质pH值呈显着负相关。

甘草质膜水通道蛋白GuPIP1对甘油的转运

王芳;董乐;戴聪杰;林娈;

2011, 0(05): 172-177.

摘要 ( 80 )

PDF (618KB) ( 431 )

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旨在进行甘草质膜水通道蛋白GuPIP1对水和溶质通透性的鉴定。将GuPIP1全长编码区的cDNA构入非洲爪蟾卵母细胞检测系统的表达载体psp64 Poly(A),并将体外转录获得GuPIP1的cRNA显微注射入卵母细胞,使GuPIP1基因在卵母细胞中表达,通过测定卵母细胞对水和溶质的转运功能来鉴定GuPIP1的转运功能。结果表明,GuPIP1在异源表达系统非洲爪蟾卵母细胞中具水和甘油通透性,但不能转运尿素,为探讨GuPIP1在植株生理中的作用奠定基础。

棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)G4株Ha109蛋白的原核表达及抗体制备

闫尧;曾利平;钱丽莹;徐旭士;

2011, 0(05): 178-182.

摘要 ( 81 )

PDF (800KB) ( 414 )

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根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)G4株基因组全序列,设计引物,利用PCR方法扩增出开放阅读框(open reading frame,ORF)109编码片段并将其克隆至载体pGEM-TEasy,测序正确后将其亚克隆至原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导,融合蛋白GST-Ha109在E.coliBL21中以包涵体形式得到高效表达。表达目的蛋白大小为38.5 kD,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1∶6 000倍稀释后用于Western blotting分析,获得特异性显色信号,为深入研究Ha109的功能奠定基础。

血管钠肽(VNP)在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

李鹏;于军;陈健康;陈蕴;房聪;邱爽;丁月娣;金坚;

2011, 0(05): 190-199.

摘要 ( 99 )

PDF (1539KB) ( 435 )

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利钠肽家族成员在维持机体心血管平衡等方面发挥着重要的生理作用。人工设计的新型利钠肽分子血管钠肽(VNP)由C-型利钠肽和A-型利钠肽的功能结构域嵌合组成,具备两种利钠肽分子的优势功能。采用分子生物学方法,构建了BL21(DE3)/pGEX-4T-1-VNP原核表达系统,在大肠杆菌中实现了融合蛋白GST-VNP的可溶性表达。经离心、超声波破碎、GST亲和层析、G25凝胶过滤和肠激酶酶切后超滤离心便可获得电泳纯的目的产物VNP,最终每升发酵液可获得20 mg重组VNP蛋白。大鼠离体血管环张力法和去膀胱尿液收集法活性评价显示,VNP具有扩张血管和利尿双重功效。

金雀异黄素对SGC-7901胃癌细胞超微结构及极光激酶A基因表达的影响

邹飞雁;刘晓;刘婉君;王秋兰;晏光荣;白顺;

2011, 0(05): 200-204.

摘要 ( 71 )

PDF (1920KB) ( 370 )

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应用原子力显微镜(Atomic Force Microscope,AFM)技术、Real-time PCR及Western blotting方法,分别检测金雀异黄素(genistein)对SGC-7901胃癌细胞超微结构、Aurora-A基因mRNA和蛋白表达的影响。AFM扫描显示,经20μg/mLgenistein处理SGC-7901胃癌细胞48 h,细胞的超微结构呈现凋亡形态特征改变;Aurora-A表达分析,5μg/mL组、10μg/mL组和20μg/mL组与对照组比较,其mRNA表达量分别下降(31.6±0.02)%、(38.8±0.04)%和(59.9±0.02)%,其中5μg/mL组与10μg/mL组间比较无显着性差异(P>0.05),其余组间比较均有显着性差异(P<0.05);其蛋白表达量分别下降(26.8±0.04)%、(33.0±0.10)%和(48.5±0.09)%,组间比较均有显着性差异(P<0.05)。由此推断金雀异黄素诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的分子机制可能涉及极光激酶A mRNA及蛋白表达下调。

pBV220/hIL-4优化表达及其包涵体复性研究

孙卫国;李邦印;张灵霞;李国利;熊志红;程小星;

2011, 0(05): 205-208.

摘要 ( 74 )

PDF (1874KB) ( 617 )

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旨在对人白细胞介素-4(hIL-4)上、下游序列进行优化设计,提高在原核系统中的表达量,并对表达的包涵体进行复性研究提高复性率。利用B ioSun的RNA二级结构预测模块辅助设计hIL-4起始密码子(AUG)上、下游的序列,使局部二级结构的自由能满足高表达要求;根据pBV220载体和原核系统的特点优化引物序列提高hIL-4原核表达量。优化hIL-4包涵体复性条件和方法,提高复性率和生物活性。结果显示,成功构建了pBV220/hIL-4高效表达载体,原核表达的重组人IL-4占细菌总蛋白的35%以上,明显高于优化前表达量;经过复性研究hIL-4包涵体复性率可达到15%以上,生物活性鉴定发现,纯化的hhIL-4蛋白的比活等同或高于国外同类产品。影响原核表达的条件较多,对表达序列的优化设计可以大大提高蛋白的表达量。针对人IL-4基因序列的优化设计提高了人IL-4基因的表达,复性方法的改良提高了复性率和生物活性。

果胶酶pelB基因片段克隆及序列分析

张菊;薛永常;

2011, 0(05): 209-212.

摘要 ( 103 )

PDF (968KB) ( 459 )

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根据GenBank上登录的果胶酶基因保守序列设计引物,从本实验室已筛选的一株具有降解果胶质功能的枯草芽孢杆菌S-1中克隆到了pelB基因片段,pelB与pMD20-T载体连接后转化到大肠杆菌JM109中,测序并构建进化树分析。结果表明,其序列与来源于Bacillus sp.果胶裂解酶pel-15和pelA的同源性分别为40.98%和39.20%;与Bacillus pumilus的pelB一致性为40.32%。推断此pelB为类似果胶酶基因片段。

长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析

罗义勇;刘卫红;柳陈坚;毕薇;张克勤;杨金奎;

2011, 0(05): 213-222.

摘要 ( 74 )

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为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异表达基因,即AlATP7、AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88,应用DNA walking技术对它们两侧的未知序列进行克隆。DNA测序和Blast搜索表明,AlATP7基因开放阅读框为712 bp,含4个外显子和3个内含子,编码169个氨基酸;AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88基因未克隆到全长序列,5′末端还有200-300 bp才到达翻译起始密码子ATG;在这些DNA序列中,AlCIT1基因长1 214 bp,含1个内含子,编码386个氨基酸;AlGLUT基因长1 308 bp,含1个内含子,编码417个氨基酸;AlHSP88基因长2 087bp,含2个内含子,编码628个氨基酸。与其他丝状真菌的氨基酸序列同源性比对发现,AlATP7和线粒体ATP合酶D亚基、Al-CIT1和柠檬酸合成酶、AlGLUT和主要易化子超家族(MFS)类型葡萄糖转运子、AlHSP88和热休克蛋白HSP88分别具有很高的同源性。同时,还对4个DCFs胁迫差异表达基因的系统发育进行分析。基于这些蛋白功能的文献报道和前期的研究,推测A.longipes存在着一种新的DCFs抗性机制:A.longipes利用MFS类型葡萄糖转运子将DCFs排除到细胞外解毒,线粒体ATP合酶和柠檬酸合成酶参与能量供给,而热休克蛋白AlHSP88可能在该机制中促进一些重要蛋白的正确折叠和修复过程中发挥重要作用。

丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原

沈徐凯;周斌;王云艳;王斌;杨慧林;潘力;

2011, 0(05): 223-226.

摘要 ( 112 )

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以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)的基因组DNA为模板,PCR扩增出转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-trans-glutaminase,pro-TG)),PCR产物连接到pMD18-T克隆载体后亚克隆到表达载体pET-22b(+),转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经IPTG诱导后,转谷氨酰胺酶酶原(pro-TG)主要以可溶性蛋白表达。菌体离心后用丙酮高速搅拌破碎细胞,亲和层析成功地纯化到了转谷氨酰胺酶酶原。转谷氨酰胺酶酶原经胰蛋白酶切割激活后其酶活为502.8 U/g CDM(菌体干重)。采用BSA交联试验证实成熟的转谷氨酰胺酶(TG)具有功能。采用丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原对大规模工业化生产转谷氨酰胺酶进行了有益的探索。

枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究

李瑞芳;薛雯雯;黄亮;熊前程;王彬;

2011, 0(05): 227-230.

摘要 ( 424 )

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为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。

阳离子脂质体Lipofectamine2000对PC12细胞转染效率的研究

杨云廷;付崇罗;

2011, 0(05): 231-235.

摘要 ( 176 )

PDF (972KB) ( 643 )

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通过改变转染试剂及DNA用量和转染时间等影响转染效率的重要因素来实现阳离子脂质体lipofectamineTM2000(lipo2000)对PC12细胞的高效转染。结果表明,lipo2000转染PC12细胞的最佳转染条件:lipo2000用量为5μL,DNA 2μg,转染时间为6 h,这种条件下的PC12细胞转染率高达40%,且未影响细胞的正常分泌,这为应用PC12细胞进行神经生物学研究提供了基础资料。

便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡的研制

姜燕;

2011, 0(05): 236-240.

摘要 ( 111 )

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采用鼠抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体1和胶体金标记鼠抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体2及对照抗体羊抗鼠IgG,利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原,在5 min内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡,用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病。应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白(Hb)抗体(McAb);ELISA方法检测McAb效价;免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡。ELISA法检测McAb效价的结果显示,鼠抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体1效价为1∶3.2×103;鼠抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体2效价为1∶1.6×103。试卡的灵敏度检测结果显示,检测粪便中血红蛋白的最低浓度为0.1μg/mL;试卡的特异性检测结果显示,特异性地结合人血红蛋白抗原,而不结合其他物种的血红蛋白(如动物血红蛋白),本法测便潜血不受维生素C、含过氧化物酶的绿叶蔬菜及铁剂等干扰。大便潜血一步检测法是一种快速、灵敏、简便的免疫层析检测法,由于具有高度敏感性和特异性,以及快速直观等优势,对于诊断各种原因引起的上下消化道出血疾病具有重要的定性判别意义。

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