生物技术通报

潘月红;逯锐;周爱莲;贾硕;孙国凤;

2011, 0(06): 1-6.

摘要 ( 167 )

PDF (654KB) ( 528 )

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目前中国农业生物技术研究的某些领域已处于国际领先水平,现代农业的发展迫切需要农业生物技术的支撑,农业生物技术产业化发展已是大势所趋。综述了中国农业生物技术研究及其产业发展的现状,在此基础上提出了相关发展对策与建议,并对未来农业生物技术及其产业的发展前景进行分析与展望。

植物生长素受体蛋白研究现状

皮冬梅;刘悦萍;

2011, 0(06): 7-11.

摘要 ( 122 )

PDF (516KB) ( 583 )

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受体是研究生长素信号传导链的关键环节,因为只有生长素与生长素受体结合以后才会引起后续的级联反应,生长素受体的发现对探索和了解生长素调控机制是极其重要的。目前所发现的生长素结合蛋白(受体)有TIR1和ABP1。扼要的介绍生长素受体TIR1的结构及其与生长素的结合位点,阐述了TIR1在基因水平上的调控和AUX/IAA被泛素化后最终被26S蛋白酶体降解的过程。概述了ABP1的结构、活性位点、性质以及ABP1的作用机理的模型。

S100蛋白功能和结构研究进展

李国明;戴克胜;李天才;

2011, 0(06): 12-16.

摘要 ( 226 )

PDF (526KB) ( 401 )

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S100蛋白作为Ca~(2+)调节蛋白广泛存在于各种脊椎动物中。它们参与调控蛋白磷酸化、酶活性、细胞增殖分化、细胞骨架组成的动力学、膜结构组成、维持细胞间Ca~(2+)浓度的恒定、参与炎症反应,以及保护细胞免受氧化损伤等。对S100蛋白的一般特征、细胞内外的功能及结构的研究进展等方面做了比较全面的阐述。部分S100蛋白三维结构的解析为进一步探讨其功能提供了直观的信息。

盐藻蛋白质组的研究进展

张永攀;柴晓杰;王晓庆;徐文琦;

2011, 0(06): 17-20.

摘要 ( 91 )

PDF (540KB) ( 260 )

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盐藻是一种公认的能耐受高盐度的海藻,是研究植物高盐适应的模式生物。高通量的蛋白质组学为人们深入探讨盐藻的耐盐机制提供了强有力的工具。就蛋白质组及其主要技术、盐藻蛋白质组的研究概况和研究展望作一简要综述。

蛋白质药物口服的研究进展

惠二京;尹帮旗;李招发;

2011, 0(06): 21-24.

摘要 ( 144 )

PDF (426KB) ( 394 )

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蛋白质药物口服给药系统因其给药方便、顺应性好,逐渐成为一种最有前景的给药方式。从提高蛋白质药物生物利用度入手,综述采用结构修饰、吸收促进剂、酶抑制剂、结肠定位释药、脉冲式药物给药系统和受体介导靶向载体系统等方式,均可大大提高蛋白质药物的口服生物利用度和在胃肠道中的稳定性。

甲壳动物血液凝固的分子机制

钱云霞;顾晓英;

2011, 0(06): 25-30.

摘要 ( 105 )

PDF (638KB) ( 308 )

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甲壳动物的防御机制完全依赖于非特异性免疫系统,血淋巴的凝固在宿主防御和阻止血淋巴渗漏中起重要的作用。甲壳动物的凝固酶的激活有两种独立的方式。在鳌虾中,依赖于Ca~(2+)的转谷氨酰胺酶催化可溶性的凝固蛋白原转变成共价交联的凝固蛋白多聚物,不需要蛋白裂解反应。相反,在鲎中,位于淋巴细胞中凝固反应的所有因子都在受到脂多糖激活分泌到胞外,一系列的蛋白裂解反应使得凝固蛋白原转变成凝固蛋白,凝固蛋白间通过非共价的交联结合,而有转谷氨酰胺酶催化的凝固蛋白和淋巴细胞表面proxin间的结合则更加稳定了凝固蛋白反应。

死亡受体5介导细胞凋亡的研究及应用

王志;张琦;林连兵;季秀玲;魏云林;

2011, 0(06): 31-34.

摘要 ( 176 )

PDF (464KB) ( 358 )

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死亡受体DR5(death receptor 5)属于肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员,其胞质区部分含有死亡结构域(death domain,DD),广泛分布于各种肿瘤细胞和正常组织细胞的膜上。配体TRAIL与肿瘤细胞表面的DR5结合,可诱导大多数肿瘤凋亡,而对正常的组织几乎没有作用。近年来死亡受体DR5与细胞凋亡的关系已成为研究热点之一,对DR5介导细胞凋亡的机制和应用进展作一综述。

细菌的群体感应及与病原菌致病性的关系

梁燕;王志钢;

2011, 0(06): 35-39.

摘要 ( 166 )

PDF (493KB) ( 431 )

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微生物的群体感应(quorum sensing,QS)也称为自诱导,是微生物间通过小分子分泌物(自诱导物)在细胞与细胞之间扩散以感知群体密度,并通过自诱导物的浓度及其与转录因子的相互作用调控整个群体细胞中一系列目标基因表达的一种自我感知系统。不同的细菌类型,其QS系统也有一定的差异。根据信号分子的不同,一般可以将细菌的QS系统分为3类,即以AHL为信号分子的革兰氏阴性细菌、以寡肽类物质为信号分子的革兰氏阳性细菌和以哈氏弧菌为代表的兼具上述两种类型QS系统特征的第三类QS系统。综述革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和哈氏弧菌的3种不同QS系统及其在病原菌致病性方面的研究进展。

转录组学平台技术及其在植物抗逆分子生物学中的应用

付畅;黄宇;

2011, 0(06): 40-46.

摘要 ( 130 )

PDF (733KB) ( 935 )

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不利的环境条件是影响作物产量和生态环境的重要因素之一。植物抗逆分子生物学的研究是植物学领域的研究热点之一。转录组学与蛋白质组学技术是筛选抗逆基因以及揭示植物抗逆分子机制的主要技术。综述主要的转录组学平台技术的原理、特点及其在植物抗逆分子生物学中的应用。总结植物抗逆分子生物学研究面临的问题并对发展前景作出展望。

长穗偃麦草EeNAC9基因功能初步研究

高世庆;王永波;唐益苗;徐蓓;马锦绣;陈京瑞;柳珊;张风廷;赵昌平;

2011, 0(06): 47-52.

摘要 ( 97 )

PDF (963KB) ( 201 )

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NAC(NAM-ATAF-CUC)转录因子在植物逆境胁迫应答反应中发挥重要作用。通过同源克隆方法从长穗偃麦草中分离到一个NAC转录因子基因EeNAC9(Elytrigia elongate NAM-ATAF-CUC 9),该基因编码274个氨基酸,等电点为9.03;对该蛋白二级结构预测发现主要存在9个螺旋区(helices)和无规则卷曲(coils)。氨基酸疏水性分析表明,该蛋白存在大量的疏水性氨基酸。将该基因构建到PBI121双元植物表达载体上,通过农杆菌介导转化烟草,经PCR分子检测获得T0代35S::EeNAC9转基因烟草阳性植株65株。胁迫培养基上初步功能研究表明,过表达EeNAC9转基因烟草表现出对ABA的敏感性,同时增强了对干旱、高盐的胁迫耐性,从而为小麦抗逆分子育种提供了优良候选基因资源。

柑橘钙结合蛋白基因的克隆及其在果皮褐变中的表达分析

高雪;

2011, 0(06): 53-57.

摘要 ( 55 )

PDF (988KB) ( 237 )

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从柑橘果皮褐变相关基因的差减cDNA文库中,筛选了一个与钙结合蛋白基因家族同源的EST片段,通过RACE技术克隆了其全长cDNA序列(CsCAB,GenBank登录号EF010854)。CsCAB基因全长984 bp,含有一个621 bp的开放阅读框,编码207个氨基酸,预测蛋白质分子量为22.95 kD,理论等电点为4.5;序列分析结果显示CsCAB与钙结合蛋白具有很高的同源性,且具有钙结合蛋白的保守结构域EF-hand。Northern blot结果显示CsCAB在褐变果皮中上调表达,说明该基因与柑橘果实的果皮褐变有密切关系。

金花茶查尔酮合成酶基因全长克隆与序列分析

周兴文;李纪元;范正琪;

2011, 0(06): 58-64.

摘要 ( 63 )

PDF (1076KB) ( 326 )

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利用RT-PCR和RACE方法,从我国珍稀植物金花茶(Camellia nitidissima)花瓣中获得了查尔酮合成酶(chalconesynthase,CHS)基因的cDNA全长,命名为Cn-CHS,GenBank登录号HQ269804。碱基序列分析表明,Cn-CHS全长1 454bp,包含77 bp的5′非翻译区、207 bp的3′非翻译区和一个长为1 170 bp编码389个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析显示该基因编码的蛋白具有CHS家族保守存在的所有功能活性位点和特征性多肽序列。氨基酸序列比对分析表明,Cn-CHS与蔷薇科、杜鹃花科、茄科等植物的CHS相似性都在92%以上;与山茶科山茶属物种山茶(C.japonica)CHS完全一致;与茶(C.sinensis)CHS相似性达99%,有5个氨基酸位点存在差异,其中包括一个功能性位点。

木薯Actin基因片段的克隆及序列分析

许娟;罗兴录;

2011, 0(06): 65-70.

摘要 ( 70 )

PDF (1195KB) ( 313 )

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克隆木薯Actin基因片段,为研究其他基因在木薯中的表达和调控提供内参基因。通过比较拟南芥、蓖麻和麻风树Actin基因cDNA同源区域,根据基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段,使用分子生物学软件进行分析。结果显示,获得一段大小为698 bp的基因片段,编码233个氨基酸;该基因序列与其他Actin基因核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达94%以上;系统进化分析表明,木薯Actin基因与大戟科植物橡胶、麻风树及蓖麻的亲缘关系最近,与毛果杨、陆地棉及木瓜等植物Actin基因具有较高的保守性。克隆的基因片段为木薯Actin基因片段,并命名为msACT。

决明查尔酮合成酶全长cDNA的克隆及其原核表达载体的构建

方袁梦梦;崔润泽;陈访访;周嘉裕;廖海;

2011, 0(06): 71-75.

摘要 ( 76 )

PDF (600KB) ( 251 )

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从决明子叶中提取查尔酮合成酶(Chalcone synthase)总RNA,经过RT-PCR获得查尔酮合成酶cDNA,纯化后与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌Top10,获得了查尔酮合成酶全长基因序列。序列测定表明,查尔酮合成酶全长核苷酸长度为1173 bp,编码390个氨基酸。与GenBank中已发表序列EU430077进行比较,核苷酸同源性为100%。将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/Chalcone synthase,所获重组质粒经过双酶切、PCR和序列测定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为查尔酮合成酶的进一步表达奠定了基础。

烟草烟酰胺酶基因的克隆及序列分析

蔡刘体;胡重怡;

2011, 0(06): 76-79.

摘要 ( 145 )

PDF (325KB) ( 326 )

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烟酰胺酶是烟草中烟碱合成途径中的关键酶之一。在植物中,通过烟酰胺酶的催化作用,烟酰胺转化成烟酸,烟酸是合成烟碱的一个重要底物。从烤烟品种南江3号(Nicotiana tobacum cv.Nanjiang-3)均一化全长cDNA文库中克隆获得烟草烟酰胺酶基因cDNA全长序列(命名为T-nic1),GenBank中的登录号为HQ448853,该基因全长为841 bp。利用ORF finder和ProtParam软件分析显示,它包含一个完整的开放读码框,编码一个含有162个氨基酸、等电点为4.94、分子量为18.2 kD的小分子量蛋白。Blast搜索结果及进化分析结果表明,该基因编码的蛋白与毛果芍药、拟南芥中的烟酰胺酶序列具有较高的同源性,其氨基酸序列一致性分别为71%、67%。

外源基因在烟草绿色组织中的高效表达研究

杨大伟;周焘;张锐;罗淑萍;郭三堆;

2011, 0(06): 80-87.

摘要 ( 96 )

PDF (1626KB) ( 249 )

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研究外源基因在受体绿色组织中的特异表达情况,分别构建由棉花PsbP启动子驱动的GUS基因及CP4 epsps基因的植物表达载体pBI121-P、pBI121-PE。农杆菌介导法转化到烟草中,获得20株转pBI121载体、40株转pBI121-P载体和32株转pBI121-PE载体的烟草阳性植株。组织化学染色分析表明,GhPsbP启动子驱动的GUS基因只在转基因烟草的叶片和茎中表达,在根中不表达;Real-time PCR分析表明,PsbP启动子驱动CP4 epsps基因在叶和茎中的表达量分别是根中的15倍和10倍;草甘膦抗性试验证明,PsbP启动子驱动的CP4 epsps基因在烟草叶及茎的绿色组织中的表达量足以忍受1%浓度草甘膦的毒害。证明GhPsbp启动子可以有效地驱动外源基因在烟草的绿色组织中高效特异的表达。

牦牛MC1R基因的克隆测序及其分析研究

唐懿挺;钟红梅;姬秋梅;张成福;柴志欣;赵尚娟;白雪;信金伟;钟金城;

2011, 0(06): 88-93.

摘要 ( 74 )

PDF (635KB) ( 264 )

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以麦洼牦牛、斯布牦牛、天祝牦牛和九龙牦牛为研究对象,对黑色素皮质素受体1(Melanocortin receptorⅠ,MC1R)基因编码区进行了克隆测序及分析。结果表明,牦牛的MC1R基因编码区全长954 bp,编码317个氨基酸;4个牦牛品种间及与普通牛间在MC1R基因的编码区内共有13个碱基差异,无碱基的插入和缺失现象,编码蛋白共有9个氨基酸差异。MC1R蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,有糖基化位点和7个跨膜区。系统进化分析显示,麦洼牦牛与斯布牦牛的MC1R基因相似性最近。本研究结果对今后开展MC1R基因与牦牛毛色性状的相关性分析以及牦牛的毛色遗传机理、基因定位、基因表达调控等研究具有重要的意义。

小鼠TOll样受体3基因的克隆及真核表达

彭丽娜;李力;邱亚峰;缪剑华;王晓杜;徐永莉;史子学;邵东华;魏建超;马志永;

2011, 0(06): 94-98.

摘要 ( 76 )

PDF (571KB) ( 248 )

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采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中克隆小鼠Toll样受体3(TLR3)基因,基因测序表明获得了小鼠全长TLR3cDNA,构建了真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-TLR3。重组质粒转染293T细胞,Western blotting检测蛋白表达,表达蛋白质的相对分子量与预计相符。采用TLR3的阳性刺激物poly(I:C)刺激重组质粒转染的293T细胞,双荧光素酶报告基因系统检测发现能激活下游转录因子NF-κB的转录活性,并能诱导TLR3下游细胞因子IL-6和TNF-α的表达。小鼠TLR3基因的克隆和表达,为研究TLR3介导的信号通路及其在抗病毒免疫中的作用打下基础。

缢蛏SRAP-PCR体系的正交优化

钟玉民;刘达博;冯冰冰;陈慧;林国文;李家乐;

2011, 0(06): 99-103.

摘要 ( 92 )

PDF (623KB) ( 197 )

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运用L_(16)(4~5)正交设计对影响缢蛏SRAP-PCR反应的5个因素:Taq酶浓度、Mg~(2+)浓度、模板DNA浓度、dNTPs浓度和引物浓度在4个水平上进行了优化试验,PCR结果采用SPSS v16.0软件分析。结果表明,各因素对SRAP-PCR反应的影响依次为:引物>Taq酶>模板DNA>Mg~(2+);缢蛏SRAP反应最佳体系为:在20μL PCR反应体系中,引物0.3μmol/L、Taq酶0.5 U、模板DNA 50 ng、dNTPs 0.2 mmol/L及Mg~(2+)2 mmol/L。用不同缢蛏的基因组DNA两次SRAP-PCR扩增,8对引物均能扩增出清晰且重复性好的谱带。因而建立的缢蛏反应体系稳定可靠。

三角帆蚌组织蛋白酶L基因的克隆和序列特征与进化分析

白志毅;汪桂玲;李家乐;

2011, 0(06): 104-111.

摘要 ( 77 )

PDF (1184KB) ( 285 )

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组织蛋白酶L在多种生理过程中具有重要作用。根据本实验室构建的三角帆蚌(Hyriopsis cummgii)cDNA文库中已标注的EST序列,利用RACE方法克隆了三角帆蚌组织蛋白酶L基因的cDNA全序列(GenBank登录号为HQ610996)。结果表明,该序列全长为1 105 bp,包括24 bp的5′-末端非转录区,1 002 bp的开放阅读框和79 bp的3′-末端非转录区,共编码333个氨基酸,包含1个由20个氨基酸组成的信号肽。推测的三角帆蚌组织蛋白酶L前体肽具有组织蛋白酶前体抑制因子功能结构域,具有组织蛋白酶L家族高度保守结构基序ERFNIN[E-X3-R-X2-(L/V)-F-X3-N-X3-I-X3-N]、GNFD和GCXGG;该蛋白的半胱氨酸类蛋白酶半胱氨酸、组氨酸和天冬氨酸活性位点均高度保守。同源性分析表明,推测的三角帆蚌组织蛋白酶L氨基酸序列与其他贝类高度保守,同源性在60%-74%之间。进化分析显示,三角帆蚌组织蛋白酶L与其他贝类组织蛋白酶L聚为一支,在该支中,三角帆蚌与软体动物淡水螺(R.peregra)的亲缘关系最近。本研究结果为进一步研究三角帆蚌组织蛋白酶L的生理功能提供基础资料。

对虾养殖水环境宏基因组Fosmid文库的构建

李会琴;林炜铁;蔡小龙;李敬源;唐水水;

2011, 0(06): 112-115.

摘要 ( 78 )

PDF (867KB) ( 296 )

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采用包埋法提取大片段基因组DNA,通过低熔点琼脂糖酶法回收40 kb左右的DNA,经补平磷酸化、与pCC2FOS载体连接、体外包装和转染EP1300-T1~R,构建对虾养殖水环境Fosmid文库。对文库进行鉴定,该文库平均插入片段大小约35 kb,共保存8 000个克隆,包括了大概8×10~8个微生物细胞。用几丁质酶筛选平板对文库进行初步筛选,筛选到4个阳性克隆子。本试验构建Fosmid文库,初步获取了对虾养殖生态系统的微生物遗传信息,对于从虾池原位环境鉴定并筛选具有潜在益生作用的功能微生物意义重大。

武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得

檀贝贝;孙蕾;张克诚;杨振娟;武哲;张俊;

2011, 0(06): 116-121.

摘要 ( 83 )

PDF (1256KB) ( 253 )

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以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料,提取基因组DNA,经Sau 3AⅠ部分酶切后回收35-40 kb之间的片段,连接到pCC1FOS载体上,经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库,文库的滴度为8.8×10~5CFU/mL。随机挑取16个阳性克隆,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳分析,样品插入片段平均长度大于35 kb,插入率为100%,符合构建文库的要求。根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因(PKS)设计特异性引物,以基因组为模板进行PCR扩增,筛选特异性引物探针。结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1 693 bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95%以上。武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得,为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础。

稻瘟菌无毒基因的分子检测及其指纹类型分析

孙庚;靳春鹏;陈婷婷;刘金亮;任金平;刘晓梅;张世宏;潘洪玉;

2011, 0(06): 122-126.

摘要 ( 66 )

PDF (567KB) ( 237 )

相关文章 | 计量指标

针对稻瘟菌中Avr-Pita与AvrPiz-t两个无毒基因,设计特异性引物,利用PCR方法对吉林省103株稻瘟菌菌株进行分子检测,并结合AVR-Pih、AVR-CO39、PWL2和ACE1 4个无毒基因在其中85个菌株中的分布情况,绘制出基于这6个无毒基因的指纹类型。结果表明,Avr-Pita基因和AvrPiz-t基因在吉林省稻瘟菌中的分布频率分别为86.41%和62.14%;建立的指纹类型显示,85株稻瘟菌分布于9种类型中,其中类型1为主要类型,其分布频率为40.00%;根据30个已知生理小种的菌株在指纹类型中的分布情况,初步发现类型7与吉林省优势生理小种ZE1可能存在对应关系,并应用于稻瘟菌优势生理小种的特异性分子检测;其他指纹类型与中国生理小种并无明显对应关系。明确了无毒基因Avr-Pita与AvrPiz-t在吉林省稻瘟菌中的分布情况,构建了无毒基因的指纹类型,为水稻抗瘟育种和稻瘟菌优势小种的分子监测提供理论依据。

eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化

郭艳荣;常晓月;崔晓君;魏勋斌;朱乃硕;

2011, 0(06): 127-133.

摘要 ( 113 )

PDF (1179KB) ( 269 )

相关文章 | 计量指标

eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。

东亚三角涡虫PSA蛋白的表达、鉴定及抑菌分析

刘斌;赵博生;

2011, 0(06): 134-139.

摘要 ( 94 )

PDF (1054KB) ( 281 )

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PCR扩增含酶切位点的DjPsa基因(ORF),构建了DjPsa基因的原核表达载体pET-28a(+)-DjPsa,转化入E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE、Western blotting(His-Tag抗体)分析表达蛋白,抑菌试验检测其活性。结果表明,重组质粒在E.coli BL21(DE3)中以包涵体的形式高效表达,其蛋白的分子大小约为25 kD;Western blotting检测说明得到的蛋白为PSA重组蛋白;抑菌试验显示复性后的PSA具有较强的抑菌作用,为进一步研究它的功能、活性提供基础。

人源STK3蛋白截短突变体的克隆、表达及纯化

朱文壮;刘勇;张飞云;

2011, 0(06): 140-144.

摘要 ( 159 )

PDF (885KB) ( 231 )

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人源STK3蛋白(serine/threonine-protein kinase3)是一种促凋亡激酶,能与多种肿瘤相关蛋白相互作用,主要功能为应激活化,能入核介导染色质凝集,导致核小体间DNA碎片化。为了进一步研究STK3蛋白结构与功能,对其进行了克隆、蛋白提取及纯化。由于在表达全长STK3蛋白时很难获得可溶性表达蛋白,基于此蛋白序列特点设计了6个STK3蛋白截短突变体,对其进行克隆、表达及纯化,最终得到了纯度较高的STK3蛋白C端截短突变体(327-491),为下一步进行蛋白结晶和结构测定奠定基础。

抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

李忠清;王亮;

2011, 0(06): 145-149.

摘要 ( 115 )

PDF (984KB) ( 281 )

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利用巴斯德毕赤酵母系统表达抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽简称LfcinBD,获得的表达产物具有较强的抗菌活性。将人工设计的用化学合成法合成的以酵母偏爱密码子编码的LfcinBD基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组质粒pPIC9K-LfcinBD通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母GS115宿主菌,G418抗性筛选,得到高拷贝转化子。经PCR检测,LfcinBD基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinBD,诱导表达5 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽衍生肽基因已整合到酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较强抗菌活性的抗菌肽,而且对氨苄青霉素抗性的大肠杆菌亦有较强的抑菌作用。

PSCA-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

董磊;张晓鹏;房婷;易绍琼;于婷;侯利华;付玲;于长明;陈薇;

2011, 0(06): 150-154.

摘要 ( 123 )

PDF (740KB) ( 219 )

相关文章 | 计量指标

旨在大肠杆菌中表达PSCA-HSP70融合蛋白,并对其进行纯化。克隆人PSCA基因及HSP70基因,构建表达PSCA-HSP融合蛋白的工程菌,优化表达及纯化条件,对重组蛋白进行纯化。结果表明,成功构建重组表达质粒PSCA-HSP,重组蛋白得到可溶性表达,优化纯化条件后获得90%以上纯度的重组蛋白。本研究成功实现了PSCA与HSP的融合表达,为下一步肿瘤疫苗的研制奠定基础。

GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

张怡;周庆峰;贾孟;张红绪;李成伟;

2011, 0(06): 155-159.

摘要 ( 91 )

PDF (906KB) ( 236 )

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为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。

斜纹夜蛾核多角体病毒Splt119基因在大肠杆菌中的表达及抗体制备

李赛男;李朝飞;庞义;杨凯;

2011, 0(06): 160-164.

摘要 ( 77 )

PDF (717KB) ( 244 )

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用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirns,SpltMNPV)ORF119全长基因(Splt119),将其克隆至5′端有6×His编码序列的原核表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15[pREP4],在1 mmol/LIPTG诱导下超量表达了一个分子量约28 kD的融合蛋白。经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化,免疫新西兰大白兔制备了特异的抗Splt119抗体。Western blotting免疫印迹分析表明,该抗体适合用作Spltl19蛋白功能的进一步研究。

大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达

梁晓梅;黎明;成堃;贾红红;路福平;

2011, 0(06): 165-169.

摘要 ( 180 )

PDF (744KB) ( 593 )

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构建了一个可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中复制,并可以在枯草芽孢杆菌中表达外源蛋白的穿梭表达载体pBE2R。该穿梭表达载体是以pBE2为基本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下游引入嗜碱芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽和前肽构建而成。试验结果表明,该穿梭表达载体pBE2R可以在大肠杆DH5α和枯草芽孢杆菌WB600中稳定存在,并可以使外源蛋白在枯草芽孢杆菌进行分泌表达,同时也为碱性蛋白酶定向改造提供了高通量筛选平台。

产L-乳酸的运动发酵单胞菌代谢工程菌株的构建

姜坤妤;苏喆;王勇;潘超强;朱燕;郑秀;高强;

2011, 0(06): 170-174.

摘要 ( 95 )

PDF (620KB) ( 276 )

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以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆得到其丙酮酸脱氢酶基因(pdc)同源下游p3片段,并连接到广谱宿主载体pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL中构建了重组质粒pBBR1MCS3-Ppdc-ldhL-p3,将此重组质粒转化到受体菌Z mobilis CP4中,分别以Ppdc和p3片段作为同源上游和下游片段,利用同源双交换重组技术将重组质粒中的ldhL基因置换了Z.mobilis染色体中的pdc基因,得到重组菌株Z.mobilis CP4(△pdc::ldhL)。测得重组菌株乳酸产量为10.8g/L,明显高于出发菌株,说明初步成功构建了产L-乳酸的运动发酵单胞菌代谢工程菌株。

CALA在毕赤酵母中的表达、纯化及酶学特性研究

严慧玲;蓝东明;王永华;杨博;

2011, 0(06): 175-181.

摘要 ( 113 )

PDF (725KB) ( 338 )

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将南极假丝酵母脂肪酶A(cala)基因克隆至组成型表达载体pGAPZαA中,电激转入X-33,获得高效表达的CALA酵母工程菌株。发酵液上清经超滤浓缩、硫酸铵沉淀和阴离子交换层析等步骤,获得纯化的重组CALA,其比酶活达384.90 U/mg。该酶最适温度为70℃,最适pH值为8.0。经50℃保温2 h,仍含有60%水解酶活力;在pH7.0和8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理1 h,仍保持90%的活性;非离子型表面活性剂能提高CALA的酶活,金属离子在不同程度上抑制CA-LA的酶活。

蔗糖磷酸化酶的分离纯化及其催化合成α-熊果苷的研究

侯顾伟;马江锋;隋姗姗;徐冰;刘嵘明;姜岷;

2011, 0(06): 182-186.

摘要 ( 91 )

PDF (566KB) ( 282 )

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考察了肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)G123厌氧发酵产蔗糖磷酸化酶下游的分离纯化工艺。收集的菌体经超声破碎得到粗酶液,通过硫酸铵沉淀、透析、阴离子交换层析分离后获得了电泳纯的蔗糖磷酸化酶,酶活回收率为31.7%,酶的分子量约为55.7 kD,纯化后的蔗糖磷酸化酶比活为115.3 U/mg。该酶在中性及偏酸性(pH5.5-8.0)情况下,酶稳定性较好,较报道的肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)B-1149的pH稳定范围宽。同时该酶在37℃保存2 h,酶活几乎没有下降。利用获得的纯酶以氢醌和蔗糖为底物催化合成α-熊果苷,在23 U/mL的酶反应体系中,60%蔗糖、5%氢醌、pH7.5,37℃,反应12 h,氢醌转化率达到16.3%,α-熊果苷的产量为20g/L。

重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化和性质的研究

王丹;丛丽娜;谢三群;张欢;

2011, 0(06): 187-192.

摘要 ( 96 )

PDF (823KB) ( 367 )

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旨在研究重组海参i型溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)可溶性表达的发酵条件、纯化及生物学性质。采用摇瓶发酵的培养方式,分别从培养基组分和发酵条件两个方面对获得可溶性重组SjLys进行研究。表达产物通过亲和层析纯化以及凝胶过滤层析脱盐,获得了电泳纯为95%的重组SjLys蛋白。进一步对其生物学活性分析,结果表明该酶最适温度为45℃,最适pH值为6.8,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有广谱抑菌作用。上述结果将为海参溶菌酶进行产业化奠定应用基础。

六种石磺科贝类超氧化物歧化酶和酯酶同工酶分析

张坤霞;沈和定;陈诚;魏峦峦;张雨;方磊;

2011, 0(06): 193-197.

摘要 ( 83 )

PDF (668KB) ( 235 )

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采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳分离技术对中国东南沿海的石磺科6种石磺的腹足、肝胰脏两种组织的超氧化物歧化酶和酯酶同工酶进行分析。明确了其酶谱的特征及分布,并利用聚类分析方法对种间的亲缘关系进行了研究。同工酶聚类分析显示,紫色疣石磺(Peronia verruculata)和小紫疣石磺(Peronia sp.)的亲缘关系最近;里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)和白底拟石磺(Paraoncidium sp.)聚为一类;平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)和瘤背石磺(Onchidium struma)聚为一类。种间的个体酶谱表型有差异,同属的种间差异小于不同属的种间差异。酶谱的差异程度与形态分类学中的亲缘关系相近。利用超氧化物歧化酶同工酶和酯酶同工酶酶谱袁型也可以作为一种蛋白分子标记应用于石磺科属种的分类鉴定。

高产蛋白酶菌株Bacillus cereus KM-4的产酶实时动态研究

宋园亮;黄文宇;张忠华;吴少雄;殷建忠;柳陈坚;

2011, 0(06): 198-204.

摘要 ( 71 )

PDF (935KB) ( 212 )

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从昆明豆豉样品分离得到一株蛋白酶活性较高的菌株,其酶活达14.58 U/mL。采用SDS-gelatin-PAGE蛋白电泳及Zymography染色,结合茚三酮法测定其蛋白酶活性,对KM-4菌株分泌的蛋白酶进行酶谱分析。结果表明,培养pH6.0有利于该菌株分泌分子量约为116 kD的蛋白酶,经明胶诱导培养后,其酶活明显提高,推测其所分泌的蛋白酶可能需要蛋白质诱导。

链霉菌产木聚糖酶条件和酶学性质以及重离子诱变对产酶的影响研究

冯佳丽;台喜生;李梅;李师翁;

2011, 0(06): 205-210.

摘要 ( 70 )

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以一株由青藏高原牦牛粪中分离出的链霉菌为出发菌株,对其培养特性、产酶条件和酶学性质进行初步研究。通过重离子诱变,筛选出遗传稳定的高产菌株。结果表明,该菌以玉米芯和麸皮(1:1)为碳源能高效地诱导木聚糖酶的胞外分泌,其最适培养基和培养条件氮源为酵母膏、初始pH7、培养温度为25℃,在此条件下,第4天酶活力达到峰值3 480.25 U/mL,说明该酶能够利用农业废弃物高效生产木聚糖酶。该菌株所产木聚糖酶的最适反应温度为15℃、pH4,属低温酸性木聚糖酶。经重离子诱变后,筛选出一株高产菌株SZ10-7,其酶活力可达5 338.42 U/mL。

氨基脱氧分支酸合成酶对Corynebacterium glutamicum SYPS-062积累L-丝氨酸的影响

苑亮;张晓梅;窦文芳;许泓瑜;许正宏;

2011, 0(06): 211-217.

摘要 ( 91 )

PDF (688KB) ( 252 )

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为阐明氨基脱氧分支酸合成酶(ADC合成酶)在Corynebacterium glutamicum SYPS-062体内积累L-丝氨酸过程中的作用,通过交叉PCR以及同源重组的方法敲除叶酸途径关键酶ADC合成酶的编码基因pabAB,构建了叶酸缺陷型菌株Corynebacterium glutamicum SYPS-062△pabAB,同时构建pabAB基因增强表达重组菌C.glutamicum SYPS-062(pJC I-pabAB)。分别考察了ADC合成酶对菌株生长的影响、对L-丝氨酸降解途径关键酶丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)的影响以及其对L-丝氨酸积累的影响。结果表明,与出发菌株相比,增强表达基因pabAB重组菌的ADC合成酶的酶活力提高了33%,SHMT酶的酶活力提高了30%,其最大比生长速率(μ_m)提高了48%,单位细胞产酸率(Yp/x)降低了36.2%;而敲除基因pabAB重组菌的ADC合成酶的酶活力降低了61%。SHMT酶的酶活力降低了20%,最大比生长速率降低了32%,单位细胞产酸率提高了12%。

分选酶A在pET32a(+)原核表达载体中的表达和鉴定

朱芳;邓思;罗立新;

2011, 0(06): 218-222.

摘要 ( 129 )

PDF (748KB) ( 277 )

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旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定。以合有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA_(△N24)和SrtA_(△N59)基因,经过BamHⅠ、XhoⅠ酶切,克隆入表达载体pET32a(+)中,构建重组载体pET32a-SrtA_(△N24)及pET32a-SrtA_(△N59),并转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物分别进行分析和鉴定。然后对重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达条件进行了优化。结果显示重组载体pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59)分别表达出相对分子量为约42 kD和37 kD的融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting检测显示其分子量与预期的大小相符合。成功构建了重组质粒pET32a-SrtA_(△N24)和pET32a-SrtA_(△N59),并且在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效融合表达。

拟除虫菊酯农药降解菌HP-S-01培养基的筛选及优化

陈少华;耿鹏;胡美英;杨柳;陈慧婷;

2011, 0(06): 223-231.

摘要 ( 60 )

PDF (1181KB) ( 274 )

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通过比较高氏合成1号培养基、查彼氏培养基、马铃薯葡萄糖培养基、燕麦片培养基和理查德培养基等5种培养基对拟除虫菊酯农药降解菌Streptomyces sp.HP-S-01生长的影响,确定了高氏合成1号培养基为菌株生长最适宜的培养基。以高氏合成1号培养基为基础培养基,采用中心组分旋转设计法(RRCD)和响应曲面法(RSM),优化了培养基关键组分中可溶性淀粉、硝酸钾和磷酸氢二钾的组成,以降解率为主要衡量指标,最佳配方包括可溶性淀粉25.9549g/L、硝酸钾1.9975g/L和磷酸氢二钾0.9505g/L,最终优化出的培养基处理1 d后对50 mg/L高效氯氰菊酯的降解率达到99.61%,与期望降解率99.92%相一致,比优化前84.10%提高了15.51%。

消费者对转基因食品态度评价与认知:食品政策综述及其影响(待续)

于迎建;

2011, 0(06): 232-236.

摘要 ( 99 )

PDF (621KB) ( 231 )

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<正>转基因食品的发展已经受到广泛的关注,引起世界范围的讨论。"不确定性"、"风险"、"利益"这些新术语,在食品工业界和消费者中广泛传播,但是人们对于充满需求创新潜力的食品产业的了解却很有限。消费者的需求、偏好及价值观等因素都会影响消费者是否能够接受接受转基因食品,这也受到了学术界的关注。事实上,由于许多转基因食品作

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