生物技术通报

许硕;胡正;姜奇彦;张辉;

2012, 0(02): 1-7.

摘要 ( 134 )

PDF (1197KB) ( 894 )

相关文章 | 计量指标

microRNA(miRNA)是一种内源性的小分子RNA,长度约为21到25个核苷酸大小,在动植物生长发育的各个过程中起重要的调控作用。近几年随着高通量测序技术的飞速发展,研究人员在许多物种中鉴定了大量的miRNA,未来miRNA的研究主要集中在功能研究方面,尤其是植物miRNA在逆境条件下的功能方面。就目前miRNA功能的主要研究方法,以及逆境条件下植物miRNA的研究进行了综合阐述。

禾本科植物响应非生物胁迫的转录调控网络

刘春;曹丽敏;陈冲;肖炜;彭晚霞;

2012, 0(02): 8-13.

摘要 ( 124 )

PDF (1181KB) ( 937 )

相关文章 | 计量指标

分子和遗传研究表明,转录因子在响应非生物胁迫的基因表达调控中起着重要的作用,并且大部分转录因子在禾本科植物和拟南芥中是相同的。禾本科植物包括许多重要的农作物,对禾本科植物的转录因子进行研究,可增强重要农作物对非生物胁迫的耐受性。综述了禾本科植物响应非生物胁迫的转录调控网络,包括响应寒冷胁迫的DREB1/CBF调节子、响应脱水和高盐胁迫的DREB2调节子,ABA介导反应的ABRE及其伴侣元件、响应ABA的AREB/ABF调节子,响应脱水、高盐和寒冷胁迫的NAC调节子。

农杆菌介导的葡萄转化研究进展

张丽;王敬东;宋玉霞;

2012, 0(02): 14-19.

摘要 ( 132 )

PDF (1095KB) ( 388 )

相关文章 | 计量指标

综述近年来以农杆菌介导法将外源基因转化葡萄的研究进展及基因型、再生途径、农杆菌菌株、菌液浓度、侵染时间、共培养及抗生素等对葡萄遗传转化的影响,并指出当前存在的问题及研究趋势。

微生物代谢组学及其在工业中的应用

薛金红;李晖;韦萍;欧阳平凯;

2012, 0(02): 20-27.

摘要 ( 183 )

PDF (1191KB) ( 822 )

相关文章 | 计量指标

微生物代谢组学是系统生物学的重要组成部分,其与基因组学、转录组学和蛋白质组学相互补充,近年来受到越来越多人的重视。其主要对细胞生长或生长周期某一时刻细胞内外所有低分子量代谢物进行定性和定量分析,直接反映了细胞的生理状态,对理解细胞功能十分重要。由于代谢物的复杂性,研究者需根据不同的目的及对象选择合适的分析方法。对微生物代谢组学近年来的研究方法进行综述,包括样品处理、分析手段、数据分析,并讨论了微生物代谢组学在工业中的应用及所面临的挑战。

聚乳酸羟基乙酸纳米微球在肿瘤药物递送中的应用

李丹丹;孙维敏;丁克俭;

2012, 0(02): 28-32.

摘要 ( 195 )

PDF (1072KB) ( 900 )

相关文章 | 计量指标

药物递送载体的应用使得小分子药物、蛋白质药物,以及基因药物能够通过多种给药方式用于癌症的治疗。聚乳酸-羟基乙酸共聚物因其具有良好的生物相容性及生物可降解性,成为广泛采用的抗癌药物载体之一,可以通过静脉、皮下、口服等多种给药途径用于化疗、基因治疗、蛋白治疗给药及接种免疫等诸多方面,显示了良好的应用前景。

AAV在基因治疗中的靶向修饰研究进展

尹帮旗;连文昌;惠二京;李招发;

2012, 0(02): 33-40.

摘要 ( 208 )

PDF (1485KB) ( 769 )

相关文章 | 计量指标

安全、有效、具有靶向性的病毒载体是基因治疗药物在临床上得以应用的关键。AAV是微小病毒科的一种,它能以其低的免疫原性及广泛的宿主性对人及灵长类进行感染,并且经过改造后的AAV病毒能更有效的靶向性特定组织及肿瘤细胞。重点对AAV病毒载体的衣壳蛋白基因工程修饰、转录调控修饰和转录后microRNA干扰表达修饰及衣壳蛋白化学修饰靶向机理,以及改造方法进行介绍。修饰后的AAV能改善其感染引起的性免疫反应、转染效率和肿瘤靶向性。

黏膜抗体在疫苗免疫效力评价中的前景

张亚;冯志新;张道华;刘茂军;白方方;王海燕;邵国青;

2012, 0(02): 41-47.

摘要 ( 99 )

PDF (1118KB) ( 963 )

相关文章 | 计量指标

简单介绍目前疫苗效力检验的方法、黏膜抗体的功能及其在实验室疫苗效果效力评价中的应用,提出了黏膜抗体作为疫苗免疫效力试验的替代指标或免疫监测的主要抗体的建议。

转基因定量检测用质粒分子标准物质研究进展

李亮;王晶;隋志伟;臧超;余笑波;

2012, 0(02): 48-52.

摘要 ( 108 )

PDF (1101KB) ( 953 )

相关文章 | 计量指标

近10年来,应用于转基因植物产品定量检测的质粒分子标准物质凭借其易于富集,快捷高效等优点,成为各国检测机构的研究热点。对国内外转基因植物核酸定量检测用的质粒分子标准物质研究进展进行总结和评述,并且对该类标准物质在研制过程中的问题进行分析,同时展望了该类标准物质的发展与应用。

小麦转基因技术研究进展

周岩;薛晓锋;魏琦超;张洁;何男男;游建;

2012, 0(02): 53-58.

摘要 ( 139 )

PDF (1111KB) ( 549 )

相关文章 | 计量指标

小麦是我国的主要粮食作物,对其进行基因工程改良已成为研究的热点。近年来,利用转基因技术以提高小麦产量、改善品质、增强抗病虫和抗逆能力等相关研究日趋深入广泛。主要对目前小麦转基因研究现状进行综述,包括表达载体、报告基因与选择标记基因、目标基因、受体材料及转化方法等;并对当前小麦转基因技术存在的问题及育种潜力分析和展望。

苋菜IRT1基因克隆、序列及表达分析

孙静文;赵世诚;范洪黎;周卫;

2012, 0(02): 59-64.

摘要 ( 91 )

PDF (1526KB) ( 517 )

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通过对镉超积累苋菜品种天星米铁转运蛋白基因(IRT1)的克隆、序列及表达分析,旨在为植物修复镉污染土壤奠定基础。依据同源克隆原理,通过RACE技术克隆苋菜IRT1基因及生物信息学方法分析基因序列结构和功能,Northern杂交研究基因表达。苋菜IRT1基因cDNA全长1 135 bp,包含完整的阅读框,编码322个氨基酸。苋菜IRT1蛋白与已知铁转运蛋白相似性在53.70%-63.04%,具有铁转运蛋白典型的功能结构特征,即N端含有1个信号肽、氨基酸序列上具有完整的ZIP家族功能结构域(Pfam:Zip)和7个跨膜结构域(TMs)。苋菜IRT1蛋白还具有1个COGO428超级家族(转运二价金属离子功能)、2个蛋白激酶C磷酸化位点和2个酪蛋白II磷酸化位点。低铁胁迫时苋菜根中IRT1基因表达量增加,加镉处理没有改变IRT1基因表达量。因此,推断苋菜IRT1基因是ZIP家族的一员,具有转运二价金属离子功能,将基因在GenBank中注册,序列号为:GU363501,命名为AmIRT1。

蝴蝶兰LFY基因克隆及高效植物表达载体的构建

崔波;牛苏燕;蒋素华;武思;王默菲;叶永忠;

2012, 0(02): 65-68.

摘要 ( 99 )

PDF (1260KB) ( 497 )

相关文章 | 计量指标

根据NCBI中蝴蝶兰LFY花序分生组织基因序列设计2对引物,用RT-PCR法从蝴蝶兰花芽中扩增出LFY基因,对扩增产物进行克隆和测序。结果表明,获得的蝴蝶兰LFY基因约为1 500 bp,与报道序列同源性达98.71%。将LFY基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-LFY。

大豆血红蛋白基因lba转化根瘤菌工程菌株的构建

于海鹏;潘钰;蒙明明;李海英;

2012, 0(02): 69-74.

摘要 ( 151 )

PDF (1506KB) ( 626 )

相关文章 | 计量指标

以土著大豆根瘤菌接种大豆幼苗45 d后获得的根瘤为材料,提取其总RNA并反转录成cDNA,采用同源序列克隆法扩增大豆血红蛋白基因lba编码区序列。利用DNA重组技术,将lba基因连到lac启动子的下游,利用带有发光酶标记基因luxAB的质粒载体pTR102构建表达载体pTR-Plac-lba。采用三亲本杂交的方式,将表达载体pTR-Plac-lba及作为对照的空载体pTR102分别转化土著大豆根瘤菌,获得根瘤菌工程菌株SFH(pTR-Plac-lba)和SFH(pTR102)。盆栽试验发现,接种SFH(pTR-Plac-lba)的大豆植株各生理指标明显高于接种SFH(pTR102)、土著根瘤菌以及未接菌的大豆植株各生理指标。试验证明,导入大豆血红蛋白基因lba的根瘤菌工程菌株SFH(pTR-Plac-lba)对于提高大豆根瘤的固氮酶活性,增加大豆产量起到显著效果。

马铃薯非共生血红蛋白基因StHb1的克隆及表达

郑建坡;曲占良;张洪伟;李继刚;

2012, 0(02): 75-79.

摘要 ( 101 )

PDF (1218KB) ( 456 )

相关文章 | 计量指标

采用RT-PCR技术成功分离了马铃薯StHb1基因序列。经半定量RT-PCR分析表明,StHb1基因的表达在抗性品种(陇薯三号)和感性品种(荷兰十五)块茎中均受致病疫霉的侵染所抑制;StHb1基因在正常生长的马铃薯块茎组织中表达量最高;外源NO和H2O2的作用可明显地抑制StHb1基因的表达,但在抗性品种中该基因受抑制的程度低于感性品种。上述试验结果暗示了StHb1基因与马铃薯对致病疫霉侵染的抗性应答具有一定的相关性。

牛α-IFN及FMDV P12A3C双表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

杨彬;兰喜;李宝玉;殷相平;李学瑞;柳纪省;

2012, 0(02): 80-84.

摘要 ( 99 )

PDF (1230KB) ( 591 )

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从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因。将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功。用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达。以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/0.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用。结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础。

内蒙古白绒山羊TSC2基因克隆与表达模式分析

史偈君;杨娇馥;张涛;秦毅;谢鸿云;李树裕;郝喜燕;王志钢;

2012, 0(02): 85-89.

摘要 ( 111 )

PDF (1265KB) ( 407 )

相关文章 | 计量指标

旨在克隆内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA并分析其特性及基本表达模式。利用RT-PCR分段克隆TSC2基因cDNA片段并测序,将得到的cDNA各片段核苷酸序列拼接后获得绒山羊TSC2基因编码区全长序列(HQ684023)并进行生物信息学分析。半定量RT-PCR方法检测TSC2基因在不同组织中的表达特异性。结果表明内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA编码区核苷酸序列为5 184 bp,包含了编码1 727个氨基酸残基的全长ORF。核苷酸序列与牛、猪、马、大熊猫、犬、恒河猴、人、小鼠及大鼠的同源性分别为97%、90%、89%、88%、87%、87%、87%、86%和86%。NCBI CDD程序预测该基因编码的蛋白质有一个Tuberin结构域和一个Rap-GAP结构域;Psite程序分析有5个N糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点、16个蛋白激酶C磷酸化位点、25个酪蛋白激酶磷酸化位点。PSORT程序预测其定位于胞内体膜。TSC2基因在内蒙古白绒山羊的睾丸、脑、肝脏、肺、乳腺、脾和肾脏等组织中都有表达,mRNA丰度在睾丸中较高,乳腺中较低。

人BMP4基因的克隆及其原核表达载体的构建

刘秋英;陈伟;毛国梁;熊盛;钱垂文;利奕成;王一飞;

2012, 0(02): 90-92.

摘要 ( 143 )

PDF (1176KB) ( 918 )

相关文章 | 计量指标

以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒。酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子。重组质粒转化至感受态的Rosseta宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,从胎盘组织中成功地克隆到人BMP4基因,与NCBI中公布的序列100%相符合,原核表达载体pET22b-BMP4转化至Rosseta构建表达菌体,经IPTG诱导后电泳分析可见重组蛋白表达的条带。

受四环素调控的真核表达系统SK-Hep1细胞株的建立

彭晓慧;毛宣;汤顺清;

2012, 0(02): 93-96.

摘要 ( 130 )

PDF (1232KB) ( 889 )

相关文章 | 计量指标

建立稳定、高效表达外源基因的SK-Hep1细胞株,以便进一步研究基因的作用。首先将调控质粒pCDNA6/TR转染SK-Hep1细胞,经潮霉素筛选得到多个稳定单克隆。各个单克隆分别扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过DOX(强力霉素)诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-D galaetosidase,β-gal)活性,从而筛选出高诱导水平低背景表达的SK-Hep1 tet-on细胞株。最后,再将pCDNA4/TO/c-myc质粒转染进SK-Hep1 tet-on细胞株,进一步通过Western blotting检测该系统对下游基因的表达调控。成功建立了一株受DOX调控的高诱导水平低背景表达的细胞株SK-Hep1 tet-on 10#。

基于Red重组系统构建含Flag标签标记UL23基因的重组人巨细胞病毒

胡嘉淼;肖静;刘明亮;曾宝娟;李婧惠;李继东;周天鸿;冉艳红;李弘剑;

2012, 0(02): 97-101.

摘要 ( 135 )

PDF (1322KB) ( 659 )

相关文章 | 计量指标

利用来源于λ噬菌体的Red系统,将Flag标签及两侧带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段插入原HCMV TowneBAC中UL23基因3'末端区域,通过卡那抗性筛选带有抗性标记的重组菌株,并通过表达重组酶FLP的质粒pCP20去除卡那霉素抗性基因,得到带有Flag标签标记UL23基因和单一FRT位点的突变BAC。重组后的BAC分子同质粒pcDNA3.1(+)-pUL82共转染HFF细胞后重建重组HCMV。Western blotting检测证实所构建重组病毒能够表达含Flag标签标记的pUL23蛋白。此含有Flag标签标记UL23基因的重组HCMV的成功构建为了进一步研究人巨细胞病毒UL23基因及其产物的功能提供依据。

幽门杆菌Catalase/GST融合蛋白的表达、标签切除及鉴定

姜茵;奚月;李妍;

2012, 0(02): 102-106.

摘要 ( 179 )

PDF (1290KB) ( 767 )

相关文章 | 计量指标

旨在利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签。将重组质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,Catalase/GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达在上清中。采用谷胱甘肽琼脂糖树脂Glutathione Sepharose 4B对其进行纯化,得到Catalase/GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Western blotting鉴定。高效表达出Catalase/GST融合蛋白的相对分子质量约85 kD,凝血酶成功地切除了GST标签,Western blotting证实Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别。

谷氨酸棒杆菌ldh基因的敲除

伍展红;郑穗平;

2012, 0(02): 107-111.

摘要 ( 139 )

PDF (1355KB) ( 1310 )

相关文章 | 计量指标

谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态细胞。分别在卡那霉素抗性平板及10%蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC 13032-Δldh。应用荧光定量PCR检测,ATCC 13032-Δldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC 13032相比,相对表达量为0。ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响。

刺五加鲨烯合酶基因cDNA的克隆与序列分析

龙月红;邢朝斌;王明艳;吴鹏;陈龙;梁能松;何闪;

2012, 0(02): 112-116.

摘要 ( 92 )

PDF (1167KB) ( 546 )

相关文章 | 计量指标

采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参鲨烯合酶基因(squalene synthasegene,SS)cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SS基因的cDNA序列。克隆得到长度为1258 bp的刺五加SS基因cDNA序列,开放阅读框全长1248 bp,编码415个氨基酸残基,GenBank登录号为HQ456918,与人参的SS1、SS2和SS3氨基酸序列一致性分别为91.73%、97.59%和96.63%。首次分离并报道了刺五加SS基因cDNA序列,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机理研究提供参考。

云南药用野生稻BIBAC文库混合克隆池制备及筛选

刘艳平;程在全;殷富有;余腾琼;张敦宇;郭怡卿;张薇;黄兴奇;

2012, 0(02): 117-120.

摘要 ( 81 )

PDF (1230KB) ( 377 )

相关文章 | 计量指标

在已构建完成的云南药用野生稻BIBAC(binary bacterial artificial chomosome)文库的基础上,将文库制备成一、二、三级混合克隆池,各级混合池的数量分别为3 360、140和14个。根据Xa21抗病基因序列设计1对特异引物,利用4步PCR法对文库混合克隆池进行逐级筛选,初步确定了3个抗病基因阳性克隆。为今后以PCR法高效利用云南药用野生稻BIBAC文库挖掘其优异基因奠定了良好的基础。

热带药用植物根际放线菌的分离、鉴定及生物活性分析

黄小龙;陈吉良;李建平;林海鹏;庄令;李佳;洪葵;

2012, 0(02): 121-127.

摘要 ( 139 )

PDF (1247KB) ( 724 )

相关文章 | 计量指标

从海南热带植物园采集12种药用植物的根际土样,采用选择性分离方法,分离得到400株根际放线菌。使用5种活性筛选模型对分离菌株进行生物活性评价,154株放线菌在一个或多个活性筛选模型中显示为阳性,菌株初筛阳性率达38.5%;根据菌株形态特征并结合代谢产物的生物活性,从中挑选出28株菌进行16S rRNA基因序列分析,发现其分属于链霉菌属、诺卡氏菌属、小单孢菌属和野野村菌属。

小麦抗赤霉病品种NBS同源序列克隆与分析

魏芳;马鸿翔;

2012, 0(02): 128-135.

摘要 ( 165 )

PDF (1814KB) ( 667 )

相关文章 | 计量指标

根据二穗短柄草NBS-LRR类基因的保守序列设计同源引物,以小麦抗赤霉病品种苏麦3号、宁7840和望水白基因组DNA为模板,通过PCR扩增,得到43条序列,其中4条为非编码序列或结构域不完整;39条与植物抗病基因同源,其中的7条内部存在终止密码子,可能是假基因,经过比对分析,其余32条具有连续的开放阅读框和保守结构域,推导的氨基酸序列均具有Kinase-1a、Kinase-2和Kinase-3a及GLPL区等几个保守区,在GenBank中均能找到与之高度同源的其他物种的核酸序列,并且Kinase-2的最后一个氨基酸均为色氨酸(W),属于non-TIR类NBS基因。32条序列可分为4大类,它们之间核苷酸同源性为64%-98%,编码氨基酸同源性为22%-98%。根据序列分析随机设计5对不同基因特异性引物,并利用RT-PCR技术进行表达分析,结果表明,7-1、s-3、s-4和w-2均能表达,说明这些片段可能是功能性抗病基因的部分序列;7-13不表达,再次证明属于假基因。32条序列在之前未被报道过,这些RGA可以作为筛选赤霉病功能性抗病基因的候选序列。

拟南芥过氧化物酶序列与功能的生物信息学分析

马亭亭;周宜君;高飞;余丽;刘冉;刘楠;隋欣;

2012, 0(02): 136-143.

摘要 ( 165 )

PDF (1543KB) ( 597 )

相关文章 | 计量指标

植物过氧化物酶(POD)属于多基因家族,不仅是植物体内清除活性氧自由基的重要酶类之一,而且参与多种生理生化过程,在维系植物生长发育过程中发挥重要的作用。采用生物信息学方法对拟南芥过氧化物酶家族的73个基因编码的蛋白质序列的结构和功能进行了分析,其中包含氨基酸的数量、等电点、跨膜结构域、信号肽、二级结构组成及磷酸化位点等,并用Mega4.0软件构建了去除信号肽前后的系统进化树,旨在了解其结构特征。对已经进行功能研究的成员进行结构分析,以此来揭示结构与功能之间的联系,为植物抵御氧化胁迫方面研究提供理论基础。

东亚三角涡虫Rab蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析

姚杨;黄原;苏杰;

2012, 0(02): 144-150.

摘要 ( 106 )

PDF (1605KB) ( 354 )

相关文章 | 计量指标

通过构建东亚三角涡虫(Dujesia japonica)cDNA文库,随机挑选重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得1个三角涡虫新基因——Rab蛋白基因(DjR),涡虫Rab蛋白cDNA全长2 141 bp,开放性阅读框(ORF)621bp,编码206个氨基酸,相对分子量为23.1 kD,等电点6.59,属亲水性蛋白,主要定位于细胞质中,在氨基酸第20和21位之间有信号肽剪切位点。有8个磷酸化位点。含有小G蛋白家族5个保守的鸟苷酸结合区域。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他23个物种的相似性为53%-90%,且符合种属之间的进化关系。

小黑麦碳酸酐酶蛋白质三维结构预测

何宣;王白羽;张晓磊;任丽彤;孔广超;

2012, 0(02): 151-158.

摘要 ( 94 )

PDF (2014KB) ( 859 )

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根据已经克隆到的小黑麦碳酸酐酶基因序列,将其概念地翻译成蛋白质的氨基酸序列。利用MEGA4.1、DNAStar5.02、SOPMA、Swiss-Model Workspace和NCBI-VAST等在线软件和服务器对该小黑麦碳酸酐酶(CA)的一级结构、二级结构及三维结构进行了分子结构模型预测,并对其三维结构进行了比对。结果显示,小黑麦碳酸酐酶定位于线粒体内膜和叶绿体类囊体膜上,具有β类碳酸酐酶所特有的保守性基序C-[SA]-D-S-R-[LIVM]-x-[AP];SOPMA预测的二级结构显示,该酶含有α-螺旋(38.61%)、随机卷曲(54.44%)和β-折叠(6.95%)。通过VAST矢量比对工具将小黑麦碳酸酐酶与模板(lekjA)三维结构进行比对,结果显示小黑麦碳酸酐酶与豌豆β碳酸酐酶同型八聚体中的一个单体(lekjA)具有很好的匹配,故推测小黑麦碳酸酐酶全酶也可能是同型八聚体。

葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

赖呈纯;范丽华;谢鸿根;余亚白;郑铭西;谢福鑫;

2012, 0(02): 159-164.

摘要 ( 107 )

PDF (1371KB) ( 690 )

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采用正交设计L9(34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平。最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng。反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存。

猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用

董沁芳;郭瑶;汪平;程菊会;徐辉;丁先锋;郭江峰;姜永厚;

2012, 0(02): 165-169.

摘要 ( 169 )

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为准确特异灵敏地检测猪细小病毒(PPV),建立一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝。利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6%。

红壳色文蛤F_1代养殖群体多样性分析

郑培;陈爱华;姚国兴;吴杨平;张志伟;张雨;沈和定;

2012, 0(02): 170-175.

摘要 ( 109 )

PDF (1299KB) ( 478 )

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运用形态学标记和分子标记对江苏省文蛤良种场红壳色文蛤F1代养殖群体(父母本为江苏野生红壳色群体)进行遗传多样性分析。用文蛤壳长、壳宽、壳高和体重4个可量性状进行形态学数据的聚类分析,显示可量性状变异系数在38.48%-82.95%。运用7个引物微卫星基因座的多态性进行了养殖群体F1代的分子标记评估,结果表明,7个微卫星基因位点的平均等位基因数3.857 1,平均有效等位基因数2.583 0,平均观察杂合度0.565 3,平均期望杂合度0.565 3,Shannon指数平均数1.050 1,多态信息含量平均数0.522 5。综合形态学数据和分子标记的研究结果表明,红壳色文蛤江苏养殖群体F1代的遗传多样性处于中度偏高水平,具有较高的遗传改良潜力。

桑木层孔菌液体培养条件的研究

曹春蕾;崔宝凯;戴玉成;

2012, 0(02): 176-181.

摘要 ( 128 )

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对桑木层孔菌(Phellinus mori)液体发酵条件进行了研究,以生物量和胞外多糖为指标,通过L16(45)和L9(34)正交表进行了两次正交试验,筛选出桑木层孔菌最适液体培养条件为:麦芽糖30 g/L,酵母浸粉和蛋白胨15 g/L(质量比2 1),KH2PO4和CaCl25.5 g/L(质量比1 1),初始pH6.0;通过单因素试验筛选出最适装液量为120 mL/250 mL,最适接种量为10%。在此条件下液体发酵培养7 d后,桑木层孔菌生物量达到23.375 g/L,胞外多糖产量达到3.993 g/L。

羊毛防毡缩用蛋白酶的化学修饰

陈忍忍;范雪荣;王强;袁久刚;朱怡然;

2012, 0(02): 182-187.

摘要 ( 99 )

PDF (1339KB) ( 549 )

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为减少防毡缩整理中蛋白酶对羊毛纤维主体结构的破坏作用,分别研究了戊二醛、微生物谷氨酰胺转氨酶(MTG)和水溶性碳二亚胺(EDC)对蛋白酶Savinase 16L的化学修饰,以期达到增大蛋白酶分子量,从而将水解作用限制在纤维表面的目的。主要通过体积排阻色谱、SDS-PAGE谱图以及荧光光谱研究修饰酶的分子量和结构变化。结果表明,戊二醛不能对蛋白酶分子进行有效修饰;MTG会被蛋白酶水解,无法催化酶分子间发生共价交联;而碳二亚胺既可以使蛋白酶分子间发生交联,又能将含有伯胺基的大分子修饰剂偶联到酶分子上。

蒙古口蘑子实体凝集素性质初步研究

孟建宇;宋馨宇;

2012, 0(02): 188-192.

摘要 ( 88 )

PDF (1080KB) ( 590 )

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对蒙古口蘑干燥子实体研磨后,用磷酸盐缓冲液浸提,得到蒙古口蘑子实体的凝集素粗提物。对其性质进行分析表明,蒙古口蘑子实体凝集素对牛血和羊血都能凝集,且对羊血的凝集作用较强;D-果糖、β-葡萄糖、半乳糖和木糖对蒙古口蘑子实体凝集素均具有抑制作用;弱酸或弱碱性浸提液有利于凝集素的提取;蒙古口蘑子实体凝集素具有一定的热稳定性,直到70℃以后凝集红细胞的活力才丧失;凝集素的凝集活性对Ca2+、Mg2+、Mn2+和Fe3+这4种离子有不同程度的依赖。

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